Name: Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme C. Elegans Davranış (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: Keşfedin Caenorhabditis elegans'ta EIW analizi ile bakteri kaynaklı maddelerin üreme davranışlarına etkisini. Bu yöntem patojenlere karşı davranışsal yanıtları incelemek için güvenilir bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar E. tedarik Haziran Middleton teşekkür etmek istiyorum faecalis suşları ve rehberlik için bakteri kültürü ile. C. elegans Araştırma Altyapısı Programları NIH Ofisi (P40 OD010440) tarafından finanse edilmektedir CGC, tarafından verilmiştir.

Nematod Büyüme Medya 1) hazırlanması (NGM) <ol><li> 50 levha yapmak için, 1.5 g NaCl, 8.5 g saf olan Ağar ve 1 Lflask 1.25 g pepton ekleyin. </li><li> Balona dH 2 O 487.5 ml ekleyin. Alüminyum folyo bir parça balonun açılış karıştırmak ve karşılamak için yavaşça girdap. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> Çözüm bir su banyosunda 45 ° C soğumasını bekleyin. </li><li> 5 mg / ml stok çözeltisi (etanol içinde çözülmüş), 500 ul 1 M CaCI2, 500 ul 1 M MgSO 4 ve 12.5 ml KPO 4 tampon maddesi (54.15 g ile 500 ul: kolesterol çözeltisine, sırayla aşağıdaki eklemek dH 2 O 500 ml KH 2 PO 4 ve 17.8 g K 2 HPO 4) 18 olarak tanımlanmıştır. </li><li> Steril pipetler kullanarak, her 60 mm polistiren Petri kabı agar çözüm 10 ml ekleyin. Medya oda sıcaklığında overn katılaşmaya izinight. </li></ol> B Broth E. 2) hazırlanması coli Medya <ol><li> Beş, 100 ml kültür hale getirmek için, bir behere Bacto Tripton, 2.5 g maya özütü, 5.0 g NaCl, 5.0 g ekleyin. </li><li> 500 ml &#39;lik bir son hacim için steril, damıtılmış su ekleyin. Çözünen çözünmüş kadar, karıştırarak, sıcak bir plaka üzerinde çözüm ısıtın. </li><li> Beş cam şişe (en az 200 ml hacim) içine Oda suyu 100 ml dökün. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> B suyu kullanmadan önce oda sıcaklığına kadar soğumasını bekleyin. </li></ol> 3) Tohumlama C. elegans Bakım Tabaklar <ol><li> NGM plakalar en az bir hafta için oda sıcaklığında kuruması için izin verdikten sonra, E. birkaç koloni ile bir 100 ml oda suyu kültürü aşılamak coli (OP50). </li><li> E. büyütün 37 ° C&#39;de gece boyunca kültür coli. </li><li> Pipet bir-iki damlası (yaklaşık 10081, l) OP50 kültürünün her NGM plaka ortasına üzerine. Tabaklar genellikle kapak tarafı yukarı dizilir. (Ekim) pipetleme zaman, yığının altındaki plaka üzerine kültür pipetleme başlar. Her yığın şekilde çalışır. Bu kültür çok yakın plakanın kenarlarına alamadım önemlidir çünkü, tohumlama sonra plakaları taşımak için çalışın. </li><li> Tohumlanan plakalar kullanılarak önce en az bir hafta için oda sıcaklığında kurumaya bırakın. </li><li> Tohumlu plakalar oda sıcaklığında kapalı plastik kaplarda (ters) saklanır. </li></ol> 4) C. bakımı elegans Suşlarının <ol><li> Iyi beslenen C. korumak için elegans stokları, her 3-4 günde bir yeni bir, numaralı seribaşı NGM plaka için üç L4S veya gebe yetişkin taşımak için almak bir solucan kullanın. </li><li> Mağaza plakalar (ters) tercihen bir inkübatör içinde 15 - 22 ° C Açıklanan tahlillerinde kültürler 20 ° C C de muhafaza edildi elegans geliştirme sıcaklığa bağlıdır. Maintena gibisıcaklık artışları nce, gelişim evreleri arasında zaman azalır. </li></ol> Triptik soya ağarı (TSA) E. 5) hazırlanması faecalis Kültür Medya <ol><li> Bir ocak, karıştırarak 50 plaka yapmak için, bir balona steril, distile su 500 ml ölçmek ve bir taşım kaynatın. </li><li> Şişeye toz TSA agar 20 g ilave edin ve eritmek için bir çözüm sağlar. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> Çözüm bir su banyosunda 45 ° C soğumasını bekleyin. </li><li> Steril pipetler kullanarak, her 60 mm polistiren Petri kabı agar çözüm 10 ml ekleyin. Ortam gece boyunca oda sıcaklığında katılaşmaya izin verin. </li></ol> Tryptic Soy Broth (TSB) E. 6) hazırlanması faecalis Kültür Medya <ol><li> Karıştırılırken 250 kültür tüpleri hale getirmek için, bir ocak üzerindeki bir şişeye ve sıcak olarak, steril, damıtılmış su, 500 ml ölçer. </li&gt; <li> Şişeye TSB, agar tozu 15 g ekleyin ve tozu çözmek için izin verir. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> Steril, 5 ml test tüplerine çözelti oda sıcaklığına soğumaya bırakın ve daha sonra pipet 2 mi. </li></ol> 7) E. için Streptomisin ile Beyin Kalp İnfüzyon (BHI) Medya, hazırlanması, faecalis Kültür <ol><li> Bir şişe içine steril damıtılmış su, 500 ml ölçmek ve bir ocak, karıştırılırken, bir kaynama noktasına getir. </li><li> Şişeye BHI ortamı 26 g ekleyin ve çözelti, çözünmesi için izin verir. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> Çözüm ° C su banyosunda 45 soğumasını bekleyin. </li><li> Steril tekniği kullanarak, bir 10 mg / ml streptomisin stok solüsyonu ve karıştırmak için girdap 0.5 ml. </li><li> Her 60 mm polistiren Petri kabı çözüm 10 ml ekleyin. </li><li&gt; Veren ortam gece boyunca oda sıcaklığında katılaşmaya bırakılır. Mağaza, 4 tabak (ters) ° kullanmadan önce birkaç saat kadar C. </li></ol> 8) E. bakımı faecalis suşları <ol><li> E. korumak için faecalis hisse senetleri, ayrı triptik soya agar (TSA) plakalar üzerine çizgi tek tek koloniler steril bir döngü kullanın. </li><li> 37 ° C gecede kültür büyütün. Birkaç hafta boyunca oda sıcaklığında kapalı bir torba ya da kutu içinde plakları (ters). </li></ol> 9) E. hazırlanması EIW Testi için faecalis Plakalar <ol><li> E. bir koloni ile 2 ml TSB kültürü aşılamak faecalis ve 37 gece boyunca inkübe ° C </li><li> E. Pipet 20 ul faecalis hazırlanmış BHI-streptomisin plakasının ortasına üzerine kültür ve 37 gece boyunca inkübe ° C </li></ol> 10) E. hazırlanması EIW Testi (Kontrol Levhalar) için coli Tabaklar <ol><li> 100 ml&#39;lik bir B-bro inoküleE. bir koloni ile inci kültürü coli OP50 ve 37 ° C gece boyunca inkübe </li><li> Pipet 20 bir giremeyen NGM plaka merkezi üzerine OP50 kültür ul ve tohumlu plakalar gece boyunca oda sıcaklığında kurumaya bırakın. </li></ol> Solucan Deneyi 11) Yumurta <ol><li> 15 almak - 20 sahnelenen-L4 C. hazırlanmış bir BHI-Strep-E. bakteri çim ortasında üzerine elegans (Şekil 1) faecalis plaka. BHI plakasına OP50 bir sürü aktarmak için dikkatli olun. NGM-OP50 plaka bir kontrol için L4S aynı sayıda seçin. </li><li> 20 ° C&#39;de 40 saat boyunca inkübe edin </li><li> 20% çamaşır suyu çözeltisi hazırlayın. Damıtılmış su, uygun hacmi ile ticari bir çamaşır suyu (% 6.0 sodyum hipoklorit) karıştırın. </li><li> Bir plastik kapak on farklı yerlerde (bir solucan veya bakteriyel plaka) için çamaşır suyu 10 ul damla ekleyin. </li><li> Bir solucan seçim kullanarak, her çamaşır suyu damla içine bir solucan aktarın. Bir Yavaşça girdap ucusolucan seçim sonunda (bir mikroskop altında damlacık görüntüleyerek teyit) yıkanır emin olmak için çamaşır suyu damlacık içinde almak. </li><li> Solucanlar yumurta (Şekil 2) kovma, açık patlayana kadar manikür yaklaşık 10 dakika ya da çözmek için izin verin. Plaka yumurta transferi için dikkatli olun. </li><li> Bir mikroskop kullanarak, çamaşır suyu her damla yumurta sayısı. </li></ol>

<ol><li>Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+octopamine+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Science. 216, 1012-1014 (1982).</li>
<li>Sawin, E. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Genetic+and+cellular+analysis+of+modulated+behaviors+in+Caenorhabditis+elegans+%5B%5D%22">Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]</a>. , Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1996).</li>
<li>Trent, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Genetic+and+behavioral+studies+of+the+egg-laying+system+of+Caenorhabditis+elegans+%5B%5D%22">Genetic and behavioral studies of the egg-laying system of Caenorhabditis elegans [dissertation]</a>. , Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1982).</li>
<li>Chase, D. L., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+RGS+protein+function+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of RGS protein function in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Enzymol. 389, 305-320 (2004).</li>
<li>Trent, C., Tsuing, N., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+defective+mutants+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Egg-laying defective mutants of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 104, 619-647 (1983).</li>
<li>Weinshenker, D., Garriga, G., Thomas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+analysis+of+neurotransmitters+controlling+egg+laying+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological analysis of neurotransmitters controlling egg laying in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 15, 6975-6985 (1995).</li>
<li>Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+alternative+behavioral+states+by+serotonin+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans.</a> Neuron. 21, 203-214 (1998).</li>
<li>Bany, A., Dong, M., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+cellular+basis+for+acetylcholine+inhibition+of+Caenorhabditis+elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genetic and cellular basis for acetylcholine inhibition of Caenorhabditis elegans egg-laying behavior.</a> J. Neurosci. 23, 8060-8069 (2003).</li>
<li>Dempsey, C. M., Mackenzie, S. M., Gargus, A., Blanco, G., Sze, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+%285HT%29%2C+fluoxetine%2C+imipramine+and+dopamine+target+distinct+5HT+receptor+signaling+to+modulate+Caenorhabditis+elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Serotonin (5HT), fluoxetine, imipramine and dopamine target distinct 5HT receptor signaling to modulate Caenorhabditis elegans egg-laying behavior.</a> Genetics. 169, 1425-1436 (2005).</li>
<li>Leung, M. C., Williams, P. L., Bennedetto, A., Au, C., Helmcke, K. J., Aschner, M., Meyer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans%3A+an+emerging+model+in+biomedical+and+environmental+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans: an emerging model in biomedical and environmental toxicology.</a> Toxicol. Sci. 106, 5-28 (2008).</li>
<li>Mylonakis, E., Aballay, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worms+and+flies+as+genetically+tractable+animal+models+to+study+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions.</a> Infect. Immun. 73, 3833-3841 (2005).</li>
<li>Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchafer%2C+WR+%22WormBook%22">WormBook</a>. , WormBook. (2005).</li>
<li>White, J., Southgate, E., Thomson, N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+Caenorhabditis+elegans+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the Caenorhabditis elegans nervous system.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314, 1-340 (1986).</li>
<li>Desai, C., Garriga, G., McIntire, S. L., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+pathway+for+the+development+of+the+Caenorhabditis+elegans+HSN+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genetic pathway for the development of the Caenorhabditis elegans HSN motor neurons.</a> Nature. 336, 638-646 (1988).</li>
<li>Garsin, D. A., Sifri, C. D., Mylonakis, E., Qin, X., Singh, K. V., Murray, B. E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+model+host+for+identifying+Gram-positive+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A simple model host for identifying Gram-positive virulence factors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 10892-10897 (2001).</li>
<li>Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+typhmurium+proliferates+and+establishes+a+persistent+infection+in+the+intestine+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Salmonella typhmurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans.</a> Curr. Biol. 10, 1539-1542 (2000).</li>
<li>O'Quinn, A. L., Wiegand, E. M., Jeddeloh, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burkholderia+pseudomallei+kills+the+nematode+Caenorhabditis+elegans+using+an+endotoxin-mediated+paralysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Burkholderia pseudomallei kills the nematode Caenorhabditis elegans using an endotoxin-mediated paralysis.</a> Cell. Microbiol. 3, 381-393 (2001).</li>
<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Harvey, S. C., Shorto, A., Orbidans, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+analysis+of+life-+history+traits+of+Caenorhabditis+elegans+in+stressful+environments%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic analysis of life- history traits of Caenorhabditis elegans in stressful environments.</a> BMC Evol. Biol. 8, 15(2008).</li>
<li>Harvey, S. C., Orbidans, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All+eggs+are+not+equal%3A+the+maternal+environment+affects+progeny+reproduction+and+developmental+fate+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">All eggs are not equal: the maternal environment affects progeny reproduction and developmental fate in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 6, e25840(2011).</li>
<li>Klass MR, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%3A+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Ageing.+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mech. Ageing. Dev. 6, 413-429 (1977).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Başarılı bir şekilde bu testte performans en kritik adımlar şunlardır: 1) C iyi beslenmiş desteleri kullanarak, tahlil plaka, 3 elegans, 2) kültür bakteri tek tip) doğru belirlenmesi E. maruz kalma L4 solucanlar sahnelenen faecalis, 4) E. maruz kalma süresi tutmak zaman ağartma tüm çalışmalar ve 5 tutarlı faecalis) yumurta parçalanma önlemek için on dakika geçmemelidir. Bu testi için sağlıklı, iyi beslenmiş solucanlar almak için önemlidir...

Caenorhabditis elegans, mikroskobik, serbest yaşayan yuvarlak kurt, geleneksel olarak insanlara nedeniyle şeffaf anatomi, iyi karakterize geliştirme, tam sıralı genom, kısa nesil zamanlı ve genetik homoloji gelişim ve hücre sinyal süreçleri incelemek için kullanılan bir model organizmadır . Daha yakın zamanda, C. elegans çevresel toksikoloji ve doğuştan gelen bağışıklık 10, 11 alanında bir model organizma haline gelmiştir. Bu kendi kendine gübreleme hermaphroditic solucanlar yumurtadan çıkım iki-üç gün içinde cinsel olgun olur. Yaşam döngüsü, C. sırasında elegans yetişkinliğe ulaşmadan önce, dört larva aşamaları (L1-L4) geçer. Bir izole hermafrodit tepe verimlilik üç gün içinde, ortalama, 300 yavru üretebilir. Üreme olgun C. elegans çift cinsiyetli, döllenmiş yumurta koydu önce birkaç saat boyunca rahim içinde korunur.Herhangi bir anda, rahim içinde depolanan yumurta normal sayıda (en yüksek verimlilik esnasında) on ila onbeş 12&#39;dir. Rahim yumurta sayısı yumurta üretimi oranı ve yumurtlama oranını hem de bir fonksiyonudur. Döllenmiş yumurta vulva 13 açılış etrafında düzenlenmiş on altı vulva kasların kasılması ile rahim kesilir. Hermafrodit özel nörotoksinlerini (HSN) &#39;ın ve dolayısıyla VC nörotoksinlerini kas kasılması etkileyen vulva kasları üzerine sinaps ve yumurtlama davranışı 5,7,13,14. Rahim yumurta ihraç nöronlar ve kasların koordine aktivite nedeniyle oluşur. C. Laboratuar kültürleri elegans genellikle patojen olmayan Escherichia coli OP50 bir diyet yetiştirilir. Doğal ortamda, C. elegans gibi patojen bakteriler gibi gıda kaynakları, çeşitli temas, potansiyel olarak zararlı olabilir. Zararlı maddelere maruz kaldığındaçevre, C. çevreye daha elverişli hale gelinceye kadar elegans yumurta saklayın. Muhtemelen bu yumurta tutma onların soyu korumak için bir çabadır. Solucan (EIW) testi, C bu yumurta elegans, potansiyel olarak patojenik bakteriler, ortamda bulunan Enterococcus faecalis, maruz kalmaktadır. E. patojenik biçimlerine maruz faecalis C. kalıcı bağırsak enfeksiyonu ve hatta ölüme neden olabilir elegans 15. Patojenik bakterilerin diğer formlarına maruz kalma yumurta tutma 16,17 etkilediği gösterilmiştir, bununla birlikte etki miktarı değildi. E. Buna ek olarak, hafif patojenik etkisini suşları faecalis, yumurta döşeme davranış, hemen öldürücü olmayan suşları çalışılmamıştır. EIW deneyleri C rahim korudu yumurta sayısı, sayım içerir elegans 4. Olsa ° C. eleganssaydam, rahim içinde biriken yumurta bozulmamış bir hayvanda ölçmek için zor olabilir. EIW testi gebe yetişkin C. beyazlatma içerir zaman sabit bir süre için bakterilere maruz bırakıldı elegans. Çamaşır suyu solüsyonu geride bırakarak yumurta dış kütikül çözünür. Yumurta kabuğu koruyucu bir varlığı nedeniyle ağartıcı etkilerine refraktif vardır. Ağartma sonra, bir çok kolay beyazlatma üzerine solucanlar rahim salınan yumurta sayısını yapabiliyor. Bu deney, bir anda rahim içinde yumurtaların sayısını ölçmek için basit, ucuz ve hızlı bir yöntemdir, ve böylece E. etkilerini ölçmek yumurta tutma üzerinde faecalis. Bu testte yumurta tutma bakteri, çevresel toksinler veya ilaç diğer türleri etkisini ölçmek için kullanılabilir. Bu deney aynı zamanda bakteriyel patojen için bir ekran olarak kullanılmak üzere bir potansiyele sahiptir.

<table><tbody><tr><td>Ağar, ultra saf</td><td>Affymetrix</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Peptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Tripton</td><td>Becton Dickinson</td><td>211705</td><td></td></tr><tr><td>Beyin Kalp İnfüzyonu susuz ortam</td><td>Carolina Biyolojik Tedarik</td><td>781781</td><td></td></tr><tr><td>C elegans, N2 suşu</td><td>Caenorhabdit Genetik Merkezi</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>Kolesterol</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11470</td><td></td></tr><tr><td>C. elegans</td><td>Tritech Research Inc.</td> için kültür plakaları<td>T3308</td><td></td></tr><tr><td>E. faecalis</td><td>Fisher Scientific-Fisherbrand</td><td>875713</td><td></td></tr><tr><td>E. coli (OP50)</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>E. faecalis J</td>. Middleton tarafından sağlanan suşlar<td></td><td></td><td>. Tüm izolatlar, enterococcosel</td></tr> agar (BBL) ve% 6 NaCl suyunda büyüme gözlenerek enterococci<tr><td colspan="4"> olarak doğrulandı;</td></tr><tr><td colspan="4"> tüm suşlar 44.5 &ordm'de büyüdü; C ve katalaz negatif ve hidrolize eskülin idi. Basitleştirilmiş&nbsp; ikili anahtar&nbsp; (arabinoz, mannitol, metil-&alfa; -D-glukopiranosid (MGP), riboz, sorboz ve sorbitol) izin verilir&nbsp; tüm E varsayımsal tanımlaması. faecalis suşları (Efs pigmentasyondan yoksundur ve arabinozdur, MGP&nbsp; ve sorbose negatif ve sorbitol, mannitol ve riboz pozitif). Tüm varsayımsal Efs suşları&nbsp; API 20 STREP sistemi (Biomerieux) kullanılarak doğrulanmıştır. </td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Motic</td><td>SMZ 168B</td>, <td>iletilen aydınlatmaya ve 50X büyütmeye sahip herhangi bir mikroskop yeterli olmalıdır</td></tr><tr><td>Streptomisin sülfat</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP910-50</td><td></td></tr><tr><td>Triptik Soya Agar (Soya Fasulyesi-Kazein Sindirim Agar Ortamı), Difco</td><td>Becton Dickinson</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Triptikaz Soya Suyu (Soya Fasulyesi-Kazein Sindirim Ortamı), BBL</td><td>Becton Dickinson</td><td>211768</td><td></td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>Acros</td><td>61180-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

Üzerinde bakterilerin etkilerinin Ölçme<em&gt; c. elegans</embir yumurta tutma testi kullanma&gt; davranış

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

C. elegans yumurta döşeme davranış, osmolaritesi 1 ve titreşim 2 gibi çevresel ipuçları etkilenir. Gıda C. toplam yokluğunda elegans da yumurta döşeme ateşkes ve rahim 3 döllenmiş yumurta korumak. Ancak, özellikle farklı gıda kaynakları, özellikle patojen bakteri ve yumurta döşeme davranış Enterococcus faecalis, etkisi iyi karakterize değildir. Yumurta-in-solucan (EIW) testi bu durumda E&#39;de, bakteri farklı etkilerini ölçmek için bir araçtır faecalis, yumurta döşeme davranış. EIW deneyleri C rahim korudu yumurta sayısı, sayım içerir elegans 4. EIW testi sahnelenen ağartma, gebe yetişkin C. içerir elegans manikür kaldırmak ve hayvan muhafaza yumurta ayırmak için. Önce beyazlatma için, solucan bakteri (veya çevresel işaret her türlü maruz kalan) Zaman belirli bir süre için. Ağartma sonra, bir çok kolay solucanlar rahim içinde muhafaza yumurta sayısını yapabiliyor. E. sonra yumurta tutma Bu deneyde, ölçülebilir bir artış faecalis maruz kolaylıkla ölçülebilir. EIW tahlil patojenik bakteri veya çevresel toksinler varlığı açısından taranması için kullanılabilecek bir davranış deneyidir. Buna ek olarak, EIW testi yumurta döşeme davranış, serotonin ve asetilkolin 5-9 gibi nörotransmitterlerin tarafından modüle olduğu için sinyalizasyon nörotransmitter etkileyen ilaçlar için ekrana bir araç olabilir.

Bu testte bir C içinde muhafaza yumurta sayısı ölçmek için sağlar E. maruz kaldıktan sonra elegans faecalis. L4 solucanlar (kendi vulva, Şekil 1 üzerinde şeffaf açık alan ile karakterize) E. maruz bırakıldı sahnelenen yetişkinlik boyunca faecalis. E. maruz kalma kırk saat sonra faecalis, ağartma uygulandı. Kütikül ağartma damlacık içinde çözüldüler olarak, yumurta (Şekil 2) daha da belirgin hale geldi. Muhafaza yumurta sayısı kolayca...

Bir yumurta-in-solucan (EIW) testi yumurtlama davranışı ölçmek için yararlı bir yöntemdir. Yumurtlama değişiklikler model organizma bir davranış tepki olabilir<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Bu patojen bakteriler tarafından üretilen gibi zararlı çevresel maddelere.

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme<em&gt; C. Elegans</emBir Yumurta Tutma Testi Kullanma&gt; Davranış

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...

measuring-effects-bacteria-on-c-elegans-behavior-using-an-egg

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

C. elegans yumurtlama davranışı, gelişimsel, üreme ve anatomik çalışmalarda önemli bilgiler sağlayabilir. Bu video, bir yumurtlama testinin önemli adımlarını tanıtır ve bir ilacın üreme toksisitesi açısından test edildiği örnek bir deneyi gösterir.

Yumurtlama Deneyi: C. elegans'ın Yumurtlama Davranışını Ölçmek İçin Bir Yöntem

Niceliksel kemotaktik tepkiyi değerlendirmek için bir...

C. elegans Kemotaksis Deneyi

C. elegans davranış üzerindeki etanol etkilerini incelemek için yararlı bir modeldir. Bu davranış analizi, sürünen solucanların lokomesyon hızındaki etanol etkilerini nicel olarak belirler; bu analiz ile hem başlangıç hassasiyeti hem de etanol için akut fonksiyonel tolerans gelişimi ölçülebilir.

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Bir modeli hayvan, Caenorhabditis elegans, kimyasal toksisitesi değerlendirmek için temel bir protokol açıklanmıştır. Uygun ve risk değerlendirmesi çeşitli çevresel kirleticilerin gelince de eczacılık gelişimi için yararlı yöntemdir.

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

Burada, mikrobiyal etkileşim çalışmaya çok yönlü ana model olarak Caenorhabditis elegans Yuvarlak solucanlar mevcut.

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

Bu protokol, Caenorhabditis elegansbağırsak geçirgenliği ölçmek için nasıl açıklar. Bu yöntem bağırsak bakterileri ve ev sahibi arasındaki etkileşim ile ilgili bağırsak sağlığı temel biyolojik araştırma ve sızıntılı bağırsak sendromu ve inflamatuar barsak hastalıkları nın tedavisi için probiyotik ve kimyasal ajanları belirlemek için tarama için yararlıdır.

Bakteri ve Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Bağırsak Geçirgenliği Üzerine Etkilerinin Ölçülmesi

Refakatçi-refakatçi ve refakatçi-substrat etkileşimlerini incelemek için, hafif mutasyonlar veya refakatçilerin aşırı ekspresyumu ile birlikte RNA paraziti kullanarak Caenorhabditis elegans'ta sentetik etkileşim ekranları gerçekleştiriyoruz ve dokuya özgü protein disfonksiyonunu organizma düzeyinde izliyoruz.

Dokuya Özgü Chaperone Etkileşimlerini Taramak için Caenorhabditis elegans'ı Kullanma

Caenorhabditis elegans, sağlık süresini, ömrünü ve strese karşı dayanıklılığı araştırmak için sağlam ve düşük maliyetli yöntemlerle mükemmel bir model sistem olarak hizmet eder.

Caenorhabditis elegans'ta Yaşam Süresini ve Sağlık Süresini Ölçmek için Düşük Maliyetli Yöntemlerin İncelenmesi

Burada, C. elegans model organizmasını kullanarak embriyonik canlılığı ve üretilen toplam embriyo sayısını (kuluçka) belirlemek için genel bir yöntem sunuyoruz.

Caenorhabditis elegans'ta embriyonik canlılık ve yavru büyüklüğünün ölçülmesi

Bu video transgenik hayvanlar oluşturmak için C. elegans gonad içine mikroenjeksiyon tekniği göstermektedir.

Mikroenjeksiyon Kararlı Transgenik C. elegans Üretimi

Keşfedin Caenorhabditis elegans'ta EIW analizi ile bakteri kaynaklı maddelerin üreme davranışlarına etkisini. Bu yöntem patojenlere karşı davranışsal yanıtları incelemek için güvenilir bir çerçeve sunar.

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme

Daha fazla video keşfet