Name: Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-06T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: Öğrenin, ultrason eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon ile meme kanseri beyin metastazı fare modeli geliştirmeyi. Bu yöntem, 9.4 T MRG ile tümör gelişimini invaziv olmayan şekilde izlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Dr minnettarız. Bize MDA-MB231Br hücreler sağlamak için Diane Palmieri ve NCI Patricia Steeg. Biz teknik ve meslekdaşlar destek için Dr Ralph Mason, Bay Jason Reneau ve Perran Lopes teşekkür ederim. Bu çalışma DOD IDEA Awards W81XWH-08-1-0583 ve W81XWH-12-1-0317 tarafından kısmen desteklenmiştir. MR deneyler Gelişmiş Görüntüleme Araştırma Merkezi, bir NIH BTRP # P41-RR02584 tesis yapıldı ve ultrason rehberliğinde intrakardiyak enjeksiyon 1S10RR02564801 altında VisualSonics Vevo 770 ile gerçekleştirildi.

Bütün hayvan prosedürleri Teksas Üniversitesi Güneybatı Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. 1.. MDA-MB231/Br-GFP Hücreler hazırlanması <ol><li> % 10 FBS,% 1 glutamin ve% 1 penisilin / streptomisin içeren DMEM ortamı içinde (nazik Dr. Palmieri ve Steeg, NCI tarafından sağlanan) MDA-MB231/Br-GFP hücrelerini almak ve kültür. </li><li> Hücreler ve ortamın rengi durumunu dikkate alınız, ve her 2-3 günde bir ortam değiştirin. </li><li> Tripsinize ve adımda tarif edildiği gibi% 80 izdiham 1.3.1-1.3.5 ulaşıldığında hücreleri toplamak: <ol><li> Tamamen eski orta çıkarın ve yavaşça Hücreleri yıkamak için 5 ml PBS (1x) ekleyin. Çanak PBS çıkarın. </li><li> Çanak 1.5 ml Tripsin ekleyin, tüm hücreler tripsin tarafından karşılanmaktadır sağlamak için hafifçe çanak eğin. Geri hücre kuluçka makinesi için çanak koyun ve 1 dakika boyunca 37 ° C&#39;de tutun. </li><li> Kuluçka çanak alın ve gözlemlemekhücreler sağlamak için bir optik mikroskop altında, hücreler çanak ayırmak. </li><li> Tripsin etkisini durdurmak için 3 ml orta ekleyin. Bir santrifüj tüpüne hücre karışımını toplamak. 5 dakika boyunca 2,000 rpm&#39;de santrifüje karışımı. </li><li> Dikkatlice Ortamı çıkarın ve homojen hale gelinceye kadar 5 ml serum barındırmayan ortam içinde hücreler tekrar süspansiyon haline getirin. </li></ol></li><li> Uygun hücre sayısını ve 100 ul hacim içinde 1.75 x 10 5 hücre bir son konsantrasyona bulunan serumsuz DMEM ortamı içine tekrar süspansiyon. <ol><li> 50 ul hücre karışımı alın ve 50 ul Trypan Mavi ekleyin. Karıştırma işleminden sonra, 10 ul karışımı almak ve dikkatli bir şekilde hücre sayımı slayta ekleyin. Doğru hücre sayısı tahmini sağlamak için birden çok örnekleri kullanın. </li><li> Hücre sayımı slayt, bir seferde bir uç ile otomatik hücre sayacı saymaya başlar sopa. Bütün sayma sonuçların ortalama alın ve toplam hücre sayısını hesaplayın. </li><li> Yine hücreler santrifüj ve bunları tekrar süspansiyonhacim ul 1.75 x 10 5 hücre/100 nihai konsantrasyonu ile sonuçlanması serumsuz ortamda uygun hacmi. </li></ol></li><li> Önce intrakardiyak enjeksiyon için buz üzerine yerleştirin hücreleri. </li></ol> 2. Ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon <ol><li> Eski 6-8 hafta arası kadın çıplak fareler (BALB / c nu / nu) kullanın. </li><li> Görüntüleme sistemi oturum açın. Dönüştürücü 704 (40 MHz) başlat. </li><li> Yeni bir çalışma başlatın ve bilgileri doldurun. </li><li> Anestezisi (indüksiyon odasında% 3 isoflurane/100% O 2) ve bir burun konisi yoluyla tüm prosedür esnasında% 100 O 2 (1 dm 3 / dak) izofluran (% 2) ile hayvanları korumak. Hiçbir geri çekilme refleksi ayak tutam ile görülmektedir zaman anestezi teyit edilir. </li><li> 37 ° C için görüntüleme tablo sıcaklığını ayarlama Sırtüstü pozisyonda ısıtılmış görüntüleme masaya anestezi fare bantlayın. </li><li> Im önce 37 ° C &#39;de, ultrason jel Olyaşlanma. Fare göğüs jel uygulanır. </li><li> Tutucuya vericiyi. Istenen görüntüleme derinlik ulaşana kadar dönüştürücüyü indirin. Sol ventrikül dönüm noktası olarak çıkan aorta (Şekil 1A) ile tespit edilene kadar sahne taşıyın. Sol ventrikül net bir manzara görüntülenmiştir sahne kilitleyin. </li><li> Bir 22 G iğne ile bir 1 ml şırınga içine hücre karışımı 100 ul çizin. Yerleştirin ve montaj şırınga şırınga düzeltmek. </li><li> Fare göğüs doğru ileri şırınga taşımak ve iğne ucu (fareyi girmeden önce) görüş görüntüleme alanında olduğu kadar dikkatli tarafına tarafına taşımak. </li><li> Sol ventrikül aşağı hedefliyoruz iğne yüksekliğini ve açısını ayarlayın. </li><li> Ultrasonografi rehberliği altında sol ventrikül içine derhal cilt ve kas katmanları üzerinden intercoastal uzaya şırınga iğnesi nüfuz. Sol ventrikül içine iğnenin sokulması başarılı bir göstergesicle şırıngaya taze arteriyel kan (koyu kırmızı kan venöz aksine pembe renkli) reflü </li><li> Hücre karışımı yavaş yavaş (Şekil 1 B) enjekte edilir. </li><li> Tamamlanmasından sonra, iğneyi dönüştürücüyü yukarı kaldırın, nemli gazlı bez ile ultrason jeli temizlemek ve bandı çıkarın. </li><li> Önceden ısıtılmış pad ile temiz bir kafes hazırlayın. </li><li> Pad üzerinde hayvan koyun ve tam iyileşme kadar hayvan gözlemlemek. </li><li> Hayvanın davranışı iki gün boyunca her 24 saat izleyin. </li><li> Genel şartlar ve deney farelerinde komplikasyonlar nörolojik bulgular rutin izlenir. </li></ol> 3. İntrakraniyal Tümör Kalkınma MRG takibi <ol><li> Beyin metastazı intrakranial gelişimini izlemek için 9.4 Tesla mıknatıs kullanın. </li><li> Iki hafta Tümör implantasyon sonrası MRG başlatmak ve üç hafta boyunca haftada bir kez tekrarlayın. </li><li> % 3 izofluran ile hayvanları sakinleştirin ve gen altında onları korumakral anestezi (% 1.5 izofluran). </li><li> Monitör ve deney boyunca hayvanın vücut ısısı ve solunum sabit tutmak. </li><li> Yüksek çözünürlüklü kesitli (1 mm ile 14 dilim kalın, hiçbir boşluk) T 1 - ve T 2 ağırlıklı koronal posterior fossa frontal lob gelen bölgeyi kapsayan görüntüleri, aşağıdaki parametreleri ile elde edilir: T 1-ağırlıklı görüntüler: echo birden dilim (SEMS) dönmeye, TR / TE = 400 msec/20 msn, matriks: 256 x 256, uçak çözünürlükte FOV 20 x 20 mm, 78 x 78 mikron 2. T 2-ağırlıklı görüntüler: 256 x 256, FOV 20 x 20 mm, düzlem çözünürlüğü: 78 x 78 mikron hızlı spin birden dilim (FSEMS) dizileri, TR / TE = 2500 msec/48 msn, 8 yankı trenler, matris echo 28,9. Tümör lezyonlar T 2-ağırlıklı görüntülerde normal beyin dokusuna göre daha parlak görünür. </li><li> Tümör boyutu elle donanımı tak özetleyen T 2-ağırlıklı görüntülerde belirlenirBizim 8 tarafından yazılmış MATLAB programlarını kullanarak her bir resmin üzerine kitle bölümünü dans ediyorum. Çapı, kesit kalınlığı (1 mm) &#39;den küçük olan, tümörün en çok göz önüne alındığında, tümör boyutu oldukça hacimden düzlemi alanında olarak sunulmuştur. </li></ol> 4. H &amp; E Boyama Metastazlari Onaylanması <ol><li> Tümör taşıyan beyinleri incelemek hemen son MR taradıktan sonra fareler feda ve Ekim ortamı içine gömmek ve -80 ° C de donduruldu </li><li> Bölüm 10 mikron kalınlığında koronal beyin bir dizi kriostat sahip örnekler. </li><li> Beyin kesitlerinde H &amp; E boyama yapın. </li></ol>

<ol><li>Schouten, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+brain+metastases+in+a+cohort+of+patients+with+carcinoma+of+the+breast%2C+colon%2C+kidney%2C+and+lung+and+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Incidence of brain metastases in a cohort of patients with carcinoma of the breast, colon, kidney, and lung and melanoma.</a> Cancer. 94, 2698-2705 (2002).</li>
<li>Lin, N. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+metastases+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">CNS metastases in breast cancer.</a> J. Clin. Oncol. 22, 3608-3617 (2004).</li>
<li>Eichler, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+brain+metastases-translation+to+new+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">The biology of brain metastases-translation to new therapies.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. , (2011).</li>
<li>Lockman, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+blood-tumor+barrier+permeability+determines+drug+efficacy+in+experimental+brain+metastases+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous blood-tumor barrier permeability determines drug efficacy in experimental brain metastases of breast cancer.</a> Clin. Cancer Res. 16, 5664-5678 (2010).</li>
<li>Yoneda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bone-seeking+clone+exhibits+different+biological+properties+from+the+MDA-MB-231+parental+human+breast+cancer+cells+and+a+brain-seeking+clone+in+vivo+and+in%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A bone-seeking clone exhibits different biological properties from the MDA-MB-231 parental human breast cancer cells and a brain-seeking clone in vivo and in.</a> 16, 1486-1495 (2001).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Her-2+overexpression+increases+the+metastatic+outgrowth+of+breast+cancer+cells+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Her-2 overexpression increases the metastatic outgrowth of breast cancer cells in the brain.</a> Cancer Res. 67, 4190-4198 (2007).</li>
<li>Percy, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+changing+blood-tumor+barrier+permeability+in+a+mouse+model+of+breast+cancer+metastasis%3A+a+complementary+magnetic+resonance+imaging+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Radiol%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of changing blood-tumor barrier permeability in a mouse model of breast cancer metastasis: a complementary magnetic resonance imaging approach.</a> Invest. Radiol. 46, 718-725 (2011).</li>
<li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+MRI+evaluation+of+intracranial+development+and+vascular+characteristics+of+breast+cancer+brain+metastases+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Longitudinal MRI evaluation of intracranial development and vascular characteristics of breast cancer brain metastases in a mouse model.</a> PLoS One. 8, (2013).</li>
<li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+near-infrared+optical+imaging+of+2-deoxyglucose+uptake+by+intracranial+glioma+of+athymic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dynamic near-infrared optical imaging of 2-deoxyglucose uptake by intracranial glioma of athymic mice.</a> PLoS One. 4, (2009).</li>
<li>Zhang, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+permeability+of+the+blood-brain+barrier+in+experimental+brain+metastases+produced+by+human+neoplasms+implanted+into+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Differential permeability of the blood-brain barrier in experimental brain metastases produced by human neoplasms implanted into nude mice.</a> Am. J. Pathol. 141, 1115-1124 (1992).</li>
<li>Mason, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+oximetry%3A+comparison+of+19F+MR+EPI+and+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor oximetry: comparison of 19F MR EPI and electrodes.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 530, 19-27 (2003).</li>
<li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pazopanib+reveals+a+role+for+tumor+cell+B-Raf+in+the+prevention+of+HER2%2B+breast+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Pazopanib reveals a role for tumor cell B-Raf in the prevention of HER2+ breast cancer brain metastasis.</a> Clin. Cancer Res. 17, 142-153 (2010).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu çalışmada, bu çalışmada geliştirilen beyin metastazı her hayvan ve hayvansal ölüm gözlenmedi böylece ultrason görüntüleme rehberliğinde sol ventrikül enjeksiyon doğruluğunu garanti olduğunu göstermiştir. Görüntü kılavuzlu enjeksiyon güzelliği deri ve son olarak da, sol ventrikül içine iğne penetrasyon yolu izlenir ve takip etmek katı anatomik yerler gerektiren Manüel prosedür ayrıdır görüntüsü altında ayarlanabilir olmasıdır. Beyin metastazı intrakranial geliştirme mevcut anlayışların büy...

Beyin metastazı erişkinlerde en sık görülen intrakranial hastalıktır. Prognoz bile agresif tedavi ile 4-6 aylık bir medyan sağkalım, son derece kötüdür. Meme kanseri beyin metastazı 1-3 yüksek morbidite ile üç büyük temel kanserlerden biridir. Çeşitli beyin-tropik meme kanseri hatları intrakardiyak veya intracarotid enjeksiyondan sonra 4 beyin metastazı geliştirme yeteneğine sahiptir. Sol ventrikül içine tümör hücrelerinin direkt enjeksiyon akciğer kılcal yatak atlamak ve böylece visseral metastaz en aza beyin metastazı oluşturan sıklığını artırabilir. MDA-MB231Br hat kemirgen modellerinde 5,6 beyin metastazı geliştirmek için en yaygın olarak kullanılan insan göğüs kanser hücre dizilerinde biridir. Diğer birçok çalışmalarda 4,7 gibi, bizim daha önceki çalışmalarda intrakardiyak enjeksiyon manuel işlem gerçekleştirdik. Ancak sadece% 50 başarılı oran kılavuzu ile elde edildiönceki denemeleri başarısız olursa enjeksiyon ve farelerin bir kısmı tekrarlanan invaziv prosedürler öldü. Burada, atimik farelerde sol ventrikül içine, beyin arayan meme kanseri hücrelerinin enjeksiyonu sağlamak için bir görüntüleme rehberliğinde prosedürünün kullanımını sunuyoruz. Boyuna yüksek çözünürlüklü MRI beyin metastazı intrakranial gelişimini takip uygulanır.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>HyClone</td><td>SH30022.01</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Mediatech</td><td>25-051-C1</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Otomatik hücre sayacı</td><td>BioRad</td><td>TC10</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Baxter Uluslararası A.Ş.</td><td>1001936060</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>VisualSonics Vevo 770 Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme Sistemi&nbsp;</td><td>Görsel Sonik A.Ş.</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Varian INOVA Unity sistemli 9.4 T yatay delikli mıknatıs&nbsp;</td><td>Agilent</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>O.C.T Bileşik</td><td>Sakura Finetek ABD</td><td>4583</td><td>&nbsp;</td></tr></tbody></table>

boyuna mrg ardından meme kanseri beyin metastaz bir fare modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

Ultrasound Imaging-guided Intracardiac Injection to Develop a Mouse Model of Breast Cancer Brain Metastases Followed by Longitudinal MRI

Meme kanseri beyin metastazı, evre IV meme kanseri hastalarının% 30&#39;unda görülen, yüksek mortalite ile ilişkilidir. Medyan sağkalım sadece 6 aydır. Bu, klinik senaryo olarak metastatik hücrelerin yayılmasını hemodinamik taklit etmek için uygun hayvan modelleri olması önemlidir. Burada, atimik çıplak farelerin sol ventrikül içine, beyin tropikal göğüs kanseri hücrelerinin doğru bir kılavuz enjeksiyon için küçük bir hayvan ultrason görüntüleme kullanımını sunuyoruz. Boyuna MRG intrakranial başlatılması ve beyin metastazlarının büyümesini değerlendirmek için kullanılır. Ultrason eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon doğru enjeksiyon ve bu vesile ile daha yüksek bir oranda başarılı değil sadece sağlar, aynı zamanda bizim önceki el yordamı ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak mortalite oranı azalmıştır. In vivo yüksek çözünürlüklü MRI gibi küçük, hiperintens multifokal lezyonların görülmesini sağlar 310 mikron T üzerinde çapı 3 hafta sonrası enjeksiyon görüntüleri 2-ağırlıklı. Follow-up MR intrakranial tümör büyümesini ve tüm beyin çapında dağıtmak metastaz artan sayısını ortaya koymaktadır.

MRG (düzlem çözünürlükte 78 mikron) yüksek uzaysal çözünürlüğü ile hiperintens lezyonlar (Şekil 2) çapı 310 mikron kadar küçük tespit edilebilir. Bu çalışmada metastaz çok küçük ve nekroz ve ödem gelişme olduğu T-2 ağırlıklı görüntülerde hiperintens lezyon gerçekten tümör kitlesini temsil az. Uzunlamasına MRI çalışmaları, tümör büyümesinin vivo noninvaziv değerlendirilmesinde sağlar. Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, yüksek çözün...

Bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli MDA-MB231/Br-GFP hücreleri ultrason görüntüleme kılavuzluğunda intrakardiyak enjeksiyonu ile kurulmuştur. Multifokal intrakranial metastaz gelişimi, yüksek çözünürlüklü 9.4 T MR kullanılarak uzunlamasına izlenir olmuştur.

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 ...

Bu prosedürün genel amacı, MRI ile takip edilebilen bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli oluşturmak için ultrason rehberliği kullanmaktır. Bu işlem, beyin tropik meme kanseri hücrelerinin toplanması ve sol ventriküle enjekte edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, ultrason rehberliği yardımıyla intrakraniyal tümör gelişimi izlenir.MRI kullanılarak ve H&E boyamasıyla metastazlar doğrulanır. Sonuç olarak, görüntü rehberliğinde yapılan hassas enjeksiyon; meme kanserinin beyin metastazlarının oluşumunun, gelişiminin ve izlenmesinin başarısını önemli ölçüde artırabilir. Boylamsal MRI, meme kanserinin oluşumunun ve gelişiminin non-invaziv bir şekilde izlenmesini sağlar.Tüm hayvan prosedürleri, Teksas Güneybatı Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Bu protokol için %10 FBS, %1 glutamin ve %1 penisilin-streptomisin içeren DMEM ortamında kültüre edilmiş M-D-A-M-B 2 31 B-R-G-F-P hücrelerini hazır bulundurun. Hücrelerin durumunu sürekli izleyin ve besiyerini her iki ila üç günde bir değiştirin. %80 konfluens elde edildiğinde, tripsinize edin ve hücreleri toplayın.Öncelikle, eski besiyerini vakumlu pipet yardımıyla tamamen uzaklaştırın. Ardından, tüm hücreler PBS ile kaplanana kadar hücreleri nazikçe yıkamak için beş mililitre PBS ekleyin. Daha sonra yıkama solüsyonunu uzaklaştırın.Ardından, kaba 1,5 mililitre tripsin ekleyin. Tüm hücrelerin tripsinle kaplandığından emin olmak için kabı hafifçe eğin. Kabı tekrar 37 °C'deki hücre inkübatörüne yerleştirin.Bir dakika bekleyin ve hücreleri mikroskop altında gözlemleyin. Eğer yuvarlaklarsa ve yüzüyorlarsa, ayrılmışlar demektir. Sindirimi durdurmak için üç mililitre besiyeri ekleyin ve hücre karışımını bir santrifüj tüpüne pipetleyin.Karışımı 1.160 G'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Ardından, vakumlu bir pipet kullanarak medyumu dikkatlice uzaklaştırın. Sonra, belirgin bir hücre peleti görülmeyene ve çözelti 50 µL'lik hücre karışımı için homojen görünene kadar, hücreleri bir pipet yardımıyla beş mililitre serumsuz medyum içerisinde nazikçe yeniden süspanse edin.İyice karıştırıldıktan sonra 50 µL trypan blue ekleyin. Birkaç hücre sayım lamına 10 µL'lik porsiyonlar halinde ekleyin. Ardından, hücre sayacı değerlerinden hücreleri sayın.Tüm sayımların ortalamasını hesaplayın ve kullanın. Şimdi daha hassas bir hücre süspansiyonu hazırlayın. Hücreleri tekrar santrifüjleyin ve serumsuz ortamın 100 µL'sinde 175.000 hücre olacak şekilde yeniden süspand edin.Ardından, hücreleri intrakardiyak enjeksiyon için buz üzerinde saklayın. Bu protokol için altı ila sekiz haftalık dişi BC nude fareler kullanın. Görüntüleme sistemine giriş yapın ve probu başlatın.40 megahertz değerinde 7 0 4. Yeni bir çalışma başlatın ve bilgi istemlerini uygun şekilde doldurun. Ardından, fareyi anestezi altına alın ve anesteziği bir burun konisi aracılığıyla uygulayın.Kılavuzlu enjeksiyon sırasında, görüntüleme masasının sıcaklığını 37 °C'ye ayarlayın ve fareyi sırtüstü pozisyonda masaya bantlayın. Ultrason jelini görüntüleme öncesinde 37 °C'de tutun ve farenin göğüs bölgesine bir miktar uygulayın. Ardından transdüseri tutucuya yerleştirin ve istenen görüntüleme derinliğine kadar indirin.Ardından, asendan aorta'yı referans noktası olarak kullanarak sol ventrikül belirlenene kadar sahneyi hareket ettirin ve görüntünün en net olduğu noktada sahneyi sabitleyin. Şimdi, 22 gauge iğneli bir mililitrelik bir şırıngaya 100 µL soğutulmuş hücre karışımı çekin. Dolu şırıngayı şırınga tutucuya sabitleyin.Ardından şırıngayı göğüs bölgesine doğru hareket ettirin. Fareye giriş yapmadan önce, iğne ucu görüntüleme alanı görüş açısına girene kadar iğneyi dikkatlice yanlara doğru hareket ettirin. İğne yüksekliğini ve açısını sol ventrikülü hedefleyecek şekilde ayarlayın ve uygun konuma geldiğinde, iğneyi hızla deri ve kas tabakaları üzerinden sol ventriküle doğru batırın.Ultrason görüntüsü rehberliğinde, sol ventriküle başarılı bir şekilde girildiğinin göstergesi, şırıngaya taze pembe arteriyel kanın geri gelmesidir. Ardından hücre karışımını yavaşça enjekte edin, iğneyi geri çekin, transduseri kaldırın ve ultrason jelini nemlendirilmiş gazlı bezle temizleyin. Daha sonra hayvanı banttan kurtarın ve önceden ısıtılmış bir ped bulunan temiz bir kafese aktarın.Fare tamamen iyileşene kadar gözlemleyin ve ardından birkaç gün boyunca her gün kontrol edin. Düzlem çözünürlükte 78 kare mikron kullanılarak, 310 mikron çapındaki MRI hiperintens lezyonlar belirlenebilir. Bu çalışmadaki metastazlar çok küçük olduğundan ve nekroz ile ödem minimum düzeyde kaldığından, T2 ağırlıklı görüntülerdeki hiperintens lezyonlar gerçek anlamda tümörü temsil etmekteydi.Kütleli boylamsal MRI çalışmaları, tümör büyümesinin in vivo non-invaziv değerlendirmesine olanak tanır. Yüksek çözünürlüklü MRI, intrakardiyak enjeksiyondan üç hafta sonra birkaç küçük lezyonu tespit edebilmiştir; dördüncü haftada, önceki taramada görülen tüm lezyonlar büyümüştür. T2 ağırlıklı görüntülerde daha fazla yeni lezyon ortaya çıkmıştır.H ve E boyaması diffüz metastatik lezyonları veya H ve E boyaması küme tipi metastatik lezyonları ortaya çıkardı. Tümör çevresinde sıklıkla görülen genişlemiş damarlar, filizlenme dışı anjiyogenezin gerçekleştiğini göstermekteydi. Bu videoyu izledikten sonra, bir fare kalbinin sol ventrikülüne ultrason görüntüleme rehberliğinde iğne enjeksiyonunun nasıl yapılacağı konusunda iyi bir bilgi sahibi olmalısınız.

ultrasound-imaging-guided-intracardiac-injection-to-develop-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Hipoksi indüklenebilir faktör-1α aktivite Biyoparlaklık görüntüleme, bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli intrakranial tümör hipoksi gelişimini izlemek için uygulanır.

Meme Kanseri Beyin metastaz tümör Hipoksi Dynamics in vivo Biyoparlaklık Görüntüleme Fare Modeli

Kemik metastazının patogenezine, anjiyojenez önemli bir proses ve bu nedenle görüntüleme ve tedavi için bir hedef temsil eder. Burada siteye özel meme kanseri kemik metastazı bir sıçan modeli sunmak ve non-invaziv görüntü anjiyogenez için stratejiler...

Manyetik Rezonans Görüntüleme, Volumetrik Bilgisayarlı Tomografi ve Ultrason Kullanımı Meme Kanseri Kemik metastazı bir Nude Rat Model Angiogenezis Multi-modal Görüntüleme

Ekokardiyografi perkü- intramiyokardiyal enjeksiyon sıçangil kalp gen transfer ajanları veya hücre verilmesi için etkili, güvenilir ve hedeflenebilir yaklaşımı olmaktadır. Bu protokolde belirtilen adımları izleyerek, operatör hızla bu çok yönlü, minimal invaziv teknikle yetkin olabilir.

Farelerde ultrason eşliğinde transtorasik intramiyokardiyal Enjeksiyon

Kanser tümörü çevreleyen dokunun hem de yerel pro- ve anti-inflamatuar aracılar tarafından etkilenir kompleks bir hastalıktır. Bu nedenle, daha çok deri altı modellere göre ortotrop enjeksiyon modelleri, bir şekilde daha iyi taklit eden insan patoloji kanser ilerlemesinin incelemek için yararlı olabilir.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

tedavi seçenekleri palyatif kalmıştır ise görülme sıklığı artmıştır olarak beyin metastazı acil karşılanmamış tıbbi ihtiyaç haline gelmiştir. Kanser hücrelerinin intracarotid arteriyel enjeksiyon yoluyla beyin metastazı deneysel hayvan modelleri oluşturma yeni müdahale rejimlerinin hastalığın biyolojisi ve değerlendirilmesi mekanik çalışmaları kolaylaştırır.

Intracarotid Kanser Hücre Enjeksiyon Beyin metastaz Fare modelleri üretmek için

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

İntrakraniyal beyin metastazı modellemesi, tümör boyutunun izlenememe ve tedaviye tam ve zamanında yanıt verilememesi ile karmaşıktır. Sunulan metodoloji çiftler manyetik rezonans görüntüleme analizi ile intrakranial tümör enjeksiyonu, kombine edildiğinde, hassas ve tutarlı enjeksiyonlar, gelişmiş hayvan izleme ve doğru tümör hacmi ölçümleri yetiştirir.

İntrakraniyal Enjeksiyon ve Manyetik Rezonans Görüntüleme Ile Beyin Metastazlarının Modellenmesi

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Beyin metastazı kanser hastalarında ciddi morbidite ve mortalite nedenidir. Çoğu beyin metastazı fare modeli, mortalite ve terapötik müdahale sonuçlarının kafa karıştırıcı analizini karıştıran sistemik metastazlar ile karmaşıktır. Burada, minimal sistemik tümörlerle tutarlı intrakraniyal tümörler üreten kanser hücrelerinin internal karotis enjeksiyonu için bir protokol sunulmaktadır.

Kanser Hücrelerinin İç Karotis Arter Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Öğrenin, ultrason eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon ile meme kanseri beyin metastazı fare modeli geliştirmeyi. Bu yöntem, 9.4 T MRG ile tümör gelişimini invaziv olmayan şekilde izlemeyi sağlar.

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon (Video) | JoVE Journal

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

Daha fazla video keşfet