Name: Ligatable Floresan Sondalar Deneysel İnme Hücre Ölümü Fagositik Gümrükleme Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Keşfedin, deneysel inme sonrası hücre ölümü fagositik gümrükleme değerlendirmesi için ligatable floresan sondalar kullanarak aktif fagositleri seçici olarak etiketleme yöntemini. Bu teknik, iskemik beyin dokusunda ölü hücre temizliğinin verimliliğini anlamanıza yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu araştırma Nörolojik Bozukluklar Ulusal Enstitüsü hibe R01NS062842 ve Sağlık (VVD) İnme, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından ve Ulusal Nörolojik Bozukluklar Enstitüsü ve ARRA aracılığıyla Sağlık İnme, National Institutes (VVD) ve R21 hibe R21 NS064403 tarafından desteklenmiştir Biyomedikal Görüntüleme ve Biyomühendislik EB006301 Ulusal Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri (VVD).

Yöntem, formaldehit sabitlenmiş, parafine gömülü doku bölümleri için uygundur. Bu teknik, sıçanlarda deneysel olarak inme burada uygulanması gösterilmiştir. Tyramide Sinyal Amplifikasyon (TSA) sistemi için 1. Hazırlanması Bileşenleri TSA tabanlı geliştirme Bu reaksiyon için hazırlanması, etiketleme son aşamasında kullanılır, ancak en fazla 1 saat alabilir. Bu nedenle etiketleme başlamadan önce TSA reaktifler için uygundur. <ol><li> Fluorofor tiramid stok solüsyonu olun. TSA etiketleme kiti ile tek tek vialler içinde verilen flüorofor tiramid reaktifi kullanarak. Tiramid reaktifi şişeye 300 ul DMSO ilave edin. 4 ° C&#39;de depolandığında Florofor tiramid stok çözeltisi en az 3 ay süreyle stabildir </li><li> TNT içeren yıkama tamponu edin: 0.1 M Tris-HCI, pH 7.5; 0,15 M NaCl; % 0.05 Tween-20. Gerektiğinde% 0.3 Triton X-100,% 0.05 Tween-20 ile ikame edilebilir ise. Alternatively PBS yıkama tampon olarak kullanılabilmektedir. </li><li> Yap TNB içeren bloke edici tampon: 0.1 M Tris-HCI, pH 7.5; 0,15 M NaCl; % 0.5 Engelleme Reaktif (kit ile birlikte). Karıştırılırken tamamen bloke reaktif çözmek için, yavaş yavaş arabelleğe küçük artışlarla ekleyin. Yavaş yavaş sürekli karıştırma ile 55 ° C&#39;ye kadar bu çözüm ısıtın. Bu 30-60 dakika sürebilir. Çözelti sütlü görünecektir. Kullanmadan önce oda sıcaklığına getirin. Uzun süreli kullanım için -20 ° C&#39;de kısım ve mağaza. </li></ol> Bölüm 2. Hazırlanması Formalin sabit dokulardan kesip monte 5 mikron kalınlığında kesitler ile slaytlar kullanın. <ol><li> 15 dakika boyunca, ksilen ile tedavi bölümleri. </li><li> Aşağıdaki gibi bölümler Rehydrate: 5 dakika her biri için% 96 EtOH 2x emmek; 5 dakika boyunca% 80 EtOH emmek; 5 dakika her biri için, su 2X ile yıkayın. </li><li> PBS içinde 50 ug / ml proteinaz K stok çözelti seyreltilerek Proteinase K çalışma çözeltisi olun. </li><li> Proteinaz EkleK bölümlere çözüm çalışıyor. 23 ° C&#39;de 15 dakika inkübe Çözeltinin hacmi ve sindirim zaman bölümleri ve doku tiplerinin boyutuna bağlı olarak ayarlanması gerekebilir. Küçük bir (çapı 5 mm altında) bir bölüm için proteinaz çözeltisi 50 ul yeterli olacaktır. Ortalama boyutu için, (~ 10 mm çapında) bölümünde Proteinaz K çözeltisi 100 ul ilave edin. Çok büyük kesitler için çözeltinin hacmi kadar ölçeklendirilebilir. Tüm durumlarda sinyal kaybını tamamlamak için yol ve doku morfolojisi yok bölümleri Overdigestion önlemek için özen. Kuluçka süresi 25 dakika aşarsa, bu sık sık olur. </li><li> Her biri 5 dakika için damıtılmış su 2x bölümleri yıkayın. Bölümler su içinde iken aktif prob ihtiva eden etiketleme karışım hazırlayın. </li></ol> 3.. VACC TOPO dayalı Boyama <ol><li> Aşağıdaki birleştirerek aktif prob çözeltisi hazırlayın: Su - 11.75 ul 1 M Tris-HCI, pH 7,4-1,25 μl 12-baz çıkıntı intihar oligonükleotidin 100 pmol - 1 ul Adaptör oligonükleotidin 100 pmol - 1 ul 50 pmol VACC TOPO - 10 ul </li><li> Pipetleme ile hafifçe karıştırın. Prob aktivasyonu için izin vermek için 15 dakika boyunca oda sıcaklığında (23 ° C) inkübe edin. </li><li> Yıkama kavanoz bölümleri alın ve kalan suyu aspire. Daha sonra adım 3.1 (~ 10 x 10 mm bölüm başına 25 ul) &#39;de hazırlanan aktif prob çözeltisi uygulanır. </li><li> Bölümleri lamel ve 23 ° C&#39;de 15 dakika boyunca inkübe Dip lamelleri yavaşça çıkarmak için su içinde kayar. 5 dakika her biri için su 3x yıkayın. </li></ol> 4. TSA Sinyal Geliştirme <ol><li> TNB daha önce hazırlanan ve oda sıcaklığında (23 ° C) de 30 dakika boyunca nemlendirilmiş bir odada kuluçkaya bırakın Blokaj tamponu ile doku bölümleri örtün. </li><li> TNB bloke edici tampon içinde streptavidin-yaban turpu peroksidaz (SA-HRP) bir 1:100 seyreltme hazırlayın. Aspire TNBSA-HRP solüsyonu tampon ve uygulamak engelleme. Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca SA-HRP ile slaytlar inkübe edin. Doku bölümü, Bölüm başına genellikle 100 ul kapsayacak şekilde reaktif ses kullanın. </li><li> Yıkama, oda sıcaklığında, TNT, yıkama tamponu (veya PBS) içinde 5 dakika boyunca 3 kez, her kayar. </li><li> Kiti 1x Abartma Seyrelticisi içinde fluoroforun tiramid stokunun 1:50 seyreltme hazırlayın. Her bir slayt üzerine flüoroforun tiramid çalışma çözeltisi pipetle. Tamamen doku bölümü, Bölüm başına genellikle 100 ul karşılamak için yeterli çalışma solüsyonu kullanın. Hemen her etiketleme önce fluoroforun tiramid çalışma çözüm olun. Çözelti, tekrar, yani etiketleme sonra da herhangi bir kullanılmamış bir bölümünü atmak mümkün değildir. </li><li> 3-10 dakika boyunca oda sıcaklığında kuluçkaya bırakın. Yapıların birinci uçları görülebileceği kadar, bir mikroskop altında floresan artışı izler. Çabuk adımı yıkamak geçin. </li><li> Yıkama odası t TNT yıkama tamponu (veya PBS) içinde 5 dakika boyunca 3 kez her slaytlarçalkalanarak emperature. </li><li> DAPI ve kapak ile solmaya solüsyonu ekleyin. Flöresanlı bir mikroskop altında dikkate alınmalıdır. DAPI ve FITC floresan bir bant geçiren filtre seti kullanmak görselleştirmek için: FITC uyarma D490/40, emisyon 520/10; DAPI uyarma D360/40, emisyon 460/20, veya benzer. </li></ol>

<ol><li>Jin, R., Yang, G., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mechanisms+in+ischemic+stroke%3A+role+of+inflammatory+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mechanisms in ischemic stroke: role of inflammatory cells.</a> J Leukoc Biol. 87, 779-789 (2010).</li>
<li>Schilling, M., Besselmann, M., Müller, M., Strecker, J. K., Ringelstein, E. B., Kiefer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominant+phagocytic+activity+of+resident+microglia+over+hematogenous+macrophages+following+transient+focal+cerebral+ischemia%3A+an+investigation+using+green+fluorescent+protein+transgenic+bone+marrow+chimeric+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Predominant phagocytic activity of resident microglia over hematogenous macrophages following transient focal cerebral ischemia: an investigation using green fluorescent protein transgenic bone marrow chimeric mice.</a> Exp Neurol. 196 (2), 290-297 (2005).</li>
<li>Faustino, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+cells+contribute+to+endogenous+brain+defenses+after+acute+neonatal+focal+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial cells contribute to endogenous brain defenses after acute neonatal focal stroke.</a> J Neurosci. 31 (36), 12992-13001 (2011).</li>
<li>Thored, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+accumulation+of+microglia+with+proneurogenic+phenotype+concomitant+with+persistent+neurogenesis+in+adult+subventricular+zone+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Long term accumulation of microglia with proneurogenic phenotype concomitant with persistent neurogenesis in adult subventricular zone after stroke.</a> Glia. 57 (8), 835-849 (2009).</li>
<li>Sierra, A., Abiega, O., Shahraz, A., Neumann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Janus-faced+microglia%3A+beneficial+and+detrimental+consequences+of+microglial+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Janus-faced microglia: beneficial and detrimental consequences of microglial phagocytosis.</a> Front Cell Neurosci. 7 (6), (2013).</li>
<li>Samejima, K., Earnshaw, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trashing+the+genome%3A+Role+of+nucleases+during+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Trashing the genome: Role of nucleases during apoptosis.</a> Nat.Rev. Mol. Cell Biol. 6 (9), 677-688 (2005).</li>
<li>Minchew, C. L., Didenko, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+probes+detecting+the+phagocytic+phase+of+apoptosis%3A+enzyme-substrate+complexes+of+topoisomerase+and+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Fluorescent probes detecting the phagocytic phase of apoptosis: enzyme-substrate complexes of topoisomerase and DNA.</a> Molecules. 16 (6), 4599-4614 (2011).</li>
<li>Shuman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+classes+of+DNA+end-joining+reactions+catalyzed+by+vaccinia+topoisomerase%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Two classes of DNA end-joining reactions catalyzed by vaccinia topoisomerase.</a> Sci. Rep. 267, 16755-16758 (1992).</li>
<li>TSA Fluorescence Systems. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://www.perkinelmer.com/CMSResources/Images/44-73609man_TSAFluorescenceSystems.pdf">http://www.perkinelmer.com/CMSResources/Images/44-73609man_TSAFluorescenceSystems.pdf</a> Forthcoming.</li>
<li>Barcia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROCK%2FCdc42-mediated+microglial+motility+and+gliapse+formation+lead+to+phagocytosis+of+degenerating+dopaminergic+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep.+%22%5BJournal%5D)">ROCK/Cdc42-mediated microglial motility and gliapse formation lead to phagocytosis of degenerating dopaminergic neurons in vivo.</a> Sci. Rep. . 2, 809(2012).</li>
<li>Didenko, V. V., Ngo, H., Minchew, C. L., Boudreaux, D. J., Widmayer, M. A., Baskin, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+irreparable+ischemic+damage+in+brain+by+selective+labeling+of+double-strand+blunt-ended+DNA+breaks%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Visualization of irreparable ischemic damage in brain by selective labeling of double-strand blunt-ended DNA breaks.</a> Mol. Med. 8, 818-823 (2002).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu videoda fokal beyin iskemi hangi berrak hücre ölümü aktif fagositler etiketlemek için nasıl, doku kesiti biçiminde göstermektedir. Sunulan tekniği özellikle yuttu ve aktif hücresel cesetleri sindirimi yalnızca bu atık yönetimi hücreleri etiketler ilk yaklaşımdır. Bu, bu yeteneğe sahip değilsiniz fagositik hücrelerin, etiketlenmesi için varolan diğer yöntemlere göre avantajlı kılar. , Çift kollu bir sardı çekirdeklerin sindirim sırasında atık yönetim hücre fagolizozomları üretilen sona 5&#...

İskemik inme etkilenen beyin dokusunda köklü değişiklikleri neden olur. Bu mikroglial kaynaklı yerleşik fagositik hücrelerin hızlı aktivasyonuna yol açar ki, büyük hücre ölümü başlatır. Aynı zamanda, nötrofiller, makrofajlar, dendritik ve mast hücreleri dahil olmak üzere, 1,2 kandan alınan profesyonel fagositlerin çeşitli iskemik beyin infiltrasyonu yola çıkıyor. Hala iskemik yaralanma bu yanıtı olumlu ya da olumsuz bir rolü olup olmadığını tartışmalıdır. Ölü hücreleri temizler ve enflamasyon bastırır felç nedeniyle aşağıdaki fagositoz yararlı olabilir, ancak, aynı zamanda, nöronun hayatta kalışını etkileyen ve doku hasarı 1-5 arttıran toksik reaktif oksijen türleri oluşturur. Fagositik hücrelerin çeşitli iskemik beyin sızmak da, tüm bunların hücre cesetlerini içine çeken ve rejeneratif süreçleri 1-3 önünü temizleyerek atık yönetimine katılmak. Bu crinme hücre ölümünün fagositik açıklık gerçekleştirmek atık yönetim hücrelerinin seçici tanımlanması için bir gereklilik eates. Gibi aktif atık yönetimi hücreleri görüntüleme, onlar sardı hücre cesetleri aşağılamak ne kadar verimli soruyu cevaplamak için de önemlidir. Kendi kendine bağışıklık ve patolojik nükleer malzeme 6&#39;nın serbest önler, çünkü fagositozu ölen hücrenin DNA etkin ve tam bozulması gereklidir. Burada aktif fagositik hücrelerin belirteçleri olarak spesifik DNA sonlarını kullanmak yeni araştırmalar mevcut. Bu imza sonları sadece işlevsel bir atık yönetimi hücrelerin içinde yuttu çekirdeklerinin parçalanması sırasında üretilir. Bu nedenle sondalar seçici yutmak sadece bu fagositler etiket ve aktif hücresel cesetleri sindirmek. Ayrıca yutulma sonrası yoğunluğu ve DNA parçalanması tamamlanmasını gözlem izin verir. Problar yoğunluğu ve effici değerlendirmeler de faydalıdırfagositik açıklık ency. Yeni sondalar olmayan bir protein bazlı işaretleyici kullanan ve bu nedenle geniş bir iskemik hasar hücre morfolojisi bozacak ya da özellikle çekirdek iskemik bölge içinde, protein-bazlı belirteçler tüketebilir inme, çalışmalarda özellikle avantajlı olabilir. Tekniğin ilkesi, Şekil 1 &#39;de sunulmuştur. Şekil enzim vaccinia topoizomeraz (VACC TOPO) ile lige saç tokası şeklinde oligonükleotit probları gösterir 5&#39;OH DNA DNA sindirim 7 boyunca lızozomal DNase II tarafından üretilen sona erer.

<table><tbody><tr><td>Ksilen</td><td>JT Baker</td><td>9490-22</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>Roche</td><td>3115879001</td><td></td></tr><tr><td>PBS Tampon</td><td>İnvitrojen</td><td>AM9624</td><td></td></tr><tr><td>Vaccinia Topoizomeraz</td><td>I Canlı Teknolojiler</td><td></td><td>5 pmol/&mu; l stok</td></tr><tr><td>12 Baz Çıkıntı İntihar Oligonükleotid</td><td>IDT DNA</td><td></td><td>5'-AAG GGA CCT GC<güçlü > B< / güçlü> GCA GGT CCC TTG ATA CGA TTC TA -3 '; B &ndash; Biyotin-dT; 100 pmol/&mu; l ddH2O&nbsp; stok; &nbsp;</td></tr><tr><td>Adaptör Oligonükleotid</td><td>IDT DNA</td><td></td><td>5'-TAG AAT CGT ATC-3'; 100 pmol/&mu; l ddH 2 O</td></tr><tr><td>1 M Tris-HCl, PH 7.4</td><td>Lonza</td><td>51237</td><td></td></tr><tr><td>TSA, Floresein Sistemi ve nbsp;</td><td>PerkinElmer&nbsp;</td><td></td><td></td>NEL701A001KT</tr><tr><td>1 M NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ara-20&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P9416-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield, DAPI</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td></td> ile H-1200 <td></td></tr><tr><td>Lameller</td> 22 x 22 mm veya 22 x 40 mm cam veya plastik lameller.<td></td><td></td><td> Reaksiyon sırasında plastik lameller tercih edilir, çünkü bölümden çıkarılması daha kolaydır.</td></tr><tr><td>Sıçan Beyin Bölümleri</td><td></td><td></td>: <td>Didenko'da tarif edildiği gibi iskemik inmenin üremesinden 48 saat sonra alınan sıçan beyni et al11. 5-6 &mu; Paraformaldehit ile sabitlenmiş, parafine gömülü doku bloklarından kesilmiş M kalınlığında kesitler. Şarjlı ve önceden temizlenmiş slaytlar kullanın.</td></tr><tr><td>Ters Mikroskop</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dijital Video kamera ve yazılım</td><td>Micromax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yazılım</td><td>Metamorf</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ligatable floresan sondalar deneysel İnme hücre Ölümü fagositik gümrükleme değerlendirilmesi

Assessing Phagocytic Clearance of Cell Death in Experimental Stroke by Ligatable Fluorescent Probes

Biz fokal beyin iskemi fagositik açıklık görselleştirme için yeni bir histokimyasal yaklaşım açıklar. Yaklaşım herhangi bir hücresel soy atık yönetimi fagositlerce inme ölü hücrelerin ortadan kaldırılması çalışmasına izin verir. Fagositoz yeteneğine sahip, farklı kökenlerden çok sayıda hücreleri iskemik beyinde mevcut olmasına rağmen, bunların sadece bir kısmı aktif olarak yutan ve hücre cesetleri sindirmek. Seçici görselleştirme, ölçme ve böyle aktif fagositik atık yönetiminin analizi iskemi beyin yanıtı değerlendirirken yardımcı olur. Bu daha sonraki işlemleri için rejeneratif yol açar gibi etkili hücre ölümü açıklık, iskemik yaralanma beyin kurtarma için önemlidir. Cesetleri temizlemek için arıza olmayan bozulmuş DNA ve protein neden olduğu zehirli bir reaksiyona neden olur. Tarif edilen işlem, seçici yutulma sırasında tüm fagositler üretilen karakteristik DNA sonları için bir viral topoizomeraz ile lige floresan probları kullanırve hücrelerin sindirim geri dönüşümsüz iskemi zarar. Yöntem, iskemik yaralanma beyin reaksiyon soruşturma için yeni bir araçtır.

Aktif atık yönetim fagositler etiketleme için tekniğin temel ilkesi, Şekil 1 &#39;de sunulmuştur. Gösteren şematik üç adımda tespit ilerler ki. İlk adım, sonda ile aktivasyonunu (Şekil 1A) kapsamaktadır; ikinci adımda aktive prob doku bölümleri (Şekil 1C) belirli DNA sonları bağlanır; Üçüncü adım floresan sinyal amplifikasyon (Şekil 1D) içerir. Aşağıdaki gibi daha ayrıntılı bir açıklama, algılama gider: 1.. Probe etki...

Biz aktif fagositik hücrelerin yerinde etiketleme seçici için yeni bir floresan tekniği sunmak, hangi berrak inme hücre cesetlerin kapalı. İskemik beyin içinde mevcut olan fagositoz sadece küçük bir kısmı, hücre ölümü açıklık katılmak için bir yaklaşım, iskemi, beyin reaksiyon değerlendirilmesi için önemlidir.

Ligatable Floresan Sondalar Deneysel İnme Hücre Ölümü Fagositik Gümrükleme Değerlendirilmesi

We describe a new histochemical approach for visualization of phagocytic clearance in focal brain ischemia. The approach permits the study of elimination ...

Bu prosedürün genel amacı, inmede hücre kalıntılarını temizleyen aktif fagositik hücreleri seçici olarak işaretlemektir. Bu işlem, öncelikle Tite tabanlı sinyal amplifikasyon reaksiyonu için bileşenlerin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise kesitlerin hazırlanmasıdır.Ardından, vaccinia enzimi, topoizomeraz ve etkileşimli floresan problar kullanılarak işaretleme reaksiyonu gerçekleştirilir. Son adım, IDE tabanlı floresan sinyal artırımıdır. Nihayetinde, fokal beyin iskemisinin doku kesitlerinde ölü hücrelerin fagositik temizlenmesini değerlendirmek için floresan mikroskobu kullanılır.Ölü hücrelerin fagositler tarafından temizlenmesi, iskemi sonrası beyin iyileşmesinde önemli bir rol oynar. Sunulan yöntem, yalnızca ölü hücreleri aktif olarak temizleyen fagosit boyutlarını etiketleyerek bu sürecin verimliliğini belirler. Bu yöntem iskemik beyin hakkında bilgi sağlasa da, diğer organ ve dokulardaki iskemik hasarları incelemek için de kullanılabilir.Ölü hücrelerin FA asidik temizliğinin önemli olduğu durumlarda, IDE sinyal amplifikasyonu veya TSA adımı etiketlemenin son aşamasında gerçekleşse de, bu reaksiyon için hazırlık yapmak bir saatten fazla sürebilir. Bu nedenle, TSA

assessing-phagocytic-clearance-cell-death-experimental-stroke

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, konfokal mikroskopi kullanarak apoptotik hücrelerin klirensini incelemek için efferositoz testini gösteriyoruz. Efferositoz, apoptotik hücrelerin fagositler tarafından yutulduğu ve efferozom adı verilen veziküller içinde parçalandığı çok aşamalı bir süreçtir. Bu protokol, tek tek apoptotik hücrelerin içselleştirilmiş ve içselleştirilmemiş kısımlarını görselleştirmek ve efferositozu ölçmek için bir yöntem sağlar.

Sabit Hücreli Efferositoz Deneyi: Floresan Mikroskobu Kullanarak Apoptotik Hücrelerin Makrofajlar Tarafından Efferositik Alımını İncelemek İçin Bir Yöntem

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Canlı Makrofagların içinde Phagolysosome Biogenesis&#39;den Çalışması

Mikroglia hücre dışı bir ortamda malzemenin fagosite veya yutmak için yüksek bir kapasitesi olan merkezi sinir sistemi (CNS) içinde yerleşik bağışıklık hücreleri bulunmaktadır. Burada, sinaptik bileşenlerin mikroglia aracılı yutulmasına görselleştirme ve ölçmek için, genel olarak, uygun ve güvenilir olup, kantitatif analiz tarif edilmektedir.

Bir yutulma Deneyi: CNS Fagositler ve nöronlar arasındaki etkileşimi değerlendirmek için bir protokol

doku homeostazında ve yetersiz fagositik fonksiyonunun korunması patolojisinde dahil olmuştur için mikrogliyal fagositoz kritiktir. Ancak, in vivo mikroglia fonksiyonunu değerlendirmede teknik olarak zordur. Biz tam izleme ve fizyolojik bir ortamda mikroglia fagositik potansiyelini ölçülmesi için basit ama güçlü bir teknik geliştirdiler.

Retina Mikroglial Fagositik Fonksiyonu değerlendirilmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt; A Akış Sitometri bazlı analiz kullamlarak

Biz birincil fare kemik iliği türevi makrofajlar fluorescently etiketli miyelin enkaz ve hücre içi lipid damlacık boyama kullanarak fagositik kapasitesini değerlendirmek için yöntemler mevcut.

Vitro Fagositoz miyelin enkaz kemik iliği türevi makrofajlar tarafından

Efferocytosis, apoptotik hücreler, fagositik kaldırılması homeostazı korumak için gerekli ve reseptörleri ve tanıma, engulfment ve apoptotik hücreler içselleştirilmesi için izin sinyal yollar tarafından yönetilir. Burada, biz efferocytosis miktar ve efferocytic sinyal yolları etkinlik için bir floresans mikroskobu Protokolü mevcut.

Efferocytosis tek hücreli floresans mikroskobu tarafından miktar

Nörodejeneratif hastalıklar düzensiz mikroglia fonksiyonları ile ilişkilidir. Bu makalede, iPSC-makrofajlar tarafından nöroblastom hücrelerinin fagositozunun in vitro bir tahlili özetlenen bir makale verilmiştir. Nicel mikroskopi okumaları hem canlı hücre zaman atlamalı görüntüleme hem de sabit hücreli yüksek içerikli görüntüleme için açıklanmıştır.

İPSC-Makrofajlar tarafından Ölü Nöroblastom Hücrelerinin Fagositozu için İn vitro Nicel Görüntüleme Tahlili

Sıçan in vivo modelleri, iskemik inme için patolojik mekanizmaları ve terapötik hedefleri araştırmak için vazgeçilmez araçlardır. Bu çalışma, sıçanlarda orta serebral arter tıkanıklığını (MCAO) takiben enfarktüslü beyin dilimlerinde immünofloresan boyama gerçekleştirmeyi açıklayacaktır.

İskemik İnmenin Sıçan Modelinde İmmünofloresan ile Hücre Ölümü Sinyalinin Değerlendirilmesi

Burada, mini inme modelinde akış sitometrik analizi kullanarak iskemik inme sonrası immün hücre fonksiyonunu değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, nöroimmün etkileşimlerin ayrıntılı olarak incelenmesini sağlar ve diğer nörodejeneratif hastalıkları incelemek için uyarlanabilir ve inme patolojisindeki immün yanıtları anlamamızı geliştirir.

Mini İnme Murin Modelinde Nöroimmün Etkileşimlerin İzolasyonu ve Flow Sitometrik Değerlendirmesi

İpliksi Orta serebral arter oklüzyonu farelerde iskemik inme eğitimi için ortak bir model.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Keşfedin, deneysel inme sonrası hücre ölümü fagositik gümrükleme değerlendirmesi için ligatable floresan sondalar kullanarak aktif fagositleri seçici olarak etiketleme yöntemini. Bu teknik, iskemik beyin dokusunda ölü hücre temizliğinin verimliliğini anlamanıza yardımcı olur.

Ligatable Floresan Sondalar Deneysel İnme Hücre Ölümü Fagositik Gümrükleme Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet