Miyelin Oligodendrosit Glikoprotein (MOG 35-55) C57BL / 6 Farelerde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit (EAE) Bağlı
April 15th, 2014
Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), çoklu skleroz kurulmuş bir hayvan modelidir. C57BL / 6 fareleri, merkezi sinir sistemi otoreaktif bağışıklık hücreleri tarafından neden olduğu artan gevşek felce neden, miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG) peptit 35-55 (MOG 35-55) ile immünize edilir. Hastalığın başlama ve izleme için protokoller tartışılacaktır.
Bu prosedürün genel amacı, multipl sklerozun klinik ve patofizyolojik özelliklerini taklit eden deneysel bir otoimmün ensefalomiyelit hayvan modelini indüklemektir. Bu, önce antijen ve adjuvan ve boğmaca toksininin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, antijen ve CFA emülsiyonunun deri altına ve boğmaca toksininin intraperitoneal olarak enjekte edilmesidir.
İki gün sonra, m tekrar boğmaca toksini intraperitoneal enjekte edilir. Bunu takiben hayvanlar tartılır ve klinik skorları günlük olarak değerlendirilir. Sonuç olarak, deneysel otoimmün ve ensefalomiyelitin klinik belirtileri genellikle aşılamadan sonraki dokuzuncu ila 14. günler arasında gözlenebilir.
Örneğin, rizon veya EIE'nin farklı varyantları gibi toksik ajanları içeren mevcut protokollerin bu tekniğinin ana avantajı, hepsinin MS'in adaptif bağışıklık sisteminin katılımı gibi altta yatan patolojik özelliklerde büyük farklılıklar gösteren özelliklerini taklit etmeleridir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, bağışıklamanın zor ele alınması nedeniyle mücadele edeceklerdir. Hayvanlar için stresi azaltmak ve gelişiminden sonra optimal bağışıklamayı sağlamak kesinlikle gereklidir.
Bu model, nöroimmünoloji alanındaki araştırmacıların nakavt hayvanları karakterize etmelerinin yolunu açtı. Yeni moleküler ilaç hedeflerini belirlemek veya umut verici ilaç adaylarını test etmek için: Peptit çözeltisini hazırlamak için, liyofilize MOG 35 ila 55 peptidi çift damıtılmış suda mililitre başına iki miligramlık bir nihai konsantrasyona seyrelterek başlayın. Fare başına bu çözeltiden 100 mikrolitre gereklidir ve hazırlık sırasında bir miktar hacim kaybolur.
Bu nedenle, gereken çözelti miktarının 1,5 ila iki katını yapın. Peptit çözeltisini eksi 20 santigrat derecede saklayın, böylece tam fronları adjuvan hale getirin veya CFA, 100 miligram kurutulmuş mikobakteriyi tüberküloza yerleştirin. H 37 RA'yı bir havan haline getirin ve ince bir toz elde etmek için havan tokmağı ile öğütün.
Daha sonra, mililitre başına 10 miligramlık bir CFA çorap çözeltisi elde etmek için 10 mililitre eksik yaprak adjuvanı ekleyin. CFA stoğu, aşılama gününde ihtiyaç duyulana kadar dört santigrat derecede saklanabilir. CFA stok çözeltisini, partikül materyali yeniden süspanse etmek ve buz üzerine yerleştirmek için iyice karıştırılarak mililitre başına iki miligramlık bir nihai konsantrasyona kadar eksik fres adjuvanı ile seyreltin.
MOG 35 ila 55 peptit çözeltisinin bir alikotunun buzunu çözdükten sonra. Buzun üzerine yerleştirin. CFA'nın bir mililitresini çekmek için iki mililitrelik bir şırınga ve 27 gauge kanül kullanın.
Ardından, MOG 35 ila 55 çözeltisinin bir mililitresini çekmek için ikinci bir iki mililitrelik şırınga ve 20 gauge bir kanül kullanın. Hava kabarcıklarını çıkarın ve her iki şırıngayı da üç bir vana ile bağlayın. Üç vana neredeyse kapalıyken, emülsiyonu bir şırıngadan diğerine itin ve en az 10 dakika boyunca iyice karıştırın.
Bittiğinde, çözelti beyaz, sert ve viskoz olmalı ve faz ayrımı yapılmamalıdır. Şimdi emülsiyonun en az 30 dakika veya aşılamadan birkaç gün öncesine kadar oturmasına izin verin, Hala emülsifiye olduğundan emin olmak için kontrol edin. Aşılama gününde, çözeltiyi iki şırıngadan birine çekin ve 27 gauge kanül bağlayın.
50 mikrolitre çift damıtılmış suda 50 mikrogram boğmaca toksinini sulandırın. Mililitre başına 100 mikrogramlık bir stok çözeltisi için, stok çözeltisini ihtiyaç duyulana kadar dört santigrat derecede saklayın. Bağışıklama gününde, boğmaca stok çözeltisini bir ila 50 oranında seyreltin.
PBS ile, 400 nanogram boğmaca toksini içeren enjeksiyon için 200 mikrolitre seyreltilmiş boğmaca çözeltisi içeren bir şırınga hazırlayın ve iğne göbeğinin ölü alanı için ek 100 mikrolitre çekin. Bir fareyi izo flor ile uyuşturduktan sonra, bir ayak parmağı tutamağı kullanarak anestezi seviyesini değerlendirin. 100 mikrolitre antijen CFA emülsiyonunu deri altından her bir arka kanattaki iki farklı bölgeye enjekte edin.
Enjeksiyondan sonra, cilt altında soğanlı bir kitle oluşmalı ve bu deney boyunca devam etmelidir. Daha sonra, 200 mikrolitre boğmaca toksini içeren hazırlanan şırıngayı intraperitoneal enjekte edin. Tek tek farelerin günlük değerlendirme için kolayca tanımlanabildiğinden emin olun.
Örneğin, kuyruk tabanındaki renk işaretleri ile.
Genel Bakış
Bu makale, multipl skleroz modeli olan C57BL/6 farelerinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin (EAE) indüksiyonunu ele almaktadır. Prosedür, miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG) peptid 35-55 ile immünizasyonu ve bunun sonucunda paralizin klinik belirtilerine yol açmaktadır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nöroimmünoloji
- Otoimmün hastalıklar
- Hastalıkların hayvan modelleri
Arka Plan
- Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), multipl sklerozi taklit eder.
- C57BL/6 fareler bu model için yaygın olarak kullanılmaktadır.
- İmmünizasyon, merkezi sinir sistemini etkileyen bir otoimmün yanıtı tetikler.
- EAE'nin anlaşılması, multipl skleroz için potansiyel terapötik hedeflerin belirlenmesine yardımcı olur.
Çalışmanın Amacı
- EAE için güvenilir bir hayvan modeli kurmak.
- Multipl sklerozun klinik ve patofizyolojik özelliklerini değerlendirmek.
- Nöroimmünoloji mekanizmaları ve ilaç testleri üzerinde araştırmayı kolaylaştırmak.
Kullanılan Yöntemler
- MOG 35-55 peptidi ve tam Freund'un adjuvanı (CFA) hazırlanması.
- Antijen ve CFA emülsiyonu ile deri altı enjeksiyonu.
- Pertussis toksininin karın boşluğuna enjeksiyonu.
- Klinik skorların ve hayvan ağırlığının günlük izlenmesi.
Ana Sonuçlar
- EAE'nin klinik belirtileri tipik olarak bağışıklandırmadan sonraki 9 ve 14. günler arasında gözlenir.
- Fare üzerinde gevşek paralizinin başarılı bir şekilde indüksiyonu.
- Model, merkezi sinir sistemindeki bağışıklık tepkilerinin çalışılmasına izin verir.
- Yeni moleküler ilaç hedeflerinin tanımlanmasını kolaylaştırır.
Sonuçlar
- EAE modeli, multipl sklerozun çalışılması için değerli bir araçtır.
- Başarılı bir bağışıklama için uygun kullanım ve stres azaltma kritik öneme sahiptir.
- Bu yöntem, nöroloimmünoloji süreçlerinin anlaşılmasına yardımcı olur.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
The MOG35-55-induced EAE model in C57BL/6 mice provides a robust and reproducible system for studying autoimmune neuroinflammation relevant to multiple sclerosis pathophysiology. This model enables mechanistic de-risking of therapeutic candidates by recapitulating adaptive immune-mediated demyelination and neurodegeneration. It supports target validation and preclinical screening by allowing evaluation of drug effects on clinical disease progression and immune responses in a genetically tractable background.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of autoimmune hypotheses involving MOG-specific T-cell responses and CNS inflammation.
- Operational Value: Provides a standardized model for validating targets in neuroinflammatory pathways using genetic or pharmacological modulation.
- Predictive Value: Supports target confidence by modeling the effector phase of autoimmune encephalomyelitis with clinical readouts.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantifiable clinical scores and weight loss metrics for dose-response assessment of immunomodulatory compounds.
- Operational Value: Establishes a reproducible workflow for compound testing with defined immunization and monitoring timelines.
- Assay Readiness: Outputs enable standardized evaluation of therapeutic impact on disease onset, severity, and duration.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Facilitates mechanistic studies of immune cell infiltration, demyelination, and axonal damage relevant to MS pathology.
- Translational Continuity: Allows evaluation of target engagement and pathway modulation from discovery through preclinical validation.
- Risk-Adjusted Decisions: Informs go/no-go criteria based on clinical score thresholds and histopathological correlates.
Pipeline & Workflow Integration
The model fits within the discovery continuum from target validation through lead optimization to preclinical efficacy testing, providing immunological and clinical readouts that inform compound advancement.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing of autoimmune mechanisms and functional validation of targets in neuroinflammation.
- Screening: Delivers quantitative clinical and phenotypic outputs enabling compound comparison and structure-activity relationship analysis.
- Analytics: Generates longitudinal clinical scoring and weight data for statistical evaluation of treatment effects.
- Translational Research: Connects immunomodulatory mechanisms to disease-modifying potential in a disease-relevant system.
- Enterprise Reuse: Serves as a reusable platform for screening multiple candidates across neuroimmunology programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Reduces mechanistic ambiguity in autoimmune CNS disorders through reproducible disease induction.
- Operational Value: Ensures standardization across studies via defined antigen preparation, adjuvant emulsification, and toxin dosing protocols.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early de-risking of targets with high translational failure potential.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by linking target modulation to clinical outcomes in a validated model.
Implementation Considerations
- Requires expertise in animal handling, emulsion preparation, and clinical scoring to minimize variability.
- Dependent on precise CFA-MOG emulsion quality and pertussis toxin dosing for consistent disease induction.
- Necessitates standardized scoring protocols and blinding for cross-functional data interpretation.
- Requires adaptation considerations when translating findings across different genetic backgrounds or disease variants.
- Practical limitations include model variability influenced by microbiota, housing conditions, and technician proficiency.
