Name: Kolorimetrik Algılama Paper-based Escherichia coli Salmonella Spp. Ve Listeria monocytogenes Tarım Su geniş hacimli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 50 s
Description: Keşfedin tarımsal suda gıda kaynaklı patojenleri tespit etme yöntemini. Escherichia coli, Salmonella ve Listeria monocytogenes için renkli algılama protokolü, Modified Moore Swab kullanarak büyük hacimli örnekleri analiz eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

USDA Ulusal Gıda ve Tarım Enstitüsü 2009-01208 ve 2009-01984 hibelerinden bu proje için fon sağlandığını minnetle kabul ediyoruz.

MMS kullanma Tarımsal Su geniş hacimli Bakterilerin 1. Konsantrasyon <ol><li> MMS Hazırlık <ol><li> 40 x 12 cm boyutlarında 4-katlı tülbent dikdörtgen bir bölümü kesin. </li><li> 20 x 6 cm boyutlarında bir dikdörtgen elde etmek için her iki eksen boyunca tülbent katlayın. </li><li> Boyunda yaklaşık 6 cm ve çapı 3 cm olan silindirik bir çubukla oluşturulması için sıkı uzun ekseni boyunca tülbent döndürün. </li><li> Alüminyum folyo tülbent bez otoklavlayınız kaseti otoklavlamayın yok. % 10 ev tipi ağartıcı içinde 30 dakika için ıslatılarak kaseti dekontamine ve bir sodyum tiosülfat pentahidrat (Na 2S 2 O 3 · 5H 2 O) çözeltisi (50 mg / L, 15 dakika boyunca kaseti ıslatarak kalıntı kloru devre dışı ) steril su içinde hazırlandı. </li><li> MMS kaset içine bezi yerleştirin. Not: MMS kasetinin olmayan tek versiyonu kullanılırsa, tülbent bir 4-katlı tabaka ile başlamak me80 x 22 cm asuring, 40 x 11 cm katlayın ve çapı yaklaşık 11 cm boyunda ve 6 cm bir silindir oluşturacak şekilde yuvarlayın. </li><li> MMS birleştirin. </li><li> Borunun tam spigots yapışır sağlanması, MMS her iki tarafında musluk için vinil tüp takın ve peristaltik pompanın içine boru düzeltmek. Peristaltik pompa boru donanımı üst numune için yeterli uzunlukta olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> Bakterilerin Konsantrasyon <ol><li> Yüksek hızda peristaltik pompa çalıştırılarak Tarımsal su numune en az 10 L. </li><li> Örnekleme tamamlandıktan sonra, su numunesi gelen peristaltik pompa girişini çekilme ve hiçbir atık su MMS çıkarken görülmektedir kadar pompayı çalıştırmaya devam. </li><li> Bir manifold, aynı anda birkaç numune çalıştırmak için kullanılan, her MMS çıkış maddesinin toplamak ve 10 L, tek bir MMS içinden süzülür zaman, söz konusu MMS için valfi kapatmak ve pompa çalışmaya devam eder. <ol><li> I örnekleme zamantamamlanmış s, tarımsal su peristaltik pompa girişini çekilme manifoldu tüm vanaları açık ve hiçbir atık su mmss çıkarken görülmektedir kadar pompayı çalıştırmaya devam. </li></ol></li></ol></li><li> Konsantrasyonu bütün mmss için tamamlandıktan sonra, dikkatli bir şekilde MMS musluk gelen vinil boru kaldırmak ve MMS her iki tarafındaki uçlar kap. Sıkıca kapatılmış MMS zenginleştirme ortamı eklemeden önce en fazla 12 saat saklanabilir. </li></ol> 2.. MMS Zenginleştirme ve Numune Hazırlama <ol><li> Zenginleştirme <ol><li> MMS kapağını sökün ve aseptik uygun steril zenginleştirme et suyu 20 ml ekleyin. Her seçici zenginleştirme için bir MMS kullanın. Alternatif olarak, aynı örnekteki tüm üç hedef bakteri yaymak için, seçici olmayan bir zenginleştirme gerçekleştirin. NOT: MMS kasetin olmayan tek sürümü kullanılırsa, aseptik kaset tülbent filtreyi kaldırmak ve reklamdan önce steril bir torbaya koyunUygun zenginleştirme ortamı Ding 225 mi. <ol><li> E. zenginleştirilmesi için E. coli, vankomisin hidroklorür 8 mg / L içeren tamponlu pepton suyu (BPW) 20 ml. </li><li> Salmonella spp zenginleştirilmesi için., BPW 20 ml Salmonella takviyesi (4 ml / L) ile desteklenmiş ekleyin. </li><li> L. zenginleştirilmesi için monocytogenes, VIDAS UP Listeria (LPT) et suyu 20 ml ekleyin. </li><li> Tek bir MMS kullanarak üç mikroorganizmalar için eş zamanlı olmayan seçici zenginleştirme için, genel ön zenginleştirmeye suyu (UPB) kullanır. </li></ol></li><li> Geri sıkıca MMS kapağını vidalayın. Spigots sıkıca zenginleştirme sırasında dökülmeleri ve olası kontaminasyonu önlemek için kapatılmış olduğundan emin olun. </li><li> 200 rpm&#39;de bir çalkalama inkübatöründe kadar 18-24 saat için MMS inkübe edin. E. 42 ° C kullanın coli ve Salmonella spp. selektif zenginleşmesi. L. 30 ° C kullanın monocytogenes selektif zenginleştirme ve kullanımı 37 &amp; #176, seçici olmayan bir zenginleştirme C. </li></ol></li><li> Numune Hazırlama <ol><li> Kuluçka tamamlandığında, inkübatör MMS kaldırmak spigots birini kapağını açmak, ve yavaşça bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpe yaklaşık 0.5 ml dağıtmak. Alternatif olarak, dışarı MMS ve pipet 0.5 gecede zenginleştirme ml sökün. Not: MMS kasetinin-olmayan tek versiyonu kullanılırsa, torbadan zenginleştirme 0.5 ml pipetle. </li><li> E. kolorimetrik analizi için coli seçici zenginleştirme ya da seçici olmayan zenginleştirme analizi için, 5 W, bir sonda sonikatör kullanarak 20 saniye boyunca 22 kHz&#39;de zenginleştirme 0.5 ml sonikasyon. </li></ol></li></ol> ΜPADs 3. Hazırlanması ve kolorimetrik alt-tabakalar arasında gömülmesi <ol><li> Test edilen her bir numune ve hedef için yeterince μPADs hazırlayın. E. algılamak için coli Salmonella spp, CPRG ve X-Gluc μPADs hazırlamak. algılama MC μPADs hazırlamak, ve L. monocytogenes algılama X-InP μPADs hazırlamak. <ol><li> HEPES tamponu hazırlayın kolorimetrik alt-tabakalar için, [0.1 M,% 0.1 Bovine Serum Albumin (BSA) ile HEPES] ve ikinci olacak substrata göre tamponun pH&#39;ının ayarlanması: CPRG ya da X-gluc hazırlanması için pH 7.5, MC pH 9 ve X-InP için pH 7. </li><li> PH substratların stok çözelti hazırlayın 3 mM (CPRG), 62.5 mM (X-Gluc), 15 mM (MC), 100 mM (X-InP) konsantrasyonlarda HEPES tamponu ayarlandı. Işıktan stok çözümleri koruyun. </li><li> Daha sonra her bir taban stok çözeltisinden 24 ul ile μPAD Microspot imbed, steril bir Petri kabı içinde μPADs yerleştirin. </li></ol></li></ol> 4.. Algılama ve Veri Analizi <ol><li> Bulma <ol><li> Petri kabı içinde bulunan her bir uygun μPAD Microspot için zenginleştirilmiş örnek 6 ul ekleyin. </li><li> Petri kabı kapağını geri yerleştirin ve Parafilm ile mühür. </li><li> Örnek inkübemicrospots renk gelişimi ve kurutma için izin verecek şekilde 3 saat boyunca 37 ° C&#39;de μPAD ile. </li></ol></li><li> Sonuçların görsel incelenmesi <ol><li> ΜPADs renk değişiklikleri basit görsel muayene ile tespit gerçekleştirin. NOT: Genellikle, kesin renk değişiklikleri üretmek güçlü tepkiler daha fazla açıklama için ihtiyacı ortadan kaldıracak olmalı ve pozitif olarak düşünülmelidir zenginleşme 18-24 saat, aşağıdaki bekleniyor. </li><li> Bir E. varlığını belirlemek kırmızı-mor ve mavi-yeşil renksiz X-Gluc değişikliği ile ankastre microspots sarıdan CPRG değişikliği ile ankastre microspots gözlemleyerek coli pozitif örnek. </li><li> Bir L. varlığını belirlemek renksiz gelen indigo X-InP değişikliği ile ankastre microspots gözlemleyerek olumlu örnek monocytogenes. </li><li> Salmonella spp varlığını belirler. col gelen MC değişikliği ile ankastre gözlemleyerek microspots pozitif numunemor-leylak rengi için orless. </li></ol></li><li> Yazılım Destekli Veri Analizi NOT: Açıkça zayıf reaksiyonlar olumlu ya da olumsuz olup olmadığını belirlemek için ve sonuçların bir yarı-kantitatif analiz sağlamak için yürütülen. <ol><li> ΜPADs tamamen kurumasını bekleyin. </li><li> Düz yataklı tarayıcı kullanarak μPAD tarayın. </li><li> Görüntü işleme ImageJ yazılımı kullanın. <ol><li> Ana menüden (veya basın &quot;Clt + O&quot;) üzerindeki &quot;Dosya&quot; sekmesi altında bulunan ImageJ analiz edilecek, taranan görüntüyü &quot;aç&quot;. </li><li> (&quot;Clt + Shift +&quot; ya basın) ana menüde &quot;Edit&quot; sekmesinin altında bulunan &quot;Dönüştür&quot; seçerek görüntüyü ters çevirin. </li><li> Ana menüde &quot;Analiz&quot; sekmesini kullanın ve analiz rapor ölçüleri seçmek için &quot;Set Ölçümleri ...&quot; seçeneğini seçin. </li><li> Emin &quot;Mean gri yoğunluk&quot;, &quot;eşik Limit emin olun&quot; ve &quot;Display etiket&quot; kutularıkontrol ve basın &quot;Tamam.&quot; Bu yazılım, seçilen her alanda analiz nasıl ayarlar ve nasıl bunu bildiriyor. </li><li> Eğer içinde ölçmek istediğiniz alanı ana hatlarıyla bir daire çizmek için &quot;Oval&quot; aracını kullanın. </li><li> &quot;Analiz&quot; sekmesinde &quot;Tedbir,&quot; (ya da basın &quot;Clt + M&quot;) seçin. Yazılım tanımlı alanı içinde ortalama gri yoğunluğunu ölçmek ve kopyalanabilir ve daha fazla analiz için excel yapıştırılabilir bir pop-up ekranında rapor edecektir. NOT: Tam bir analiz için, her numunenin en az iki teknik çoğaltır yapılmalıdır. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guidance+for+industry%3A+Guide+to+minimize+microbial+food+safety+hazards+for+fresh+fruits+and+vegetables%22">Guidance for industry: Guide to minimize microbial food safety hazards for fresh fruits and vegetables</a>. , U.S. Dept. of Health and Human Service, Food and Drug Administration, Center for Food Safety and Applied Nutrition (CFSAN). (1998).</li>
<li>Bisha, B., Pérez-Méndez, A., Danyluk, M. D., Goodridge, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Modified+Moore+swabs+and+continuous+flow+centrifugation+for+concentration+of+Salmonella+and+Escherichia+coli+O157%3AH7+from+large+volumes+of+water%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Food+Prot%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Modified Moore swabs and continuous flow centrifugation for concentration of Salmonella and Escherichia coli O157:H7 from large volumes of water).</a> J Food Prot. 74, 1934-1937 (2011).</li>
<li>Sbodio, A., Maeda, S., Lopez-Velasco, G., Suslow, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+Moore+swab+optimization+and+validation+in+capturing+E.+coli+O157%3AH7+and+Salmonella+enterica+in+large+volume+field+samples+of+irrigation+water%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Modified Moore swab optimization and validation in capturing E. coli O157:H7 and Salmonella enterica in large volume field samples of irrigation water.</a> Food Res Int. 51, 654-662 (2013).</li>
<li>McEgan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Salmonella+spp.+from+large+volumes+of+water+by+modified+Moore+swabs+and+tangential+flow+filtration%5BTitle%5D)+AND+%22Lett+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of Salmonella spp. from large volumes of water by modified Moore swabs and tangential flow filtration.</a> Lett Appl Microbiol. 56, 88-94 (2013).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Solicitation+Number%3A+FDA-SS-1116253%22">Solicitation Number: FDA-SS-1116253</a>. , Administration USFaD. (2013).</li>
<li>Jokerst, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+paper-based+analytical+device+for+colorimetric+detection+of+select+foodborne+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Development of a paper-based analytical device for colorimetric detection of select foodborne pathogens.</a> Analytical Chemistry. 84, 2900-2907 (1021).</li>
<li>Martinez, A. W., Phillips, S. T., Butte, M. J., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterned+paper+as+a+platform+for+inexpensive%2C+low-volume%2C+portable+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Edit%22%5BJournal%5D)">Patterned paper as a platform for inexpensive, low-volume, portable bioassays.</a> Angew Chem Int Edit. 46, 1318-1320 (2007).</li>
<li>Martinez, A. W., Phillips, S. T., Wiley, B. J., Gupta, M., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLASH%3A+A+rapid+method+for+prototyping+paper-based+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">FLASH: A rapid method for prototyping paper-based microfluidic devices.</a> Lab on a Chip. 8, 2146-2150 (1039).</li>
<li>Abe, K., Suzuki, K., Citterio, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inkjet-printed+microfluidic+multianalyte+chemical+sensing+paper%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Inkjet-printed microfluidic multianalyte chemical sensing paper.</a> Analytical Chemistry. 80, 6928-6934 (1021).</li>
<li>Cheng, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Millimeter-scale+contact+printing+of+aqueous+solutions+using+a+stamp+made+out+of+paper+and+tape%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Millimeter-scale contact printing of aqueous solutions using a stamp made out of paper and tape.</a> Lab on a Chip. 10, 3201-3205 (1039).</li>
<li>Lu, Y., Shi, W. W., Jiang, L., Qin, J. H., Lin, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+prototyping+of+paper-based+microfluidics+with+wax+for+low-cost%2C+portable+bioassay%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Rapid prototyping of paper-based microfluidics with wax for low-cost, portable bioassay.</a> Electrophoresis. 30, 1497-1500 (2009).</li>
<li>Jokerst Rapid detection of pathogens using paper devices. US patent. , WO2012125781 A3 (2012).</li>
<li>T10-06 Colorimetric paper-based detection of Salmonella spp. and Escherichia coli from artificially contaminated irrigation river water. Bisha, B., et al. Internation Association for Food Protection Annual Meeting, Providence, RI, , (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu protokol, E. saptanması için entegre bir yöntem tarif E. coli, Salmonella spp. ve L. Tarımsal suda monocytogenes. Burada, tarım büyük hacimlerde suyun bakterilerin MMS konsantrasyonu (10 L), bakteriyel zenginleştirme ile birleştiğinde ve bakteri gösterge kolorimetrik tespiti μPADs kullanıyor. Bakteriler 10 kat konsantre olurken MMS prosedürü su örneklerinde yüksek partikül içeriği ile başa çıkabilir, sağlam ve az eğitimli personel tarafından saha uygulamaları için yeterince basit v...

Bu gıda kaynaklı hastalık etmenleri gıda kaynaklı hastalık yükünü azaltmak için alan bazlı ortamlarda hızla ve tercihen tespit edilmesi önemlidir. Gıda kaynaklı bakteriyel patojenler tespit etmek için ortak stratejiler biyokimyasal profil, seçici ve diferansiyel kültürlemenin, immünolojik izolasyon ve algılama ve moleküler algılama vardır. Ancak, bu yöntemler sporadik kirlenme tarafından engellendiğini, test küçük bir örnek boyutları, gıda kaynaklı patojen bakterilerin genellikle düşük konsantrasyonlarda, uzun işlem süreleri gerektiren ve / veya alan ayarları için geçerli değildir. Bundan başka, birçok gıda matrislerdeki bileşiklerin tespit ve teşhis uygulamalarına önleyici bulunmaktadır. Mikrobiyal algılama olasılığını artırmak amacıyla, Amerika Birleşik Devletleri Gıda ve İlaç Dairesi (örneğin, yıkama, su ve sulama suyu olarak) Tarımsal su testi taze ürün büyük bir yüzey alanı ile temas ya da bir araç olarak hizmet eder ya da bu da önerdi produce kontaminasyon gıda 1. doğrudan test için bir alternatiftir. Buna rağmen, temsili tarımsal su numunesi seyreltme etkisi ile birleştiğinde genellikle düşük, doğal patojen-patojen yükü konsantrasyon için numune hazırlama yöntemleri gerekli kılar. Bu tür bir yöntem, su (≥ 10 L), uygun patojen-konsantrasyonu ve alt algılama stratejileri ile uyumluluk geniş hacimli örnekleme gerektirir. Modifiye Moore bezlerden (MMS) su 2-4 büyük hacimlerde (≥ 10 L) bakterileri konsantre için kullanılan, ucuz, basit ve sağlam cihazlardır. MMS bir peristaltik pompa kullanılarak pompalanmıştır kaset su büyük miktarlar için, bir kaba filtre olarak hizmet gazlı bez, dolu bir plastik kaset oluşur. MMS işlenmiş li mikroorganizmalar da dahil olmak üzere organik ve inorganik tanecikli madde yakalar bakteri konsantrasyonu (≥ 10 kat konsantrasyon) bir ayrım yöntemisterlin örnekleri. Bu, MMS ile hedef mikroorganizma konsantrasyonunun mükemmel etkinliği mikroorganizmalar silt-kil fraksiyonu ya da süspanse edilmiş katı maddelerin 3 organik mikro agrega bağlı olması beklenmektedir gerçeği ile açıklanabilir olasıdır. MMS sağlam tasarımı, bu tür filtrelerin tıkanması, büyük hacimli işleme yetersizlik, yüksek bulanıklık ile filtre örnekleri ve yüksek maliyetler gibi sudan bakteri, yakalanması ve konsantrasyon için diğer filtrasyon yöntemleri ile ilgili en eksikliklerin sağlar. Bu nedenlerle, FDA MMS çevre ve üretmek, ilgili numune toplama prosedürleri 5 resmi işlemleri dahil edilmesi tavsiye edilmektedir. Burada, bir yöntem olup, konsantrasyon, zenginleştirme ve Escherichia coli algılama, Salmonella spp. Ve tarımsal sularından Listeria monocytogenes için açıklanmıştır. A MMS Bact konsantrasyonu için kullanılıreria ve ayrıca seçici ya da seçici olmayan bakteriyel zenginleştirilmesi için bir kap olarak işlev görür. Bakteriyel algılama kağıt tabanlı analitik cihazları (μPADs) 6 kullanılarak biyokimyasal elde edilir. μPADs akışkan ağları veya Fotolitografi, inkjet baskı, damgalama, ve balmumu 7-11 baskı da dahil olmak üzere çeşitli yöntemler kullanılarak nokta testleri olarak imal edilebilir. Akışkan tasarımları örnekleri, numunenin merkez yatırılır ve daha sonra, numune ya da alt-tabaka merkezine 12 içine kılcal hareket ile kanalın dış rezervuar çekilir edildiği distal rezervuar ya da tek kanal alışkanlıklarına akar dendritik kanal desen olabilir. Bu protokol için, biz burada test mikroorganizmaların göstergesidir enzimler tarafından işlenebilir kromojenik substratları ile ankastre 7 mm çaplı balmumu kağıt nokta diziler için istihdam seçtiniz: Klorofenol kırmızı β-D-galaktopiranosid (CPRG) ve 5 - bromo-4-kloro-3-indolil β-D-glukuronid (X-Gluc)E. tarafından üretilen β-galaktosidaz ve β-glukuronidaz saptanmasında coli; Salmonella spp tarafından üretilen, C8-esteraz tespiti için 5-bromo-6-kloro-3-indolil kaprilat (kırmızı kaprilat).; fosfatidilinositol özgü fosfolipaz C tespiti için ve 5-bromo-4-kloro-3-indolil-miyo-inositol fosfat (X-InP) (PI-PLC) tarafından üretilen L. 6 monocytogenes. Bu nedenle, belirli bir bakteri varlığı, karmaşık ekipman ve veri yorumlama için gerek kalmadan görsel olarak gözlenebilir. Bu özel hedef bakterilerin enzim bazlı kolorimetrik μPAD algılama spesifikliği ve duyarlılığı, daha önce 6 incelenmiştir. Buna ek olarak, bu hedef bakteriler için entegre konsantrasyon algılama yönteminin hassasiyeti mikroorganizmalar (yayınlanmamış veriler ve Bisha et al. 13) önceden belirlenmiş bir seviyede suyun büyük hacimlerde spike ile değerlendirildi.

<table><tbody><tr><td>Tarımsal su</td><td></td><td></td><td>Sulama suyu, yıkama suyu, kuyu suyu vb. Üretir.</td></tr><tr><td>Vinil boru</td><td>Wilmar</td><td>BN-CVT1005</td><td>&nbsp; 1/4 "iç çap, &nbsp; 3/8 "dış çap, şurada mevcuttur:&nbsp; http://www.wilmar.com</td></tr><tr><td>Modifiye Moore Swab kartuşu&nbsp;</td><td>Lumiere Diagnostics</td><td></td><td>11 &frac12; cm uzunluğunda ve 4 &frac12; cm genişliğinde, şu adresten ulaşılabilir:&nbsp; http://www.lumierediagnostics.com.&nbsp; Alternatif olarak, kartuşun tek kullanımlık olmayan bir versiyonu kullanılabilir (metne bakın)</td></tr><tr><td>Tülbent</td><td>Chesapeake Silecek & Tedarik A.Ş.</td><td>CC90</td><td>Sınıf # 90, 44 x 36 dokuma, şu adreste mevcuttur: &nbsp; www.raglady.com</td></tr><tr><td>Ev Tipi Çamaşır Suyu</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>Sodyum hipoklorit konsantrasyonu yaklaşık% 6</td></tr> <tr><td>Sodyum tiyosülfat 5-hidrat</td><td>Mallinckrodt Baker Inc</td><td>8100-04</td><td></td></tr><tr><td>Manifold</td><td>Dahili şirket</td><td></td> içi <td>İsteğe bağlı olarak, cihaz PVC borulardan ve uygun bağlantı parçalarından yapılabilir</td></tr><tr><td>Peristaltik pompa</td><td>Mikron Metre</td><td>RPP1300</td><td>Mevcut:&nbsp; http://www.micronmeters.com</td></tr><tr><td>Serolojik pipet</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>Tek Kullanımlık, 10 ml</td></tr><tr><td>Üniversal ön zenginleştirme suyu</td><td>Difco</td><td>223510</td><td></td></tr><tr><td>Tamponlu pepton suyu</td><td>Difco</td><td>218105</td><td></td></tr><tr><td>Salmonella takviyesi</td><td>Biom&eacute; rieux Industry</td><td>42650</td><td>http://www.biomerieux-usa.com</td></tr><tr><td>VIDAS UP Listeria (LPT) Et Suyu Biyom</td><td>&eacute; rieux Industry</td><td>410848</td><td>http://www.biomerieux-usa.com</td></tr><tr><td>Vancomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>861987</td><td>http://www.sigmaaldrich.com</td></tr><tr><td>Pipet Yardımı</td><td>Burada kullanılan çeşitli</td><td></td><td>Drummond DP-110</td></tr><tr><td>Çalkalama inkübatörü</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>Excella E25, New Brunswick Scientific burada kullanılan</td></tr><tr><td>Mikropipet ve nbsp;</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>10 &mu; l, 1 ml</td></tr><tr><td>Mikropipet uçları</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>Bariyer, 10 &mu; l, 1 ml</td></tr><tr><td>1.5 mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>RNaz ve DNaz içermeyen</td></tr><tr><td>Prob sonikatörü</td><td>Q Sonica LLC</td><td>XL-2000 serisi</td><td></td></tr> <tr><td>ve mikro; PAD'ler</td><td>Avant&nbsp;</td><td></td><td>Balmumu baskılı 7 mm çapında daireler, 4 pt çizgi kalınlığında. Ek bilgi için Dr. Charles Henry ile iletişime geçin:</td></tr><tr><td>HEPES [N-(2-Hidroksietil)piperazin-N&prime; -2-etansülfonik asit]</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8022</td><td></td></tr><tr><td>Klorofenol kırmızı-galaktopiranosid (CPRG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>59767</td><td></td></tr><tr><td>5-Bromo-4-kloro-3-indolil-&beta;-D-glukuronid (X-Gluc)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B8174</td><td></td></tr><tr><td>5-bromo-6-kloro-3 indolilkaprilat (macenta kaprilat)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>53451</td><td></td></tr><tr><td>5-Bromo-4-kloro-myo-inositol fosfat (X-InP)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>38896</td><td></td></tr><tr><td>Petri kapları, polistiren 100 mm x 15 mm</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>Steril</td></tr><tr><td>Düz yataklı tarayıcı</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>Xerox USB tarayıcı</td></tr><tr><td>ImageJ yazılımı</td><td>Ulusal Sağlık</td><td></td><td>Enstitüleri http://rsb.info.nih.gov/ij/</td></tr></tbody></table>

kolorimetrik algılama paper-based<em&gt; escherichia coli</em&gt;<em&gt; salmonella</em&gt; spp. ve<em&gt; listeria monocytogenes</em&gt; tarım su geniş hacimli

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

Bu protokol, tarımsal sularının büyük hacimli Escherichia coli, Salmonella spp. Ve Listeria monocytogenes hızlı kolorimetrik tespitini (10 L) da açıklamaktadır. Burada su bakteri konsantre, plastik bir kartuş içine basit bir ağ filtre oluşur steril Modifiye Moore Swabs (MMS), süzülür. Süzüldükten sonra, hedef bakteriler için seçici olmayan ya da seçici bir zenginleşme MMS gerçekleştirilir. Hedef bakteri kolorimetrik tespiti için, zenginleşmesi sonra bakteri işaret eden alt-tabakalar ile gömülü kağıt bazlı analitik cihazlar (μPADs) kullanılarak deneye tabi tutulur. Her bir alt-tabaka üzerinde görsel μPAD (kalitatif tespiti) tespit edilebilir renkli ürünler üreten, hedef gösterge bakteryel enzimler ile reaksiyona girer. Alternatif olarak, reaksiyona μPADs dijital görüntüler ortak tarama ve çekim cihazları ile ve oluşturulan ImageJ yazılımı al kullanılarak analiz edilebilirsonuçlar daha objektif ve standart yorumlanması için lowing. Biyokimyasal tarama işlemleri yukarıda bahsedilen bakteriyel patojenler belirlemek için tasarlanmış olsa da, enzimler, arka mikrobiyota veya kolorimetrik alt-tabakaların bozulması tarafından üretilen bazı durumlarda yanlış pozitif üretebilir. Bu nedenle, daha ayrımcı teşhis kullanılarak teyit gereklidir. Bununla birlikte, bu bakteriyel konsantrasyon ve algılama platformu bir ilk tarama yöntemi olarak kullanılmasını haklı, (konsantrasyon, zenginleştirme ve algılama yaklaşık 24 saat içinde yapılır), ucuz (0,1 CFU / ml tespit sınırı) duyarlı, gerçekleştirmek kolay ve hızlıdır Tarımsal su mikrobiyolojik kalitesi için.

Bu protokolde tarif edildiği gibi, MMS kullanarak bakteri konsantrasyonu (Şekil 1), yaklaşık 15-20 dakika içinde yapılabilir. Iki ayrı bileşenleri, akrilonitril butadien stiren (ABS) &#39;den meydana in MMS; silindirik bir tülbent çubuk içine sokulduğu entegre bir mil kasnağı montajı (Şekil 1A) ile her ikisi de, bir kapak ve bir kartuş. Her iki bileşen de daha sonra birlikte MMS (Şekil 1 B) oluşturan vidalanır. MMS-tabanlı işleme alan ortamlarda yoğun olarak numuneler i...

Büyük hacimli tarımsal sularda gıda kaynaklı patojenlerin entegre konsantrasyon, zenginleştirme ve son nokta kolorimetrik tespitini içeren bir protokol burada sunulmaktadır. Su, seçici veya seçici olmayan ortamlarla zenginleştirilmiş Modifiye Moore Swablarından (MMS) süzülür ve algılama, bakteriyel-gösterge kolorimetrik substratlarla gömülü kağıt bazlı analitik cihazlar (μPAD) kullanılarak gerçekleştirilir.

Kolorimetrik Algılama Paper-based<em&gt; Escherichia coli</em&gt;<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp. Ve<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Tarım Su geniş hacimli

This protocol describes rapid colorimetric detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from large volumes (10 L) of ...

Bu prosedürün genel amacı, büyük hacimli tarımsal sularda gıda kaynaklı patojenleri tespit etmektir. Bunun için, katlanmış bir gazlı bez veya tülbent parçasının bir MMS kasetinin içine yerleştirilmesiyle, bundan sonra MMS olarak adlandırılacak olan modifiye edilmiş bir sürüntü düzeneği hazırlanır. Ardından, örnekleme alanında, bir peristaltik pompa kullanılarak büyük hacimlerdeki suyun MMS'den geçirilmesiyle hedef bakteriler konsantre edilir.MMS uçları ardından sıkıca kapatılır ve laboratuvara geri taşınır. MMS'ye seçici veya seçici olmayan zenginleştirme besiyeri eklenir ve 18 ila 24 saat boyunca inkübe edilir. Daha sonra zenginleştirilmiş kültürler toplanır ve E. coli tespiti için lizatlar hazırlanır.Bunlar, kolorimetrik enzimatik tespit için substratlarla emdirilmiş mikro ped mikro noktalarına eklenir ve üç saate kadar inkübe edilir. Daha sonra mikro pedler incelenir ve taranır. Sonuç olarak, mikro noktaların görsel ve kantitatif analizi, mililitrede 0.1 CFU kadar düşük seviyelerde E. coli, Salmonella türleri ve L. monocytogenes varlığını ortaya çıkarır.Bu tekniğin membran filtrasyonuna ve katı besiyerinde kültüre göre temel avantajı, daha büyük hacimlerde su örneğinin kullanıla

colorimetric-paper-based-detection-escherichia-coli-salmonella-spp

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bu protokol, ardından hızlı bir şekilde tüm hücre algılama, domates ve diğer taze ürün yüzeyler örnekleme için basit bir yapışkan bant tabanlı yaklaşım,...

Yapışkan bant tabanlı Örnekleme ve Floresans kombinasyonu In situ</emHızlı Algılama> Hibridizasyon Salmonella Taze üretin

Biz son zamanlarda basit bir bakteriyel tespiti için floresan assay "mix-ve-okuma" kurmak için uygulanabilir Flourogenik DNAzyme probları üretmek için yeni bir yaklaşım bildirdin. Bu özel DNA sondaları böylece floresans sinyali kuşağa bakteriyel algılama çevirme belirli bakteri tarafından üretilen ham hücre dışı karışımı (CEM) varlığında, bir kromofor-değiştirilmiş-DNA RNA kimerik substratın bölünme katalize. Bu yazıda, "RFD-EC1" ifade belirli bir DNAzyme prob modeli bakterinin tespiti için...

Flourogenik DNAzymes kullanarak Bakterilerin Tespiti

Biz hızlı bakteri bulunması ve belirlenmesi için bir elektrokimyasal sensör test yöntem açıklanmaktadır. Tahlil, ribozomal RNA (rRNA) türe özgü dizileri için DNA oligonükleotid probları yakalama fonksiyonuna sahip bir sensör dizisi içerir. Yakalama prob ve yaban turpu peroksidaz bağlı DNA oligonükleotid dedektör prob ile hedef rRNA Sandwich melezleme ölçülebilir bir amperometrik akım üretir.

Elektrokimyasal Sensörler kullanarak Bakteriyel Algılama ve Tanıma

Öncelikle E. coli dahil olmak üzere fekal koliform barındırma ihtimali olan kontamine su örneğiyle başlayın.Bulanıklığı ve mikrobiyal yükü azaltmak için distile suda seri seyreltme işlemi yapılabilir.İstediğiniz seyreltilmiş örneği besin ortamıyla karıştırın ve mikrofluidik bir çipe yükleyin.Vakum filtreleme kullanarak çipin serpantin kanalındaki bir membranda bakterileri yakalayın.Üst odaya besin ortamı ekleyin ve bakteriyel iyileşmeyi artırmak için kuluçka yapın.Ortamı, lusiferaz genini...

Su Örneklerinde Canlı E. coli Tespit Etmek İçin Tabanlı Mikrofluidik Analiz

Bu video, bir DNAzime'i aktive eden bir E. coli biyobelirteçini içeren, RNA bağlantısının bölünmesine ve bir DNAzime-üreaz konjugatının ayrılmasına yol açan bir kolorimetrik E. coli algılama yöntemini göstermektedir. Sonraki bir kolorimetrik test, amonyak kaynaklı pH değişiklikleri yoluyla E. coli biyobelirtecini tespit eder.

Modifiye Turnusol Testi Kullanılarak Bakteriyel Bir Biyobelirteçin Kolorimetrik Tespiti

H7 benzersiz bir genetik işaretleyici, Z3276 hedefleme: A QPCR tahlil Escherichia coli O157 tespiti için geliştirilmiştir. QPCR canlı hücre algılaması için propidyum monoazide (PMA), tedavi ile kombine edilmiştir. Bu protokol, çok sayıda numune, kolay ve uygun kullanım için bir 96 oyuklu plaka formatı değiştirilmiş ve uyarlanmıştır...

Live Algılama<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: PMA-qPCR H7 Hücreler

Tavuklarda Eimeria enfeksiyonu teşhisi zorlu olmaya devam etmektedir. Parazit morfolojisi ve konak patolojisi odaklı yaklaşımlar genellikle sonuçsuz kalırken, PCR'ye dayalı moleküler yaklaşımların maliyet ve uzmanlık açısından zorlu olduğu kanıtlanmıştır. Bu protokolün amacı, eimerian enfeksiyonu için basit bir moleküler tanı olarak döngü aracılı izotermal amplifikasyonu (LAMP) oluşturmaktır.

Türler özgü Algılama Loop-aracılı İzotermal Amplifikasyon (LAMP) Tahliller<em&gt; Eimeria</em&gt; Tavuklar bulaştırmak ki

Bu yazıda, aynı anda Enterococcus spp ölçmek için kullanılabilecek bir çift yönlü dijital PCR deneyi. Ve eğlence sularda genel olarak insan ilişkili dışkı kirlenme göstergeleri olarak HF183 genetik işaretleyiciler açıklanmaktadır.

Eşzamanlı Niceleme için Dubleks Dijital PCR Testi<em&gt; Enterococcus spp.</em&gt; Ve Waters İnsan Fekal ilişkili HF183 Marker

RNA parçalayan DNAzime, üreaz ve manyetik boncuklardan yararlanan modifiye bir turnusol testi kullanarak E. coli'nin kolorimetrik tespiti için bir protokol açıklıyoruz.

Turnusol Testi kullanarak Bakterilerin Kolorimetrik Tespiti

Hızlı algılama özellikle patojenik bakterilerin manyetik gevşeme ve floresan emisyon modaliteleri kombinasyonu ile hedef ve bu protokol genel amacı, düşük maliyetli, taşınabilir için fonksiyonel nanosensors sentez etmektir.

Gıda kaynaklı patojen tarama kullanarak Manyeto-floresan Nanosensor: E. Coli O157: H7 hızlı tespiti

Keşfedin tarımsal suda gıda kaynaklı patojenleri tespit etme yöntemini. Escherichia coli, Salmonella ve Listeria monocytogenes için renkli algılama protokolü, Modified Moore Swab kullanarak büyük hacimli örnekleri analiz eder.

Kolorimetrik Algılama Paper-based

Daha fazla video keşfet