Name: Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-13T13:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: Öğrenin Drosophila uçuş performansını hızlı ve doğru ölçmek için yüksek verimli bir yöntem. Bu teknik, genetik mutasyonları ve yaşlanma gibi nörodejeneratif koşulları taramak için araştırmacılara güçlü bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenen F32 NS078958 (DTB) ve R01 AG033620 (BG) verir.

1.. Uçuş Tester birleştirin <ol><li> Yüzük Güvenli uçuş silindir zincir kelepçeler kullanarak 1 Standı. (Çanak tartmak için silindirin altında yaklaşık 3 cm bırakın.) (Not: Kullandığımız uçuş silindir 13.5 cm çapında 90 cm uzunluğundadır.) </li><li> Uçuş silindirin altında mineral yağ ince bir tabaka ile çanak tartmak yerleştirin. </li><li> Ring Güvenli huni bir halka kelepçe ve pençe kelepçe kullanarak 2 Standı. Huninin alt uçuş silindirin üst kısmı ile aynı hizada olacak şekilde huni yüksekliğini ayarlar. (Not: huninin uç çapı şişeler ile düşmez, böylece damla tüplerine yerleştirilen şişelerin dış çapından daha küçük olması gerekir.) </li><li> Huni üst içine açılan tüp takın ve bir pençe kelepçe kullanarak sabitleyin. (Not: Bu 25 cm uzunluğunda bir damla tüpü kullanmak Bırakma hedefi içeren homojen bir kuvvet ile tüm sineklerin tutarlı çıkarılmasını sağlayan bu yükseklikten şişeler düşürme tüpünün iç çapı, sligh olmalıdır..Flakon serbestçe düşmesine olanak sağlamak üzere şişenin dış çapından daha büyük tly). </li><li> Uygun boyutta poliakrilamid levha (lar) kesin. (Not: ekleme ve levha giderilmesinde yardımcı olmak için, genişliği uçuş silindirin iç çevresi biraz daha küçük olmalıdır). </li><li> Yaprağa Tangle-Trap ince bir tabaka uygulayın. Kullanmadan önce 1 saat boyunca bekletin. (Not: tabakanın üst ve alt ekleme / kaldırma için sayfasını kavramak kaplanmamış (yaklaşık 3 cm) yeterli boşluk bırakın.) </li><li> Uçuş silindir poliakrilamid sayfasını yerleştirin. </li><li> Çam destek dirseklerini kullanarak kamera parçayı birleştirin. (Not: parçanın alt lens bloke olmadan kamera destek sağlamak Şekil 1B&#39;ye bakınız.). </li><li> Tıkaçs ekleyin ve yerine vida. (Not: Burası kamera panorama modunda tüm plastik sayfasını görüntülemek sağlayacak yerlerde tıpaları.) </li></ol> 2. Denemeyi çalıştırın <ol> &lt;li&gt; test edilecek sinekler şişeleri toplayın. En iyi sonuç için, en fazla 20 sinekler / şişesini kullanın. </li><li> Yavaşça flakonun dibine sinekler dokunun, prizden, ardından açılan tüp içine yerleştirin ve şişeyi bırakın. (Not: Bu, dar huni açıklığı edecek kadar şişe düşürme tüpü düşer şişe hunisi çarptığında, sinekler uçuş silindir içine atılır.). </li><li> Boş şişeyi kaldırmak için açılan tüp kaldırın. (Not: Aynı deney grubu sinekler Birden küçük şişeler tek bir poliakrilamid kağıda denenebilir Biz kadar 200 sinekler (20 sinekler her 10 şişe), tek bir kağıda test ve kolayca görüntülü bulabilirsiniz.. </li><li> Plastik levha çıkarın ve düz beyaz bir yüzey üzerine yerleştirin. (Not: tezgah üstleri koyu renkli ise beyaz poster panosu kullanılabilir.) </li><li> Plastik levha üzerinde kamera parçayı birleştirin. Kamera görüş alanında yaprağın alt ve üst hem de sahip için tabaka üzerinde yeterli derecede yüksek olmalıdır. </li><li> Th boyunca kamerayı kaydırıne parça panoramik bir görüntü elde etmek için &quot;yakalama&quot; tuşuna basılı tutarak. </li><li> Petrol iniş sinek sayısı her deneme için elle sayılır. </li><li> Tekrar verilen bir deneyde tüm koşullar için 2,2-2,7 adımları. Sinekler her deneme arasındaki tabakasından çıkarılabilir. Alternatif olarak, çok sayıda yaprak her seferinde yeni bir tabaka ile, kullanılabilir. </li></ol> 3. Veri Toplama <ol><li> ImageJ yazılımı kullanarak görüntü dosyaları açın. </li><li> Kırpma görüntüleri sadece iniş yüzey alanı dahil etmek gerekirse. (Bu Tangle-Trap kaplı alandır.) </li><li> 8-bit gri tonlama görüntüleri dönüştürün. </li><li> Beyaz arka plan filtrelemek için bir &quot;Eşik&quot; oluşturun. (Görüntü → → Eşik ayarlayın). </li><li> &quot;Parçacıkları analiz&quot; menüsünü kullanarak her sinek belirlemek için parametreleri ayarlayın. Bir parçacık tanımlamak için kullanılan parametrelerini tanımlayın (Parçacıklar Analiz → Analiz). Bizim kurmak ile bulduğumuz bir kullanıyor5-90 piksel 2 ve 0,4-1,0 bir dairesellikte alanı doğru tüm örnekleri tespit edecektir. </li><li> Her parçacığın koordinat oluşturulan listesini kullanarak her sineğin yerini ölçün. Piksel x-koordinatı iniş yüksekliğini hesaplamak için santimetre dönüştürülebilir. </li><li> (Microsoft Excel gibi) bir tablo içine tablo ithal. </li></ol>

<ol><li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Am%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of behavior.</a> Sci. Am. 229, 24-37 (1973).</li>
<li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+locomotor%2C+learning%2C+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> J. Vis. Exp. , e2504(2011).</li>
<li>de Vries, S. E., Clandinin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetic+Stimulation+of+Escape+Behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , e50192(2013).</li>
<li>Mundiyanapurath, S., Certel, S., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+aggression+in+Drosophila+%28fruit+flies%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Studying aggression in Drosophila (fruit flies).</a> J. Vis. Exp. , e155(2007).</li>
<li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+assay+Drosophila+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J. Vis. Exp. , e3795(2012).</li>
<li>Shiraiwa, T., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proboscis+extension+response+%28PER%29+assay+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Proboscis extension response (PER) assay in Drosophila.</a> J. Vis. Exp. , e193(2007).</li>
<li>Lloyd, T. E., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flightless+flies%3A+Drosophila+models+of+neuromuscular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Flightless flies: Drosophila models of neuromuscular disease.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1184, e1-e20 (2010).</li>
<li>Atkinson, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+separation+of+two+behavioral+phenotypes+by+a+mutation+affecting+the+promoters+of+a+Ca-activated+K+channel%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular separation of two behavioral phenotypes by a mutation affecting the promoters of a Ca-activated K channel.</a> J. Neurosci. 20, 2988-2993 (2000).</li>
<li>Atkinson, N. S., Robertson, G. A., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+component+of+calcium-activated+potassium+channels+encoded+by+the+Drosophila+slo+locus%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A component of calcium-activated potassium channels encoded by the Drosophila slo locus.</a> Science. 253, 551-555 (1991).</li>
<li>Elkins, T., Ganetzky, B., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+mutation+that+eliminates+a+calcium-dependent+potassium+current%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A Drosophila mutation that eliminates a calcium-dependent potassium current.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 8415-8419 (1986).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40, 386-395 (2005).</li>
<li>Fry, S. N., Rohrseitz, N., Straw, A. D., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+control+of+flight+speed+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visual control of flight speed in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 212, 1120-1130 (2009).</li>
<li>Mronz, M., Lehmann, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+free-flight+response+of+Drosophila+to+motion+of+the+visual+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The free-flight response of Drosophila to motion of the visual environment.</a> J. Exp. Biol. 211, 2026-2045 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek Çıkar çatışması var.

Burada açıklanan yöntemler kullanılarak, hızla daha önce mümkün olandan daha yüksek verimlilik sağlayan, Drosophila mutantlarının bir sayıda uçuş performansının değerlendirilmesi mümkün olmuştur. Deneyler için, rutin, erkek ve dişileri ayrı ve kanatları zarar verebilir saldırganlığı sınırlamak için düşük yoğunluklu (az 20 sinekler / flakon) onları yükseltmek. Diğer bir önemli husus genetik arka farklılıklardan ötürü uçuş performans farklılıkları için uygun kontrol etmektir. Biz de önce uçuş test karbondioksit i...

Drosophila uzun davranış 1 genetik temelini incelemek için kullanılır olmuştur, ve araştırmacılar davranış 2-6 çeşitli analiz etmek için çeşitli yollar geliştirdiler. Sinekler nöromüsküler bozukluklar 7 açısından yararlı modeller sağlayan özellikle yararlı olmuştur. Lokomotor davranışını incelemek için kullanılan ortak bir tahlil uçuş performans. Orijinal uçuş test uçuşu kusurlu mutantlar tanımlamak için ve uçuş yetenek 1 kantitatif değerlendirilmesi için yararlıdır, ancak yüksek verimli ekranlar için uygulanmasını kısıtlayan bazı eksiklikleri vardır: Yağ kaplı silindir kullanımı, dağınık ve hantal gibi bazı özellikleri Değişken güç ile tüp içine silindir ve sinekler sokulma uzunluğu kantitatif doğruluğunu azaltmak ve bu test canlı sinekler geri kazanılması zor olan. Bu sınırlamaları aşmak için, bir dizi iyileştirmeler içerecek şekilde uçuş test değiştirdiniz. Biz bir &quot;damla tu eklendiBiz kolay temizlik ve bireysel sinekler kurtarma sağlayan bir yapıştırıcı ile kaplı çıkarılabilir akrilik yaprak kullanmak deneyler ve kullanıcılar arasındaki değişkenliği ortadan kaldırmak için sinekler tanıtmak için &quot;olması.. Biz kantitatif doğruluğunu ve güvenilirliğini artırmak için uçuş tüpün uzunluğu artmıştır. Nihayet , bir dijital kamera ve sineklerin iniş yükseklikleri hesaplamak için görüntüleme yazılımı kullanın. Biz bu gelişmeler uçuş performansı kusurlar için büyük ölçekli genetik ekranlar yürütülmesi ilgilenen herhangi bir laboratuvara yararlı olacağına inanıyorum.

<table><tbody><tr><td>Macun bıçağı</td><td>Home Depot</td><td>630147</td><td><a href="http://www.homedepot.com">www.homedepot.com</a></td></tr><tr><td>Çam sırt bandı kalıplama (2x)</td><td>Home Depot</td><td>156469</td><td><a href="http://www.homedepot.com">www.homedepot.com</a></td></tr><tr><td>Furring Şerit</td><td>Tahtası Home Depot</td><td>164704</td><td><a href="http://www.homedepot.com"> www.homedepot.com</a></td></tr><tr><td>Tangle-Tuzak Böcek Tuzağı Kaplama Biyokontrol Ağı</td><td></td><td>268941</td><td><a href="http://www.biconet.com">www.biconet.com</a></td></tr><tr><td>Dizüstü Bilgisayar&nbsp;</td><td>Apple</td><td></td><td><a href="http://www.apple.com/mac/">www.apple.com/mac/</a></td></tr><tr><td>Mineral yağ</td><td>Fisher Scientific BP26291</td><td></td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>Beyaz poster panosu</td><td>Staples</td><td>247403</td><td><a href="http://www.staples.com">www.staples.com</a></td></tr><tr><td>Polistiren tartım kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67091A</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>ImageJ Software</td><td>National Institutes of Health</td><td></td><td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ij/</a></td></tr><tr><td>Dijital fotoğraf makinesi</td><td>Sony</td><td>DSC-TX7</td><td><a href="http://www.store.sony.com">www.store.sony.com</a> </td></tr><tr><td>İnce forseps</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td><a href="http://www.finescience.com">www.finescience.com</a></td></tr><tr><td>Polikarbonat silindir (damla tüpü)</td><td>McMaster-Carr</td><td>8585K62</td><td><a href="http://www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td></tr><tr><td>Uçuş silindiri (akrilik)</td><td>McMaster-Carr</td><td>8486K943</td><td><a href="http:// www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td></tr><tr><td>Polikarbonat levhalar</td><td>McMaster-Carr</td><td>85585K25</td><td><a href="http://www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td></tr><tr><td>halka standı (2x)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S47808</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>Halka desteği</td><td>Fisher Scientific</td><td>S47791</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>Üç uçlu uzatma kelepçeleri (x2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-769-7Q</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>Huni</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-3</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a</td></tr><tr><td>>zincir kelepçeleri (2x)</td><td>VWR</td><td>21573-275</td><td><a href="http://www.vwr.com">www.vwr.com</a></td></tr><tr><td>Cam şişeler</td><td>VWR</td><td>66020-198</td><td><a href="http://www.vwr.com/">www.vwr.com</a></td></tr></tbody></table>

uçuş performans doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş yöntemi<em&gt; drosophila</em

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Drosophila uçuş dahil olmak üzere davranış analizi için yararlı bir model sistemi, olduğu kanıtlanmıştır. İlk uçuş test yer bırakarak içine uçar yağ kaplı silindir mezun, iniş yüksekliği silindirin duvarı ile temas kurmaya itme yeterince hazırlamadan önce çok sinekler düşecek ne değerlendirerek uçuş performansı ölçmek sağladı. Burada dört önemli iyileştirmeler ile uçuş test güncelleştirilmiş bir sürümünü açıklar. İlk olarak, bütün sinekler kullanıcılar arasındaki değişkenliği ortadan kaldırarak, çalışmalar arasındaki benzer bir hızda uçuş silindire girer olmasını sağlamak için bir &quot;damla tüp&quot; ekledi. İkincisi, biz Tangle-Trap, canlı böcekleri yakalamak için tasarlanmış bir yapıştırıcı kaplı çıkarılabilir plastik levhalar ile yağ kaplaması değiştirilir. Üçüncü olarak, uçuş yeteneği daha doğru ayrımcılık sağlamak için daha uzun bir silindir kullanın. Dördüncü biz uçuş performans puanlama otomatikleştirmek için bir dijital kamera ve görüntüleme yazılımını kullanabilirsiniz. Bu gelişmeler rap için izinid, uçuş davranış kantitatif değerlendirilmesi, büyük veri kümeleri ve büyük ölçekli genetik ekranlar için yararlıdır.

<html> Şekil 1A güncellenen uçuş test düzeneğinin şemasını göstermektedir. Şekil 1B parça tasarımı kamera görüntüsü alanını engelleme olmadan panoramik bir görüntü almasına izin göstermektedir. Sonuçlar Örnek 8-10, bilinen bir kusur bir uçuş uyuşuk mutant sinekler, uçuş performansı, vahşi tip Canton-S uçan ile karşılaştırıldığında, Şekil 2 de gösterilmiştir. Kontrolü sürekli bireyler arasında çok az yayılması ve 73 ± 2.0 cm ortalama iniş yüks...

Burada yüksek verimli tarama sağlayan, Drosophila uçuş performans hızlı ve doğru bir ölçümü için bir yöntem tarif eder.

Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an ...

Bu prosedürün genel amacı, Drosophila'da uçuş performansını hızlı ve doğru bir şekilde ölçmektir. Bu işlem, öncelikle sineklerin bir uçuş silindirine bırakılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, iniş yüzeyinin bir dijital kamera ile görüntülenmesidir.Son adım, görüntüleme yazılımı kullanarak her bir sineğin iniş yüksekliğini ölçmek suretiyle verileri analiz etmektir. Nihayetinde bu prosedür, uçuş yeteneğini bozan mutasyonların yanı sıra yaşlanma veya nörodejenerasyon gibi durumların belirlenmesine ve uçuş performansının nicelleştirilmesine yardımcı olur. Bu tekniğin orijinal uçuş test cihazı gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, uçuşu bozan mutantlar ve diğer durumlar için yapılan yüksek kapasiteli taramalara daha uygun olmasıdır.Bu yöntemle ilgili ilk fikrimiz, orijinal uçuş test cihazını kullanarak çok sayıda genotipin test edilmesinin ne kadar zaman aldığını fark ettiğimizde ortaya çıktı. Uçuş silindirini zincir klempler kullanarak bir ring standa sabitleyin. Silindirin altında, tartım kabı için yaklaşık üç santimetre boşluk bırakın.Yol kabını ince bir mineral yağ tabakasıyla doldurun ve uçuş silindirinin altına kaydırın. Huniyi ikinci bir ring standına sabitleyin. Huninin alt kısmı uçuş silindirinin üst kısmıyla aynı seviyeye gelecek şekilde huninin yüksekliğini ayarlayın.Huninin en dar kısmı bir sinek tüpünden daha dar olmalıdır. Damlatma tüpünün çapı, tüpün serbestçe düşebilmesi için bir sinek tüpünden biraz daha geniş olmalıdır. Damlatma tüpünü huninin üst kısmına yerleştirin ve bir kıskaçlı klemple sabitleyin.Ardından, bir poliakrilamid levhadan, uçuş silindirinin uzunluğunda ve genişliği uçuş silindirinin iç çevresinden biraz daha dar olan dikdörtgen bir parça kesin. Levhanın üst ve alt kısımlarında, levhayı tutabilmek için yeterli alanı kaplamadan, ince bir tabaka tangle trap yapıştırıcısı uygulayın. Levha üzerindeki yapıştırıcı bir saat boyunca kuruduktan sonra, levhayı yapışkanlı yüzeyi içe bakacak şekilde uçuş silindirinin içine kaydırın.Ardından, çam destek braketlerini kullanarak kamera rayını monte edin. Rayın alt kısmının, lensi engellemeden kamerayı destekleyebildiğinden emin olun. Daha sonra, durdurucuları kameranın plastik levha görüşünü kesmeyecek şekilde yerlerine vidalayın.Test edilecek sinekleri, her tüpte 20 sineği geçmeyecek şekilde tüplere toplayın. Sineklerin tüp tabanına inmesi için tüpe hafifçe vurun. Tüpün tıpasını çıkarın ve damlatma tüpüne yerleştirin.Tüpü serbest bırakın. Tüp, daralan huninin duvarlarına çarptığında, sinekler uçuş silindirine doğru fırlar. Boş tüpü çıkarmak için düşürme tüpünü kaldırın ve istenirse daha fazla sinek yükleyin.10 flakondan yüklenen 200 adete kadar sinek, tek bir poliakrilamid levha üzerinde kolayca test edilebilir ve görüntülenir. Şimdi, plastik levhayı çıkarın ve düz beyaz bir yüzeye yerleştirin; tezgâhlar koyu renkliyse beyaz bir poster kartonu kullanılabilir. Kamera rayını plastik levhanın üzerine monte edin.Kameranın, sayfanın hem üst hem de alt kısmının görüş alanında kalması için sayfanın yeterince üzerinde olması gerekir. Panoramik bir görüntü elde etmek için yakalama düğmesini basılı tutarken kamerayı ray boyunca kaydırın. Uçuş odasının altındaki kapta bulunan yağa konan sineklerin sayısı manuel olarak sayılabilir.Denemeler arasındaki her bir işlem için sinekler tabakadan uzaklaştırılabilir ve tabaka yeniden kullanılabilir. Görüntü dosyalarını Image J yazılımında açın ve gerekirse görüntüleri, yalnızca iniş yüzey alanını ve kaplanmış dolanıklık tuzağı alanını içerecek şekilde kırpın.Görüntüleri sekiz bitlik gri tonlamaya dönüştürün ve bir eşik değer oluşturun. Beyaz arka planı filtrelemek için parametreleri her bir sineği tanımlayacak şekilde ayarlayın.Parçacıkları analiz et (analyze particles) menüsünü kullanarak parametreleri tanımlayın. Demonstrasyon düzeneği kullanılarak bir parçacığın tanımlanması için kullanılır. 5 ile 90 piksel kare arasında bir alan ve 0,4 ile 1,0 arasında bir dairesellik, tüm örnekleri doğru bir şekilde tanımlayacaktır.Şimdi, her bir partikül için oluşturulan koordinat listesini kullanarak her bir sineğin konumunu ölçün. Piksel cinsinden X koordinatı santimetreye dönüştürülebilir. Konma yüksekliğini hesaplamak için tabloyu bir hesap çizelgesine aktarın ve analize geçin.Bilinen bir uçuş kusuruna sahip olan slow poke mutant sineklerinin uçuş performansı, vahşi tip canton s sinekleri ile karşılaştırılmıştır. Tüm sinekler üç günlük olup oda sıcaklığında yetiştirilmiştir; kontrol sinekleri tutarlı bir şekilde silindirin üst kısmına yakın bölgelere konmuştur. Konma yayılımı slow poke mutantları için çok daha genişti.Kantonlar için ortalama iniş yüksekliği 73 santimetre ile slow poke mutantlarının 44 santimetrelik değerinden anlamlı derecede daha yüksekti. Bu prosedürün ardından, uçuş kaslarının, motor nöronların veya nöromüsküler bağlantıların yapısal bütünlüğüne ilişkin ek soruları yanıtlamak için histoloji gibi ek yöntemler kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, oph'da uçuş performansını nasıl hızlı bir şekilde değerlendirebileceğiniz konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

an-improved-method-for-accurate-rapid-measurement-flight-performance

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Yetişkin Drosophila melanogaster Locomotion Yüksek Çözünürlüklü Video Takip

Drosophila melanogaster bir yüzyıl 1 aşkın süredir birçok önemli biyolojik işlemlerin moleküler ve hücresel temelini anlamak için kullanılan bir genetik ve davranışsal uysal modeli sistemidir. Drosophila iyi sinek davranışının genetik temeli içgörü kazanmak için istismar edilmiştir.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Bu videoda, lokomotor aktiviteyi izlemek için kullanılan Drosophila aktivite monitörü (DAM) sistemi açıklanmaktadır. Araştırmacılar, meyve sineklerinde sirkadiyen ritimleri incelemek için DAM'dan toplanan aktivite verilerini kullanıyorlar. Öne çıkan protokol klibi, cihaza sineklerin nasıl yükleneceğini ve sirkadiyen deneyler için etkinlik verilerinin nasıl kaydedileceğini gösterir.

Drosophila Aktivite monitörü (DAM): Sineklerde lokomotor aktiviteyi ölçmek için bir yöntem

Drosophila melanogaster gibi spontan lokomotor aktivite gibi davranışları etkileyen genetik veya çevresel manipülasyonlar okuyan yararlıdır. Burada kızılötesi ışınları ve spontan lokomotor aktivitesini ölçmek için veri analiz yazılımı ile monitör kullanan bir protokol açıklar.

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Özgür ve ucuz yazılım programları bir web kamerası ve bir arada kullanarak, Drosophila melanogaster lokomotif desenler hız, mesafe, ve çeşitli motor etkinlikler zamanında farklılıkları tespit etmek için analiz edilebilir.

Nöbet gibi Aktivite Analizi ve Hareket için A Düşük maliyetli Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Metabolik bozukluklar, insanlarda en yaygın hastalıklardan biri arasında yer alıyor. Genetik uysal bir model organizma D. melanogaster metabolizmasını düzenleyen yeni genleri tanımlamak için kullanılabilir. Bu çalışma da CO 2 üretimini ölçerek sinekler metabolizma hızı okuyan sağlayan nispeten basit bir yöntem tarif etmektedir.

Metabolik Oranı Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Respirometrik kullanarak

Bu rapor, TriKinetics Drosophila Activity Monitor kullanılarak Drosophila larva aktivitesini ölçmek için bir yöntemi açıklar. Cihaz, 16 adede kadar bireysel hayvanın hareketlerini algılamak için kızılötesi ışınlar kullanır. Veriler, oranlar ve hayvanların tahlil odaları içindeki konumları dahil olmak üzere hareket parametrelerini temsil etmek için analiz edilebilir.

Larvaların Faaliyet Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Bu adım adım protokolü Drosophila negatif geotaxis davranışı sinekler yüzlerce ev sahipliği yapan ve eylemlerinin bir elektrik motoru ile eşitler otomatik çoklu silindir sistemi kullanarak çözümler. Eşitleme sinek negatif geotaxis davranış, dijital kaydedilen ve analiz kendi kendine tasarlanmış RflyDetection yazılım kullanarak denetlesinler.

Ateş, Drosophila modeli yetişkin tırmanma davranışı çözümlemek için bir otomatik hızlı yinelemeli negatif Geotaxis tahlil

Burada zaman ve mekan içinde hızlı ve hassas sıcaklık değişiklikleri üretir programlanabilir bir ısı kontrollü arena kullanarak sıcaklık değiştirme Drosophila lokomotor performansını otomatik olarak belirlemek için bir iletişim kuralı mevcut.

Drosophila sıcaklık değişiklikler uzay ve zaman içinde performansını belirlemek için otomatik yöntemi

Drosophila alkol duyarlılığını ölçmek için geçerli yöntemler sinek grupları test etmek için tasarlanmıştır. Çok sayıda tek sinekte alkol sedasyon hassasiyetini değerlendirmek için basit, düşük maliyetli, yüksek iş çıkışlı bir çalışma salıyoruz. Yöntem özel araçlar gerektirmez ve ortak malzemeler kullanılarak herhangi bir laboratuvarda yapılabilir.

Bireysel Drosophila melanogaster Alkol Sedasyon Süresini Ölçmek için Yüksek İşLenme Yöntemi

Mevcut protokol, Drosophila'nın lokomotor aktivitesini, hız, mesafe vb. parametreleri hesaplamak için yüksek tanımlı video kaydına dayalı olarak her karenin piksellerini segmentlere ayırmak için eklentilerle uyumlu açık kaynaklı yazılım Fiji'yi kullanarak el yapımı bir arenada sineklerin hareketini izleyerek ve analiz ederek değerlendirir.

Drosophila'da Lokomotor Aktiviteyi Test Etmek İçin Basit Bir Teknik

Öğrenin Drosophila uçuş performansını hızlı ve doğru ölçmek için yüksek verimli bir yöntem. Bu teknik, genetik mutasyonları ve yaşlanma gibi nörodejeneratif koşulları taramak için araştırmacılara güçlü bir araç sunar.

Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi

Daha fazla video keşfet