Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi Drosophila

Bu prosedürün genel amacı, Drosophila'daki uçuş performansını hızlı ve doğru bir şekilde ölçmektir. Bu, önce sineklerin bir uçuş silindirine bırakılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, iniş yüzeyini bir dijital kamera ile görüntülemektir.

Son adım, her bir sineğin iniş yüksekliğini ölçerek görüntüleme yazılımı kullanarak verileri analiz etmektir. Sonuç olarak, bu prosedür, uçuş kabiliyetini bozan ve uçuş performansını ölçmeye yardımcı olan yaşlanma veya nörodejenerasyon gibi mutasyonları ve durumları tanımlamaya yardımcı olur. Bu tekniğin, orijinal uçuş test cihazı gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, mutantlar ve uçuşu bozan diğer koşullar için yüksek verimli ekranlar için daha uygun olmasıdır.

Bu yöntem için ilk olarak, orijinal uçuş test cihazını kullanarak çok sayıda genotipin test edilmesiyle ne kadar zaman harcandığını fark ettiğimizde aklımıza geldi. Uçuş silindirini zincir cl kullanarak bir halka standına sabitleyin.amps. Yol çanağı için silindirin altında yaklaşık üç santimetre bırakın.

Yol çanağına ince bir tabaka mineral yağ yükleyin ve uçuş silindirinin altına kaydırın. Huniyi ikinci bir halka standına sabitleyin. Huninin yüksekliğini, huninin alt kısmı uçuş silindirinin üst kısmı ile aynı hizada olacak şekilde ayarlayın.

Huninin en dar kısmı bir sinek şişesinden daha dar olmalıdır. Damla tüpünün çapı bir sinek şişesinden biraz daha geniş olmalıdır, böylece şişe serbestçe düşebilir. Damla borusunu huninin üst kısmına yerleştirin ve bir pençe kelepçesi kullanarak sabitleyin.

Bir poli akrilamid levhadan sonra, uçuş silindirinin iç çevresinden biraz daha küçük bir genişliğe sahip, uçuş silindirinin uzunluğunda dikdörtgen bir parça kesin. Tabakaya ince bir tabaka dolaşma tuzağı yapıştırıcısı uygulayın ve tabakayı tutmak için üst ve alt kaplamasız yeterli alan bırakın. Tabaka üzerindeki yapıştırıcı bir saat kuruduktan sonra, tabakayı yapışkan içe bakacak şekilde uçuş silindirine kaydırın.

Ardından, çam destek braketlerini kullanarak kamera rayını birleştirin. Rayın alt kısmının lensi engellemeden kamerayı destekleyebildiğinden emin olun. Ardından tıpaları, kameranın plastik tabakayı görmesini kesintiye uğratmayacakları bir yere vidalayın.

Flakon başına en fazla 20 sinek ile test edilecek sinek şişelerini toplayın. Sinekleri nazikçe şişenin dibine vurun. Şişeyi fişten çekin ve damla tüpüne yerleştirin.

Şişeyi serbest bırakın. Flakon daralan huninin duvarlarına çarptığında, uçuş silindirine atılan sinekler. Boş şişeyi çıkarmak için damla tüpünü kaldırın ve istenirse daha fazla sinek yükleyin.

10 flakondan yüklenen 200'e kadar sinek, tek bir poli akrilamid levha üzerinde kolayca test edilebilir ve görüntülenebilir. Şimdi, plastik tabakayı çıkarın ve üzerine yerleştirin Düz beyaz bir yüzey tezgahlar koyu renkliyse beyaz poster panosu kullanılabilir. Kamera rayını plastik tabakanın üzerine monte edin.

Kamera, sayfanın hem üstünü hem de altını görüş alanında tutmak için sayfanın üzerinde yeterince yüksekte olmalıdır. Panoramik bir görüntü elde etmek için yakalama düğmesini basılı tutarken kamerayı yol boyunca kaydırın. Uçuş odasının altındaki çanaktaki yağa inen sinek sayısı manuel olarak sayılabilir.

Denemeler arasındaki her deneme için, sinekler tabakadan çıkarılabilir ve tabaka yeniden kullanılabilir. Görüntü dosyalarını görüntü J yazılımında açın, gerekirse görüntüleri yalnızca iniş yüzey alanını içerecek şekilde kırpın. Alan kaplanmış dolaşık tuzağı.

Görüntüleri sekiz bit gri tonlamaya dönüştürün ve bir eşik oluşturun. Beyaz arka planı filtrelemek için. Her bir sineği tanımlamak için parametreleri ayarlayın.

Parçacıkları analiz et menüsünü kullanarak parametreleri tanımlayın. Gösteri aparatını kullanarak bir parçacığı tanımlamak için kullanılır. Beş ila 90 piksellik bir alanın karesi ve 0,4 ila 1,0 daireselliği, tüm örnekleri doğru bir şekilde tanımlayacaktır.

Şimdi, her parçacık için oluşturulan koordinat listesini kullanarak her sineğin konumunu ölçün. Piksel cinsinden X koordinatı santimetreye dönüştürülebilir. İniş yüksekliğini hesaplamak için tabloyu bir elektronik tabloya aktarın ve analize devam edin.

Bilinen bir uçuş kusuruna sahip olan yavaş dürtme mutant sineklerinin uçuş performansları, vahşi tip kanton sineklerine benzetilmiştir. Tüm sinekler üç günlüktü, oda sıcaklığında kontrol edilen sinekler sürekli olarak silindirin tepesine yakın bir yere indi. İnişin yayılması, yavaş dürtme mutantları için çok daha büyüktü.

73 santimetredeki kantonlar için ortalama iniş yüksekliği, 44 santimetredeki yavaş dürtme mutantlarından önemli ölçüde daha büyüktü. Bu prosedürü takiben, uçuş kaslarının, motor nöronların veya nöromüsküler kavşakların yapısal bütünlüğü ile ilgili ek soruları yanıtlamak için histoloji gibi ek yöntemler kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, oph'de uçuş performansını nasıl hızlı bir şekilde değerlendirebileceğinizi iyi anlamış olmalısınız.