Rat Kalp Yetmezliği Hücre Terapisi: Miyokard İnfarktüsü için çift Torakotomi ve Hücreleri ile BioMatrix arasında Epikardiyal implantasyonu

Bu işlemin amacı, koroner ligasyon ve epikardiyal uygulama yapmak için sıçanlara çift torakotomi yapmaktır. Bu, önce dördüncü interkostal boşlukta bir torakotomi yapılarak gerçekleştirilir. Daha sonra, sol ön inen koroner arter veya LAD bağlanır.

Daha sonra iki hafta sonra beşinci interkostal boşlukta ikinci bir torakotomi yapılır. Son olarak, hücreler ve matris, enfarktüslü atan kalbin yüzeyine uygulanır. Sonuç olarak, kalp fonksiyonunu değerlendirmek için ekokardiyografi yapılır ve histoloji enfarktüs boyutu ölçümleri ile gerçekleştirilir.

Bu tekniğin sternotomi gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, prosedürün olacağını gösteren minimal invaziv bir yaklaşım olmasıdır ve Lopez laboratuvarımızdan işbirlikçiler göndermiştir. Tüm hayvanlar, F-E-L-A-S-A ve İsviçre Hayvanları Koruma Yasası'nın tavsiyelerine uygun olarak tedavi edildi. Bir sıçanı kan durumuna düşürdükten ve femur kemiklerini metin protokolüne göre izole edip temizledikten sonra, kemiklerin her iki ucunu da kesmek için makas kullanın.

Daha sonra kemik iliğini yıkamak için, steril PBS'yi kemiğin çekirdeğine enjekte edin ve iliği 15 mililitrelik bir tüpe toplayın. Toplanan kemik iliğini 300 kez G'de yedi dakika santrifüjleyin. Supinatı üç mililitre kırmızı kan hücresi lizis tamponu ile çıkarın. Peleti askıya alın, süspansiyonu oda sıcaklığında bir dakika inkübe edin ve resüsten sonra 300 kez G'de yedi dakika tekrar döndürün.

Peletin steril kültür ortamında askıya alınması. 150 mililitrelik bir kültür şişesine ilave hücre kültürü ortamı ekleyin ve hücreleri inkübasyonun ikinci gününde tohumlayın. Yapışmayan hücreleri çıkarmak için ortamı değiştirin ve istenen hücre yoğunluğu elde edilene kadar ortamı iki ila üç hafta boyunca her iki günde bir değiştirmeye devam edin.

İlk T torakotomisini gerçekleştirmek için, fareyi tartarak başlayın ve ventilatör parametrelerini buna göre ayarlayın. Havalandırma çıkışı otomatik olarak tanımlanır. Ardından göğüs kafesinin sol kısmını tıraş edin, bir ısıtma yastığını açın ve 37 santigrat dereceye ayarlayın.

Sıçanı metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, sıçanı 14 gauge IV kateter kullanarak sırtüstü pozisyonda ısıtma yastığına yerleştirmeden önce bir ayak parmağı veya kuyruk çimdikleme yapın, hayvanı entübe edin, ardından entübasyon kateterini bir kemirgen ventilatörüne bağlayın. Dakikada 2,5 litre oksijen,% 2,5 flor, iki mililitre tidal hacim ve dakikada 90 nefes solunum frekansı için programlanmıştır. Deri altında kilogram başına 0.1 miligram buprenorfin içeren bir şırınga hazırladıktan sonra, çözeltinin üçte birini enjekte edin, ardından alanı dezenfekte etmek için% 1 Betadin çözeltisi kullanın.

Daha sonra, dördüncü interkostal boşluğun sternumuna dik olan cildi kesin ve üç torasik kas tabakasını ayırın. Ardından dördüncü interkostal boşluğu kaburgalar dört ve beş arasında açın. Kaburgaları açmak ve kalbi ortaya çıkarmak için küçük bir ekartör kullanın.

Daha sonra perikardımı dikkatlice açın ve sol ön inen koroner arteri veya LAD'yi bulun ve atriyumun dört milimetre altına bağlamak için 7.0 sütür kullanın. Daha sonra sternumdan yaklaşık ve distal olarak yerleştirilmiş üç sıfır sütür ile iskemik alanın renk değişimini kontrol edin. İnterkostal boşluğu kapatmak için kullanılacak iki dikiş yapın.

Distal sütürü sıkın. Göğsü şişirmek ve pnömotoraksı önlemek için ventilatör egzoz borusunu iki saniye boyunca kelepçeleyin. Ardından ikinci dikişi sıkın.

Kas katmanlarını tekrar yerine yerleştirin. Daha sonra cildi% 1 Betadine solüsyonu ile kapatmak için beş sıfır sütür kullanın. Sütürü dezenfekte edin ve kalan buprenorfin solüsyonunu enjekte edin.

Anestezi sistemini kapatın ve entübasyon kateterini çıkarın. Fareyi bir IVC ünitesine geri göndermeden önce bir ila iki saat boyunca ılık bir lamba altında bir kafeste tutun. İlk torakotomiden iki hafta sonra iyileşme tamamlanır ve bir yara izi zar zor görülür.

Sıçanı ameliyata hazırlamak için bu videoda daha önce özetlenen prosedürü takiben, beşinci interkostal boşlukta sternuma dik olan cildi kesin. Üç kas katmanını ayırın ve beşinci ve altıncı kaburgalar arasındaki beşinci interkostal boşluğu açın. Kaburgaları açmak ve kalbi ortaya çıkarmak için küçük bir ekartör kullanın.

Biraz yapışma varsa, dikkatlice rahatlatmak için ince forseps kullanın. Ardından, bağın altında soluk bir alan olarak görünen enfarktüs alanını bulun. Gerekirse, apekse 10 santimetrelik bir yedi sıfır sütür parçası yerleştirin ve sol ventrikülü daha iyi görselleştirmek için hafifçe çekin.

Daha sonra kalbin iskemik bölgesinin yüzeyine hücreler ve matris uygulamak. Peletlemeden sonra, metin protokolünde belirtildiği gibi altı hücreye dört kez 10 kez, kaplamak için bir fibrin dolgu macunu kullanmadan önce paleti kalbin üzerine bırakın. Tutkal tabakası hücreleri kalbin yüzeyine sabitler.

Dikiş parçasını apeks pozisyonundan çıkardıktan sonra, kas katmanları tekrar yerine dikilir ve hayvanı dezenfekte eder. Burada gösterildiği gibi videoda daha önce gösterildiği gibi. Cerrahi müdahale sonrası hayvanlar uygulanan tedaviden bağımsız olarak kilo almadan önce hızlı bir şekilde kilo vermiş ve toparlanmıştır Bu Kaplan grafiğinde gösterildiği gibi, ilk T torakotomiden sonra sağkalım oranı yüksektir, fibrin ve/veya hücreleri ile tedavi edilen hayvanlar bu grafikte görüldüğü gibi diğer gruplara göre daha düşük sağkalım oranları göstermiştir.

Bununla birlikte, genel sağkalım oranları bir saniye sonra yüksek kaldı. Torakotomi ve tedavisi kalp fonksiyonları ekokardiyografi ile değerlendirildi. Sağlıklı ve enfarktüslü hayvanlar için bu temsili M modu görüntüleri, LV duvar kasılmasının kaldırıldığını göstermektedir LAD ligasyonundan iki hafta sonra, toplam 104 hayvanda LAD lasyonundan iki hafta sonra fraksiyonel kısalma kaydedildi.

Frekans dağılımı, %17'lik bir varyasyon katsayısı ile makul ölçüde tekrarlanabilir yöntemleri gösterirBu şekil, LAD lasyonundan iki ve altı hafta sonra ölçülen ejeksiyon fraksiyonu ile kalp fonksiyonunun grafiksel temsilini göstermektedir Kalp fonksiyonu bu süre zarfında azalmaya devam eder. Kalbin yeniden şekillenmesi de bu dönemde meydana gelir ve burada hem kız kardeş hem de diyastolde kaydedilen LV hacimlerinde bir artış ile temsil edilir. Son olarak, kalp bölümlerindeki altın lekelenme, fibrotik dokunun ve nihayetinde LAD ligasyonundan altı hafta sonra gelişen transmural bir yara izi olduğunu ortaya çıkardı Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 30 ila 40 dakika içinde yapılabilir.

Bu videoyu izledikten sonra, minimal invaziv çift torakotominin nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız.