Noninvaziv M-mod ekokardiyografi ile Fare Kalp Puan utero Ölçümünde

Bu prosedürün genel amacı, basit bir M modu ultrason kullanarak uteroda E 18.5'te fare embriyolarının kalp atış hızlarını ölçmektir. Bu, önce hamile kadının sürekli anestezi ile platforma güvenli bir şekilde yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkincisi, embriyoların yeri dişinin karnının epidermisi boyunca tanımlanır.

Üçüncü adım, 30 megahertz'lik bir dönüştürücü kullanarak her embriyonun kalp atış hızını ölçmektir. Daha sonra embriyoların kuyrukları genotipleme için toplanır. Sonuç olarak, sonuçlar, kardiyak döngü başına milisaniye cinsinden geçen süreyi ölçerek her bir embriyonun kalp atış hızının uteroda nasıl belirlendiğini gösterebilir.

Bu tekniğin video mikroskobu gibi mevcut yönteme göre en büyük avantajı, hem uzmanlar hem de uzman olmayanlar için tasarlanmış basit bir yöntem olması ve son derece doğru kalp atış hızı ölçümleri sağlamasıdır. Sistemin ve materyalin uygun şekilde hazırlanması kritiktir ve aşırı uzun prosedür fetüslerin fizyolojik ve hemodinamik özelliklerini etkileyebilir. Ultrason görüntüleme sistemini başlatın.

30 megahertz dönüştürücüye karşılık gelen tarama kafasını bağlayın ve fizyoloji kontrol ünitesini kontrol ünitesine bağlayın. Kardiyak ölçüm programını seçin. Ardından, tarama kafasının burun kısmını iyonize su ile doldurun.

Görüntüleme çözünürlüğünü çaldığı için hava kabarcıklarından kaçının. Tarama kafasını, tutamak yeri yukarı bakacak şekilde, dezenfekte edilmiş çalışma alanındaki görüntüleme platformunun yanındaki tutucusuna yerleştirin, ultrason jeli şişesini tamamen doldurun. Büyük baloncuklar oluşturmaktan kaçının.

Şişeyi 37 santigrat dereceye ayarlanmış ön ısıtma kabına baş aşağı yerleştirin. Anestezi için tüp sistemindeki oksijen ve izo flor seviyelerini doğrulayın. Yaklaşık sekiz embriyo ile yapılan bir deney 15 ila 20 litre oksijen kullanacaktır ve gerçekleştirilmesi bir saatten fazla sürmemelidir.

Oftalmik balsam, tüy dökücü krem ve elektrot jeli şişelerini görüntüleme platformunun yakınına yerleştirin. Kızılötesi ısı lambasının çalışıp çalışmadığını kontrol edin. Altına yerleştirilen farelerin vücut ısılarını ve sabit bir kalp atış hızını koruyabilmeleri için doğru mesafe ve yoğunluğa ayarlanmalıdır.

Hamile kadını, yanıt vermeyene kadar sürekli% 2 isof, flor ve oksijen kaynağı olan bir odada uyuşturun. Fareyi görüntüleme platformuna sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Tüpü% 1.5 izo flor ve oksijenin sürekli solunması için tüpü ayarlayın ve inhalasyon tüpünü bantla sabitleyin.

İşlem sırasında farenin rahat duruşu ve kuyruk ve ayak parmağı tutamaklarına herhangi bir yanıt verilmemesi ile yeterli anestezi onaylanmalıdır. Elektrot jelini sadece sağ dört bacak ve sol arka bacak için sol üst ve sağ alt elektrot pedlerine yerleştirin. Elektrokardiyografi için, gözlerin kuruluğunu önlemek için dört pençeyi bant kullanarak her bir pede sabitleyin.

Her göze bir damla oftalmik balsam sürün. Ardından, bir saç kesme makinesi ile karnı göğüsten mesaneye kadar tıraş edin. Meme uçlarını kesmemeye dikkat edin, ardından iki dakika boyunca tüy dökücü krem uygulayın ve kalan tüyleri almak için gazlı bezle dikkatlice silin.

Son olarak, elektrot jeli ile önceden yağlanmış termometreyi dişinin rektumuna yerleştirin. Kızılötesi ısı lambasını ayarlayarak vücut ısısını ve kalp atış hızını koruyun. Vücut ısısı 36,5 santigrat derecenin altına düşerse, durun, lamba ayarlarını yapın ve devam etmeden önce birkaç dakika bekleyin.

Bu, tüm aletler hazırken ma damını hazırladıktan sonra, embriyoları yavaş ve hafif bir şekilde bulmak için çıplak karın üzerine hafifçe bastırıldıktan sonra sabır gerektirecektir. Embriyoların çoğunu her uterus boynuzunda karın yüzeyinin altında tek bir tabaka halinde olacak şekilde yayın, torbalar doğrusal olarak bağlanır. Yayılırken bu sıraya uymaya çalışın.

Bazı suşlarda, birkaç embriyo diğerlerinin altında bulunur. Bu embriyoları analizden çıkarın. Dişinin çıplak karnındaki her embriyoyu ön, arka ve dorsal ventral yönleri ile kalıcı bir işaretleyici ile işaretleyin.

Rahim ağzından başlayarak sağ ve sol boynuzdaki embriyoları numaralandırın. Ardından, onları izlemek için konumlarını bir kağıda çizin. Çıplak karın üzerine az miktarda ön ısıtma ultrason jeli yerleştirin ve eşit şekilde yayın.

Kabarcık oluşumundan kaçının. Uzun anestezi, saç dökülmesi ve ultrasonik jeli görüntülemek için belirli bir alana yaklaşık beş mililitre jel ekleyin. Her ne kadar ön ısıtma hipotermiye yol açabilir ve daha sonra dişilerin vücut ısısını etkileyebilir.

Vücut ısısı 36,5 santigrat derecenin altına düşerse veya kalp atış hızı dakikada 400 atışın altına düşerse, işlem sırasında herhangi bir zamanda durun, ısıtma lambasını yaklaştırın ve hayati belirtilerin yeniden ayarlanmasına izin vermek için birkaç dakika bekleyin. Probu kalın jel tabakası ile temas halinde tutun ve atan kalbi ararken probu yavaş yavaş cilde doğru hareket ettirin. Ardından, probun açısını, her iki ventrikülün de görüntüleme düzlemindeki en büyük boyutlarında olması için ayarlayın.

Ön kol istasyonda dururken görüntü almaya başlayın. Görüntüleme ekranında canlı bir görüntü elde etmek için dönüştürücüyü ultrason jeli üzerine yerleştirin. Dönüştürücünün çıkıntısını yukarı bakacak şekilde tutun ve cilt kafası yönlendirme işaretçisine tıklayın.

Rahim ağzından başlayarak, en yakın embriyoya geçin ve odak bölgesindeki ekranın merkezinde atan kalbi görselleştirin. Jel ile temasını kaybetmeden probu yavaşça yukarı ve aşağı ve ayrıca yanlara doğru hareket ettirin. İstenen görüntü düzlemini elde etmek için canlı kaydı elde edin.

İzci görüntüsünü elde edin ve bir sonraki embriyoya geçmeden önce en az beş saniye boyunca kayda devam edin. Tüm embriyolar analiz edildikten sonra klavyede göz at düğmesine basın. Kayıtların listesini görüntülemek için, kaydedilen her M modu izlemeyi oynatın ve ortalama kalp atış hızını elde etmek için en az altı bitişik tepe noktası arasındaki boşluğu ölçün.

Fareyi hareket ettirmeyin, bunun yerine temiz cerrahi makas ve forseps kullanarak numaralandırılmış embriyoları uzunlamasına takip etmek, karın derisi ve kas katmanlarını takip etmek için görüntüleme platformunda cerrahi prosedürü gerçekleştirin. Her rahim boynuzundaki çuvalları bulun ve sayıları eşleştirin. Embriyoyu yukarıda kullanılan sırayla ortaya çıkarmak için meşe çuvalını kesin.

Doğrusal bir düzenlemede değilse, her bir kuyruğun yaklaşık dört milimetresi kesilmiş embriyo pozisyonlarının kağıt taslağına bakın. Genotipleme için, genomik DNA bittiğinde embriyonik kuyruklardan çok verimli bir şekilde ekstrakte edildiğinden, hayvan bakım komitenize göre tüm hayvanları ötenazi yapın. Tarif edilen yöntem kullanılarak, Suriye proteaz furininin endotel hücrelerindeki etkisi değerlendirildi.

Fare embriyolarının kalp atış hızlarının uteroda E 18.5'te ölçülmesi, furin içermeyen homozigot ancak heterozigot olmayan eko embriyolarının bir kez ustalaştıktan sonra taşikardiden muzdarip olduğunu ortaya çıkardı. Bu teknik, altı ila sekiz embriyonun bir litresi için yaklaşık bir saat içinde yapılabilir.