Name: Biyoluminesen Bakteriler Kullanılarak Gerçek Zamanda Bir Akut Fare Pnömoni Modelinde Pnömokok virulans faktörlerinin etkisi aşağıdaki (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-23T14:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 32 s
Description: Keşfedin fare pnömoni modelinde Streptococcus pneumoniae enfeksiyonlarının biyolüminesan görüntüleme ile gerçek zamanlı izlenmesini. Bu yöntem bakteri virülans faktörlerinin değerlendirilmesine olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Laboratuarda araştırma SH Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG HA 3125/3-2, 3125/4-2 DFG HA) ve Eğitim ve Araştırma Federal Bakanlığı (Bmbf) Tıbbi Enfeksiyon Genomics (FKZ 0315828A) hibe tarafından desteklenmiştir.

Burada anlatılan hayvan enfeksiyon deneyleri kurallar ve omurgalı hayvanların kullanımı için düzenlemeler yerel ve uluslararası (Laboratuar Hayvan Bilimi Konfederasyonu (FELASA) Federasyonu örneğin, Avrupa Sağlık Hukuku) ile sıkı göre yapılmalıdır. Deneyleri yerel etik kurulu ve Kurumsal Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmış olması gerekir. S ile Tüm deneyler laboratuar veya hayvan enfeksiyonlarda pneumoniae Sınıf II Biyogüvenlik Kurulu yapılmaktadır. 1.. Biyoluminesen Pneumocococi ve Bulaşıcı Stok hazırlanması <ol><li> 80 ° C de (ağ / hac) maya ekstresi ve bakımı için,% 20 gliserol bir nihai konsantrasyon% 1 ile takviye Todd-Hewitt lapası içindeki stok kültürleri pnömokok hazırlayın </li><li> Kan agar plakası üzerine, derin dondurulmuş bir stok kültürünün pnömokok küçük bir miktar Plate ve% 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de 10 saat boyunca bakteri inkübe edin. TO, kan agar plaka genomuna luxABCDE gen kasetinin transpozon sokulması için, kanamisin (150 ug / ml) halinde uygun bir antibiyotik içerir. </li><li> 10 saat arasında bir süre için bir yeni kan agar plakası üzerine yeni bir koloni Alt yetiştirmek. </li><li> THY ortam% 10 (v / v) ısı (56 ° C &#39;de 30 dakika) etkisizleştirilmiş fetal sığır serumu (FBS) ile takviye edilmiş olan pnömokok ve OD 0,05-0,07 600 de başlangıç ​​kültürü inoküle. </li><li> Kültür OD 0,35-0,40 600 ulaşıncaya kadar 37 ° C&#39;de çalkalanarak ve% 5 CO2 olmadan pnömokok inkübe edin. Büyüme 3-4 saat arasında sürer. </li><li> 10 dakika boyunca 3750 x g ve% 0.5 FBS ile takviye edilmiş fosfat tamponlu tuzlu su pH 7.4 (PBS) içinde yeniden süspanse biyolüminesans pnömokok santrifüjleme ile hasat pnömokokkinin. </li><li> PBS/10% FBS içinde istenen konsantrasyona inokulum ayarlayın. Enfeksiyon dozu, kullanılan pnömokok gerilme ve mikrofon genetik arka plan bağlıdıre. S ile burun outbred CD-1 fareleri enfekte etmek için pneumoniae D39 Enfeksiyon dozu 90 Units hiyaluronidaz ile takviye edilmiş 20 ul bir süspansiyon içinde 1 x 10 7 CFU ayarlanmalıdır lux. Bu otolitik tetikler, çünkü sallamak veya vorteks pnömokokki etmeyin. </li><li> % 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de gece boyunca büyüme sonrası kan agar ve kolonilerin sayımı üzerine 10 kat seri dilüsyonları kaplama ile inokulum konsantrasyonunun kontrol edin. </li><li> Bir optik görüntüleme sistemi kullanılarak ışıldaması ölçülerek pnömokok inokulum biyo-kontrol edin. </li></ol> 2. Bioluminescent Pnömokok ile burun içi ve intraperitoneal Farelerin enfeksiyonu <ol><li> Akut pnömoni ve sepsis model için 7-10 hafta çağında kadın outbred fareler kullanın. Bu farelerin ağırlığı 20-30 g arasında olmalıdır. </li><li> Ketamin ve ksilazin intraperitonal enjeksiyonu ile farelerin anestezisi. Karışımı 1.0 mg hazırlanması100 ul steril% 0.9 ve 0.1 mg ketamin xylazine 20 g bir vücut ağırlığına sahip fareler için (w / v) sodyum klorit ilave edildi. Bu, ketamin / kg vücut ağırlığı ve 50 mg ksilazin boyunca 5 mg / kg vücut ağırlığı dozunda ile tutarlıdır. Doğrusu, anestezik enjeksiyondan önce fareler tartın. </li><li> Intraperitoneal boşluğuna karışımı enjekte edilir ve anestezik hareket ve hayvanlar uyuşturulur kadar geri kafese hayvanları yerleştirin. Farelerin Solunum çok yavaş ve düzenli olacak. Fareler bakteri süspansiyonu intranazal aşılama ve soluma, dolayısıyla aşı kaybı hapşırma ve neden olmaz, böylece tam olarak uyuşturulur olması gerekir. Bu onların kuyruk sonunda fareyi sıkarak değerlendirilebilir; tamamen uyuşturulur fare yanıt yoksun olacaktır. </li><li> Yavaşça uyuşturulur fareyi alıp dik burun (Şekil 1) ile parmak ve başparmak arasında fareyi tutun. </li><li> Uzun dar ipuçları (Jel Yükleyici ile bir pipet kullanınİpuçları) ve fare 26-29 burun (10 ul / burun) üzerine birden fazla küçük damlacıklar biyolüminesens pnömokok bırakın. Fare istemsiz bakteri nefes olacaktır. Dik fare 1-2 dakika tutun ve fare hapşırma veya inokülumu tutar mı gözlemleyin. </li><li> Gerçek zamanlı olarak izlemek için enfeksiyon, sırasıyla, D39 ve gerilme TIGR4, 1 x 10 7 ya da 7.5 x 10 7, pnömokokkinin bir enfeksiyon dozu ile burun içinden 7-10 haftalık CD-1 fareler, Infect. Dokuda herhangi bir emme olmaksızın sistemi için tespit limiti, yaklaşık 1 x 10 6-ışıldar bakteridir. </li><li> Enfekte fareler intraperitoneal (İP) değerlendirmek ve sepsis fare enfeksiyon modelinde, pnömokokkinin biyoimaj ölümcüllüğe. D39 suşu 100 ul 5 x 10 3 CFU kullanın ve gerginlik TIGR4 1 x 10 4. IP yolu kullanırken Fareler anestezi değildir. </li><li> PBS ile kontrol farelere inoküle. <img alt="Şekil 1" fo:content-width fo = &quot;5in:&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51174/51174fig1highres.jpg&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51174/51174fig1.jpg&quot; width = &quot;500px&quot; /&gt; Şekil 1. S ile CD-1 mice intranazal enfeksiyonu pneumoniae. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51174/51174fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li></ol> 3. Görüntüleme Sistemi kullanarak Akciğer ve Kan içine Pnömokok Yaygınlaştırma görselleştirme Bir in vivo görüntüleme sistemi kullanılarak gerçek zamanlı olarak dişi CD1 Dışarıda gelişen farelerin burun içi enfeksiyondan sonra, pnömokokkinin görüntü dağıtılması. <ol><li> Görüntüleme sistemi açın ve preconfigurated bilgisayarda bulunan görüntü analiz yazılımı başlatmak. </li><li> Görüntüleme sistemi otomatik olarak başlatılır ve CCD kamerası thermoelectrically aktif edilmeden önce 90 ° C&#39;ye soğutulur. </li><li> Ayarları ve gruplaması ölçülen farelerin sayısı bağlıdıraynı anda ve bioluminescent sinyal gücüne bağlıdır. Hayvanların ışıldaması izlemek için görünüm (FOV) alanında değişkendir ve büyütme göğüs gibi hayvanın tek bir fare veya parçalar ölçmek için beş fareler ölçmek için 22.5 sm bir FOV arasında değişir, ve 3.9 cm&#39;lik bir FOV ya da baş. </li><li> Rutin 1 dakika, binning orta derecede, ve 22.5 cm bir FOV (set D) bir pozlama süresi kullanın. Öncelikle, ışıldayan görüntüleme modu seçin ve ardından görüntüleme parametrelerini ayarlamak. </li><li> Sinyalin emisyonu bakteri suşu ve ikinci fare suşu ve fare pigment bağlıdır. Örneğin, C57BL / 6 fareleri kullanırken bu farelerde pnömoni gelişimini görüntüleme avantajlı olabilir ki, farelerin göğüs tıraş. </li><li> Görüntü önceden seçilmiş zaman aralıklarında fareler bulaşmış. En fazla 8-12 saat arasında bir zaman aralıklarında akut pnömoni modelinde, farelerin biyo-ölçün. Observi tarafından da enfekte farelerin refah izleyinOnların görünüm, davranış ve kilo kaybı belirlenmesini ng. </li><li> Önce bölme içindeki ölçümler için görüntüleme ekipmanının anestezi sisteminin narkotik odasındaki fareler anestezi. Izofluran ve oksijen karışımı teneffüs başlatın ve fareler yavaş yavaş ve düzenli olarak nefes kadar bekleyin. </li><li> Sistemin görüntüleme odasına anestezi hayvanları yerleştirin ve yatar pozisyonda fareler tutun. Bölmenin olacak sonra görüntü murin solunum yolu üstündeki CCD kamerası. </li><li> Anestezik solunmasını izin tüpleri içine kendi burun hayvanları yerleştirin. </li><li> Bir gaz boru vasıtasıyla görüntüleme haznesine Isoflurane giriş anesteziyi muhafaza etmek üzere bırakılır. </li><li> Odasının üstüne CCD kamerayı etkinleştirmek için ve görüntüleme yazılımı biyolüminesan optik görüntüleme, basın &quot;Al&#39;ı&quot; başlatmak için. Hemen kapalı bir odada, farelerin bir fotoğrafıdır ekranda belirir. Bir dakika beklemeden sonra<html> biyoışıldama verilerin bir kaplamasını ölçümü ve fotoğraf gösterilir. </li><li> Görüntü bindirmesi yazılım penceresinde göründükten sonra anestezi durdurmak ve geri kafesler içine fareler koydu. </li><li> Fareler kurtarma için izlenir. <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51174/51174fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51174/51174fig2.jpg" width="500px" /> Şekil 2,. Anestezi ve inkübasyon odası içinde anestezi inkübasyon odası ile. A) IVIS Spectrum görüntüleme sistemi. B) IVIS anestezi sistemi. C) Fare sırasıyla IVIS anestezi ve IVIS Spectrum sistemi kullanarak Bio-ışıldar pnömokok ile enfekte edilen farelerin izlenmesi onların burun anestezi teneffüs ile IVIS Spektrum Görüntüleme odasının içinde bulunan. D) Fare._blank &quot;&gt; büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın. </li></ol> 4. Bioluminescent S. ile Enfekte Farelerde ışıldama Kantitasyonu ve Değerlendirilmesi pneumoniae <ol><li> Görüntü analiz yazılımı kullanılarak toplam foton emisyonu (foton / saniye) miktarının farelerin ya da bir fare, seçilen bölgenin biyoışıldama yoğunluklarını belirler. </li><li> Bir grafik hazırlamak için bir Excel veri sayfasında sağlanan foton emisyon değerleri kullanın. Veri varyasyonu genelde gruplandırılmış fareler içinde yüksek olduğu için, farklı pnömokok suşları ile enfekte olmuş farelerde farkları göstermek için bir kutu bıyık grafik oluşturmak. </li><li> Farelerde başına fotonlar veya seçilen alanın parlaklık ortalamasının (fotonlar / sn / cm 2 / sr) gibi alternatif sonuçları sağlar. </li><li> Foton modunda ROI (bölge-faiz) ölçüm verileri nicel gelen farklı in vivo görüntüleme sistemlerinde farklı arasında mukayese edilebilirparlaklık birimlerde ölçümler otomatik olarak hesaba kamera ayarlarını (örneğin entegrasyon süresi, gruplaması, f / stop ve görüş alanı) almak beri ra ayarları. </li></ol>

<ol><li>Niederman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+management+of+adults+with+community-acquired+pneumonia.+Diagnosis%2C+assessment+of+severity%2C+antimicrobial+therapy%2C+and+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).</li>
<li>WHO, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+disease%3A+2004+update%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">The global burden of disease: 2004 update.</a> World Health Organization. , (2008).</li>
<li>Bogaert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonisation+by+Streptococcus+pneumoniae+and+Staphylococcus+aureus+in+healthy+children%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Colonisation by Streptococcus pneumoniae and Staphylococcus aureus in healthy children.</a> Lancet. 363, 1871-1872 (2004).</li>
<li>Gamez, G., Hammerschmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combat+pneumococcal+infections%3A+adhesins+as+candidates+for+protein-based+vaccine+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Combat pneumococcal infections: adhesins as candidates for protein-based vaccine development.</a> Curr. Drug Targets. 13, 323-337 (2012).</li>
<li>Mook-Kanamori, B. B., Geldhoff, M., vander Poll, T., Dvan de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+pathophysiology+of+pneumococcal+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and pathophysiology of pneumococcal meningitis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 24, 557-591 (2011).</li>
<li>Musher, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+contagious+are+common+respiratory+tract+infections%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">How contagious are common respiratory tract infections.</a> N. Engl. J. Med. 348, 1256-1266 (2003).</li>
<li>Brueggemann, A. B., Pai, R., Crook, D. W., Beall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+escape+recombinants+emerge+after+pneumococcal+vaccination+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Vaccine escape recombinants emerge after pneumococcal vaccination in the United States.</a> PLoS Pathog. 3, (2007).</li>
<li>Munoz-Almagro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+invasive+pneumococcal+disease+caused+by+nonvaccine+serotypes+in+the+era+of+7-valent+conjugate+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Emergence of invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes in the era of 7-valent conjugate vaccine.</a> Clin. Infect. Dis. 46, 174-182 (2008).</li>
<li>Whitney, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+conjugate+pneumococcal+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Infect.+Dis.+J%22%5BJournal%5D)">Impact of conjugate pneumococcal vaccines.</a> Pediatr. Infect. Dis. J. 24, 729-730 (2005).</li>
<li>Whitney, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decline+in+invasive+pneumococcal+disease+after+the+introduction+of+protein-polysaccharide+conjugate+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Decline in invasive pneumococcal disease after the introduction of protein-polysaccharide conjugate vaccine.</a> N. Engl. J. Med. 348, 1737-1746 (2003).</li>
<li>Lynch, J. P. 3rd, Zhanel, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae%3A+epidemiology+and+risk+factors%2C+evolution+of+antimicrobial+resistance%2C+and+impact+of+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Pulm.+Med%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae: epidemiology and risk factors, evolution of antimicrobial resistance, and impact of vaccines.</a> Curr. Opin. Pulm. Med. 16, 217-225 (2010).</li>
<li>Singleton, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+pneumococcal+disease+caused+by+nonvaccine+serotypes+among+Alaska+native+children+with+high+levels+of+7-valent+pneumococcal+conjugate+vaccine+coverage%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes among Alaska native children with high levels of 7-valent pneumococcal conjugate vaccine coverage.</a> JAMA. 297, 1784-1792 (2007).</li>
<li>Dockrell, D. H., Whyte, M. K., Mitchell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+pneumonia%3A+mechanisms+of+infection+and+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal pneumonia: mechanisms of infection and resolution.</a> Chest. 142, 482-491 (2012).</li>
<li>Lieberman, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+bacterial+evolution+within+multiple+patients+identifies+candidate+pathogenicity+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Parallel bacterial evolution within multiple patients identifies candidate pathogenicity genes.</a> Nat. Genet. 43, 1275-1280 (2011).</li>
<li>Yang, J., Tauschek, M., Robins-Browne, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+bacterial+virulence+by+AraC-like+regulators+that+respond+to+chemical+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Control of bacterial virulence by AraC-like regulators that respond to chemical signals.</a> Trends Microbiol. 19, 128-135 (2011).</li>
<li>Young, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+dynamics+of+Staphylococcus+aureus+during+progression+from+carriage+to+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Evolutionary dynamics of Staphylococcus aureus during progression from carriage to disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 4550-4555 (2012).</li>
<li>Kadioglu, A., Weiser, J. N., Paton, J. C., Andrew, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Streptococcus+pneumoniae+virulence+factors+in+host+respiratory+colonization+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6, 288-301 (2008).</li>
<li>Voss, S., Gamez, G., Hammerschmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+pneumococcal+microbial+surface+components+recognizing+adhesive+matrix+molecules+on+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Oral+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Impact of pneumococcal microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules on colonization.</a> Mol. Oral Microbiol. 27, 246-256 (2012).</li>
<li>Koppe, U., Suttorp, N., Opitz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+Streptococcus+pneumoniae+by+the+innate+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Recognition of Streptococcus pneumoniae by the innate immune system.</a> Cell. Microbiol. 14, 460-466 (2012).</li>
<li>Paterson, G. K., Mitchell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+and+the+pneumococcus%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Innate immunity and the pneumococcus.</a> Microbiology. 152, 285-293 (2006).</li>
<li>Gerber, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+Streptococcus+pneumoniae+meningitis+mimicking+several+features+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of Streptococcus pneumoniae meningitis mimicking several features of human disease.</a> Acta Neuropathol. 101, 499-508 (2001).</li>
<li>Gingles, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+genetic+resistance+in+invasive+pneumococcal+infection%3A+identification+and+study+of+susceptibility+and+resistance+in+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of genetic resistance in invasive pneumococcal infection: identification and study of susceptibility and resistance in inbred mouse strains.</a> Infect. Immun. 69, 426-434 (2001).</li>
<li>Holmes, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pavA+gene+of+Streptococcus+pneumoniae+encodes+a+fibronectin-binding+protein+that+is+essential+for+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The pavA gene of Streptococcus pneumoniae encodes a fibronectin-binding protein that is essential for virulence.</a> Mol. Microbiol. 41, 1395-1408 (2001).</li>
<li>Koedel, U., Klein, M., Pfister, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+understandings+on+the+pathophysiology+of+bacterial+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">New understandings on the pathophysiology of bacterial meningitis.</a> Curr. Opin. Infect. Dis. 23, 217-223 (2010).</li>
<li>Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+pneumococcal+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Methods Mol. Biol. 602, 405-410 (2010).</li>
<li>Hartel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+glutamine+transporters+on+pneumococcal+fitness+under+infection-related+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Impact of glutamine transporters on pneumococcal fitness under infection-related conditions.</a> Infect. Immun. 79, 44-58 (2011).</li>
<li>Hermans, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+streptococcal+lipoprotein+rotamase+A+%28SlrA%29+is+a+functional+peptidyl-prolyl+isomerase+involved+in+pneumococcal+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The streptococcal lipoprotein rotamase A (SlrA) is a functional peptidyl-prolyl isomerase involved in pneumococcal colonization.</a> J. Biol. Chem. 281, 968-976 (2006).</li>
<li>Jensch, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PavB+is+a+surface-exposed+adhesin+of+Streptococcus+pneumoniae+contributing+to+nasopharyngeal+colonization+and+airways+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">PavB is a surface-exposed adhesin of Streptococcus pneumoniae contributing to nasopharyngeal colonization and airways infections.</a> Mol. Microbiol. 77, 22-43 (2010).</li>
<li>Kadioglu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+protein+PavA+is+important+for+nasopharyngeal+carriage+and+development+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Oral+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal protein PavA is important for nasopharyngeal carriage and development of sepsis.</a> Mol. Oral Microbiol. 25, 50-60 (2010).</li>
<li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J. Infect. Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li>
<li>Francis, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+pneumococcal+infections+in+the+lungs+of+live+mice+using+bioluminescent+Streptococcus+pneumoniae+transformed+with+a+novel+gram-positive+lux+transposon%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Visualizing pneumococcal infections in the lungs of live mice using bioluminescent Streptococcus pneumoniae transformed with a novel gram-positive lux transposon.</a> Infect. Immun. 69, 3350-3358 (2001).</li>
<li>Basavanna, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+methionine+acquisition+and+synthesis+on+Streptococcus+pneumoniae+growth+and+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The effects of methionine acquisition and synthesis on Streptococcus pneumoniae growth and virulence.</a> PLoS One. 8, (2013).</li>
<li>Hartel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+central+carbon+metabolism+of+Streptococcus+pneumoniae+by+isotopologue+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Characterization of central carbon metabolism of Streptococcus pneumoniae by isotopologue profiling.</a> J. Biol. Chem. 287, 4260-4274 (2012).</li>
<li>Hammerschmidt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+host+immune+regulator+factor+H+interacts+via+two+contact+sites+with+the+PspC+protein+of+Streptococcus+pneumoniae+and+mediates+adhesion+to+host+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The host immune regulator factor H interacts via two contact sites with the PspC protein of Streptococcus pneumoniae and mediates adhesion to host epithelial cells.</a> J. Immunol. 178, 5848-5858 (2007).</li>
<li>Voss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+choline-binding+protein+PspC+of+Streptococcus+pneumoniae+interacts+with+the+C-terminal+heparin-binding+domain+of+vitronectin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The choline-binding protein PspC of Streptococcus pneumoniae interacts with the C-terminal heparin-binding domain of vitronectin.</a> J. Biol. Chem. , (2013).</li>
<li>Cartwright, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+disease+in+western+Europe%3A+burden+of+disease%2C+antibiotic+resistance+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal disease in western Europe: burden of disease, antibiotic resistance and management.</a> Eur. J. Pediatr. 161, 188-195 (2002).</li>
<li>vander Linden, M., Al-Lahham, A., Nicklas, W., Reinert, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+pneumococcal+isolates+from+pets+and+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of pneumococcal isolates from pets and laboratory animals.</a> PLoS One. 4, (2009).</li>
<li>Brehm,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence+of+the+adenine+methylase+gene+of+the+Streptococcus+faecalis+plasmid+pAM+beta+1%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Sequence of the adenine methylase gene of the Streptococcus faecalis plasmid pAM beta 1.</a> Nucleic Acids Res. 15, 3177 (1987).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

<html> Hayvanlarda yapılan tüm deneyler, yerel yönetimler ve etik komisyonları tarafından onaylanmış olması gerekir. In vivo enfeksiyon deneylerde, enfekte hayvanların çeşitli ev sahibi niş bakteri yükü çeşitli zaman noktalarında Enfeksiyondan tespit edilmelidir. Bu deney koşulları altında, hayvanlara önce kan, nazofarenks, bronchoalvelar lavaj, ya da akciğer, dalak ve beyin gibi organlardan bakterilerin izolasyonu için feda edilmesi gerekir. Ev sahibi niş başına bakteri sayısını hesaplar ve hastalık oluşturma e...

Virüsler veya bakterilerin neden olduğu solunum yolu enfeksiyonları, dünyadaki tüm ölüm yaklaşık üçte birini neden dünya çapında en sık görülen toplum kökenli veya klinik sorunlardan biri olmaya devam etmektedir. Anahtar bakteri türleri arasında Haemophilus influenzae ve Streptococcus pneumoniae 2 &#39;dir. Bununla birlikte, bu bakteri türleri normal olarak doğal solunum yolları florasının bilinen bileşenleridir. Böylece bakteri taşıma invazif hastalık ve bağışıklık durumu veya bireylerin yatkınlıklar bağlı olarak belirli risk aynı zamanda. Asemptomatik kolonizasyon invazif hastalık tetiklenir. Streptococcus pneumoniae toplum kökenli pnömoni (TKP) ve insanlarda bakteriyemi en yaygın nedenlerinden birinin önde gelen patojen olduğunu. Sağlıklı bireylerde S. pneumoniae (pnömokok) genellikle patojenik bakteriler ile karşı karşıya, üst solunum yolu, asemptomatik ve zararsız kolonizerleridirama aynı zamanda Haemophilus spp patojenler ile kalıcı floranın. veya Staphylococcus aureus ve insan bağışıklık savunma sisteminin ilk satırı. Taşıyıcılık oranları küçük çocuklarda yüksek olduğu (% 37) ve 3-5 (% 58) kalabalık gündüz bakım merkezleri içinde bile yüksek. Genç nüfus ve yaşlı, taşıyıcıları ve nazofarenks sekresyonları 6 aerosol iletimi yoluyla pnömokokkustan alma, konjuge pnömokok aşıları (yetişkinlerde, çocuklarda ve 23-valan polisakkarid PPSV23 içinde PCV10 veya PCV13) birini kullanarak yüksek risk gruplarına ve aşılama ait Amerika Birleşik Devletleri (ABD) ve birçok Avrupa ülkesinde 4 önerilir. PCVS çocuklarda en yaygın serotipini kapsarken PPSV23, yetişkinlerde böylece verimli invazif pnömokok hastalıkları (IPD) önlenmesinde ABD ve Avrupa&#39;da bakteremik pnömokok hastalıkları,% 90 ~ sorumludur serotiplerini kapsar. Sonuç olarak, IPD nedeniyle aşı türleri (VT) için gdrm vardıryüksek virulans potansiyeli ve antibiyotik direnç göstererek CED ama nonvaccine serotipleri 4,7-12 ortaya çıkmıştır. Rezervuar olarak nazofarenks zararlı lokal enfeksiyonlara başlatılması sinüs veya orta kulağına yaymak pnömokoklar için başlangıç ​​noktasıdır. Hayatı tehdit eden bir CAP 4,13 sonuçlanan bronşlara ve akciğere solunum yoluyla direkt olarak yayılan Daha da önemlisi, pnömokokkinin. Akciğer enfeksiyonları genellikle bu şekilde kana yaymak için patojen etkinleştirme ve IPD neden doku ve bariyer imha ile eşlik eder. TKP ve IPD&#39;nin olaylar bağışıklığı baskılanmış kişilerde yaş veya 4,13 en uç en yüksek bulunmaktadır. Yüksek zehirlilik ile bir patojene bir commensal gelen dönüşüm sorumlu koşullar tartışma sürüyor. Ancak, daha yüksek virülans ve antibiyotik direnç artışı ile birlikte konakçı duyarlılık ve evrimsel değişikliklerden uyum yanı sıra PNE üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğu önerilmiştirumococcal enfeksiyonlar 14-16. Patojen epitel hücreleri mukozal yakın temas aracılık adezinlerin çokluğu ile donatılmıştır. Hava yolu mukus üstesinden sonra, konukçu hücrelere pnömokokkal yapışmayı hücresel reseptörler ile yüzeye maruz kalan adezinlerin doğrudan etkileşimler yoluyla ve molekül 4,17,18 köprü gibi hücre dışı matris bileşenleri veya serum proteinleri istismar tarafından kolaylaştırılır. Gibi çok yönlü patojenler pnömokoklar da ana bağışıklık savunma mekanizmaları kaçırma katılan faktörler ile donatılmıştır. Ayrıca, bu tür sırasıyla akciğer, kan ve beyin omurilik sıvısı (CSF), 5,17,19,20 gibi çeşitli konak çevrelerde uyum kapasitesine sahiptir. Patogenezi ve enflamatuar yanıtları ana bakteri faktörlerin etkisi pnömoni, bakteremi hayvan modellerinde incelenmiştir veya 21-25 menenjit. Bir insan patojen olmasına rağmen, bu modeller bizpnömokok doku tropizminin, virülans mekanizmaları veya pnömokok aşısı adayların korunabilirliğini deşifre ll-kurmuştur. Kendilenmiş fare suşlarının genetik arka pneumococci için duyarlılık belirler. CBA / Ca ve SJL farenin pnömokokal enfeksiyonlara 22 karşı daha duyarlı iken burun pnömokok ile enfekte olmuş BALB / c fareleri, dirençli olduğu bulunmuştur. Bu, insanlarda genetik arka plan ve ana savunma mekanizmalarına benzer enfeksiyonun sonucunu belirlemek, anlamına gelir. Bu nedenle, daha fazla çaba pnömokokal enfeksiyonlara karşı daha az duyarlı farelerin genomuna loci direnci çözmek için gereklidir. Bulgular in vivo virülans protokollere değişikliklere yol açmıştır. Bunun yerine sık sık geçmişte kullanılan doğal BALB / c farelerde, son derece duyarlı CD-1/MF1 outbred fare suşları bugünlerde sık sık kayıp fonksiyon-pnömokok virülansa veya uygunluk 26-28 faktörlerin etkisini incelemek için kullanılır. Dahası, kullanılabilirliğiBio-ışıldar pneumococci ve optik görüntüleme teknikleri enfeksiyonların gerçek zamanlı biyoluminesans bio sağlar. Pnömokok olarak optimize luxABCDE gen kaseti (plazmid pAUL-A Tn 4001 luxABCDE Km r) transposon mutagenez ile kromozomun tek bir entegrasyon alanı içine eklenir edilmiştir. Bioluminescent pnömokok hastalık oluşturma ya da spor faktörleri ve başka 26,28-31 bir anatomik yerinden itibaren translokasyona eksikliği olan pnömokok mutantların zayıflama değerlendirmek için kullanılmıştır. Burada bir murin pnömoni veya sepsis modelinde pnömokok enfeksiyonlarının bio için bir protokol sağlamaktır. Burun içine veya intraperitoneal olarak enfekte olan farelerde amplifikasyonu ve biyolüminesans pnömokokkinin yayma kolay bir şekilde farklı zaman noktalarında bir optik görüntüleme sistemi ile aynı hayvan kullanılarak zaman içinde izlenebilir.

<table><tbody><tr><td>Todd Hewitt suyu</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Almanya</td><td>X936.1</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Almanya</td><td>2363.2</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kanlı agar plakaları</td><td>Oxoid, Wesel, Almanya</td><td>PB5039A</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kanamisin</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Almanya</td><td>T832.2</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Eritromisin</td><td>Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Almanya</td><td>E6376</td> <td>ve nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>PAA Laboratuvarları, Coelbe, Almanya</td><td>A11-151</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>CD-1 fareleri, dişi</td><td>Charles River, Sulzfeld, Almanya</td><td>CD1SIFE06W08W</td><td>dişi CD-1 fareleri, altı ila sekiz haftalık</td></tr><tr><td>Ketamin 500 mg, Curamed enjeksiyon solüsyonu</td><td>Schwabe-Curamed, Karlsruhe, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Rompun 2%, enjeksiyon solüsyonu</td><td>Bayer Hayvan Sağlığı, Monheim, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 ml şırınga</td><td>Becton Dickinson, Heidelberg, Almanya</td><td>300015</td><td>iğneli steril Luer-Lok şırıngalar</td></tr><tr><td>Jel Yükleyici Uçları</td><td>PeqLab</td><td>81-13790</td><td>M&micro; ltiFlex İpuçları</td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3884-100mg</td><td>Hyaluronidaz Tip IV-S, Sığır testinden</td></tr><tr><td>Oksijen</td><td>Hava Sıvısı, D&uuml; sseldorf, Almanya</td><td>M1001L50R2A001</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Baxter, Unterschlei&szlig; heim, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>pGEM-T Easy</td><td>Promega, Mannheim, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Oligonükleotidler&nbsp;</td><td>Eurofins MWG, Ebersberg, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Qiaprep Spin Midiprep Kiti&nbsp;</td><td>Qiagen, Hilden, Almanya</td><td>27104</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>PCR DNA saflaştırma kiti</td><td>Qiagen, Hilden, Almanya</td><td>28106</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Living Image 4.1 yazılımı</td><td>Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>XGI-8 Gaz Anestezi Sistemi</td><td>Kaliper Yaşam Bilimleri/PerkinElmer, Rodgau, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>IVIS Spektrum Görüntüleme Sistemi&nbsp;</td><td>Kumpas Yaşam Bilimleri/PerkinElmer, Rodgau, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Biyofotometre</td><td>Eppendorf AG, Hamburg, Almanya</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr></tbody></table>

biyoluminesen bakteriler kullanılarak gerçek zamanda bir akut fare pnömoni modelinde pnömokok virulans faktörlerinin etkisi aşağıdaki

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Pnömoni geliştirilmesinde önemli sağlık sorunları ve sanayileşmiş ülkelerden biridir ve önemli morbidite ve mortalite ile ilişkilidir. Bu hastalık bilgisi, yoğun bakım üniteleri (YBÜ) kullanılabilirliği ve güçlü antimikrobiyal ajanların ve etkili aşıların kullanımı ilerlemelere rağmen, ölüm oranları 1 yüksek kalır. Streptococcus pneumoniae toplum kökenli pnömoni önde gelen patojen (CAP) &#39;dir ve insanlarda bakteremi en yaygın nedenlerinden biridir. Bu patojen yüzey-açık adhesinler ve pnömoni ve invasif pnömokok hastalığının (IPD) katkıda hastalık oluşturma faktörlerinin bir usul ve araçları ile donatılmıştır. Bakteriyel spor veya hastalık oluşturma faktörlerinin in vivo rolünün değerlendirilmesi S. çözmek için büyük önem taşımaktadır pneumoniae patojenik mekanizmalar. Pnömoni, bakteriyemi ve menenjit fare modelleri Değişik at pnömokok faktörlerin etkisini belirlemek için kullanılmaktadırenfeksiyon aşamaları ferent. Burada burun içi veya biyolüminesens bakteri ile karın içi enfeksiyonlar sonrasında farelerde gerçek-zamanlı pnömokok yayılmasında izlemek için bir protokol açıklar. Sonuçlar, bir görüntüleme sistemi ile beraberindeki analiz yazılımı kullanılarak görüntülenmiştir ve değerlendirilebilir alt solunum yolu ve kandaki çarpma ve pnömokok yayılmasını göstermektedir.

Metioninin edinimi ve alımı ev sahibi niş 32,33 olarak formunu korumak pnömokokkinin için merkezi öneme sahiptir. Metionin ABC taşıyıcı lipoprotein spd _ 0151 gen (TIGR4: sp_0149) tarafından D39 kodlanmış ve MetQ 32 atadı. Pnömokok daha metionin biyosentezi enzimleri (: -; TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586, Mete ve metF Spd_0511 Spd_0510 D39) üretirler. Kimyasal olarak tanımlanmış bir ortam içinde metioninin eksikliği pnömokok ve benzeri, metionin 32,33 arasında metionin...

Streptococcus pneumoniae ciddi toplum kökenli pnömoni ve dünya çapında 2 milyondan fazla kişinin ölümünden sorumludur neden lider patojen olduğunu. Spor ya da virülans karıştığı bakteriyel faktörlerin etkisi biyolüminesens bakterileri kullanarak akut fare pnömoni veya bakteriyemi modelinde gerçek zamanlı olarak izlenebilir.

Biyoluminesen Bakteriler Kullanılarak Gerçek Zamanda Bir Akut Fare Pnömoni Modelinde Pnömokok virulans faktörlerinin etkisi aşağıdaki

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

Bu prosedürün genel amacı, aurin pnömoni veya sepsis modelinde bir streptococcus pneumonia enfeksiyonunu gerçek zamanlı olarak takip etmektir. Bu, kompleks bir besiyeri olan THY'de kültüre edildikten sonra bir streptococcus pneumonia enfeksiyon dozu hazırlanarak gerçekleştirilir. İkinci adım, farelerin streptococcus pneumonia ile intranazal veya intraperitoneal olarak enfekte edilmesidir.Son adım, toplam foton emisyonlarını belirlemek amacıyla farelerin veya farelerin seçilmiş bir bölgesinin biyolüminesans yoğunluklarının nicelendirilmesidir. Nihayetinde, bir grup farenin biyolüminesans yoğunlukları, enfeksiyondaki zaman içindeki değişimleri gösterir. Ayrıca, biyolüminesan farelerin bireysel görüntülerinin analizi gerçekleştirilir.Bu tekniğin, akciğerdeki veya farklı dokulardaki bakteriyel yükün belirlenmesi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, enfeksiyonu yalnızca tek bir hayvan kullanarak takip edebilmenizdir. Bu tekniğin etkileri, bakteriyel faktörlerin ve anti-enfektiflerin etkinliğini değerlendirmek için de uygulanabilmesi nedeniyle temel araştırmalara kadar uzanmaktadır. Bu yöntem, farelerdeki bu promo Cox grubuna dair içgörü sağlayabilir.Bu yöntem, organlardaki bakteriyel yükün belirlenmesi gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Biyoimajlama sistemini kullanmak basit olduğundan ve görüntüleri hazırlamak için yazılımlar mevcut olduğundan, araştırmacıların genel olarak bu yöntemi öğrenmekte zorlanmayacakları öngörülmektedir. Biyoimajlama sistemiyle tanıştığımda, bu yöntemi bios ve primo oksit ile yapılan enfeksiyon deneylerine uygulama fikri hemen aklıma gelmişti.Hayvanların gerektirdiği özel bakım ve inokulasyon gibi kritik adımların açıklanmasının zor olması nedeniyle, bu yöntemin gösterimi büyük önem taşımaktadır. Öncelikle, metin protokolünde açıklandığı şekilde enfektif biyolüminesans pnömokok stokları hazırlayarak başlayın. Ardından, 40 mililitre FBS takviyeli THY ortamı içeren bir tüpe pnömokokları inoküle edin ve 0,08 OD 600 değerinde bir kültür başlatın. Kültür 0,35 ila 0,40 OD 600 değerine ulaşana kadar, pnömokokları ajitasyonsuz olarak 37 °C'de ve %5 karbondioksit altında üç ila dört saat inkübe edin.Ardından, pnömokokları 3.750 ×g'de altı dakika santrifüj ederek toplayın. Daha sonra süpernatantı atın ve bakteriyel peleti yeniden süspanse edin. Yaklaşık 1 ml pH 7.4'te %0,5 FBS ile desteklenmiş PBS içerisinde, inokülumu %10 FBS ve 90 ünite hyaluronidaz içeren 20 µL PBS süspansiyonu kullanarak istenen konsantrasyona ayarlayın.Autolizi tetikleyeceği için pnömokokları çalkalamayın veya vortekslemeyin. Ardından, pnömokokların biyolüminesansını doğrulamak için bir optik görüntüleme sistemi kullanın. Yedi ila 10 haftalık dişi outbred fareyi ketamin ve ksilazin intraperitonal enjeksiyonu ile anestezi altına alın. Kuyruğu sıkarak anestezinin uygun derinlikte olduğunu test edin.Tam olarak anestezi uygulandıktan sonra, fareyi burun kısmı yukarı bakacak şekilde parmaklarınız ve başparmağınız arasında tutun. Ardından, uzun ve dar uçlu bir pipet kullanarak her bir burun deliğine 10 µL biyolüminesans pnömokok damlatın. Fare bakterileri istemsizce soluyacaktır.Fareyi, hapşırıp hapşırmadığını veya inokülumu tutup tutmadığını gözlemlemek için bir ila iki dakika boyunca dik tutun. Tamamlayın. Seçilen enfeksiyon dozunun solunması sağlandığından emin olunmalıdır. Bu nedenle, farenin yavaş ve düzenli nefes alması gerekir.Farenin hapşırmasını ve böylece enfeksiyon dozlarının bir kısmının kaybolmasını önleyin. Başarılı inokülasyonun ardından, daha sonra tanımlama yapabilmek için kuyruğu işaretleyin ve fareyi yeni bir kafese yerleştirin.Ardından, bir sepsis enfeksiyon modelinde virülansı değerlendirmek için, anestezi altındaki fareye intraperitonal olarak 100 µL pnömokok suşu enjekte edin. Kuyruğu işaretledikten sonra, fareyi kontrol grubu olarak kafese geri koyun. Diğer bir fare grubuna ise görüntüleme için PBS enjekte edin.Pnömokokların yayılımı, görüntü analiz yazılımı aracılığıyla gerçekleştirilir. İlk olarak görüntüleme modunu lüminesans olarak ayarlayın ve ardından görüntüleme parametrelerini şu şekilde belirleyin. Pozlama süresini bir dakika olarak ayarlayın.Orta derecede binning ve 22,5 santimetre görüş alanı (FOV). Fareleri, görüntüleme cihazının anestezi haznesinde izofluran ve oksijen karışımıyla anesteziye alın. Farelerin solunumu yavaşladığında, burunlarını anestezi sistemine bağlı tüplere yerleştirerek sırt üstü pozisyonda görüntüleme haznesine yerleştirin.Kameranın üst kısmındaki CCD kamerayı etkinleştirmek ve biyolüminesan optik görüntülemeyi başlatmak için görüntüleme yazılımındaki acquire düğmesine hemen basın. Kapalı oda içindeki farelerin bir fotoğrafı ekranda görünür. Bir dakikalık ölçümün ardından, biyolüminesan verilerin ve fotoğrafın üst üste binmiş bir görüntüsü gösterilir.Şimdi, maruziyetin bitiminden yaklaşık 20 saniye önce anesteziyi durdurun. Fareleri kafeslerine geri koyun ve kafes rafa geri yerleştirilmeden önce anesteziden tamamen uyanmalarını bekleyin. Enfekte farelerin görünümünü, davranışlarını ve ağırlıklarını izlemeye ek olarak, her sekiz ila 10 saatte bir görüntülemeye devam edin.Son olarak, intranazal olarak D 39 lux veya izojenik mutant D 39 luxe delta MET Q ile enfekte edilen farelerin toplam foton emisyon biyolüminesans optik görüntülemesini nicelleştirerek, zaman noktası ve fare grubu başına biyolüminesans yoğunluklarını belirlemek için görüntü analiz yazılımını kullanın. Görüntüleme, enfeksiyondan 24 saat sonra başlamış ve her grupta ölüm gerçekleşene kadar veya enfeksiyondan 120 saat sonrasına kadar her sekiz saatte bir devam etmiştir. 10 fareden yedisinde şiddetli hastalık belirtileri gelişmiş ve bu fareler ölmüştür; diğer üç farede ise biyolüminesans görülmemiş ve bu fareler hayatta kalmıştır.İki faredeki biyolüminesans görüntüsünün aslında komşu farelerdeki yoğun biyolüminesansın taşması olduğunu unutmayın. Biyolüminesan wild type D 39 lux ile başarıyla enfekte edilen farelerde, enfeksiyondan 32 saat sonra şiddetli bir akciğer enfeksiyonu gelişmiş ve bu durum sekiz ila 16 saat içinde sepsise ilerlemiştir. D 39 lux enfeksiyonu sonrası pnömoni ve sepsis geliştiren tüm fareler, enfeksiyondan sonraki 96. saate kadar ölmüştür.Metiyonin bağlayan lipoproteinin fonksiyon kaybı, pnömokokların virülansını önemli ölçüde azaltmıştır. 32 saat sonra, duyarlı D 39 lux farelerin tamamındaki enfeksiyonlarla karşılaştırıldığında, mEq mutantı ile enfekte edilen farelerin sadece birinde hafif akciğer enfeksiyonu görülmüştür. Ancak, 48 saat sonra, mutant ile enfekte edilen farelerde şiddetli akciğer enfeksiyonları belirgin hale gelmiştir.Sonuç olarak, bu farelerde enfeksiyondan 72 saat sonra sepsis gelişmiş ve enfeksiyondan 72 saat sonra daha yaygın hale gelmişlerdir; bu durum, akut pnömoni enfeksiyon modelinde met Q eksikliğinin pnömokokları zayıflattığını göstermektedir. Gruplandırılmış farelerin biyolüminesans yoğunluk değerleri belirtilen zaman noktaları için gösterilmiştir. Biyolüminesans akışının miktar tayini, enfeksiyondan 32 ve 40 saat sonra enfekte edilen yabani tip ve met q enfekte fareler arasında anlamlı farklar olduğunu göstermiştir.Böylece, met q fonksiyon kaybı pnömokokları atenüe eder ve invaziv enfeksiyonda önemli bir gecikmeye yol açar, ancak bakteriler bir kez yerleştiğinde virulent bir hale gelmezler. Bu teknik, uygun şekilde uygulandığında, dört fareden oluşan 10 grubun bir saat içinde izlenmesi için kullanılabilir. Bu prosedürü gerçekleştirirken, lumenin tamamlandığından ve fareler tarafından solunduğundan emin olmak önemlidir. Bu prosedürün ardından, hafif atenüasyon ve bakteriyel mutantlar gibi ek soruları yanıtlamak için farelerde ko-enfeksiyon gibi diğer yöntemler de uygulanabilir.Bu teknik, enfeksiyon biyolojisi alanındaki araştırmacıların farelerde pnömokokal pnömoni veya sepsis durumlarını incelemelerinin ve görselleştirmelerinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, farelerin nasıl enfekte edileceği ve bir biyogörüntüleme sistemi kullanılarak pnömokokal enfeksiyonun gerçek zamanlı olarak nasıl takip edileceği konusunda kapsamlı bir bilgi edinmiş olmalısınız. Pnömokoklar gibi insan patojenik bakterilerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu prosedür sırasında sınıf iki güvenlik kabini altında çalışmak gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

following-real-time-impact-pneumococcal-virulence-factors-an-acute

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Influenza A virusu ile aynı anda enfeksiyon asemptomatik sırasında invazif pnömokok hastalığına indüksiyonu karıştığı faktörlerden...

Yılları arasında sinerjistik Araştırma Bioluminescent Görüntüleme kullanma Streptococcus pneumoniae Bebek Fare ve İnfluenza A Virüsü

Yaşayan hayvanların bakteriyel enfeksiyonlar biyoparlaklık görüntüleme yöntemleri açıklanmıştır. Patojenler, canlı hayvanlarda enfeksiyon optik tüm vücut görüntüleme sağlayan lusiferaz ifade etmek için modifiye edilmiştir. Hayvan modelleri lusiferaz ifade patojenler ile enfekte olan ve hastalık ortaya çıkan ders biyoparlaklık görüntüleme ile gerçek zamanlı olarak görüntülenebilmekte.

Farelerde Görüntü Bakteriyel Enfeksiyonlar Lusiferaz Kullanımı

Kaynak: Valentine, M. E., ve diğerleri. Pseudomonas aeruginosa'da Çerçeve İçi Gen Silme Mutantlarının Üretilmesi ve Basit Bir Fare Enfeksiyon Modelinde Virülans Zayıflaması Testi. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, farelerde öldürücü ve zayıflatılmış bakteri suşlarının in vivo davranışını görselleştirmek ve karşılaştırmak için biyolüminesans kullanımını göstermektedir. Biyolüminesans bakteri süspansiyonlarının hazırlanmasını ve bunların farelere intraperitoneal enjeksiyonunu özetlemektedir. Öldürücü...

Biyolüminesans Kullanarak Farede Bakteriyel Enfeksiyon Dinamiklerini İzleme

Kaynak: de Vries, C. R. ve ark., Kronik Pseudomonas aeruginosa Yara Enfeksiyonunun Gecikmiş Aşılama Modeli. J. Vis. Exp. (2020).Bu video, canlı bir fare modelinde bakteriyel enfeksiyon ilerlemesini izlemek için biyolüminesans görüntüleme tekniğini gösteriyor. LuxABCDE raporlayıcı sistemiyle tasarlanmış patojenik bakteriler, enfeksiyon bölgesinde ışık yayarak metabolik olarak aktif bakterilerin görselleştirilmesini sağlar. Araştırmacılar, fareyi zamanla görüntülemekle, enfeksiyon dinamiklerini...

Farelerde Bakteriyel Enfeksiyonların Biyolüminesans Görüntülemesi

Kaynak: Valentine, M. E. ve diğerleri, Pseudomonas aeruginosa'da Çerçeve İçi Gen Silinme Mutantlarının Üretimi ve Basit Fare Enfeksiyon Modelinde Virulans Zayıflamasının Testi. J. Vis. Exp. (2020)Bu video, canlı bir fare modelinde bakteriyel enfeksiyonu izlemek için biyolüminesans tabanlı görüntüleme yaklaşımının kullanıldığını göstermektedir. Ardışık biyolüminesans ve X-ışını görüntüleme, konak genelinde yayılan enfeksiyonun gerçek zamanlı görselleştirmesi ve anatomik lokalizasyonu mümkün...

Biyolüminesans kullanarak fare modelinde bakteriyel enfeksiyonun gerçek zamanlı görüntülemesi

Çeşitli yöntemler, farelerde bakteriyel pnömoni modelleme için literatürde tarif edilmiştir. Bu yazıda, orofarinksin pipetle bakteriyel inokulum aspirasyonu (yani, inhalasyon) yoluyla zatürree uyarılması için bir non-invaziv, ucuz, hızlı bir yöntem açıklanmaktadır. akciğer doğal bağışıklık yanıtının değerlendirilmesi için aşağı akış yöntemleri de ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Farelerde Deneysel Bakteriyel Pnömoni İndüksiyonunun ve fenotipleme bir Non-invaziv ve Teknik Olmayan yoğun Yöntem

İmmün yetmezliği olan kemirgenlerde akciğer enfeksiyonları oluşturmak için bir yöntem tarif edilmiştir. Yeterlilikle, bu yöntem S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae ve A. baumannii birçok izolatı ile stabil enfeksiyonu indüklemek için hızlı ve kolay bir şekilde gerçekleştirilebilir.

Immünkompetan Kemirgenler bir Sağlam Pnömoni Modeli karşı antibakteriyel etkinliğini değerlendirmektir<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;<i&gt; H. influenza</i&gt;<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; ya da<em&gt; A. baumannii</em

Burada açıklanan yöntem, non-invaziv biyolüminesans görüntüleme (BLI) yoluyla farelerin akciğerlerinde IL-8 promotöre bağlı inflamasyon aktivasyonunun görselleştirilmesine olanak tanır. Aynı hayvan lusiferaz muhabiri yapısının teslim edildiği andan itibaren iki aya kadar birden fazla kez BLI'ye tabi tutulabilir.

Bir IL-8 Geçici Transgenize Edilmiş Fare Modeli<emIn vivo</em&gt; İnflamatuvar Yanıtların Uzun Vadeli İzlenmesi

Burada, abd gıda ve ilaç İdaresi (FDA) onaylı Escherichia coli ticari uygulamalar için karşılaştırıldığında Pseudomonas aeruginosa genetik olarak değiştirilmiş suşlarının zayıflamasını değerlendirmek için enfeksiyon fare modelibasit ve tekrarlanabilir bir protokol açıklar.

Pseudomonas aeruginosa In-Frame Gen Silme Mutantlar Üretimi ve Enfeksiyon Basit Bir Fare Modelinde Virülans Zayıflama sıiçin Test

Neonatal farelerin biyolüminesans E. coli O1:K1:H7 ile enfeksiyonu, önemli pulmoner inflamasyon ve akciğer patolojisi ile septik enfeksiyona neden olur. Burada, sistemik bakteriyel yüklerin numaralandırılmasına paralel olarak uzunlamasına intravital görüntüleme, inflamatuar profilleme ve akciğer histopatolojisi ile birlikte neonatal sepsisin modellenmesi ve incelenmesi için yapılan prosedürleri açıklıyoruz.

Gram-Negatif Bakteriyel Sepsisin Yenidoğan Görüntüleme Modeli

Bu yazıda, viral enfeksiyon sırasında pnömokokların asemptomatik bir kolonizatörden hastalığa neden olan bir patojene geçişi için yeni bir fare modeli açıklanmaktadır. Bu model, hastalık progresyonunun farklı aşamalarında ve çeşitli konakçılarda polimikrobiyal ve konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için kolayca uyarlanabilir.

Streptococcus pneumoniae'nin Viral Ko-Enfeksiyon Üzerine Kolonizatörden Patojene Geçişi İçin Bir Fare Modeli, Yaşın Şiddetlendirdiği Hastalıkları Özetler

Keşfedin fare pnömoni modelinde Streptococcus pneumoniae enfeksiyonlarının biyolüminesan görüntüleme ile gerçek zamanlı izlenmesini. Bu yöntem bakteri virülans faktörlerinin değerlendirilmesine olanak tanır.

Biyoluminesen Bakteriler Kullanılarak Gerçek Zamanda Bir Akut Fare Pnömoni Modelinde Pnömokok virulans faktörlerinin etkisi aşağıdaki (Video) | JoVE Journal

Biyoluminesen Bakteriler Kullanılarak Gerçek Zamanda Bir Akut Fare Pnömoni Modelinde Pnömokok virulans faktörlerinin etkisi aşağıdaki

Daha fazla video keşfet