Name: Uyarı, Baş-ölçülü Sıçanların Alt-kortikal Beyin Yapıları içinde Juxtacellular İzleme ve Yerelleştirme Single Nöronlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Öğrenin, uyarı sıçanlarda juxtacellular kayıt yöntemiyle alt-kortikal beyin yapılarındaki tek nöron aktivitesini izlemeyi ve yerelleştirmeyi. Bu teknik, davranışsal nörobilim araştırmalarında sinir fonksiyonlarını hassas şekilde incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri'ne (MT-5877 hibesi), Ulusal Sağlık Enstitüleri'ne (NS058668 ve NS066664 hibeler) ve ABD-İsrail İki Uluslu Vakfı'na (hibe 2003222) bu çalışmaları finanse ettikleri için minnettarız.

Federal reçete hayvan bakımı ve kullanım yönergelerine uygun olarak - (350 gr 250) ve Kaliforniya San Diego Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi Deneysel protokoller dişi Long Evans fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir. 1. Vücut Kısıtlama için Rat acclimating NOT: Bir kısıtlı diyet sıçan yerleştirin. Kısıtlama (aşağıda açıklanmıştır) sıçan gelmesini hemen her gün kullanım seansından sonra günde bir kez sıçan besleyin. Ilk ağırlığının% 80 hayvan korumak için yeterli yem sağlayın. Bu miktar 250 g ağırlığında dişi Long Evans fare için günlük besleme bölgesinin yaklaşık 6 gramdır. <ol><li> Insanlar tarafından işlenen sıçan alıştırıldı. Yavaşça yaklaşık 5 saniye her 30 sn süre için elle sıçan dizginlemek. 2 gün üst üste 15 dakika bir gün için bunu yapın. Eğitim süresince stres belirtileri günlük sıçan izleyin. İşaretler i mücadele dahilkısıtlama, seslendirme ve diş gevezelik n yanıtı. </li><li> 3. günde, 15 dakika, iki arka arkaya günde bir, günde bir vücuda sınırlayıcı kumaş çorap (Şekil 1), sıçan yerleştirin. </li><li> 5 inci gününde, çorap içine sıçan yerleştirin ve deneysel jig üzerine sert bir tüp (Şekil 4) içine çorap yerleştirin. 2 ardışık günde 15 dakika günde boru sıçan bırakın. </li><li> Her antrenmandan hemen sonra sıçan besleyin. Son oturumda (6. gün) sonunda gıda sınırsız erişim sağlar. Implantasyon için son eğitim gününde aşırı stres belirtileri göstermeye yok sadece bu sıçan seçin. NOT: implantasyon için sıçanların seçimi bizim elimizde, subjektif olmasına rağmen sıçanların% 90&#39;ın üzerinde bağımlılığına duyarlı ve implantasyonu geçmesi mümkün bulundu. </li></ol> 2. Kayıt Odası ve Baş-kısıtlama Mekanizması implante <ol><li> Bir yeniden yapınBir pin konnektörüne çıplak paslanmaz çelik tel lehim teli fark olmamas. 3-5 mm kalıntıları pin tarafından ortaya böylece tel kesin. Tüm cerrahi aletler ile birlikte, referans tel otoklavlayın. </li><li> Ketamin / ksilizin anestezi yönetme. 95 mg / intraperitoneal / kg ksilizin 5 mg ile karışık kg ketamin yönetme. başlangıç ​​dozu 1 ½ 2 saat boyunca devam eder. Gerektiği gibi, her 30-45 dk sonra anestezi Supplement. Bir göz merhem ile hayvanın gözlerini yağlayın. </li><li> Anestezi uçağı belirlemek ve gerekli anestezi korumak için ayak çekme refleksini kontrol edin. </li><li> Kulak çubukları ile bir stereotaksik tutma çerçeve içinde sıçan yerleştirin (Şekil 3A). Kafasına saç tıraş ve povidon-iyot (% 10 solüsyon) ile yara sitesi dezenfekte edin. Onlar kulak zarını zarar vermez, böylece uygun kulak çubukları eklemek için özen gösterin. Künt uçlu kulak çubukları tercih edilir. </li><li> Bir neşter Yaklafl bir kesi yapmakk kulak arkasına gözlerin postero-kaudal düzeyden kafatası orta hat boyunca. Kesme ve kesiğin iki tarafında bir deri 2-3 mm&#39;lik şeridinin çıkarılması için makas kullanın. </li><li> Yanal sırtlara dışarı kafatası yüzeyini açığa çıkarmak için periost kazınması. Superglue ince bir tabaka ile maruz kafatası örtün. </li><li> ½ mm çaplı matkap çapak kullanarak, 0-80 vida biraz daha küçük çaplı, küçük bir delik delin (Malzeme bölümüne bakınız). Vida alt daha yanal üst gitmek böylece delik hemen Bregma dikiş yanal sırt karşılar, ve kafatası içine 30-45 ° açıyla yere posterior Matkap. </li><li> 30-45 ° açıyla, delik (yaklaşık 3 tur) bir 0-80 düz taban makine vida vidalayın. Altta yatan beyin dokusu zarar vermemek için çok derin bir vida için dikkatli olun. </li><li> Gösterilen konfigürasyonda 6 ek vidalar için bu işlemi tekrarlayın <strong&gt; (Şekil 3B). Tüm vidalar tabanına superglue uygulayın. </li><li> Stereotaksi manipülatör bir şırınga iğnesi yerleştirin. Bir referans işareti olarak, istenen kraniotomi konumu Bregma dikiş itibaren ölçün ve yakın iğne ile kafatası bir göçük yapmak, ama dışarıda. NOT: Bu gösteri, markanın stereotaksik koordinatları 3 mm arka ve Bregma dikiş lateral 1 mm. </li><li> Kalıcı bir kalem ile göçük işaretleyin. Bir stereotaksik referans noktası olarak hizmet verecek gibi, marka stereotaksik koordinatlarını Not (Şekil 3B). </li><li> İstenen koordinatları (3 mm posterior ve bu örnekte bregma yanal 3 mm) üzerinde merkezlenmiş bir kranyotomi yapın. Sağlam dura mater bırakın. Tadil edilmiş yapay beyin omurilik sıvısı kraniyotomi Kapak (125 mM NaCI, 10 mM glukoz, 10 mM HEPES, 3.1 mM CaCl2, 1.3 mM MgCl2, pH 7.4) içinde 13 (Şekil 3C). </li&gt; <li> 4 0.2 ml santrifüj tüp Cut - uzunluğu 5 mm, ve kapağı kesti. Kafatası üzerinde tüp yerleştirin ve Kraniotomi üzerine merkezi. </li><li> Kafatasına tüpün tabanını mühürlemek için tüpün alt etrafında diş çimento uygulayın. Maruz Kraniotomi (Şekil 3D) içine çimento sızıntı dikkatli olun. </li><li> Kontralateral kranial plaka başka bir küçük delik (yaklaşık ½ mm çapında) delin ve dikkatle referans teli takın. (Donatımı bölümüne bakınız) telin ucuna kayıt amplifikatör ile arabirimleri bir iğne lehim teli referans Construct. Referans tel hareket etmeyin bu neden olabileceği hasar olarak beyinde bir kez. </li><li> Tel sokulduğu bir delik superglue uygulanır. Bu geçici bir yerde pin ve tel mühür olacaktır. </li><li> Silikon jel kitinin iki parça karıştırın yaklaşık olarak eşit kısımlar halinde (Malzemeler kısmına bakınız). Karıştırma ve fil için iki dakika bekleyinl santrifüj tüpü yaklaşık ⅓ jel ile dolu. </li><li> Bir dik açı sonrası kelepçesini takın kafalık çubuğuna (Malzeme bölümüne bakınız). Plaka alt hayvanın burun doğru olduğunu böylece 45 ° eğim açısında tutma çubuğunun (Şekil 2B) kafa plakasını (Şekil 2A) takın. Bu deneysel jig (Şekil 4) uyacak şekilde pitch açısını ayarlamak için bir eğimölçere kullanmak yararlı olur. </li><li> Bar kulak çubukları paralel olacak şekilde stereotaksi manipülatör koluna tutma çubuğunu takın. Plaka kaudal-en vidasına lambda dikiş ve ön arka böylece bar ve plaka indirin. </li><li> Ön kafa cıvata kavrayın (bir 8-32 damızlık veya vida, Malzeme bölümüne bakınız) vidanın baş aşağı ve hayvan kuyruk doğru bakacak şekilde, bir yardım eller kol ve kelepçe ile yaklaşık 45 ° &#39;lik açıyla. O karınca değecek şekilde vidayı indirinerior 0-80 vida (Şekil 3F, G). </li><li> Diş akrilik ile yerde cıvata ve plaka sabitleyin. Kemik vida başlarının etrafında diş akrilik, referans pimini uygulayın ve santrifüj tüpünün yüzüne etrafında. Diş akrilik kuruması için yaklaşık 10 dakika bekleyin (Şekil 3H). </li><li> Implanta cilt çimentolama, diş akrilik kenarlarında diş çimento tabakası uygulayın. Çimento kurumasını bekleyin. </li><li> Santrifüj tüpünün kapağı birkaç delik karıştırmak ve tüp kapağını yerleştirin. </li><li> Yardım eller kelepçe çıkarın. Sonra dikkatlice stereotaksi kafa tutan çubuğunu kaldırmak ve daha sonra bar (Şekil 3I) kafa plaka kaldırmak. </li><li> Stereotaksi hayvan çıkarın ve yürürlükteki tüm kurallar, yönetmelikler, kanunlar ve (uygun post-operatif bakım ve izleme yönetmek, örneğin, Buprenorfin 0.02 mg / kg, 24 en az her 8-12 saatsaat). Inflamasyon implant kenarlarında oluşursa çözülene kadar, günlük etkilenen site antibiyotik merhem ince bir tabaka uygulayın. </li></ol> Nöronal Birimleri 3. Juxtacellular İzleme <ol><li> Bir karbondioksit lazer mikropipet çektirmesi üzerine kuvars kılcal boru çekin az 1 mikron (Şekil 5A) ucu çapları (Ekipman bölümüne bakınız). NOT: ısıtma parametreler arasında özellikle araca göre değişecektir ve gerekli olan boyun çapının ilgi beyin yapısına bağlı olarak değişecektir ki. Sıçan talamus kayıtları için, mikropipetler 5-7 mm arasında değişen boyunları var. </li><li> Uzun çalışma mesafesi hedefleri ile donatılmış bir diferansiyel girişim kontrast (DIC) mikroskop altında yerine pipet sabitleyin. Mikroskop sahnede yerinde pipet tutmak için modelleme kil kullanın. </li><li> Mak için kullanılan bir cam parçası, 1 cm kalınlığında - Yavaşça 0.5 cam bloğu (hareketUltra-mikrotom bıçak ing pipet ile görüş alanı içine) uygundur. Sahne mikromanipülatör kullanarak, yavaşça kırmaya neden cama pipet dokunun. Pipet dış çapı 1-3 mikron arasında olana kadar gerekli tekrarlayın (Şekil 5B, C). Bu mikropipetler yaklaşık 5-15 MΩ arasındaki empedanslara sahip olduğundan emin olun. </li><li> Hücre-dışı tuzlu su (135 mM NaCI, 5.4 mM KCI, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, NaOH ile 5 mM HEPES, pH 7.2) ile 8 Hazırlama Chicago Sky Blue (ağ / hac)% 2 ekleyin. 30 G iğne ya da daha küçük olan bir şırınga kullanılarak, çözelti ile pipet arka uç doldurun. Seçenek olarak ise, tek bir hücre juxtacellular etiketleme için% 2 ilave (ağırlık / hacim) neurobiotin da biyotinile edilmiş dekstran amin (BDA-3000 ya da BDA-10000) ve Chicago Sky Blue yerine tuzlu su çözeltisine ilave edilir. </li><li> Uygun bir deneysel jig üzerinde sert tüp içinde bez çorap içine sıçan yerleştirin ( <strong&gt; Şekil 4) .Wait kafa tutma jig üzerinde hayvan yerleştirmeden önce ameliyat sonrası 72 saat en az. Havayolu tıkanıklığı önlemek için, yerine boyun daha üst sternum etrafında İpli sıkın. Solunum zorlanarak veya tıkalı gibi görünüyorsa, İpli gevşetin veya posterior taşıyın. Sıçan uyarı ise bu yordamı uygulayın. </li><li> Jig karşılık gelen parça sıçan baş-frenleyici plaka takın. Bunu yapmak için, ilk etapta baş kısıtlama plaka pin ve daha sonra bir 4-40 vida kullanarak sabitleyin. Hayvan başına aşırı tork uygulayarak önlemek için sakin beklemek emin olun. Sonraki sıçan implante edilir kafa frenleyici cıvata somunu bir 8-32 yerleştirin. Sonra baş cıvata dişli paslanmaz çelik çubuk vida. Yerine sıkılabilecek bir şekilde (Şekil 4) &#39;de deneysel jig çubuğun yapıştırın. NOT: Baş-kısıtlama plaka min yanı sıra baş cıvata ile hayvan güvenliğinidüzeneğin bükme imizes ve kayıt kararlılığını geliştirir. İlk gün başlayabilir kayıt Çoğu durumda hayvan kafa ölçülü olduğunu. Hayvan aşırı kıpırdıyor veya seslendirir Ancak, herhangi bir kayıtları başlamadan önce baş-emniyet alışma eğitimi bir gün sunmak. Bu durumda, 15 dakika boyunca şablon üzerine hayvan bırakın ve daha sonra kafes içinde geri koyun. Ertesi gün bu adımı tekrarlayın ve protokol ile devam edin. </li><li> Kayıt odasına açın ve silikon jel çıkarın. Doku Kraniotomi yeniden büyüdü eğer ince forseps kullanarak kraniotomiye temizleyin. </li><li> Motorlu mikromanipülatör pipet takın ve headstage öncesi amplifikatör takın. NOT: Bu gösteride, headstage küçük bir röle devresi amplifikatör kurşun teller ve yüksek uyum (Şekil 6A-C) ile harici akım kaynağı arasında geçiş yapmak için kullanılır. Bazı amplifikatörler yerleşik bir uygun en yüksek uyum kaynağı olduğunu unutmayın(Tartışma ve Malzeme bölümlerine bakınız). </li><li> Kayıt odasında stereotaxically tespit işareti pipet ucu taşımak için motorlu mikromanipülatör kullanın. Bu konumun koordinatlarını unutmayın. Kafatası üzerinde pipet ucu kırmak için değil dikkatli olun. </li><li> Ön-arka ve iç-dış eksende istenilen kayıt konuma pipet taşıyın. Amaçlanan kayıt konumuna yaklaşık 500 mikron dorsal kadar Sonra dura ile ventral pipet ilerlemek. </li><li> Pipet ve referans tel arasında kaydedilen güçlendirilmiş gerilim bir ses monitörde olayları spike için dinlerken yavaşça pipet ilerlemek. Bir kez spiking olaylar tespit edilir, yaklaşık 500 mV gözlenir daha fazla pozitif gidiş gerilim sapması kadar pipet 0-100 mikron hareket devam ediyor. NOT: elektrot direnci yaklaşık 1,5-10 wh bir faktör artacakBu durumda en. </li><li> Bir kez birim ilgi tüm diğer davranışsal ve fizyolojik önlemlerle birlikte, 3.11 adıma göre izole edilmiş kayıt başlayın. Bu gösteride, kendi ürettiği bıyık hareketleri (Malzeme bölümüne bakınız) yüksek hızda videografi ile izlenmektedir. </li><li> Kayıt siteyi etiketlemek için, elektrot akım kaynağına bağlanmak yol açar geçiş. , Yerleşik bir el mevcut amplifikatör kaynağı, ya da (Şekil 6D, bkz adım 3.8 ve Tartışma) - ya bir röle devresi (C Şekil 6A) kullanarak bunu yapmak için birkaç yolu vardır. Geçiş -4 uA% 50 işlem devirinde 2 sn darbeleri ile 4 dakika boyunca iyontoferik pipet ile Chicago Sky Blue enjekte edilmesiyle gerçekleştirilebilmektedir. </li><li> Öldürmek ve standart uygulamaya göre çeşitli etiketleme prosedürlerinden sonra hayvan serpmek. Bölüm olarak gerekli beyin ve counterstain kayıt anatomik konumu oturup tanımlamak içinör. 14 uyarınca sitokrom oksidaz reaktiflik için doku Counterstain. Alternatif olarak, floresan mikroskobu kullanarak Chicago Sky Blue mevduat tespit. NOT: doğru etiketler arasında pipet çözülmesini olmadan, tüm etiketler aynı gün aynı pipet ile yapılır önemlidir farklı etiketli birimler ayırt etmek. Bu durumda kayıt siteleri her sitenin kaydetti manipülatör koordinatları ile birlikte post-hoc histoloji onların göreceli konumlara göre ayırt edilebilir (adım 3.9 bakınız). Kesin tanımlama için, birbirlerine ve beyin bölgelere göre en fazla 3-5 etiket en az 200 mikron dışında etiketleri işaretleyin. </li></ol>

<ol><li>Fee, M. S., Leonardo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniature+motorized+microdrive+and+commutator+system+for+chronic+neural+recording+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Miniature motorized microdrive and commutator system for chronic neural recording in small animals.</a> Journal of Neuroscience Methods. 112 (2), 83-94 (2001).</li>
<li>Ventakachalam, S., Fee, M. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-miniature+headstage+with+6-channel+drive+and+vacuum-assisted+micro-wire+implantation+for+chronic+recording+from+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Ultra-miniature headstage with 6-channel drive and vacuum-assisted micro-wire implantation for chronic recording from neocortex.</a> Journal of Neuroscience Methods. 90 (1), 37-46 (1999).</li>
<li>Szuts, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+wireless+multi-channel+neural+amplifier+for+freely+moving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A wireless multi-channel neural amplifier for freely moving animals.</a> Nature Neuroscience. 14 (2), 263-269 (2011).</li>
<li>Roy, S., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wireless+multi-channel+single+unit+recording+in+freely+moving+and+vocalizing+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Wireless multi-channel single unit recording in freely moving and vocalizing primates.</a> Journal of neuroscience. 203 (1), 28-40 (2012).</li>
<li>Hill, D. N., Mehta, S. B., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+metrics+to+accompany+spike+sorting+of+extracellular+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Quality metrics to accompany spike sorting of extracellular signals.</a> Journal of Neuroscience. 31 (24), 8699-8705 (2011).</li>
<li>Pinault, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+single-cell+staining+procedure+performed+in+vivo+under+electrophysiological+control%3A+morpho-functional+features+of+juxtacellularly+labeled+thalamic+cells+and+other+central+neurons+with+biocytin+or+Neurobiotin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">A novel single-cell staining procedure performed in vivo under electrophysiological control: morpho-functional features of juxtacellularly labeled thalamic cells and other central neurons with biocytin or Neurobiotin.</a> Journal of neuroscience. 65 (2), 113-136 (1996).</li>
<li>Person, A. L., Perkel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pallidal+neuron+activity+increases+during+sensory+relay+through+thalamus+in+a+songbird+circuit+essential+for+learning%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pallidal neuron activity increases during sensory relay through thalamus in a songbird circuit essential for learning.</a> The Journal of neuroscience. 27 (32), 8687-8698 (2007).</li>
<li>Kock, C. P., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiking+in+primary+somatosensory+cortex+during+natural+whisking+in+awake+head-restrained+rats+is+cell-type+specific%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+USA%22%5BJournal%5D)">Spiking in primary somatosensory cortex during natural whisking in awake head-restrained rats is cell-type specific.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 106 (38), 16446-16450 (2009).</li>
<li>Connor, D. H., Peron, S. P., Huber, D., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+activity+in+barrel+cortex+underlying+vibrissa-based+object+localization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Neural activity in barrel cortex underlying vibrissa-based object localization in mice.</a> Neuron. 67 (6), 10481061(2010).</li>
<li>Hellon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+marking+of+electrode+tip+positions+in+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">The marking of electrode tip positions in nervous tissue.</a> The Journal of physiology. 214, 12P(1971).</li>
<li>Furuta, T., Deschênes, M., Kaneko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+distribution+of+thalamocortical+boutons+in+barrels%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Anisotropic distribution of thalamocortical boutons in barrels.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (17), 6432-6439 (2011).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Rat+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. (1986).</li>
<li>Kleinfeld, D., Delaney, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distributed+representation+of+vibrissa+movement+in+the+upper+layers+of+somatosensory+cortex+revealed+with+voltage+sensitive+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Distributed representation of vibrissa movement in the upper layers of somatosensory cortex revealed with voltage sensitive dyes.</a> Journal of Comparative Neurology. 375 (1), 89-108 (1996).</li>
<li>Wong-Riley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+visual+system+of+monocularly+sutured+or+enucleated+cats+demonstrable+with+cytochrome+oxidase+histochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Changes in the visual system of monocularly sutured or enucleated cats demonstrable with cytochrome oxidase histochemistry.</a> Brain research. 171 (1), 11-28 (1979).</li>
<li>Moore, J. D., Deschênes, M., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-generated+vibrissa+motion+and+touch+are+differentially+represented+throughout+ventral+posterior+medial+thalamus+in+awake%2C+head-fixed+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Society+for+Neuroscience+Annual+Meeting.+41+496.08%2FTT424+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Self-generated vibrissa motion and touch are differentially represented throughout ventral posterior medial thalamus in awake, head-fixed rats.</a> Society for Neuroscience Annual Meeting. 41 496.08/TT424 Society for Neuroscience. 41, (2011).</li>
<li>Khatri, V., Bermejo, R., Brumberg, J. C., Zeigler, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whisking+in+air%3A+Encoding+of+kinematics+by+VPM+neurons+in+awake+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+and+Motor+Research%22%5BJournal%5D)">Whisking in air: Encoding of kinematics by VPM neurons in awake rats.</a> Somatosensory and Motor Research. 27 (2), 344-356 (2010).</li>
<li>Hill, D. N., Curtis, J. C., Moore, J. D., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+motor+cortex+reports+efferent+control+of+vibrissa+position+on+multiple+time+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Primary motor cortex reports efferent control of vibrissa position on multiple time scales.</a> Neuron. 72 (2), 344-356 (2011).</li>
<li>Moore, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchy+of+orofacial+rhythms+revealed+through+whisking+and+breathing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hierarchy of orofacial rhythms revealed through whisking and breathing.</a> Nature. 497, 205-210 (2013).</li>
<li>Duque, A., Zaborszky, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuque%2C+A+%22Neuroanatomical+Tract-Tracing+3%22">Neuroanatomical Tract-Tracing 3</a>. , Springer. 197-236 (2006).</li>
<li>Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://kationscientific.com/fsubstances.html">http://kationscientific.com/fsubstances.html</a> Forthcoming.</li>
<li>Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://kationscientific.com/fdyes.html">http://kationscientific.com/fdyes.html</a> Forthcoming.</li>
<li>Urbain, N., Deschênes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroactive+substances%3A+Neuropharmacology+by+microiontophoresis.+%28Kation+Scientific%29%2C+Dyes+and+Tracers%3A+Sitemarking+and+tracktracing+by+microiontophoresis.+%28Kation%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. (Kation Scientific), Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. (Kation).</a> Journal of Neuroscience. 27 (45), 12407-12412 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

Deneysel jig İnşaatı Bu çeşitli şekillerde imal edilebilir deney jig (Şekil 4) oluşturmak için kullanılan mekanik parçaların açıklaması protokol atlandı. Bu gösteri standardında opto-mekanik parça ve destek kelepçeler kafalık bar ve vücut kısıtlama tüp (Malzeme bölümüne bakınız) monte etmek için kullanılır. Benzer opto-mekanik parçalar motorlu mikromanipülatör elektrot tutucu monte etmek için de kullanılabilir. Bu jig üzerine k...

Aktif bir davranış görev yapan bir uyarı hayvanda nöronal aktivitenin izlenmesi sinir sisteminin fonksiyonunu ve organizasyonunu anlamak için önemlidir. Tek nöronal birimlerinden gelen elektriksel aktivite Hücre dışı kayıt uzun sistemleri nörobilim bir elyaf araç olmuştur ve şu anda kullanımda yaygın hala gelmiştir. Elektrot türleri ve yapılandırmaları çeşitli özel bir deney bilimsel ve teknik taleplerine bağlı olarak mevcuttur. Kronik mikro sürücü implante veya elektrot dizileri genellikle kuşlar, kemirgenler ve insan olmayan primatlar 1-4 de dahil olmak üzere serbest hareket eden hayvanlar, kullanılır. Alternatif olarak, harici bir mikromanipülatör yoluyla, metal veya cam Mikroelektronlar akut girmeler genellikle anestezi veya kafa ölçülü hayvanlardan kaydetmek için kullanılır. Cam mikropipet elektrotlar juxtacellular kullanılan ya da &quot;hücre bağlı&quot; gibi bir avantajı vardır yapılandırma açıkça izole etmek için5 sıralama post-hoc başak komplikasyon olmadan tek nöronların aktivitesi. Onlar boya veya Nöroanatomik izleyiciler küçük mevduat enjekte, hatta tek bir hücre kaydedildi doldurmak için kullanılabilir gibi Bu elektrotlar daha, anatomik tanımlanan hücreleri veya konumlardan kayıt izin. Bu yapılandırma, başarılı bir fare, sıçan ve kuşlar 6-10 uygulanmıştır. Şu anda açıklanan teknik juxtacellular izleme ve uyarı hücre dışı boya mevduat, baş-ölçülü fareler üzerinde duruluyor. Bu boya mevduat hücre morfolojisi veya aksonal projeksiyonlar 11 hakkında bilgi vermemektedir doldurur juxtacellular ki aksine tek hücre Not, ancak uyarı hayvanlarda önemli ölçüde daha yüksek verime sahip, eleştirel, yaklaşık 50 um kesin anatomik lokalizasyon etkinleştirin ve. Yine anatomik etiketlenmesi için alternatif bir strateji olarak sağlanır doldurur juxtacellular tek hücre ile ilgili bilgiler. Kısaca,protokol üç ana aşamadan oluşmaktadır. İlk aşamada, sıçan 6 günlük bir süre boyunca bir bez çorap (Şekil 1) vücut kısıtlama alıştırıldı edilir. İkinci aşamada ise, bir kafalık cihazı (Şekil 2) ve kayıt odası cerrahi sıçan birden sonraki kayıt seansları (Şekil 3) sırasında sterotaksik düzlemde muhafaza edilebilir şekilde implante edilir; Bu prosedür, standart referans 12 koordinatları dayalı elektrofizyolojik çalışma için beynin belirli alt-kortikal bölgeleri hedef deneyci sağlar. Üçüncü aşama açıkça tek birimleri 6-9 izole juxtacellular nöronal kayıtları, (Şekil 5) kuvars kılcal tüpten elektrot inşa, davranışsal ve elektrofizyolojik deneyleri (Şekil 4) yürütmek yapmak için uygun bir jig sıçan yerleştirerek içerir ve anatomik Locati işaretlemeChicago Sky Blue boya (Şekiller 6 ve 7) ile kayıt site üzerinde. kayıtlar eş zamanlı davranışsal izleme ile yapılır; Bununla birlikte, davranış teknik detayları Her deney bilimsel hedeflerine bağlı olacak ve tek bir protokol kapsamı dışında kalırlar. Birden fazla gün tekrar edilebilir deney prosedürünün tamamlanmasından sonra, hayvan kurban edilir. Beyin parlak alan veya floresan mikroskobu kullanarak standart nöroanatomik tekniklere göre ayıklanır ve işlenir.

<table><tbody><tr><td>Ketaset (Ketamin HCl)</td><td>Fort Dodge</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Anased (Ksilazin çözeltisi)</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Betadin (Povidon-İyot)</td><td>CVS Eczane</td><td>269281</td><td></td></tr><tr><td>Loctite 495</td><td>Grainger Endüstriyel Tedarik</td><td>4KL86</td><td>20 - 40 cp siyanoakrilat</td></tr><tr><td>Vetbond</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Kavrama çimentosu toz</td><td>Dentsply Intl</td><td>675571</td><td>Kayıt odasının tabanı için</td></tr><tr><td>Kavrama çimento sıvısı</td><td>Dentsply Intl</td><td>675572</td><td>Kayıt odasının tabanı için</td></tr><tr><td>Silikon jel</td><td>Dow Corning</td><td>3-4680</td><td></td></tr><tr><td>Jet protez onarımı akrilik toz</td><td>Lang Dental Manufacturing Co.</td><td>N/A Baş</td><td>dayanağı aparatını kafatasına sabitlemek için</td></tr><tr><td>Ortho-Jet Hızlı kürlenen ortodontik akrilik reçine sıvısı</td><td>Lang Dental Manufacturing Co.</td><td>N/A Baş</td><td>dayanağı aparatını kafatasına sabitlemek için</td></tr><tr><td>Chicago gök mavisi</td><td>Sigma</td><td>C8679</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma</td><td>158127</td><td>Perfüzyon ve doku fiksasyonu için</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Sigma</td><td>P3813</td><td>Perfüzyon ve doku fiksasyonu için</td></tr><tr><td>Sitokrom C</td><td>Sigma</td><td>C2506</td><td>Sitokrom-oksidaz boyama için, < güçlü>Şekil 7</güçlü></td></tr><tr><td>Diaminobenzidin</td><td>Sigma</td><td>D5905</td><td>Sitokrom-oksidaz boyama için, <güçlü>Şekil 7</güçlü></td></tr><tr><td>Sıçan çorabı</td><td>Sew Elegant (San Diego, CA)</td><td>N/A</td><td>Özel yapım, <güçlü>Şekil 1, 4</güçlü></td></tr><tr><td>PVC tüp 2 ve frak12; "</td> dedi.<td>ABD Plastik A.Ş.</td><td>34108</td><td>Figure 4</strong</td></tr><tr><td>>Subminiature D pinleri ve soketleri</td><td>TE Connectivity</td><td>205089-1</td><td>Figure 3</td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik müzik teli 0.010" çap</td><td>Precision Brand Products, Inc.</td><td>21010</td><td><güçlü>Şekil 3</güçlü></td></tr><tr><td>Stereotaksik tutma çerçevesi</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 900</td><td><güçlü>Şekil 3</güçlü></td></tr><tr><td>Stereotaksik kulak çubukları</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 957</td><td><güçlü>Şekil 3</güçlü></td></tr><tr><td>Stereotaksik manipülatör</td><td>Kopf Aletleri</td><td>Model 960</td><td><güçlü>Şekil 3</güçlü></td></tr><tr><td>&frac12; mm matkap çapağı</td><td>Henry Schein</td><td>100-3995</td><td></td></tr><tr><td>Sessiz Havalı diş matkabı</td><td>Midwest Dental</td><td>393-1600</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik 0-80 & frac18; &rdquo; vidalı</td><td>Bağlantı Elemanı superstore</td><td>247438</td><td><güçlü>Şekil 3</güçlü</td></tr><tr><td>>0.2 ml santrifüj tüpü</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-407-8A</td><td>Şekil 3</güçlü></td></tr><tr><td>Özel kafa tutma çubuğu</td><td>UCSD SIO Makine Atölyesi</td><td>N/A</td><td>Özel yapım, <güçlü>Şekil 2 - 4</güçlü></td></tr><tr><td>Özel kafa tutma plakası</td><td>UCSD SIO Makine Atölyesi</td><td>N/A</td><td>Özel yapım, <güçlü> Şekil 2 - 4</güçlü></td></tr><tr><td>Dik açılı kelepçe sonrası</td><td>Newport</td><td>MCA-1</td><td><güçlü>Şekil 3, 4</güçlü> deneysel jig için standart opto-mekanik parçalar (<güçlü>Şekil 4</güçlü>) de Newport Corp.'tandır.</td></tr><tr><td>8-32 ve frak34; &rdquo; vidalı</td><td>Bağlantı Elemanı Superstore</td><td>240181</td><td>Baş desteği için, <güçlü>Şekil 3</güçlü></td></tr><tr><td>4-40 &frac14; &rdquo; vidalı</td><td>Bağlantı Elemanı Superstore</td><td>239958</td><td>Baş desteği için, <güçlü>Şekil 3, 4</güçlü></td></tr><tr><td>Kuvars kılcal boru</td><td>Sutter Instruments</td><td>QF-100-60-10</td><td>Şekil 5</td></tr><tr><td>Karbondioksit lazer çektirme</td><td>Sutter aletleri</td><td>P-2000</td><td></td></tr><tr><td>Motorlu mikromanipülatör</td><td>Sutter Instruments</td><td>MP-285</td><td></td></tr><tr><td>Mikroelektrot amplifikatörü</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>Multiclamp 700B</td><td>Alternatif bölüm: Moleküler Cihazlar Axoclamp 900A</td></tr><tr><td>Mikroelektrot amplifikatör kafa aşaması</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>CV-7B</td><td>Alternatif bölüm: Moleküler Cihazlarla HS-9Ax10 Axoclamp 900A</td></tr><tr><td>İzole nabız stimülatörü</td><td>Sistemleri</td><td>Model 2100</td><td>Alternatif bölüm: Moleküler Cihazlar ile HS-9Ax10 Axoclamp 900A</td></tr><tr><td>Ses monitörü</td><td>Radio Shack</td><td>32-2040</td><td></td></tr><tr><td>Pipet tutucu</td><td>Warner Instruments</td><td>#MEW-F10T</td><td>Alternatif parçalar: bkz. <güçlü>Tartışma</güçlü>, <güçlü>Şekil 6A</güçlü></td></tr><tr><td>Elektrot kurşun tel</td><td>Cooner tel</td><td>NEF34-1646</td> <td>(isteğe bağlı), <güçlü>Şekil 6D< / güçlü></td></tr><tr><td>Amplifikatör kafa aşaması</td><td>için röle COTO Teknolojisi</td> <td># 2342-05-000</td><td>(isteğe bağlı) Özel yapım bir baskılı devre kartı (UCSD Physics Electronics Shop) ile birlikte kullanılır, <güçlü>Şekil 6A-C< / güçlü></td></tr><tr><td>Dijital video kamera</td><td>Basler</td><td>A602fm</td> <td>(isteğe bağlı) Davranışsal izleme için, <güçlü>Şekil 7</güçlü></td></tr><tr><td>Puralube veteriner merhemi</td><td>Amazon.com, Inc</td><td>NC0138063</td><td></td></tr></tbody></table>

uyarı, baş-ölçülü sıçanların alt-kortikal beyin yapıları içinde juxtacellular İzleme ve yerelleştirme single nöronlar

Juxtacellular Monitoring and Localization of Single Neurons within Sub-cortical Brain Structures of Alert, Head-restrained Rats

Tek nöronal birimlerin hücre dışı aktivitesini izlemek için çeşitli teknikler vardır. Bununla birlikte, bu aktivitenin davranan hayvanlardaki derin beyin yapılarından izlenmesi, özellikle yapıların stereotaksik olarak hedeflenmesi gerekiyorsa, teknik bir zorluk olmaya devam etmektedir. Bu protokol, hayvanın kafasını stereotaksik düzlemde tutan ve tek nöronların ani aktivitesini açık bir şekilde izole eden uygun cerrahi ve elektrofizyolojik teknikleri açıklar. Protokol, post-hoc histolojide nöron konumunu belirlemek için uyarı kemirgenlerinin baş desteğini, mikropipet elektrotlarla juxtaselüler izlemeyi ve iyontoforetik boya enjeksiyonunu birleştirir. Bu tekniklerin her biri kendi içinde iyi kurulmuş olsa da, protokol tek bir deneyde birleşik kullanımlarının özelliklerine odaklanır. Bu nörofizyolojik ve nöroanatomik teknikler davranışsal izleme ile birleştirilir. Mevcut örnekte, somatosensoriyel talamus içindeki nöronların aktivitesinde kendi kendine üretilen vibrissa hareketlerinin nasıl kodlandığını belirlemek için kombine teknikler kullanılmıştır. Daha genel olarak, sıçanlarda, farelerde ve diğer hayvanlarda çeşitli davranışsal görevlerle birlikte nöronal aktiviteyi izlemek için bu protokolü uyarlamak kolaydır. Kritik olarak, bu yöntemlerin kombinasyonu, deneycinin anatomik olarak tanımlanmış nörofizyolojik sinyalleri davranışla doğrudan ilişkilendirmesine izin verir.

<html> Bir sıçan aktif çırpma gibi bıyık hareketinin faz kendi ürettiği 15,16 çırpma esnasında kodlamak talamus ventral posterior medial (VPM) nöronal birimler. Şekil 7A bir VPM talamik birimin örnek spike aktivitesini gösterir. Şekil 7B başak bir histogram gösterir Zaman bıyık hareket 17 anlık aşamasına hizada. Çırpma geri çekilme aşamasında daha fazla sivri vardır. Şekil 7C&#39;de gösterildiği gibi Kayıttan sonra, ünitenin yeri, Chicago gök mavisi...

Bu protokol, uyanık sıçanlarda subkortikal beyin yapılarındaki nöronal aktiviteyi izlemek için bir kafa kısıtlama mekanizmasının tasarımını ve cerrahi implantasyonunu açıklar. Juxtacellular konfigürasyondaki tek nöronları izole etmek ve anatomik konumlarını verimli bir şekilde tanımlamak için prosedürleri tanımlar.

Uyarı, Baş-ölçülü Sıçanların Alt-kortikal Beyin Yapıları içinde Juxtacellular İzleme ve Yerelleştirme Single Nöronlar

There are a variety of techniques to monitor extracellular activity of single neuronal units. However, monitoring this activity from deep brain structures ...

Bu prosedürün genel amacı, uyanık ve başı sabitlenmiş sıçanların subkortikal beyin yapıları içindeki tekil nöronların aktivitesini izlemek ve lokalize etmektir. Bu işlem, öncelikle sıçanın kumaş bir çorap yardımıyla vücut sabitlemesine alıştırılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, sıçanın sonraki birden fazla kayıt oturumu boyunca stereotaksik düzlemde tutulabilmesi için bir baş sabitleme aparatı ve kayıt odacığının cerrahi olarak implante edilmesidir.Ardından, sıçan davranışsal ve elektrofizyolojik deneylerin yürütülmesi için uygun bir düzeneğe yerleştirilir ve juksaselüler nöronal kayıtlar gerçekleştirilir. Bu işlem, tekil birimlerin kesin bir şekilde izole edilmesini sağlar. Son adım, kayıt yerinin anatomik konumunun, post hoc histoloji ile görselleştirilebilmesi için Chicago Sky mavisi boya ile işaretlenmesidir.Bu tekniğin metal mikroelektrotlarla yapılan hücre dışı kayıt gibi yaygın olarak kullanılan yöntemlere göre temel avantajı, tekil ünitelerden gelen spike'ların kesin bir şekilde izole edilebilmesi ve kayıt bölgesinin post hoc histolojide ortaya çıkarılabilmesidir. Bu prosedüre başlamak için hayvanı ketamin xylazin enjeksiyonu ile anesteziye alın. Anestezi düzeyini belirlemek için parmak çekilme refleksini kontrol edin ve anestetik uygulamasına devam ederek anesteziyi sürdürün.Gerekiyorsa başı tıraş edin ve cerrahi bölgeyi povidon iyot ile dezenfekte edin. Ardından, sıçanı bir stereotaksik tutucu çerçeveye yerleştirin ve başını kulak barlarıyla sabitleyin. Bir bistüri ile, gözlerin orta noktasından kulakların arkasına kadar kranyumun orta hattı boyunca bir insizyon yapın.Ardından, insizyonun her iki yanından iki ila üç milimetrelik bir deri şeridini kaldırın. Lateral sırtlara kadar uzanacak şekilde kraniyumu açığa çıkarmak için periostu kazıyın. Sonrasında, açığa çıkan kraniyumu ince bir tabaka hızlı yapıştırıcı ile kaplayın.Ardından, bgma sütürünün lateral sırt ile birleştiği yerin hemen arkasına, kraniyuma doğru 30 ila 45 derecelik bir açıyla küçük bir delik açın. Daha sonra, deliğe 30 ila 45 derecelik bir açıyla sıfır 80 düz tabanlı makine vidası takın; alttaki beyin dokusuna zarar vermemek için vidanın çok derin girmediğinden emin olun.Bu prosedürü aynı konfigürasyondaki diğer altı vida için tekrarlayın. Ardından, tüm vidaların tabanına hızlı yapıştırıcı uygulayın. Şimdi şırınga iğnesini stereotaksik manipülatöre yerleştirin.Uygun bir referans konumunu işaretlemek için iğne ile kranyumda bir çentik oluşturun. Ardından bu çentiği kalıcı bir markör ile işaretleyin. Sonrasında, istenen koordinat merkezli bir kraniyotomi gerçekleştirin ve dura materi sağlam bırakın.Kraniyotomi bölgesini modifiye yapay beyin omurilik sıvısı ile kaplayın. Ardından, 0,2 mililitrelik bir santrifüj tüpünü dört ila beş milimetre uzunluğunda kesin ve kapağını çıkarın. Tüpü kafatası üzerine yerleştirin ve kraniyotomi bölgesinin merkezine hizalayın.Ardından, tüpün tabanını kraniyuma sabitlemek için tüpün alt kısmına diş simanı uygulayın. Simanın açık olan kraniyotomi bölgesine sızmamasına dikkat edin. Şimdi karşıt taraftaki kranial plakaya başka bir küçük delik açın.Bir pin konnektörüne lehimlenmiş olan referans telini dikkatlice yerleştirin. Ardından, pini ve teli sabit tutmak için telin yerleştirildiği deliğe hızlı yapıştırıcı uygulayın. Sonra, silikon jel kitinin iki parçasını eşit oranlarda karıştırın.İki dakika bekleyin ve santrifüj tüpünü jel ile doldurun. Yaklaşık üçte biri dolduğunda, kafa plakasını kafa sabitleme çubuğuna takın. Burada çubuk, 45 derecelik bir eğim açısıyla dik açılı bir direk klemense tutturulmuştur.Ardından, tutma çubuğunu post klembini kullanarak stereo taksik manipülatör koluna, çubuk kulak barlarına paralel olacak şekilde sabitleyin; plak lambda sutürünün posteriorunda ve coddle mos vidasının anteriorunda kalacak şekilde çubuğu ve plağı indirin. Daha sonra, vidanın başı aşağıya ve hayvanın kuyruğuna bakacak şekilde, ön kafa civatasını bir klemple yaklaşık 45 derecelik bir açıyla kavrayın. Bundan sonra, vidayı kranyuma değecek şekilde indirin.Ardından, cıvatayı ve plakayı dental akrilik ile sabitleyin. Cildi implanta yapıştırmak için dental akriliğin kenarları boyunca bir kat dental çimentoya uygulayın. Çimento kuruduktan sonra, santrifüj tüpünün kapağına birkaç delik açın ve kapağı tüpe yerleştirin.Şimdi klempi çıkarın. Baş tutma çubuğunu stereotaksik cihazdan dikkatlice çıkarın. Ardından, baş plakasını çubuktan çıkarın.Son aşamada, hayvanı stereotaktik düzeneğinden çıkarın, postoperatif bakım ve izleme uygulayın. Bu prosedürde, karbon dioksit lazer mikro pipet ucuna sahip kuvars kapiler tüplü bir pipet kullanın. Ardından, pipeti uzun çalışma mesafeli objektife sahip bir diferansiyel girişim kontrast mikroskobu altında sabitleyin.Bir pipet ucuyla cam bloğu yavaşça görüş alanına getirin. Sahne mikro manipülatörünü kullanarak, pipet ucunu cama hafifçe dokundurarak kırın. Pipet ucu istenen hale gelene kadar prosedürü tekrarlayın.Dış çap bir ile üç mikrometre arasındadır. Ardından, hücre dışı salini hazırlayın ve %2 Chicago sky blue ekleyin. 30 gauge iğneli bir şırınga kullanarak pipetin arka ucunu solüsyonla doldurun.Ardından sıçanı bez çoraba yerleştirin ve bez çorabı uygun bir deney düzeneği üzerindeki sert tüpe aktarın. Sıçan üzerindeki baş sabitleme plakasını düzeneğin ilgili parçasına tutturun. Daha sonra sıçana implante edilmiş olan baş sabitleme cıvatasına bir 8 32 somun yerleştirin.Ardından, dişli paslanmaz çelik bir çubuğu kafa vidasına vidalayın. Bundan sonra, kayıt odasını açın ve silikon jeli çıkarın. İnce penset kullanarak kraniyotomi bölgesini temizleyin.Kraniyotomide doku yeniden büyümüşse, bu işlem sırasında gerekirse izofloran anestezisi uygulayın. Ardından, pipeti motorlu mikromanipülatöre takın. Pipeti anterior, posterior ve medyal lateral eksenlerde istenen kayıt konumuna getirin.Ardından pipeti, hedeflenen kayıt konumunun yaklaşık 500 mikrometre dorsalinde olana kadar dura boyunca ventral yönde ilerletin. Kaydedilen yükseltilmiş voltajın ses monitöründen spike olaylarını dinleyerek pipeti yavaşça ilerletin. Spike olayları belirlendiğinde, pozitif voltaj sapmaları yaklaşık 500 mikrovoltun üzerine çıkana kadar pipeti yaklaşık 0 ila 100 mikrometre daha hareket ettirmeye devam edin.Kayıt bölgesini işaretlemek için, akım kaynağını %50 görev döngüsünde iki saniyelik darbelerle negatif dört mikroampere ayarlayın ve akımı dört dakika boyunca iyonofora uygulayın, ardından pipet aracılığıyla Chicago sky blue enjekte edin. Deneyden sonra, hayvanı standart uygulamaya göre perfüze edin. Ardından, gösterilen kayıt bölgesinin anatomik konumunu belirlemek için beyni dilimleyin ve gerektiğinde karşıt boyama yapın.Burada, bir sıçan aktif olarak bıyık sallarken bir VPM talamik biriminin örnek spike aktivitesi görülmektedir. Burada, Vibra hareketinin anlık fazına göre hizalanmış spike zamanlarının bir histogramı yer almaktadır. Bıyık sallamanın geri çekilme fazı sırasında daha fazla spike görülmektedir.Kayıttan sonra, bu ünitenin konumu Chicago sky blue boyasının aferesis yoluyla işaretlenmiştir. Burada gösterildiği gibi, VPM talamusunun nöroanatomik sınırlarını ortaya çıkarmak için doku, sitokrom oksidaz aktivitesi için karşıt boyanmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, hayvanın başını stereotaksik düzlemde tutan ve tekil nöronların spiking aktivitesini kesin olarak izole eden cerrahi ve elektrofizyolojik tekniklerin nasıl uygulanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

juxtacellular-monitoring-localization-single-neurons-within-sub

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Hayvanların serbestçe hareket eden, farklı beyin bölgeleri ekstrasellüler nörotransmitter düzeylerinin izlenmesi nörotransmitter salınımı ve davranış arasındaki bağlantıyı irdeliyoruz. Ve bazal nörotransmisyon farmakolojik veya fizyolojik manipülasyonlar nasıl değiştirdiğini hakkında bilgi; in vivo mikrodiyaliz elektrokimyasal algılama ile birleştiğinde mükemmel anatomik ve kimyasal çözünürlük sağlar.

Kemirgenler içinde Kurtarılabilir Stereotaksik Cerrahi

Silikon sondalar anestezi sıçan kullanarak nöronal aktivitenin Ekstrasellüler kayıtları açıklanacaktır. Bu teknik, aynı anda 100 den fazla nöron birden çok beyin bölgelerinin daha fazla bilgi almak sağlar. Bu tek hücre çözünürlük ile, birden fazla yerel devrelerin nöronal toplulukları dinamikleri hakkında bilgi sağlar.

Anestezi Rat Silikon Probları Büyük ölçekli Nöronal Toplulukları Kaydı

Bu video, anestezi uygulanmış bir sıçanın birden fazla bölgeden beyin aktivitesinin elektrofizyolojik kayıtları için hazırlanmasına yönelik ayrıntılı prosedürü göstermektedir. Kafatasına erişmek için kafa derisi kesilir ve elektrotları yerleştirmek ve sabitlemek için kesin yerlerde delikler açılır. Tungsten mikrotel elektrotlar daha sonra verileri kaydetmek için hedeflenen konuma yerleştirilir.

Sıçanlarda Birden Fazla Bölgeden Beyin Aktivitelerinin İn Vivo Elektrofizyolojik Kayıtları

Source: Maruoka, H., et. al. uyanık farelerde mikroglial dinamiklerin ve nöronal aktivitenin eşzamanlı görüntülenmesi. J. Vis. Exp. (2022) Bu video, görsel stimülasyon sırasında uyanık bir farede nöronal aktiviteyi ve mikroglial dinamikleri görüntülemek için iki fotonlu bir mikroskopi prosedürünü göstermektedir. kalsiyum geçişleri ve hücresel etkileşimler.

Uyanık Bir Farede Mikroglial Dinamiklerin ve Nöronal Aktivitenin Eş Zamanlı Görüntülenmesi

Kaynak: Moore, J. D., et al. Juxtacellular Uyanık, Başı Kısıtlanmış Sıçanların Subkortikal Beyin Yapıları İçindeki Tek Nöronların İzlenmesi ve Lokalizasyonu. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, kısıtlanmış, uyanık bir sıçanda yan yana hücresel kayıt ve boyama yöntemini göstermektedir. Prosedür, nöronlardan gelen sinyallerin kaydedilmesini ve kayıt bölgesini tam olarak lokalize etmek için boya enjekte edilmesini içerir. Bu teknik, nöral aktivitenin beynin anatomik yapısına doğru bir şekilde...

Uyanık bir sıçanda nöral aktivitenin hassas haritalanması için juxtacellular kayıt ve boyama 

Kaynak: Lai, J., et al. Kemirgen beyninde inhibitör ajanların eşzamanlı elektrofizyolojik kaydı ve mikro enjeksiyonları. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, sıçan superior colliculus'ta eşzamanlı nöronal kayıt ve inhibisyon için mikroenjeksiyon tabanlı bir tekniği göstermektedir. Prosedür, stereotaksik hedeflemeyi, kafatası delmeyi ve nöronal aktiviteyi kaydederken inhibe edici bir nörotransmitter sağlayan bir injectrodun yerleştirilmesini içerir. Işık stimülasyonu aksiyon potansiyellerini...

Bir Sıçanda Nöronal Aktivitenin İnhibisyonu ve Elektrofizyoloji Kullanılarak Tespiti

Nöronal ağların yapısını anlamak için, bireysel nöronların fonksiyonel ve morfolojik karakterizasyon bir zorunluluktur. Burada, juxtasomal biocytin dışı yapılandırmada elektrofizyolojik kayıtları etiketleme izin verir, ama hücre içi dendritik ve aksonal mimari post hoc yeniden için nöron etiket yeteneğini muhafaza göstermektedir.

Juxtasomal Biocytin Etiketleme Bireysel Kortikal nöronlar yapı-fonksiyon ilişkisi Çalışması için

Bu yöntem, gezinmek ve hayvanın başının sağlam tespiti gerektiren mikroskobik görüntüleme veya tek hücreli elektrofizyolojik kayıtlar sırasında keşfetmek fare için somut, tanıdık bir ortam yaratır.

Düz zeminli Hava kaldırdı Platform: Yeni Bir Yöntem Awake üzerinde Mikroskopi veya Elektrofizyoloji ile davranışı birleştiren için serbestçe Kemirgenler Hareketli

Bu çalışmada, üretan anestezi altında hiperdirect yolaktan çoklu saha in vivo elektrofizyolojik kayıtların nasıl gerçekleştirileceği üzerine metodoloji sunulmuştur.

Akut<emIn vivo</em&gt; Anestezi Uygulanan Sıçanlarda Hiperdirect Pathway&#39;den Lokal Alan Potansiyellerinin Elektrofizyolojik Kayıtları ve Çoklu Ünite Aktivitesi

Bir kafa plakası ve hem tek hem de iki fotonlu mikroskoplarla uyumlu bir optik tasarımla entegre edildiğinde, mikroprizma mercek, kafa sabit durumlarda iyi kontrol edilen deneyler veya serbestçe hareket eden hayvanlarda doğal davranışsal görevler dahil olmak üzere çeşitli koşullar altında dikey bir sütundaki nöral tepkileri ölçmede önemli bir avantaj sunar.

Serbest Hareket Eden ve Kafası Sabit Hayvanlarda Mikroprizmalar Kullanılarak Tanımlanmış Nöral Popülasyonların Uzun Süreli Görüntülenmesi

Neokorteksteki birincil duyusal alanlar, gelişim sırasında benzersiz spontan aktiviteler sergiler. Bu makale, yenidoğan farelerde alana özgü senkron aktiviteleri in vivo olarak analiz etmek için bireysel nöron aktivitelerinin ve birincil duyusal alanların nasıl görselleştirileceğini açıklamaktadır.

Yenidoğan Fare Duyusal Korteksinde Tek Nöron Çözünürlükte Spontan Aktivitenin İn vivo Görselleştirilmesi

Öğrenin, uyarı sıçanlarda juxtacellular kayıt yöntemiyle alt-kortikal beyin yapılarındaki tek nöron aktivitesini izlemeyi ve yerelleştirmeyi. Bu teknik, davranışsal nörobilim araştırmalarında sinir fonksiyonlarını hassas şekilde incelemeyi sağlar.

Uyarı, Baş-ölçülü Sıçanların Alt-kortikal Beyin Yapıları içinde Juxtacellular İzleme ve Yerelleştirme Single Nöronlar

Daha fazla video keşfet