Name: In Koku Reseptör Nöronlar Tüm Dağı ile immün Drosophila Anten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 21 s
Description: Keşfedin Drosophila antenlerinde koku reseptör nöronlarını görüntülemek için tam dağı immün boyama tekniğini. Bu yöntem, nöron çeşitlenmesinin moleküler mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Özel Üniversitelerde Stratejik Araştırmalar Vakfı ve Biz video klipleri düzenlemek için Ohtake Norihito teşekkür etmek istiyorum HT JSPS Genç Bilimci B hibe MEXT Destekli Programı tarafından desteklenmiştir.

1.. Elma tabak hazırlayın <ol><li> 12.5 g agar karıştırılır, 125 ml% 100 ticari olarak temin edilebilen elma suyu, 12.5 g glukoz ve 375 ml 2 H O. 1-2 dakika için karışımın mikrodalga ve 3 cm hücre kültürü tabağına dökülür. 4 ° C&#39;de saklayın </li></ol> 2.. Genetik çapraz <ol><li> Aşağıdaki temsilcisi genetik haç kullanın: </li></ol> Or49a-mCD8 :: GFP / cyo x 1118 w 3.. Diseksiyon ve boyama protokolü <ol><li> Sinek uyutmak ve daha sonra bir forseps kullanarak tutarak dikey sinek kafasını kesti. </li><li> Dikkatli bir elma plaka üzerinde antenleri içeren kısmını yerleştirin. </li><li> Ince diseksiyon makas kullanılarak antenin üçüncü bölümü kesmek. </li><li> Bir cam alt kültür çanağı ortasına ()% 0.1 Triton X-100 ile% 0.1 PBST (PBS içinde% 4 paraformaldehid) sabitleme çözeltisi 90 ul koyun. </li><li> Yavaşça disseke ANTENN transferidoğrudan sabitleme çözüm için keskin bir iğne ile ae. Gerekirse, fiziksel olarak bir iğne kullanılarak çözelti içine anten daldırın. </li><li> Oda sıcaklığında (RT) 40 dakika süreyle inkübe edin. Aynı çanak tutarak, (% 0.4 Triton X-100 ile PBS)% 0.4 PBST içinde her 3x 10 dakika anten yıkayın. PBST çözüm kaldırmak ve eklemek için sarı ipuçlarını kullanın. Her süresi, yıkama çözeltisi 90 ul kullanın. NOT: immünohistokimyada sırasında karıştırıcı içine çanak koymayın. Çanak içine alınarak, veya eklemeden önce, iğne kullanılarak çanağın merkezine tüm antenler getirmek ve dikkatli bir yemeğin kenarından çözeltisi eklemek veya çıkarmak. </li><li> Oda sıcaklığında 20 dakika süreyle% 0.1 &#39;lik PBST içinde% 5 normal at serumu ve 90 ul anten bloke eder. </li><li> Bloklama çözeltisi uzaklaştırıldıktan sonra, daha önce tarif edildiği gibi bir kap içinde nemli 4 ° C&#39;de 48 saat boyunca% 5 at serumu ihtiva eden% 0.1 &#39;lik PBST içinde birincil antikor 90μl ile antenler inkübe <skadar&gt; 8. </li><li> % 0.4 PBST içinde 10 dakika 6x anten yıkayın. </li><li> 4 ° C&#39;de 48 saat boyunca% 5 at serumu ihtiva eden% 0.1 &#39;lik PBST içinde sekonder antikor 90 ul ile inkübe antenler % 0.4 PBST kullanarak 6x 10 dakika yıkayın. </li><li> , Antenler monte mümkün olduğunca kültürü çanak PBST kaldırmak ve yavaş yavaş antenine gliserol iki farklı konsantrasyonları tanıtmak. İlk olarak 1-2 dakika için çanak% 40 gliserol ekleyin; sonra bu kaldırmak ve% 80 gliserol ekleyin. </li><li> Dikkatle sarı ucunu kullanarak kültürü çanak (% 80 gliserol dahil) antenleri ayıklamak ve bir slayt üzerine koyun. Yavaşça üstüne lamel yerleştirin ve tırnak cilası ile lamel kenarları mühür. Antenler artık floresan mikroskop ile görüntülü hazırız. </li></ol>

<ol><li>Christensen, T. A., White, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChristensen%2C+TA+%22Representation+of+olfactory+information+in+the+brain+In+The+Neurobiology+of+Taste+and+Smell%22">Representation of olfactory information in the brain In The Neurobiology of Taste and Smell</a>. , New York. 201-232 (2000).</li>
<li>Ache, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+common+strategy+for+transducing+olfactory+information%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Towards a common strategy for transducing olfactory information.</a> Sem. Cell Biol. 5, 55-63 (1994).</li>
<li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22C.+elegans.+Cell%22%5BJournal%5D)">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction.</a> C. elegans. Cell. 13, 515-527 (1993).</li>
<li>Barth, A. L., Justice, N. J., Ngai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asynchronous+onset+of+odorant+receptor+expression+in+the+developing+zebrafish+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Asynchronous onset of odorant receptor expression in the developing zebrafish olfactory system.</a> Neuron. 16, 23-34 (1996).</li>
<li>Firestein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+the+olfactory+system+makes+sense+of+scents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">How the olfactory system makes sense of scents.</a> Nature. 413, 211-218 (2001).</li>
<li>Stockinger, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+circuitry+that+governs+Drosophila+male+courtship+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Neural circuitry that governs Drosophila male courtship behavior.</a> Cell. 121, 795-807 (2005).</li>
<li>Endo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+modification+of+Notch+targets+in+olfactory+receptor+neuron+diversification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Chromatin modification of Notch targets in olfactory receptor neuron diversification.</a> Nat Neurosci. 15, 224-233 (2011).</li>
<li>Karim, M. R., Moore, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+analysis+of+Drosophila+larval+peripheral+sensory+neuron+dendrites+and+axons+using+genetic+mosaics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Morphological analysis of Drosophila larval peripheral sensory neuron dendrites and axons using genetic mosaics.</a> J Vis Exp. , (2011).</li>
<li>Suh, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+population+of+olfactory+sensory+neurons+mediates+an+innate+avoidance+behaviour+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila.</a> Nature. 431, 854-859 (2004).</li>
<li>Sachse, S., Galizia, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+inhibition+for+temporal+and+spatial+odor+representation+in+olfactory+output+neurons%3A+A+calcium+imaging+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Role of inhibition for temporal and spatial odor representation in olfactory output neurons: A calcium imaging study.</a> J Neurophysiol. 87, 1106-1117 (2002).</li>
<li>Hallem, E. A., Ho, M. G., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+of+odor+coding+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The molecular basis of odor coding in the Drosophila antenna.</a> Cell. 117, 965-979 (2004).</li>
<li>Vosshall, L. B., Wong, A. M., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+olfactory+sensory+map+in+the+fly+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">An olfactory sensory map in the fly brain.</a> Cell. 102, 147-159 (2000).</li>
<li>Couto, A., Alenius, M., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular%2C+anatomical+and+functional+organization+of+the+Drosophila+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular, anatomical and functional organization of the Drosophila olfactory system.</a> Curr Biol. 15, 1535-1547 (2005).</li>
<li>Clyne, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+response+of+individual+sensilla+on+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Invert+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Odorant response of individual sensilla on the Drosophila antenna.</a> Invert Neurosci. 3, 127-135 (1997).</li>
<li>Vosshall, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spatial+map+of+olfactory+receptor+expression+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A spatial map of olfactory receptor expression in the Drosophila antenna.</a> Cell. 96, 725-736 (1999).</li>
<li>Wang, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+calcium+imaging+reveals+an+odor-evoked+map+of+activity+in+the+fly+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Two-photon calcium imaging reveals an odor-evoked map of activity in the fly brain.</a> Cell. 112, 271-282 (2003).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Biz tarif Drosophila anten diseksiyonu basit ve bir laboratuvar ortamında gerçekleştirmek kolaydır. Başarılı bir diseksiyon sağlamak için, bu ince kenarlı makas kullanmak için gereklidir. Parçalara anten immün da, bu antikor çözeltisi buharlaşmasını önlemek için bir nem dolu kap içinde inkübe etmek önemlidir. Kesilmiş anten çözeltide yüzer bir eğilimi vardır. Tespit sırasında PBS içinde% 0.1 Triton kullanılarak ve adım bloke çözeltisi içinde antenin suya batmaya kolaylaştıracak ve daha iyi boyama sağlamak. &quo...

Koku sistemi koku molekülleri çok büyük bir çeşitlilik ayırt etmek ve daha sonra, yüksek beyin merkezlerine elde edilen bilgi göndermek için kullanılır. Bu giriş, kesinlikle böyle beslenme ve çiftleşme 1-6 gibi temel hayvan davranışlarını kontrol etmek için kullanılır. Her koku nöron tipi kokuların bir dizi özel, koku reseptör nöronların çeşitlendirilmesi ile ilişkili olarak (ORN) ler doğru koku alma sistemi fonksiyonu 7 için gereklidir. Drosophila genetiği ORN gelişimi ve fizyolojik fonksiyonu 8-16 ile ilişkili moleküler mekanizmaları içeren tek hücre düzeyinde soruşturma yapmak için bize sağlar. Drosophila antenlerin Tüm montaj immünoboyamasıdır daha detaylı koku reseptör nöronların çeşitlendirilmesi dahil moleküler mekanizmaları (ORN) s 7 anlamak sağladı. Bu yazıda ac için basit bir yöntem kapsamlı bir açıklama sağlamakBu hieve.

<table><tbody><tr><td>Stemi DV4 diseksiyon mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Stemi DV4</td><td></td></tr><tr><td>Cam alt kültür kapları&nbsp;</td><td>MatTek şirketi</td><td>P35G-0-10-C</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan anti-ELAV</td><td>Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma Bankası</td><td>7E8A10</td><td>Seyreltme 1:200</td></tr><tr><td>Fare anti-GFP</td><td>Invitrogen</td><td>A11122</td><td>Seyreltme 1:400</td></tr><tr><td>Eşek Anti-Tavşan IgG</td><td>Jackson İmmünoAraştırma Laboratuvarları</td><td>711-225-152</td><td>Seyreltme 1:200</td></tr><tr><td>Eşek Anti-Sıçan IgG</td><td>Jackson İmmünoAraştırma Laboratuvarları</td><td>712-165-150</td><td>Seyreltme 1:200</td></tr></tbody></table>

in koku reseptör nöronlar tüm dağı ile immün<em&gt; drosophila</em&gt; anten

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molekülleri hassas ve koordineli bir şekilde hedef reseptörlerine bağlanır. Her bir reseptör belirli bir sinyal algılar ve beyne bu bilgileri aktarır. Gibi, koku bilgi algı ve davranışlarını, yararları soruşturma hem değiştirerek, beyne transfer edilir nasıl belirlenmesi. İlginçtir, hücresel iletimi ve transkripsiyon faktörleri koku reseptör nöron çeşitlendirilmesi dahil olduğunu yeni kanıtlar vardır. Burada bir bütün in vivo güçlü bir koku reseptör nöron organizasyon tahlil için immünolojik etiketleme yöntemi montaj kısmı temin etmektedirler. Bu yöntemi kullanarak, anti-ELAV antikoru, bilinen pan-sinir işaret ve Or49a-mCD8 :: GFP, özellikle anti-GFP antikoru kullanılarak NBA nöron içinde ifade edilen bir koku alıcı nöron Tüm olfaktori reseptör nöronlar tespit edilmiştir.

Diseksiyon ve sabitleme hem de hızlı yapılabilmesinin sağlanması, bu protokol ile başarıya ulaşmada önemli bir faktördür. Ince makas ve forseps kullanılması da önemlidir. İmmunosteyn sonra, floresan etiketli antenleri konfokal mikroskop altında incelendi. Biz normalde 20x lens kullanarak 1 Pm&#39;lik bölümleri alır. Biz NBA Or49a-mCD8 :: GFP kullanarak 7 Örns etiketli ve vahşi-tip anten Nba Örns sayısını sayılır. Bunun ardından mCD8-GFP raportör hücre zarı lokalize ve böylece ekspresyon, Şekil GFP ifade OR49a...

Burada, koku alma reseptör nöronlarının (ORN) çeşitlenmesinde rol oynayan moleküler mekanizmaları daha iyi anlamamızı sağlayan Drosophila antenlerinin tüm montaj immün boyama sürecini açıklıyoruz.

In Koku Reseptör Nöronlar Tüm Dağı ile immün<em&gt; Drosophila</em&gt; Anten

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, tüm anten boyama yöntemiyle koku reseptör nöronlarını görselleştirmektir. Öncelikle, başını dikey olarak kesmek için sineği anestezi edin. Ardından, diseke edilmiş sinek başını bir apple plate üzerine yerleştirin.Ardından, immünohistokimya gerçekleştirmek amacıyla antenin üçüncü segmentini kesin ve cam tabanlı kültür kabına yerleştirin. Antenleri bir lam üzerine monte ettikten sonra, konfokal mikroskopi ile farklı koku reseptörü nöron tiplerini görselleştirebiliriz. Koku sistemi üzerinde çalışmaktayız.Koku sistemi, çok çeşitli farklı molekülleri ayırt etmek için kullanılır. Bu sistem içerisinde bulunan geniş yelpazedeki farklı koku nöronları, hedef reseptörlerden beyindeki nöronlara bilginin hassas ve koordineli bir şekilde iletilmesini sağlar. Bugün, bu koku reseptör nöronlarının çeşitliliğini tespit etmek için kullanılan bütün mount anten boyamasını anlatacağız.Başarılı bir bütün bağlama (whole mount) ve anten boyaması sağlamak için, protokole başlamadan hemen önce taze bir fiksatif serisi hazırlamak kritik önem taşır. Sineği anesteziye alın ve ardından gövdesini pensle tutarak sinek başını dikey olarak kesin. Şimdi, diseke edilen anteni dikkatlice

whole-mount-immunolabeling-olfactory-receptor-neurons-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz yaşam antennal lobda koku uyarılmış kalsiyum yanıtları ölçmek ve analiz etmek için kurulmuş bir tekniği...

Koku-uyarılmış Cevaplarının Kalsiyum Görüntüleme Drosophila Antennal Lob

Nöron dendritler gibi karmaşık hücre şekilleri, geliştirme sırasında nasıl elde edilir anlamak için, bu, doğru tahlil mikrotübül organizasyonu edebilmek için önemlidir. Burada dendritik arborization duyusal nöron dendritler mikrotübül organizasyonu, trakea, kas incelemek için sağlam bir immünohistolojik bir etiketleme yöntemi açıklamak ve...

Immünohistolojik Duyusal Nöron Dendritler Mikrotübüller Etiketleme, trakea ve kaslar Drosophila Larva Vücut Duvar

Bu video, mutant Drosophila beyinlerinin mantar cisimciklerindeki fenotipik kusurları görselleştirmek için ayrıntılı bir immün boyama protokolünü göstermektedir. Protokol, mantar gövdesinin uygun morfolojik ve fonksiyonel gelişimini kolaylaştıran aksonal rehberlikte yer alan bir protein olan Fas2'ye karşı antikorların kullanılmasını içerir.

Drosophila Beyinlerindeki Mantar Vücut Nöronlarının İmmün Boyama ile Görüntülenmesi

Biz, merkezi sinir sistemi içinde tek nöron etiketlenmesine yönelik bir yöntem (CNS)...

Merkez Sinir Sistemi Tek Hücreler Etiketleme<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Koku alma duyusal nöronlarının kirpikleri, sinyal iletim kaskadının proteinlerini içerir, ancak kriyoseksiyonlarda dağılımlarının ayrıntılı bir uzamsal analizi zordur. Burada, siliyer proteinlerin tüm montaj etiketlemesi ve yüz görselleştirmesi için optimize edilmiş bir yaklaşımı açıklıyoruz.

Fareler Ana Koku Sistemde Cilia Whole Dağı Etiketleme

Bu protokolün genel amacı, uzun zincirli kütiküler feromonlara tepki gösteren Drosophila olfaktör reseptör nöronlarından tek duyarlılık kaydı için düşük uçuculukta odorantları nasıl göstereceğini göstermektir.

Elektrofizyolojik Kayıt<em&gt; Drosophila</em&gt; Düşük Volatilite Kokularına Karşı Trikoid Sensilla

Bu iletişim kuralı diseksiyon ve yetişkin Drosophila melanogaster immunostaining açıklar beyin dokuları. Özellikle, bu iletişim kuralı doğru nöronal gelişim birçok yönlerini temel genel prensipler ortaya çıkarmak için kullanılabilecek örnek nöronal alt kümeleri olarak Drosophila mantar beden ve photoreceptor nöronlar kullanımı vurgulamaktadır.

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Hücre türleri farklı morfoloji görüntülemek ve a değişiklik-in onların komşuları ile etkileşim kurmak. Bu iletişim kuralı tek hücre morfolojisi açıklamaya ve hücre-hücre etkileşim köklü Gal4/UAS ifade sistemi kullanılarak incelemek için açıklar.

Yüksek çözünürlüklü tek hücre türleri morfoloji ve Glia Drosophila içinde etkileşimlerin hücre çalışmaya uygulama çok renkli FlpOut tekniği

Burada, sahne ve koku doku Drosophila türlerden geliştirme incelemek için bir protokol mevcut. Disseke doku daha sonra kantitatif RT-PCR (Ters transkripsiyon-polimeraz zincir reaksiyonu) veya (RNAseq), sıralama RNA gibi moleküler analizleri için in vivo analizleri immünhistokimya veya in situ gibi yanı sıra kullanılabilir hibridizasyon.

Periferik koku doku için geliştirme hazırlanıyor moleküler ve immunohistokimyasal Drosophila analizde

Bu protokol, koku alma devresi düzeneğinin incelenmesi için diseksiyon prosedürünü, kültür durumunu ve anten-beyin eksplant sisteminin canlı görüntülenmesini açıklar.

Drosophila'da Koku Alma Devresi Düzeneğinin Hızlandırılmış Görüntüleme Çalışmaları için Bir Explant Sistemi

Bu makale, reaktiflerle ekonomik olan ve az sayıda hayali disklerin işlenmesini kolaylaştıran verimli bir imaginal disk diseksiyon ve antikor boyama protokolünü tanımlar.

Drosophila melanogaster'den Göz-Antenli ve Kanat Hayali Disklerinin Küçük Ölçekli Diseksiyonu ve Antikor Boyama

Keşfedin Drosophila antenlerinde koku reseptör nöronlarını görüntülemek için tam dağı immün boyama tekniğini. Bu yöntem, nöron çeşitlenmesinin moleküler mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

In Koku Reseptör Nöronlar Tüm Dağı ile immün

Daha fazla video keşfet