Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

Bu prosedürün genel amacı, MRI ile takip edilebilen bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli oluşturmak için ultrason rehberliği kullanmaktır. Bu işlem, beyin tropik meme kanseri hücrelerinin toplanması ve sol ventriküle enjekte edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, ultrason rehberliği yardımıyla intrakraniyal tümör gelişimi izlenir.

MRI kullanılarak ve H&E boyamasıyla metastazlar doğrulanır. Sonuç olarak, görüntü rehberliğinde yapılan hassas enjeksiyon; meme kanserinin beyin metastazlarının oluşumunun, gelişiminin ve izlenmesinin başarısını önemli ölçüde artırabilir. Boylamsal MRI, meme kanserinin oluşumunun ve gelişiminin non-invaziv bir şekilde izlenmesini sağlar.

Tüm hayvan prosedürleri, Teksas Güneybatı Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Bu protokol için %10 FBS, %1 glutamin ve %1 penisilin-streptomisin içeren DMEM ortamında kültüre edilmiş M-D-A-M-B 2 31 B-R-G-F-P hücrelerini hazır bulundurun. Hücrelerin durumunu sürekli izleyin ve besiyerini her iki ila üç günde bir değiştirin. %80 konfluens elde edildiğinde, tripsinize edin ve hücreleri toplayın.

Öncelikle, eski besiyerini vakumlu pipet yardımıyla tamamen uzaklaştırın. Ardından, tüm hücreler PBS ile kaplanana kadar hücreleri nazikçe yıkamak için beş mililitre PBS ekleyin. Daha sonra yıkama solüsyonunu uzaklaştırın.

Ardından, kaba 1,5 mililitre tripsin ekleyin. Tüm hücrelerin tripsinle kaplandığından emin olmak için kabı hafifçe eğin. Kabı tekrar 37 °C'deki hücre inkübatörüne yerleştirin.

Bir dakika bekleyin ve hücreleri mikroskop altında gözlemleyin. Eğer yuvarlaklarsa ve yüzüyorlarsa, ayrılmışlar demektir. Sindirimi durdurmak için üç mililitre besiyeri ekleyin ve hücre karışımını bir santrifüj tüpüne pipetleyin.

Karışımı 1.160 G'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Ardından, vakumlu bir pipet kullanarak medyumu dikkatlice uzaklaştırın. Sonra, belirgin bir hücre peleti görülmeyene ve çözelti 50 µL'lik hücre karışımı için homojen görünene kadar, hücreleri bir pipet yardımıyla beş mililitre serumsuz medyum içerisinde nazikçe yeniden süspanse edin.

İyice karıştırıldıktan sonra 50 µL trypan blue ekleyin. Birkaç hücre sayım lamına 10 µL'lik porsiyonlar halinde ekleyin. Ardından, hücre sayacı değerlerinden hücreleri sayın.

Tüm sayımların ortalamasını hesaplayın ve kullanın. Şimdi daha hassas bir hücre süspansiyonu hazırlayın. Hücreleri tekrar santrifüjleyin ve serumsuz ortamın 100 µL'sinde 175.000 hücre olacak şekilde yeniden süspand edin.

Ardından, hücreleri intrakardiyak enjeksiyon için buz üzerinde saklayın. Bu protokol için altı ila sekiz haftalık dişi BC nude fareler kullanın. Görüntüleme sistemine giriş yapın ve probu başlatın.

40 megahertz değerinde 7 0 4. Yeni bir çalışma başlatın ve bilgi istemlerini uygun şekilde doldurun. Ardından, fareyi anestezi altına alın ve anesteziği bir burun konisi aracılığıyla uygulayın.

Kılavuzlu enjeksiyon sırasında, görüntüleme masasının sıcaklığını 37 °C'ye ayarlayın ve fareyi sırtüstü pozisyonda masaya bantlayın. Ultrason jelini görüntüleme öncesinde 37 °C'de tutun ve farenin göğüs bölgesine bir miktar uygulayın. Ardından transdüseri tutucuya yerleştirin ve istenen görüntüleme derinliğine kadar indirin.

Ardından, asendan aorta'yı referans noktası olarak kullanarak sol ventrikül belirlenene kadar sahneyi hareket ettirin ve görüntünün en net olduğu noktada sahneyi sabitleyin. Şimdi, 22 gauge iğneli bir mililitrelik bir şırıngaya 100 µL soğutulmuş hücre karışımı çekin. Dolu şırıngayı şırınga tutucuya sabitleyin.

Ardından şırıngayı göğüs bölgesine doğru hareket ettirin. Fareye giriş yapmadan önce, iğne ucu görüntüleme alanı görüş açısına girene kadar iğneyi dikkatlice yanlara doğru hareket ettirin. İğne yüksekliğini ve açısını sol ventrikülü hedefleyecek şekilde ayarlayın ve uygun konuma geldiğinde, iğneyi hızla deri ve kas tabakaları üzerinden sol ventriküle doğru batırın.

Ultrason görüntüsü rehberliğinde, sol ventriküle başarılı bir şekilde girildiğinin göstergesi, şırıngaya taze pembe arteriyel kanın geri gelmesidir. Ardından hücre karışımını yavaşça enjekte edin, iğneyi geri çekin, transduseri kaldırın ve ultrason jelini nemlendirilmiş gazlı bezle temizleyin. Daha sonra hayvanı banttan kurtarın ve önceden ısıtılmış bir ped bulunan temiz bir kafese aktarın.

Fare tamamen iyileşene kadar gözlemleyin ve ardından birkaç gün boyunca her gün kontrol edin. Düzlem çözünürlükte 78 kare mikron kullanılarak, 310 mikron çapındaki MRI hiperintens lezyonlar belirlenebilir. Bu çalışmadaki metastazlar çok küçük olduğundan ve nekroz ile ödem minimum düzeyde kaldığından, T2 ağırlıklı görüntülerdeki hiperintens lezyonlar gerçek anlamda tümörü temsil etmekteydi.

Kütleli boylamsal MRI çalışmaları, tümör büyümesinin in vivo non-invaziv değerlendirmesine olanak tanır. Yüksek çözünürlüklü MRI, intrakardiyak enjeksiyondan üç hafta sonra birkaç küçük lezyonu tespit edebilmiştir; dördüncü haftada, önceki taramada görülen tüm lezyonlar büyümüştür. T2 ağırlıklı görüntülerde daha fazla yeni lezyon ortaya çıkmıştır.

H ve E boyaması diffüz metastatik lezyonları veya H ve E boyaması küme tipi metastatik lezyonları ortaya çıkardı. Tümör çevresinde sıklıkla görülen genişlemiş damarlar, filizlenme dışı anjiyogenezin gerçekleştiğini göstermekteydi. Bu videoyu izledikten sonra, bir fare kalbinin sol ventrikülüne ultrason görüntüleme rehberliğinde iğne enjeksiyonunun nasıl yapılacağı konusunda iyi bir bilgi sahibi olmalısınız.