Name: Farelerde Egzersiz Kapasitesi ve Kardiyak Uyum Kimyasal kaynaklı Yumurtalık Yetmezliği Etkisi Eğitim için Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 26 s
Description: Keşfedin kimyasal yolla menopoz oluşturulan fare modellerinde egzersiz kapasitesi ve kardiyak uyum üzerine etkileri. VCD uygulaması, vajinal sitoloji ve gönüllü kafes tekerleği egzersizi ile kalp sağlığı araştırmalarına yönelik önemli bir yöntem sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma JP Konhilas ve Kardiyovasküler Bilimleri Disiplinlerarası Eğitim Grant (HL007249 verilen NIH Ulusal ve mentored Araştırma Bilim Geliştirme Ödülü (K01 AR052840) ve Bağımsız Bilim İnsanı Ödülü (K02 HL105799) ile NIH hibe (HL 098256) tarafından desteklenmiştir .) Destek Arizona Üniversitesi Sarver Kalp Merkezi&#39;nden ve Steven M. Gootter Vakfı alındı.

Tüm deneyler, konut, ve hayvanlar için bakım kurallarına uyulması ve Arizona Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için 2011 NIH talimatlarına protokolleri kullanılarak yapıldı. 1.. 4-vinilsikloheksen diepoksit ile tedavi <ol><li> VCD dozaj protokolü: kimyasal bir davlumbaz olarak, temiz bir şişeye VCD 0,587 ml ilave susam yağı ile 10 ml nihai hacme getirmek ve daha sonra yavaşça, kapak ters çevirerek karıştırın ve Parafilm ile sağlanır. , Bir dozlama çözeltisi şişeye aktarın Parafilm ile sızdırmaz ve en çok 7 gün boyunca 4 ° C&#39;de saklayın. Tüm reaktifler steril olduğundan emin olun. <ol><li> VCD susam yağı içinde çözülmüş olarak, araç kontrolü olarak susam yağı kullanın. Mağaza VCD (MW = 140.2 g / mol, yoğunluğu = 1.09 g / ml) -20 ° C. </li><li> VCD enjeksiyon protokolü: yaşı 2 ayda, tartmak ve oda öfke günlük periton enjeksiyonları yönetmek20 gün boyunca 160 mg / kg &#39;lık bir dozda ature VCD. 2.5 ml / kg &#39;lık bir hacimde, araç solüsyonu, susam yağı ile benzer bir şekilde, kontrol fareleri enjekte edilir. Not: Enjeksiyon döneminde, yerel enfeksiyon olasılığını azaltmak için enjeksiyon siteleri alternatif deneyin. Enjeksiyon için gerekli hacmi hesaplamak için aşağıdaki denklem kullanın: Vücut ağırlığı (g) x kg / 1000 gx 2.5 ml / kg = 27 G iğne kullanılarak, yaklaşık 50 ml / enjeksiyonda enjekte edilen hacim (mi) çözeltisi ilave edildi. Nedeniyle iğne boyutuna lokal anestetikler gerekli değildir. </li><li> Östrus döngüsü izleme: Enjeksiyon süresi tamamlandıktan sonra, vajinal smear alınarak günlük östrus döngülerini kontrol. Sırt scruff yöntemini kullanarak fareler dizginlemek. 0.5 sm bir derinliğe kadar vajinal deliği içine steril tuzlu su, 0.2 ml bir damlalık yerleştirin. Tuzlu su (3x) çiğnemek ve boş bir slayt üzerine 1 damla yerleştirin. Hemen mikroskopik standart bir ışık Microsc kullanarak örnekleri değerlendirmek100X büyüklüğü de ope. Not:. Vajinal sitoloji bisiklet kaybını sağlamak ve bu nedenle yumurtalık yetmezliğine doğrulamak için kararlı olduğunu Şekil 2A, tipik vajinal farelerde östrus döngüsünün farklı aşamalarında genelinde sitoloji, yani proestrus, kızgınlık, Metestrus, 17-19 diöstrüste göstermektedir. Proestrus sırasında, hücreler, çekirdekli epitel hücreleri (Şekil 2A, oklar çekirdekli hücreleri işaret eder) içerir; kızışma sırasında, hücreler ağırlıklı olarak yassı epitel hücreleri açığa çıkan edilir; Metestrus lökositlerin baskın olduğu, hücre tiplerinin bir karışımı ile karakterize edilir; Diöstrüste lökositler hakimdir. Odak düzlemine ayarlanması, numune boyunca hücre ve çekirdeklerin görselleştirmek için gerekli olabilir. Şekil 2B&#39;de gösterildiği gibi, tipik bir kemirgen östrus döngüsü 4-5 gündür. Fareler kalıcı diöstrusun 15 ardışık gün sonra asiklik olarak kabul edilir. Sürekli başına Çalışmanın süresi boyunca estrojen döngüleri izlemekiyodür VCD tedavi edilen farelerde östrüs siklusu eksikliği onaylamak için. </li></ol></li></ol> 2. Gönüllü Cage teker Egzersiz Inbred C57BL / 6 ve B6C3F1 dişi fareler, yaşlı 7 ay, gönüllü Kafes tekerlek çalışan maruz kalmaktadır. 28 gün için bir kafes tekerleğe yüksüz giriş ile bir kafes (47 cm x 26 cm x 14.5 cm) ayrı ayrı Ev hayvanları. <ol><li> Ekipman kurulumu: kafes tekerlek tertibatı geniş tekerlek dönme ile aktive olan bir dijital manyetik sayacı ile donatılmış bir yüzeye uzanan bir 5.0 sm olan bir 11.5 cm çapındaki bir tekerlek oluşur. Her tekerlek çalışan testten önce, üreticinin talimatlarına göre kafes tekerleği kalibre. , Çalışan tekerleğin iç çapını ölçün çevresi hesaplamak ve tekerlek boyutu gibi dijital sayaç içine bu değeri girin. <ol><li> Bandı kullanarak tekerlek stand manyetik dijital sayaç bilgisayar bölümünü takın. </li><li> Bilgisayar bağlantı noktası takınbandı kullanarak tekerlek stand manyetik dijital sayaç iyon. </li><li> Mıknatıs tekrar zarar çiğneme mıknatısı korumak için yeterince bantlama, bilgisayara kablolu aynı tarafta merkezi çubuğuna dijital manyetik karşı serbest mıknatıs takın. Çarkın her dönüşü tekerlek dönme tamamlamak için herhangi bir müdahale olmadan ya da direnç bilgisayar tarafından kaydedilir ve böylece mıknatısların konumlandırılmalıdır. Not: Kanal bant çalışan tekerlek için manyetik dijital sayacın parçaları bağlamak için başarılı bir şekilde kullanılmıştır. Bantlama tamamen mıknatıs kapağı ve hayvan tarafından çiğneme zarar görmesini önlemek için yeterli olmalıdır. Mıknatıs hareketini engelleyen olmadan tekerleğe mümkün olduğunca yakın yerleştirilmelidir. Ancak, kurulum hasar çiğneme için günlük olarak izlenmekte ve gerekli tamir edilmelidir. </li><li> Tekerlek hayvan kafesinin üst kablolama ile stand kaydırarak kafesine tekerleği takın. T tekerlek standı Güvenlibağlayıcı klipleri ile o kafes kablolama. Not: klip hayvandan uzak, kablolama üstünde olmalıdır. Kafes kablo yoluyla bilgisayar bölümünü ve herhangi bir ekstra kablo besleyin. Hayvanın ulaşamayacağı bilgisayar ve aşırı kablo yerleştirin. Bu, orta büyüklükte bir plastik bilgisayarı ve fazla kabloyu tutmak için kafesin kablo üstüne çanak ağırlık yerleştirerek gerçekleştirilebilir. </li></ol></li><li> Egzersiz: Belirli bir çöp için, rastgele sedanter kontrol veya egzersiz rejimi ya fareler atayın. Tüm hayvanlar su ve standart sabit kemirgen yemi ad libitum verin. <ol><li> Elle manyetik sayaç tarafından verilen mesafe koştu (km / gün) ve çalışan harcanan toplam zaman (saat / gün), günlük değerleri kaydedin. Aynı 1 saat zaman diliminde rekor mesafe ve zaman değerleri egzersiz süresinin 28 günlük süresi boyunca doğru ve tutarlı değerler için her gün. Clear (sıfır) manyetik sayaç sonra doğru okumaları takibini sağlamak için her gün kayıtgün ing. </li><li> Her grup için mesafe ve hız ortalama değerlerini hesaplar. Her bir fare için, her gün mesafe ve zaman verilen değerlere göre hızını hesaplar. Veriler, her ölçülen parametre için günlük ya da haftalık ortalama görüntülenebilir. </li></ol></li><li> Doku hasat: özel egzersiz süresinin sonunda, solunan anestezi altında servikal dislokasyon ile kafesleri çıkarıldıktan 30 dakika içinde icra ve sedanter kontrol hayvanları euthanize. Vücut kitle ve hızlı tüketim kalpler, kas iskelet ve yumurtalıklar tartılır. <ol><li> Doku hasat zamanda, montaj ve hemotoksilinle ve eozin (H &amp;e; Şekil 2C) ile toplanır yumurtalıklar leke. Büyütme altında, saymak ve her VCD-tedavi ve kontrol hayvan için 20 primordial, primer, sekonder veya Antral gibi folikülleri sınıflandırır. Bir ilkel folikül küçük birincil olgunlaşmamış dişi gamet, yakın oosit aksine, yassı veya skuamöz granüloza hücre tek bir katman ve bir bazal içerirlamina. Birincil folikül oositi çevreleyen tek bir tabaka halinde düzenlenir, bir ya da daha fazla kübik granüloza hücre varlığı ile tanımlanır. İkincil folikül birden fazla oosit etrafında katmanları ve bir teka oluşturan granüloza hücreleri içerir. Bir antral folikülü sıvı ihtiva eden bir oyuk ya da &quot;antrum&quot; ile karakterize edilir. </li><li> Kalbi kesilmesinde, ventral tarafta medial kesi yapmak ve diyaframı açtıktan sonra kalbi görselleştirmek. Hızla soğuk fosfat tamponlu tuz yeteri kadar yıkama-out rezidüel ventriküler kan içinde taban ve yerde kalp kesip. , Aşırı doku kalbi Trim bütün kalp tartmak ve snap-dondurma, sıvı azot içinde. </li><li> Izopentan içinde değiştirilmiş bir buzla soğutulmuş fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) ile diğer tüm kesilmiş dokuları yıkayın ve ek dondurularak sıvı azot içinde soğutuldu. </li></ol></li></ol> 3. Zorla Koşu Bandı Egzersiz <ol><li> Zorla egzersiz paradigma t istihdam zamano egzersiz kapasitesini ölçmek, bir koşu bandı kullanmak ve aşağıdaki gibi ayarlayın: <ol><li> Koşu bandı rampanın dibinde bir elektrik şoku ızgara yerleştirin. Oluşturulan bu şok egzersiz için bir uyarıcı olarak hizmet vermektedir. Elektrik uyaranlara sıklığı ve şiddeti kullanıcı tarafından manuel olarak kumanda edilir. Izgaralar etkin veya her kulvar için ayrı ayrı devre dışı bırakılabilir. Tüm veri toplama elle yapılır. </li><li> Periyodik, üreticinin talimatlarına göre koşu bandını kalibre. <ol><li> Koşu Bandı Denetleyici ön paneli değiştirme &quot;DUR&quot; olarak ayarlanmış olduğundan emin olun. </li><li> Güvenli bir yer hız koşu bandı kemer lane1 üzerinde sensör ve aşağıda gösterilen konumda vida somunu ile sabitleyin. </li><li> Koşu Bandı Denetleyici ön paneldeki kadranının kullanılması, 88.7 m / dk hızını ayarlamak Sonra, Koşu Bandı Denetleyici ön panelinde 2 Hz elektrik uyarı frekansını ayarlayın. </li><li> Kalibrasyon prosedürü başlatmak için &quot;ODOMETER RESET&quot; düğmesine basınız. <strong&gt; Not: Hareketsiz veya nonexercise kontrol grupları deneysel tasarım dahil edilmelidir. Sedanter grup egzersiz grubuna eşleştirilmiş yaştır. Daha önce kardeşler ile yer hareketsiz farelere göre icra farelere eşit büyüklükte kafeslerde bireysel olarak hareketsiz farenin ilgili parametreleri etki yoktu konut göstermiştir. Bu nedenle, hareketsiz fareler icra fare gibi aynı odada kardeşleri ile tutuldu. </li></ol></li></ol></li><li> Acclimation: 3-7 gün önce günlük deney için koşu bandı için fareler alıştırıldı. Bunu yapmak için, kapalı, ama (gürültü) üzerine kayış motor kayışı kıpırdamadan ve şok ızgaraları ile koşu bandı içinde yer fareler. En az 15 dakika boyunca rahatsız edilmeden fareler bırakın. </li><li> Isınma aşağıdaki gibidir: Bu protokolde kullanıldığı gibi adımlar Isınma: <ol><li> Koşu bandı üzerinde her fare yerleştirin. Şok ızgara devre dışı bırakmak ve 15 dakika boyunca 4 m / dak bant hızını arttırır. </li><li> Şok ızgara etkinleştirin ve kayış hızını sürdürmekIlave bir 10 dakika boyunca 4 m / dak bant hızı. </li></ol></li><li> Egzersiz eğitim rejimleri <ol><li> Sıcak takip, üzerinde şok ızgaraları tutmak ve 15 dakika için 5 m / dk bant hızını artırmak. </li><li> Ilave bir 15 dakika boyunca 15 m / dk &#39;ya bant hızını arttırır. </li><li> Eğitim sonrasında geri kafeslerine fareler transfer. Not: Bu çalışmada, egzersiz eğitimi 1 hafta boyunca günde gerçekleştirildi. </li><li> Akut egzersiz rejimi: Akut egzersiz rejimi aşırı egzersiz stres, kısa ve uzun vadeli etkilerini belirlemek için tasarlanmıştır. <ol><li> Isınma sonra, 10, 15, 20, 25 5 m / dk &#39;dan bant hızını artırmak ve 30 m / dak, 10 dak ara. Not: fareler yorgunluk veya sıkıntı çalışan veya göstermek işaretleri devam edemiyoruz eğer egzersiz sonlandırın. Çalışmamızda, hayvanların çoğu 25 m / dak durdu ve hiçbir hayvan 30 m / dak aşamada geçirildi. </li><li> Her testte arasında 2-3 gün izin, her fareye üç kez test edin. Tüm Egzersiz ve eğitimi boyunca ortalama değerlerini hesaplamakHer fare için leştirilebilmesi oturumları. </li></ol></li><li> Dayanıklılık için egzersiz rejimi: Bir dayanıklılık egzersiz protokolü koşu bandı egzersiz uyarıcı bir uzun pozlama için fareler yetiştirmek için tasarlanmıştır. Bu tür bir protokol ılımlı egzersiz stresin uzun dönemli etkilerini tolere kapasitesini test. <ol><li> Isınma dönemi, 4 m / dak sırasında belirtilen bant hızı ile başlayın. </li><li> Yavaş yavaş 20 m&#39;lik bir nihai hızına kadar 1m/min göre bant hızını artırmak / dak ulaşılır. Tipik bir çalışma protokolü toplam süresi 50 dk. </li><li> Egzersiz rejimi sonra geri kafeslerine fareler transfer. Not: bitkinlik fareler Koşu kaçınılmalıdır. Bir fare yorgunluk belirtileri gösteren deney sırasında herhangi bir noktada ise, şok ızgara devreden ve fare dinlenme ve kurtarmak için izin verir. </li></ol></li></ol></li></ol> 4. Veriler ve İstatistiksel Analiz <ol><li> Olarak mevcut sonuçlar ortalama ± SEM ve 2-yönlü ANOVA (tedavi grubu ve exe kullanınana faktörler olarak rcise) Öğrenci-Newman Keuls post hoc testi veya ortalama değerler arasındaki farklılıkları karşılaştırmak için bir öğrencinin t testi izledi. </li><li> Hareketsiz grubunun ortalama kalp kütlesine her icra hayvanın kütlesi karşılaştırarak egzersiz ile kalp kütlesindeki yüzde değişim belirler. Kalp kütle farkı Daha sonra her hayvan için yerleşik hayvan bir yüzde değişiklik olarak ifade edilir. &lt;0.05 p değerleri istatistiksel olarak anlamlı kabul edilir. </li></ol>

<ol><li>Lindheim, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+estimates+of+insulin+sensitivity+in+pre-+and+postmenopausal+women+using+the+insulin+tolerance+test+and+the+frequently+sampled+intravenous+glucose+tolerance+test%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Soc.+Gynecol.+Invest%22%5BJournal%5D)">Comparison of estimates of insulin sensitivity in pre- and postmenopausal women using the insulin tolerance test and the frequently sampled intravenous glucose tolerance test.</a> J. Soc. Gynecol. Invest. 1, 150-154 (1994).</li>
<li>Dubnov-Raz, G., Pines, A., Berry, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet+and+lifestyle+in+managing+postmenopausal+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Climacteric%22%5BJournal%5D)">Diet and lifestyle in managing postmenopausal obesity.</a> Climacteric. 10 Suppl 2, 38-41 (2007).</li>
<li>Grundy, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+syndrome%3A+connecting+and+reconciling+cardiovascular+and+diabetes+worlds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Metabolic syndrome: connecting and reconciling cardiovascular and diabetes worlds.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47, 1093-1100 (2006).</li>
<li>Sharma, S., Firoozi, S., McKenna, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+exercise+testing+in+assessing+clinical+state+and+prognosis+in+hypertrophic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Value of exercise testing in assessing clinical state and prognosis in hypertrophic cardiomyopathy.</a> Cardiol. Rev. 9, 70-76 (2001).</li>
<li>Guyatt, G. H., Devereaux, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+heart+failure+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Mt.+Sinai.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">A review of heart failure treatment.</a> Mt. Sinai. J. Med. 71, 47-54 (2004).</li>
<li>Mayer, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+effects+of+ovarian+follicular+depletion+in+rats+by+4-vinylcyclohexene+diepoxide%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Long-term effects of ovarian follicular depletion in rats by 4-vinylcyclohexene diepoxide.</a> Reprod. Toxicol. 16, 775-781 (2002).</li>
<li>Mayer, L. P., Devine, P. J., Dyer, C. A., Hoyer, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+follicle-deplete+mouse+ovary+produces+androgen%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">The follicle-deplete mouse ovary produces androgen.</a> Biol. Reprod. 71, 130-138 (2004).</li>
<li>Lohff, J. C., Christian, P. J., Marion, S. L., Hoyer, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+duration+of+dosing+on+onset+of+ovarian+failure+in+a+chemical-induced+mouse+model+of+perimenopause%5BTitle%5D)+AND+%22Menopause%22%5BJournal%5D)">Effect of duration of dosing on onset of ovarian failure in a chemical-induced mouse model of perimenopause.</a> Menopause. 13, 482-488 (2006).</li>
<li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+skeletal+effects+of+ovariectomy+versus+chemically+induced+ovarian+failure+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of skeletal effects of ovariectomy versus chemically induced ovarian failure in mice.</a> J. Bone Miner Res. 23, 1296-1303 (2008).</li>
<li>Ogawa, S., Chan, J., Gustafsson, J. A., Korach, K. S., Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+increases+locomotor+activity+in+mice+through+estrogen+receptor+alpha%3A+specificity+for+the+type+of+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Estrogen increases locomotor activity in mice through estrogen receptor alpha: specificity for the type of activity.</a> Endocrinology. 144, 230-239 (2003).</li>
<li>Roy, E. J., Wade, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+estrogens+in+androgen-induced+spontaneous+activity+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Role of estrogens in androgen-induced spontaneous activity in male rats.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 89, 573-579 (1975).</li>
<li>Fahrbach, S. E., Meisel, R. L., Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preoptic+implants+of+estradiol+increase+wheel+running+but+not+the+open+field+activity+of+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Preoptic implants of estradiol increase wheel running but not the open field activity of female rats.</a> Physiol. Behav. 35, 985-992 (1985).</li>
<li>Morgan, M. A., Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+estrogen+on+activity+and+fear-related+behaviors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Horm.+Behav%22%5BJournal%5D)">Effects of estrogen on activity and fear-related behaviors in mice.</a> Horm. Behav. 40, 472-482 (2001).</li>
<li>Gorzek, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+and+tamoxifen+reverse+ovariectomy-induced+physical+inactivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Sci.+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Estradiol and tamoxifen reverse ovariectomy-induced physical inactivity in mice.</a> Med. Sci. Sports Exerc. 39, 248-256 (2007).</li>
<li>Kadi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+physical+activity+and+estrogen+treatment+on+rat+fast+and+slow+skeletal+muscles+following+ovariectomy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Muscle+Res.+Cell+Motil%22%5BJournal%5D)">The effects of physical activity and estrogen treatment on rat fast and slow skeletal muscles following ovariectomy.</a> J. Muscle Res. Cell Motil. 23, 335-339 (2002).</li>
<li>Konhilas, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+modifies+exercise+and+cardiac+adaptation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Sex modifies exercise and cardiac adaptation in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 287, 2768-2776 (2004).</li>
<li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+reproductive+status%2Fstages+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. 4, (2009).</li>
<li>Goldman, J. M., Murr, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rodent+estrous+cycle%3A+characterization+of+vaginal+cytology+and+its+utility+in+toxicological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res.+B.+Reprod.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The rodent estrous cycle: characterization of vaginal cytology and its utility in toxicological studies.</a> Birth Defects Res. B. Reprod. Toxicol. 80, 84-97 (2007).</li>
<li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+vaginal+lavage%2C+crystal+violet+staining%2C+and+vaginal+cytological+evaluation+for+mouse+estrous+cycle+staging+identification%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification.</a> J. Vis. Exp. , (2012).</li>
<li>McKee, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexually+dimorphic+myofilament+function+and+cardiac+troponin+I+phosphospecies+distribution+in+hypertrophic+cardiomyopathy+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Biochem.+Biophys%22%5BJournal%5D)">Sexually dimorphic myofilament function and cardiac troponin I phosphospecies distribution in hypertrophic cardiomyopathy mice.</a> Arch. Biochem. Biophys. 535, 39-48 (2013).</li>
<li>Konhilas, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+can+prevent+and+reverse+the+severity+of+hypertrophic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Exercise can prevent and reverse the severity of hypertrophic cardiomyopathy.</a> Circ. Res. 98, 540-548 (2006).</li>
<li>Perez, N. J., Chen, H., Regan, J. A., Emert, A., Constantopoulos, E., Lynn, M., Konhilas, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+chemically-induced+ovarian+failure+on+voluntary+cage+wheel+exercise+and+cardiac+adaptation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Compar.+Med%22%5BJournal%5D)">The impact of chemically-induced ovarian failure on voluntary cage wheel exercise and cardiac adaptation in mice.</a> Compar. Med. In press, (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Kafes tekerlek egzersiz ve koşu bandı egzersiz rejimleri çalışan iki önceki çalışmalarda 16,21,22 kullanılmıştır. Tüm hayvanlar, çevre veya insan rahatsızlıkları en aza indirmek için özel bir egzersiz odaları tutulur. Hayvanların herhangi bir rahatsızlık egzersiz performansını &#39;biyolojik ritminde önemli ölçüde hayvanların etkileyebilir&#39;. Bu nedenle, tüm hayvan bakım, performans izleme ve kayıt, ve egzersiz rejimleri aynı günlük zaman dilimi içinde yapılmalıdır. Müfettişler, stres maruz kalma süresini sınırlayan ve uygun olduğunda kafesleri kapsayan gibi önlemler sergileyerek hayvanlara ekstra stres önlemek için gayret göstermelisiniz. Cage tekerlek egzersiz Kafes tekerlek aparatı hazırlanırken fare mount ve çıkış için, tekerlek kolaylıkla erişilebilir olmalıdır. Orada gerektiği tekerlek çevresinde iç içe ve fre engelleyen fareler önlemek için kafesin altındaki asgari yatake tekerlek hareketi. Fare icra olarak tekerleğin her bir dönüşünde saymak üzere Manyetik sensör, tekerleğin sabit bölümü ve serbest tekerlek tespit mıknatıs yerleştirilmiştir. Manyetik sensör bağlı kayıt cihazı kafesin tel kapağının üzerine konulması, ve tüm maruz telleri zarar çiğneme karşı bir bariyer sağlayacak şekilde, farelerin bantlanmış veya ulaşamayacağı tutulması ya gerekir. Mıknatıs ve manyetik sensör aynı zamanda hasar ve istenmeyen hareketini hem de önlemek için uygun yapılara bantlanmış. Günlük veri toplama sırasında, tüm bantlanmış kabloları yakından teller sağlam kalır ve gerekli retaped olmalıdır sigorta için kontrol edilmelidir. Fareler yeni ortama alışmak ve düzenli egzersiz başlamak için birkaç gün gerekebilir yana, veri kayıt her hayvana uygun olmalıdır. Hayvanlar tekerlek birçok saat harcama eğilimi olsa da, çalışan çoğu geceleri ortaya çıkar. Bu nedenle, bazı hayvanlar HIG ortaya çıkarabilirh performans etkinliği onlar gündüz atıl görünmese bile. Ayrıca, bazı hayvanların sınırlı kafes Tekerlek çalışan sergileyecek nadir değildir. Tipik olarak, ortalama 1 km / gün veya daha az tutarlar kafesli tekerlekli aktivite rastgele kafes faaliyetin sonucudur ve anlamlı bir çalışma uyarıcı ile ilişkili değildir. Bu nedenle, kimin koşu parametreleri 1 km / gün veya 1 saat / gün veya daha az olan hayvanlar son veri analizi nonrunners hariç olmalıdır. Tek bir çalışma ve ilgili farelerin soylarının spesifik amaçları bağlı olarak, egzersiz uzunluğu değiştirilebilir. Daha önceki çalışmada yer alan iki fare suşları için, ortalama tekerlek çalışan hızları ve kafes tekerlek üzerinde egzersiz süresi giderek zamanla artmış ve 4 hafta plato olduğunu gösterdi. Kafes tekerlek çalışan genel olarak daha az stresli koşullar altında gerçekleştirilirken olarak alınır hayvan modellerinde gönüllü egzersiz türüdür. UNLbelirli parametreler önceden edilebileceği ike koşu bandı egzersiz, tüm test kafesinde çalışan gönüllü ve kolayca çevresel veya davranışsal ipuçları etkilenir. Büyük deney grupları sayılar kullanılır sürece Bu nedenle, farklı deneysel ayarlar arasındaki karşılaştırmalar genellikle kaçınılır. Egzersiz paradigmanın bu tip yararlanabilir araştırma Diğer potansiyel alanları gibi bilişsel nörobilim gibi fizyolojik sonuçları ile davranışsal tepkileri dahil çalışmalardır. Gönüllü kafes tekerlek paradigmayı kullanan çalışmalar için, en kritik adımlar kafes kurmak ve egzersiz faaliyetlerinin izlenmesi vardır. Koşu bandı egzersiz Acclimation adımlar koşu bandı egzersiz protokolü için hayvanları hazırlamak için gereklidir. Bireysel çalışma için özel olarak bağlı olarak, bir alışma periyodunun süresi değişebilir. Bu çalışmada, bir haftalık bir süre hayvan acclim sağlamak için seçildiısınmak süreleri egzersiz eğitim rejiminin önemli bir adım olan, koşu bandı aparat ve kafes motor gürültüsü yedik. Insan meslektaşları benzer, fareler yaralanma ve olası veri bozulmaları önlemek için herhangi bir yoğun egzersiz rejimleri girmeden önce ısınmış olması gerekir. Şok ızgaralar 15 dakika boyunca kapalı Bu çalışmada, mümkün olan en düşük hızda (4 m / dak) de kemer başladı. Katılan tüm fareler üzerinde ve kemer koşmaya başladı. Şok ızgaralar daha sonra açık ve bant hızı / dk 4 m sürdürdü. Aşırı basınç fareler önlemek için, hafif bir seviyede (1 Hz), elektrik çarpmasına ayarlayın. Birkaç gün içinde, tüm fareler koşu bandı kemer uyarlanmış. Koşu süresi hem de aynı zamanda her bir hızlanma deney tasarımı için uygun olabilir. Bir önerilen başlangıç ​​hızlanma oranı / dak 1 m&#39;dir. Yorgunluk belirtileri gösteren farelerin koşu bandı şeritleri derhal kapatılması gerekir. Mi tarafından sergilenen tükenme Tipik belirtileriaşağıdaki gibi koşu bandı üzerinde ce şunlardır: <ol><li> &gt; 5-10 saniye şok şebekeye sürekli maruz kalma, </li><li> Tek bir egzersiz rejimi sırasında şok ızgara maruz&gt; 5x sonuçlanan kapasite çalışan ve Kaybı </li><li> Şok ızgara maruz kalma sonucunda kapasite çalışan kaybı, tek bir egzersiz rejimi sırasında&gt; 2 sn en az 3x. </li></ol> Yukarıda listelenen değerler esas belirli bir deney için kılavuz olarak kullanılmak üzere bulunmaktadır. Bu parametreler o fare soyundan araştırmacı fare zorlanma, deneme deney ve araştırmacı değişir gibi her egzersiz protokolü için tespit edilmesi gerekmektedir. Kafes tekerlek egzersiz aksine, koşu bandı çalışmalar performansı çalışan çevre ve biyolojik faktörlerin etkisini ortadan kaldırmak için birkaç kez tekrar edilmelidir. Hatta aynı hayvan için testler arasında performans çalışan dalgalanmalar görmek için nadir değildir. Her egzersiz rejimi bir stre fareler çalıştıran ortaya koyar yanass, testler arasında uygun bir dinlenme aralığı gereklidir. Bizim tecrübelerimize göre, her bir testin arasındaki dinlenme periyodunu 2-3 gün fareler kurtarmak için yeterli oldu. İnsan koşu bandı egzersiz gibi, dayanıklılık egzersizi için hız en iyi kalp hızı ve kan oksijen doygunluğu, fare çalışmaları ile teknik olarak zor feat tarafından belirlenir. Koşu bandı çalışmalarının en kritik adım, genellikle bireysel fareler arasında değişmektedir bitkinlik, belirlenmesi, ve% 80 maksimal hız olarak belirlendi. Tükenme için kriterler çoğunlukla öznel beri kendi deneyim sonuçlarının kayıt ölçüde, bireysel araştırmacılar arasında farklılık gösterebilir. Bu durumda, kayıt sırasında aynı kriterler uygun uygulama kritiktir.

Menopoz başlangıcı sonunda doğal yumurtalık yaşlanma ile sonuçlanır atrezi yoluyla ilkel yumurtalık folikül tükenmesi ile karakterizedir. Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde, bir kadın ömür boyu% 30, menopoz sonrası harcanacak. Yumurtalık fonksiyonunun bir azalmaya yanıt olarak, çeşitli fizyolojik ve psikolojik etkileri artan yağlanma, damar instabilite ve ruh hali ya da uyku bozuklukları da dahil olmak üzere, meydana gelebilir. Çünkü premenopozal meslektaşları 1,2 ile karşılaştırıldığında artış obezite / yağlanmanın, postmenopozal kadınlarda kardiyovasküler hastalık (CVD) 3 dahil olmak üzere metabolik sendrom ve ilişkili yandaş, özellikle daha hassastır. Ayrıca, kardiyovasküler hastalarda başarılı bir kardiyak rehabilitasyon düzenli aerobik egzersiz içerdiğini giderek daha belirgin hale geliyor ve bu egzersiz bu konularda 4,5 kardiyovasküler morbidite ve mortaliteyi azaltır. Oysa, ne kadar egzersiz kapasitesi chaöncesi ve sonrası, menopoz geçiş sırasında nges iyi çalışılmamıştır. Daha da önemlisi, menopoz sonrası kadınlarda KVH risk için önleyici bir tedbir olarak egzersizin rolü oldukça ilgili yeterli kalır. Kadınlarda menopoz taklit için en yaygın olarak kullanılan model, uyarılabilir ovariektomi uygulanmış olan (OVX) kemirgen. Son zamanlarda, mesleki kimyasal 4-vinilsikloheksen diepoksit (VCD) özel olarak bir sonuç olarak, diğer dokularda bulunan 6 belirgin bir toksisite ile yumurtalık yetmezliği ile sonuçlanan atrezi doğal sürecinin hızlandırılması göre küçük birincil ve ilkel yumurtalık folikül hedef olduğu gösterilmiştir. Insan adet döngüsü için benzer VCD ile tedavi edilmiş farelerin çevrimi, VCD enjeksiyon tamamlanmasından sonra 2-3 ay içinde sona erdiği peri-menopoz sonrası östrojen taklit eden bir kademeli çekilmesi, sonuçları açmak geçiş. Böylece, bir folikül-dasitanî, yumurtalık-sağlam hayvan yakından doğal insan yaklaşıryoluyla ilerleme pre-peri-post-menopoz geçiş 7-9. Dahası, bu gibi enfeksiyon gibi ameliyat sonrası komplikasyonlar, indirgeme OVX modeli için bir cerrahi olmayan bir alternatif sağlar. Bu çalışmada, menopoz farelerde kalp adaptasyonu egzersizin etkilerini incelemek için VCD kaynaklı menopoz fareler kullanılmıştır. Her iki cinsiyette kemirgenlerde 10-13 östrojen ve kafes tekerlek egzersiz arasındaki ilişkiyi önermek çeşitli örnekleri vardır. Cerrahi OVX&#39;in tarafından östrojen tükenmesi fareler ve sıçanlarda 14,15 gönüllü egzersiz aktivitesini azaltır. Egzersiz iki yöntem VCD kaynaklı menopoz farelerin egzersiz kapasitesini test etmek için bu çalışmada kullanılmıştır. Cage tekerlek çalışan genellikle hayvan modellerinde gönüllü egzersiz türü olarak kabul edilir ve daha az stresli koşullar altında, muhtemelen, gerçekleştirilir. Ancak, kafes tekerlek çalışan Exerci hayvanları gerektiren hayvanların göreli egzersiz kapasitesi, göstergesi değildirse çok daha yüksek seviyeleri. Zorla koşu bandı egzersiz yoğunluğu ve dayanıklılık egzersiz için bir tolerans olarak ölçülen egzersiz kapasitesini belirlemek için kullanılmıştır. Buna ek olarak, daha önce kafes tekerlekli egzersiz kalp hipertrofisi için bir uyarıcı sağladığını göstermiştir ve bu hipertrofik büyüme cinsiyete bağlı 16 olduğunu. Bu nedenle, biz de VCD kaynaklı menopozal farelerde kafes tekerlek egzersiz kardiyak adaptasyon ölçülür.

<table><tbody><tr><td>4-Vinilsikloheksen diepoksit (VCD)</td><td>Sigma</td><td>V-3630</td><td></td></tr><tr><td>11,5 cm Çap 5,0 cm genişliğinde koşu yüzeyi olan tekerlek</td><td>Petsmart</td><td>model 6208</td><td></td></tr><tr><td>Dijital manyetik sayaç</td><td>Sigma Sport</td><td>model BC 600</td><td></td></tr><tr><td>Koşu bandı egzersizi</td><td>Columbus Instruments</td><td>model 1055SDRM</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde egzersiz kapasitesi ve kardiyak uyum kimyasal kaynaklı yumurtalık yetmezliği etkisi eğitim için bir yöntem

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

Kardiyovasküler hastalık riski (CVD) menopoz sonrası kadınlarda artar, henüz, egzersiz rolünü, menopoz sonrası kadınlarda KVH risk için önleyici bir tedbir olarak yeterince incelenmemiştir. Buna göre, biz gönüllü kafes-tekerlek egzersiz ve menopoz farelerde kardiyak adaptasyon zorla koşu bandı egzersiz etkisi araştırılmıştır. Kadınlarda menopoz taklit için en yaygın olarak kullanılan model, uyarılabilir ovariektomi uygulanmış olan (OVX) kemirgen. Bununla birlikte, OVX modeli insanlarda menopoz birkaç farklılıkları vardır. Bu çalışmada menopoz farelerde egzersiz etkisini incelemek için alternatif bir model olarak menopoz yumurtalık yetmezliği hızlandırır ki, dişi farelere 4-vinilsikloheksen diepoksit, (VCD) uygulanmıştır. VCD seçici yakından gelen doğal ilerlemesini taklit eden bir endokrin durumunda ortaya çıkan birincil ve ilkel köklerinin kaybını hızlandırır insanlarda peri-post-menopoz öncesi için. Egzersiz egzersiz etkisini belirlemek içinKapasite ve VCD ile tedavi edilen dişi farelerde kalp adaptasyon, iki yöntem kullanılmıştır. İlk olarak, bir gönüllü kafes tekerleğe VCD-muamele edilmiş ve tedavi edilmemiş fareden oluşan bir gruba maruz kalmaktadır. İkincisi, yoğunluğu ve dayanıklılık egzersiz için bir tolerans olarak ölçülen ayrı bir grup VCD-tedavi edilen ve edilmeyen farelerde egzersiz kapasitesini belirlemek zorunda koşu bandı egzersizi kullanılır.

Bunlar da bu çalışmada kullanılan bu gibi tipik bir deneysel protokol, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. VCD tedavi 20 ardışık gün sonra, vajinal sitoloji VCD-enjekte edilmiş farelerde varlığını veya yokluğunu belirlemek çevrimi için kullanılmıştır; aracı ile enjekte edilmiş fareler de izlenmiştir. Östrus döngüsü aşaması vajinal, yayma, epitel hücreler, Boynuzsu epitel hücreleri ve lökositlerin oranı (Şekil 2A) ile belirlenmiştir. Sadece açığa çıkan epitel hücrelerinin varlığı fare kızışma gösterdi ve bu nedenle yine bisiklet edildi. Farelerde çevrimi dolayısıyla tipik VCD hayvanlar asiklik vajinal sitoloji lökositlerin bir çoğunluğu (Şekil 2A) ifşa ettiği kalıcı diöstrüste, 15 gün sonra olarak kabul edildi enjeksiyonlu, 4 gün sürer. VCD ile tedavi edilmiş farelerin çevrimi düzensiz oldu, ardından VCD enjeksiyon başlangıcında (Şekil 2B) sonra 2-3 ay içinde sona </strong&gt;. VCD yumurtalık doku kontrolleri ile karşılaştırıldığında, önemli ölçüde atrofi gösterdi. Yüksek büyütmede, ilköğretim ve primordial folikülleri (Şekil 2C) tam tükenmesi bkz. Egzersiz performansı VCD kaynaklı yumurtalık yetmezliği etkisini test etmek için, rasgele 7 aylık VCD ve araç ile tedavi edilmiş fareler (iki suş, C57BL / 6 ve B6C3F1) hareketsiz veya kafes tekerlek egzersiz grupları 4-6 hafta sonra ya Bisiklet bırakma (Şekil 1). Günlük egzersiz değerler 4 haftalık egzersiz süresince her icra hayvan için zaman ve mesafe kaydedildi. Uzaklık, zaman ve hız için günlük işletme değerlerinin haftalık ortalama bir araç ya da VCD ile muamele C57BL / 6 fareleri için, Şekil 3 &#39;de gösterilmiştir. Biz C57BL / 6 veya B6C3F1 fare ya da VCD ve araç-tedavi edilen gruplar arasındaki kafes tekerlek üzerinde ortalama günlük zaman, mesafe ve hız ile ölçülen egzersiz performansında önemli farklılıklar görmedimsuşu (Şekil 4A). Hesaplanan tekerlek çalışan hızları yavaş yavaş daha önce 16 gösterildiği gibi 4 haftalık çalışma süresince artmıştır, ancak deney grupları arasında anlamlı farklılık yoktu. Bu çalışmalar gönüllü kafes tekerlek egzersiz VCD kaynaklı over yetmezliği etkisi en az 2 fare suşları aşar göstermektedir. Gönüllü kafes tekerlek egzersiz protokolünün süresi sonrasında, vücut morfometrik kaydedildi ve hayvanların kalbi, hızlıca kesilip çıkarılmıştır ve tartılmıştır. Daha önce gönüllü kafes tekerlek egzersiz kalp kütlesinin 16 bir artışa neden olduğunu göstermiştir. Burada, aynı zamanda mutlak kalp ağırlığının (HW) ile ölçülür ve HW tibial uzunlukta (TL) (Tablo 1) için normalize kafes tekerlek egzersize yanıt olarak kardiyak hipertrofi gösterir. Hareketsiz muadilleri ile karşılaştırıldığında mutlak kalp kitlesi ve HW / TL oranı, araç ve VCD-ile tedavi edilmiş farelerde önemli ölçüde daha yüksek idi. Ancak, measu vardıgönüllü kafes tekerlek egzersiz sonrası kontrol ve VCD kaynaklı over yetmezliği fareler arasında kardiyak hipertrofiye bilirliği farklılıklar. Sonra, koşu bandı egzersiz kapasitesini belirlemek için çalışan istemsiz (zorla) kullanılır. Biz ilk yorulana kadar ortalama hızı adım adım her 10 dakikada artan bir yüksek yoğunluklu protokolüne fareler tabi. Ortalama olarak, araç ile tedavi edilen farelerin maksimum hız 26.7 ± 0.95 m / dk ve VCD tedavi edilen farelerin maksimum hız tükenme öncesi dk 28 ± 1.4 m / oldu. Bu dayanıklılık kapasitesi için tahlil, 20 ° C&#39;de m / dk (maksimal yaklaşık% 80) çalışan düşük-yoğunluk kullanılır. Şekil 4B&#39;de gösterildiği gibi, yüksek ya da düşük yoğunluklu egzersiz kapasitesinde anlamlı bir fark VCD kaynaklı yumurtalık yetmezliği fare egzersiz kapasitesi üzerinde hiçbir etkiye sahip olduğunu gösteren, araç ve VCD tedavi grubu arasında bulunmuştur. Sonuç olarak, VCD muamele ile uyarılan menopoz gönüllü ya da zorunlu ya da r üzerinde hiçbir etkisi yoktur<html> unning kapasite yanı sıra, egzersiz için kalp adaptif tepki. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig1.jpg" /> Şekil 1. VCD-yönetim ve deneysel protokol kullanılır. VCD Fareler 20 gün boyunca yaşı 2 aylıkken başlanarak (160 mg / kg) ya da susam yağı (taşıt kontrol) uygulandı. VCD ve araç enjeksiyonu takiben estrojen döngüleri takip edildi ve Yöntemler bölümünde tarif edildiği gibi cyclicities belirlenmiştir. Yumurtalık işlevinin kaybı 60-90 gün içinde meydana geldi ve vajinal sitoloji ile teyit edilmiştir. 7 aylıkken farelere 4 hafta boyunca gönüllü kafes tekerlek egzersiz maruz kaldıkları ya da koşu bandı egzersiz protokolüne tabi. oad/51083/51083fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51083/51083fig2.jpg &quot;/&gt; . Farelerde Şekil 2 VCD kaynaklı over yetmezliği A:. Östrus döngüsünün dört aşamalarını gösteren bir araç enjekte fare bir boyanmamış vaginal smear Sitoloji: 1) proestrous, un ile karakterize ağırlıklı nükleatlı epitel hücrelerinde oluşan 2) kızgınlıklar, boynuzsu hücrelerin-çekirdeklendirilebilmektedir; Çekirdekli epitel hücreleri (oklar), un-çekirdekli Boynuzsu epitel hücreleri (oklar) ve lökositlerin oluşan 3) Metestrus; Lökositlerin öncelikle oluşan 4) diöstrusun; ve B:. araç-VCD-enjekte grupların östrus döngüsü ortalama uzunluğu (gün). Bir döngü kızışma sonraki dönemin ilk gün kızışma ilk günden itibaren ölçülür. Vajinal sitoloji enjeksiyonlarının hücumunu takip eden yaklaşık 6 hafta başladı. VCD enjekte edilen hayvanların estrojen döngüleri aracı ile enjekte edilmiş hayvan ile karşılaştırıldığında, düzensiz hale. 8 aydan yumurtalık dokusu H &amp; E boyama: s ve 12 estrus çevriminden sonra, her VCD sitoloji bisiklet C belirtilmedikçe artık enjeksiyon yapılan hayvanlar. Araç-tedavi (sol panel) ve 20X de VCD-tedavi (sağ panel) fareler (üst panel) ve 200X (alt panel) büyütme için 5 mikron kalınlığında yapılan kesitler. 200X büyütmede yumurtalık dokusu araç-kıyasla VCD-tedavi edilen farelerde için folikül sayısını gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51083/51083fig2highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig3.jpg" /> Şekil 3. Araca veya VCD-tedavi C57Bl/6J dişi farelerde Gönüllü kafes tekerlek performans. Sol Panel: Ortalama koşu mesafesi (km /gün) 4 haftalık çalışma süresi boyunca her 1 hafta süreyle Orta Panel:.. Ortalama çalışma süresi (saat / gün) 4 haftalık çalışma süresi Sağ Panel üzerinde her 1 hafta süreyle: Ortalama çalışma hızı (km / saat) Her için 4 haftalık çalışma süresi boyunca 1 haftalık dönemdir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51083/51083fig3highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig4.jpg" /> Şekil 4,. Gönüllü kafes tekerlek ve araç ve VCD ile tedavi edilen farelerde ayak değirmeni performansı. A: (Üst Panel) C57BL / 6 ortalama çalışma mesafesi (km / gün) ve 4 haftalık çalışma süresi boyunca her 24 saat için tekerlek (saat / gün) harcanan zaman. (Bottom Panel) &amp; #160; B6C3F1 ortalama çalışma mesafesi (km / gün) ve 4 haftalık çalışma süresi B üzerinde her 24 saat için tekerlek (saat / gün) harcanan zaman: C57BL / 6 koşu bandı çalışan parametreleri.. Maksimum süre yöntemler bölümünde ayrıntılı protokolleri kullanarak (Üst Panel) ve maksimum hız (Botoom Panel).

İki paradigmalar egzersiz egzersiz kapasitesi ve egzersiz kardiyak adaptasyon menopozun etkisini incelemek için yeni geliştirilen kimyasal kaynaklı menopoz fare modeli üzerinde test edildi.

Farelerde Egzersiz Kapasitesi ve Kardiyak Uyum Kimyasal kaynaklı Yumurtalık Yetmezliği Etkisi Eğitim için Bir Yöntem

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

Bu prosedürün genel amacı, yumurtalıklardaki foliküler atrezi sürecini hızlandırarak yumurtalık yetmezliği, östrojen tükenmesi ve döngüsel aktivitenin sona ermesiyle sonuçlanan ve menopoz durumunu yakından taklit eden bir tablo oluşturmaktır. Bu, öncelikle, küçük primer ve primordial yumurtalık foliküllerini doğal atrezi süreçlerini hızlandırarak spesifik olarak hedeflediği ve yok ettiği kanıtlanmış olan vinil siklopropan dioksit veya VCD kimyasalının 15 ila 20 gün boyunca ardışık olarak uygulanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise VCD enjeksiyonlarının başlangıcından yaklaşık altı hafta sonra vajinal sitoloji ile östrus döngüsünün ve yumurtalık döngüselliğinin belirlenmesidir.Siklus kaybını ve yumurtalık yetmezliğini doğrulamak için vajinal sitoloji ile 15 ila 20 günlük sürekli dste veya siklus dışı durum gözlemlenmelidir. Son adım, gönüllü kafes tekerleği egzersizi ve kardiyak adaptasyon gibi menopozdan veya menopoza geçişten etkilenebilecek bir müdahalenin uygulanmasıdır. Nihayetinde, gönüllü kafes tekerleği aktivitesi ve kardiyak adaptasyon, menopozun kafes tekerleği aktivitesini azaltıp azaltmadığını göstermek için kullanılır.Bu tekniğin ekstomi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, ekstominin östrojenin aniden tükenmesine yol açan cerrahi bir işlem olmasıdır; oysa bu durum, premenopozdan postmenopoza geçiş sırasında meydana gelen doğal ve kademeli östrojen kaybından farklıdır. Bu tekniğin etkileri, postmenopozal kadınların premenopozal kadınlara kıyasla metabolik sendroma ve kardiyovasküler hastalıklar dahil ilgili komorbiditelere özellikle daha yatkın olmaları nedeniyle, postmenopozal kadınlardaki metabolik ve kardiyovasküler hastalıkların tedavisine kadar uzanmaktadır. Vajinal sitoloji basamaklarının öğrenilmesinin zor olması, uygun yayma tekniğinin uygulanması ve EST döngüsünün tanımlanması konusunda dikkatli olunması gerektiğinden, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik önem taşımaktadır.Dördüncü olarak, vinil siklin dioksit veya VCD, -20 °C'de saklanır. VCD'yi enjeksiyon protokolü için hazırlamak üzere, temiz bir dozaj vialine 0,87 mL VCD ekleyin ve son hacmi susam yağı ile 10 mL'ye tamamlayın, parafilm ile kapatın ve nazikçe ters çevirerek karıştırın. 4 °C'de yedi güne kadar saklayın.VCD enjeksiyon protokolüne başlamak için, iki aylık iki fareyi 20 gün boyunca ardışık olarak tartın ve enjeksiyon süresi boyunca, 27 gauge iğne kullanarak, oda sıcaklığındaki VCD'yi kilogram başına 160 miligram dozunda günlük intraperitonal enjeksiyonlar şeklinde uygulayın. Benzer şekilde, lokal enfeksiyon olasılığını azaltmak için enjeksiyon bölgelerini değiştirilmeye çalışın. Enjeksiyon süresi tamamlandıktan sonra, kontrol farelerine taşıyıcı solüsyon olarak kilogram başına 2,5 mililitre hacminde susam yağı enjekte edin.Vajinal yaymalar alarak östrus döngüsünü günlük olarak izleyin. Bu çalışmanın başarısı için kritik faktörlerden biri, sitolojik belirleme için yüksek kaliteli vajinal yaymalar elde etmektir. Fareleri sırt derisinden kavrama (dorsum scruff) yöntemiyle sabitleyin.Vajina ağzına 0,5 santimetre derinliğe kadar 0,2 mililitre steril salin içeren bir damlalık yerleştirin. Enjekte edilen salini damlalıkla üç kez karıştırın ve ardından boş bir lam üzerine bir damla bırakın. Over yetmezliğini doğrulamak için her bir örneği standart bir ışık mikroskobu altında 100x büyütmede derhal mikroskobik olarak değerlendirin.Ardından, VCD ile menopoza indüklenmiş fareler egzersiz deneylerinde kullanılır. Kafes çark düzeneği, çark dönüşüyle aktive olan dijital bir manyetik sayaçla donatılmış, beş santimetre genişliğinde koşma yüzeyine sahip 11,5 santimetre çapında bir çarktan oluşur. Her çark koşusu öncesinde, kafes çarkını üretici kılavuzuna göre test ederek kalibre edin.Koşu tekerleğinin iç çapını ölçün. Çevreyi hesaplayın ve tekerleği kafese monte etmek için bu değeri dijital sayaca tekerlek boyutu olarak girin, tekerleği kaydırın. Hayvan kafesinin üst tel kısmından geçirin.Çark standını, binder klipsler kullanarak kafes tellerine sabitleyin. Klipsler, tellerin üst kısmında, hayvandan uzak bir noktada olmalıdır. Bilgisayar kısmını ve tüm fazla kabloları kafes tellerinin arasından geçirin.Bilgisayar ile fazla kabloyu hayvanın erişemeyeceği bir yere yerleştirin. Bu, bilgisayarı ve fazla kabloyu tutmak için kafesin kablo tesisatının üzerine orta boy plastik bir tartım kabı yerleştirilerek sağlanabilir. Ardından, dijital manyetik sayıcının bilgisayar kısmını tekerlek standına sabitleyin.Dijital manyetik sayacın boşta kalan mıknatısını, bilgisayara giden mıknatıs kablosuyla aynı tarafta olacak şekilde merkez çubuğa koli bandı ile sabitleyin. Mıknatısı kemirme hasarına karşı korumak için yeterince bantladığınızdan emin olun. Mıknatıs, tekerleğin her dönüşünün, tekerleğin tam dönüşüne herhangi bir müdahale veya direnç olmadan bilgisayar tarafından kaydedileceği şekilde konumlandırılmalıdır.Koşu tekerleğini tekerleğe takın. Tekerlek standı direklerini tekerleğin merkezi çubuklarındaki montaj deliklerine yerleştirerek sabitleyin. Tekerleğin serbestçe dönebildiğinden emin olun.Düzenek, kemirme hasarı açısından günlük olarak izlenmeli ve gerektiğinde onarılmalıdır. Deney için, belirli bir batından alınan yedi aylık inbred C 57, black six ve B six C3 F1 dişi fareler rastgele egzersiz rejimine veya sedanter kontrol grubuna atanır. Deney hayvanları, 28 gün boyunca bir kafes çarkına engelsiz erişimi olan 47 x 26 x 14,5 cm'lik kafeslerde bireysel olarak barındırılır; kontrol hayvanları ise çarksız bir kafeste birlikte barındırılır.Tüm hayvanlara su ve standart sert kemirgen yemi verin. Manuel olarak lido ekleyin; manyetik sayaç tarafından sağlanan koşulan mesafe ve toplam koşu süresi günlük değerlerini kaydedin. 28 günlük egzersiz süresi boyunca doğru ve tutarlı değerler elde etmek için mesafe ve zaman değerlerini her gün aynı bir saatlik zaman dilimi içerisinde kaydedin. Her günün kaydından sonra, ertesi gün doğru okumalar yapıldığından emin olmak için manyetik sayacı sıfırlayın.Belirli egzersiz döneminin sonunda, ötanazi uygulanan hayvanların vücut ağırlıkları doku hasadı öncesinde kaydedilir. Kalbi çıkarmak için ventral taraftan medial bir insizyon yapın, diyaframı açın ve kalbi hızla görünür hale getirin. Kalbi tabanından kesin ve ventriküler kalıntı kanı yeterince temizlemek için soğuk fosfat tamponlu saline yerleştirin. Kalbi fazla dokulardan temizleyin, tüm kalbi tartın ve istenirse sıvı azotta şok dondurun.Ekstraksiyone dokuları toplayın, modifiye edilmiş buz gibi soğuk fosfat tamponlu salin çözeltisi ile yıkayın ve sıvı azotla soğutulmuş izopentanda şok dondurun. Bu çalışmada, ovaryen yetmezlik VCD tedavisi ile indüklenmiş ve vajinal yaymaların mikroskobik incelemesi ile doğrulanmıştır. Östrus döngüsündeki evre, epitel hücrelerinin oranıyla belirlenmiş; epitel hücreleri ve lökositler nicelendirilmiştir; PROE'lerde çekirdekli epitel hücreleri baskındır.Burada oklar çekirdekli hücreleri göstermektedir; östrus dönemindeki hücreler ağırlıklı olarak çekirdeksiz skuamöz epitel hücreleridir. Metrüs, lökositlerin baskın olduğu karma hücre tipleriyle karakterizedir. Diöstrüs ise lökositlerin hakimiyetindedir.Farelerde östrus döngüsü, VCD enjekte edilmeden önce tipik olarak dört gün sürer. Hayvanlar, 15 gün boyunca devam eden diastrus durumundan sonra asiklik olarak değerlendirilmiştir. Bu şekil, vehicle ve VCD enjekte edilen grupların östrus döngüsünün gün cinsinden ortalama uzunluğunu göstermektedir.Bir döngü, ES'deki ilk günden bir sonraki periyodun ilk gününe kadar ölçülür. ES vajinal sitolojisi, enjeksiyonların başlangıcından yaklaşık altı hafta sonra başlamıştır. VCD enjekte edilen hayvanların ESTRO döngülerinin, araç enjekte edilen hayvanlara kıyasla düzensizleştiği gözlemlenmiştir ve 12 estro döngüsünden sonra, VCD enjeksiyon protokolünün tamamlanmasıyla birlikte, tüm VCD enjekte edilen hayvanların sitolojisi artık döngü olduğunu göstermemiştir; over dokusu kesitlerinin H ve e boyaması, VCD ile tedavi edilen over dokusunda kontrollere kıyasla belirgin atrofi olduğunu ortaya koymuştur.20 x büyütmede ve 200 büyütmede incelendiğinde, VCD ile işlem görmüş dokuda primer ve primordial foliküllerin tamamen tükendiği gözlemlendi. Plasebo ile işlem görmüş dokunun aksine, VCD kaynaklı yumurtalık yetmezliğinin egzersiz performansı üzerindeki etkisi, iki farklı suştan yedi aylık VCD ve plasebo ile işlem görmüş farelerde test edildi; dört haftalık egzersiz süresi boyunca egzersiz yapan her hayvan için günlük kafes tekerleği egzersiz değerleri zaman ve mesafe olarak kaydedildi. Bu şekil, mesafe, zaman ve hız için günlük koşu değerlerinin haftalık ortalamalarını göstermektedir.Vehicle veya VCD uygulanan C 57, black six fareleri için, C 57, black six veya B six C3 F1 fare suşlarının her ikisinde de VCD ve vehicle uygulanan gruplar arasında günlük ortalama koşu mesafesi ve tekerlekte geçirilen süre ile ölçülen egzersiz performansında anlamlı farklar gözlemlenmemiştir. Bu durum, VCD kaynaklı yumurtalık yetmezliğinin gönüllü kafes tekerleği egzersizi üzerindeki etkisinin, gönüllü kafes egzersiz protokolü süresince en az iki fare suşunu aştığını göstermektedir. Vücut morfometrisi kaydedilmiş ve önceki gözlemlerle tutarlı olarak kalpler hızla çıkarılıp tartılmıştır.Mutlak kalp ağırlığı ve tibia uzunluğuna göre normalize edilmiş kalp ağırlığı ile ölçülen, kafes tekerleği egzersizine yanıt olarak gelişen kardiyak hipertrofi gözlemlenmiştir. Mutlak kalp kütlesi ve kalp ağırlığının tibia uzunluğuna oranı, sedanter karşıtlarına kıyasla vehicle ve VCD ile tedavi edilen farelerde anlamlı derecede daha yüksek olsa da, kontrol grubu ile VCD kaynaklı over yetmezliği arasında kardiyak hipertrofi açısından ölçülebilir bir fark saptanmamıştır. Gönüllü kafes tekerleği egzersizi yapan fareler, son aşamada hem yüksek hem de düşük şiddetli egzersiz kapasitelerini belirlemek amacıyla zorunlu koşu bandı egzersizine tabi tutulmuştur.Yüksek yoğunluklu protokolde, fareler bitkinlik belirtileri gösterene kadar ortalama bant hızı her 10 dakikada bir kademeli olarak artırıldı. Ortalama olarak, vehikül uygulanan farelerin maksimal hızı 26,7 ± 0,95 metre/dakika ve VCD uygulanan farelerin maksimal hızı bitkinlik öncesinde 28 ± 1,4 metre/dakika idi. Dayanıklılık kapasitesini değerlendirmek için 20 metre/dakika hızında düşük yoğunluklu koşu kullanıldı.Ortalama olarak, araç uygulanan farelerin tükenme öncesindeki maksimum süresi 28,3 ± 1,3 dakika, VCD uygulanan farelerin maksimum süresi ise 29,7 ± 1,4 dakikaydı. Araç ve VCD uygulanan gruplar arasında yüksek veya düşük şiddetli egzersiz kapasitesi açısından anlamlı bir fark bulunmamış olup, bu durum VCD ile indüklenen over yetmezliğinin fare egzersiz kapasitesi üzerinde herhangi bir etkisi olmadığını göstermiştir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik; hücresel, moleküler ve fizyolojik bilimler alanındaki araştırmacıların, rodentlerde menopozun rolünü keşfetmelerine zemin hazırlamıştır.Bu videoyu izledikten sonra, uygun VCD enjeksiyonlarının nasıl yapılacağı, vajinal sitolojinin nasıl yürütüleceği ve fizyolojik bir müdahalenin nasıl uygulanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

a-method-to-study-impact-chemically-induced-ovarian-failure-on

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Laboratuvar farelerinde şok ızgarası kullanılmadan egzersiz dayanıklılığını değerlendirmek için bir yöntem gösterilmiştir. Bu yöntem, stresin deneysel parametreler üzerindeki kafa karıştırıcı etkilerini azaltabilen insancıl bir iyileştirmedir.

Bir Şok Grid Kullanımı olmadan Kemirgen Egzersiz Endurance Değerlendirilmesi: Zorla Egzersiz Alternatif Bir

Hipoksi yoğun eğitim sprint yeteneği tekrarlanan vasküler uyarlamalar potansiyel olarak bazı hastalarda yararlı ikna etmek ve sporcuların geliştirmek için kanıtlanmış bir protokoldür. Burada, protokol ve ex vivo vasküler işlevi değerlendirme sistemini kullanarak bu vasküler uyarlamalar tanımlamak fizibilite eğitim fare kullanarak sınayın.

Supramaximal yoğunluğu hipoksik egzersiz ve farelerde vasküler işlevi değerlendirme

Kısa oturum (≤10 min) yüksek yoğunluk ara egzersiz (HIIT) daha uzun egzersiz yöntemleri için bir alternatif olarak ortaya çıkıyor, henüz daha kısa türevleri nadiren hayvan çalışmalarında modellenmiştir. Burada, biz 10 dk tarif, 3 gün bir hafta, yokuş yukarı koşu bandı HIIT protokolü bu erkek fiziksel performansını yükseltir ve dişi fareler yaşlı.

Kısa oturum yüksek yoğunluklu ara egzersiz ve koşu bandı değerlendirme yaşlı farelerde

Klinik olarak, menopozal kadınlarda östrojen eksikliği lipid bozulması ve ateroskleroz insidansını ağırlaştırabilir. ApoE-/- farelerde çift dorsal-lateral kesi ile bilateral ovariektomi ile in vivo östrojen eksikliği modeli oluşturduk. Fare modeli menopoz sonrası kardiyovasküler disfonksiyon eksojen östrojen tedavileri tarama için geçerlidir.

Menopoz Sonrası Kardiyovasküler Disfonksiyon Exogenous Östrojen Tedaviler Tarama için Bir In Vivo Östrojen Eksikliği Fare Modeli

Daha önce dondurulmuş arşivlenmiş katı dokulardan mitokondri ile zenginleştirilmiş örneklerin hazırlanması, araştırmacıların çeşitli deneysel yöntemlerde mitokondrilerin hem fonksiyonel hem de analitik değerlendirmelerini yapmalarına izin verdi. Bu çalışma, donmuş kalp dokusundan mitokondri ile zenginleştirilmiş preparatların nasıl hazırlanacağını ve mitokondrilerin analitik değerlendirmelerinin nasıl yapıldığını göstermektedir.

Daha Önce Dondurulmuş Kardiyak Dokudaki Mitokondriyal Elektron Transfer Komplekslerinin Sow'un Yavrularından Ölçülmesi: Egzersize Bağlı Mitokondriyal Biyoenergetik Değişikliklerini Değerlendirmek için Bir Model

Gebelik oluşumu, kompleks embriyo ve uterus çapraz ilişkisini içeren dinamik bir süreçtir. Maternal uterin ortamın bu süreçlere kesin katkıları aktif bir araştırma alanı olmaya devam etmektedir. Burada, bu araştırma sorularını ele almak için in vivo hayvan modellerinin tasarlanmasına yardımcı olacak ayrıntılı protokoller sağlanmaktadır.

Yumurtalık Ameliyatlı Fare Modelinde Gebelik Oluşumuna Uterus Katkılarını İnceleme Yöntemleri

Çeşitli ekstragonadal doku ve organlarda folikül stimüle edici hormon (FSH) birçok hastalığın patogenezi ile ilişkilidir. Yumurtalıklı ve FSH ile tedavi edilmiş fare modeli (OVF), FSH'nin ekstragonadal etkilerini araştırmak için kullanılabilir.

Folikül Uyarıcı Hormonun Bağımsız Etkilerinin Bir Fare Modelinde İn Vivo Olarak Araştırılması

Bu protokol, mini pompalar kullanılarak kontrollü letrozol salınımı yoluyla farelerde polikistik over sendromu (PCOS) modellerini indüklemek için bir teknik sunar. Yeterli anestezi altında, mini pompa deri altına implante edildi ve mini pompa salınımından belirli bir süre sonra farelerde PCOS başarılı bir şekilde indüklendi.

Farelerde Polikistik Over Sendromunu İndüklemek İçin Modifiye Edilmiş Bir Teknik

Bu makale, farklı kalp atış hızlarında basınç/hacim analizi yoluyla murin sol ventrikül fonksiyonunun ölçümünü açıklamaktadır.

Bowditch Efekt incelenmesi: Basınç Hacim İlişkisi Tedbir Fare Kardiyak Kateterizasyon

Bu çalışma, insan iskelet kasındaki mitokondriyal oksidatif fosforilasyon (OXPHOS) kapasitesini ölçmek için in vivo fosfor-31 manyetik rezonans spektroskopisi (31PMRS) tekniğinin fizibilitesini göstermektedir.

Fosfor-31 Manyetik Rezonans Spektroskopisi: Ölçme için Aracı İn Vivo Mitokondriyal Oksidatif Fosforilasyon Kapasitesi

Keşfedin kimyasal yolla menopoz oluşturulan fare modellerinde egzersiz kapasitesi ve kardiyak uyum üzerine etkileri. VCD uygulaması, vajinal sitoloji ve gönüllü kafes tekerleği egzersizi ile kalp sağlığı araştırmalarına yönelik önemli bir yöntem sunar.

Farelerde Egzersiz Kapasitesi ve Kardiyak Uyum Kimyasal kaynaklı Yumurtalık Yetmezliği Etkisi Eğitim için Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet