Name: Nöbet gibi Aktivite Analizi ve Hareket için A Düşük maliyetli Yöntemi Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-19T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster'da lokomotor ve nöbet benzeri davranışları analiz etmek için düşük maliyetli bir yöntemi. Web kamerası ve yazılım araçları kullanarak hareket ölçütlerini nicel olarak değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar ayrıca ince-ayar çalışmalarıyla bu deney için Kris Burner, Stephen McKinney, Laura Tobin, Jenny Gilbreath, Ashley Olley, Megan Hoffer ve Megan Hyde teşekkürlerimizi ifade etmek istiyoruz.

1.. Bireysel hazırlanması Locomotion Testi için Sinekler <ol><li> Transferi hafifçe bireysel boş şişeleri içine dokunarak ve bir pamuk yumağı ile şişeleri kap ile uçuyor. Sinekler gözlem öncesinde rahatsız 20-30 dk bekletin. Daha önceki çalışmalar, anestezisiz sinekler 14 oranla anestezi poz davranışını değiştirebilir bulduk önce davranışsal gözlem saat içinde sinekler uyutmak değil önemlidir. </li><li> Yavaşça şişeden sinek dokunun ve hava geçişini sağlamak için küçük yarıklar ile (5 mm yüksekliğinde), 5 cm çaplı Petri kapsamındaki bireysel sinekler yerleştirin. Alttan aydınlatmak ve Petri kabı üzerine monte edilmiş bir web kamerası kullanarak sinekler gözlemlemek. </li></ol> 2. Bireysel hazırlanması nöbet Testi için Sinekler <ol><li> İki günlük nöbet duyarlı sinekler Yem standart maya / mısır unu / agar ortam veya standart medya ya doğrudan ilaç ile birlikte karıştırılır. Burada sunulan veriler için, sinekler 1 gitmesine ya beslenen edildistandart medya veya metformin 25 mg ile karışık standart ortam 1 gr f. </li><li> Sinekler bireysel boş şişeler içine nazik dokunarak bunları aktarmak ve bir pamuk yumağı ile şişeleri kap, medya ya da medya artı ilaç iki gün boyunca beslendi sonra. Sinekler gözlem önce 20 dakika süreyle rahatsız bekletin. Daha önceki çalışmalar, anestezisiz sinekler 14 oranla anestezi poz davranışını değiştirebilir bulduk önce davranışsal gözlem saat içinde sinekler uyutmak değil önemlidir. </li><li> 10 saniye boyunca yüksek ayarı kullanarak bir laboratuar vortexer tek bir sinek içeren Vortex tek ampuller. Doğrudan kağıt üzerine monte edilmiş bir web kamerası altında kağıt boş bir beyaz kağıda hareketsiz sinek yerleştirin. </li></ol> 3. Video Kaydı <ol><li> HandyAvi yazılım programını kullanarak hareket veya SLA kaydedin <a href="http://www.azcendant.com/download.htm">http://www.azcendant.com/download.htm</a> . Bu program web kamerası kullanıyorsakullanıcı ayarları dayalı görüntüleri yakalayabilir. </li><li> Capture sekmesi altında Time-Lapse görüntüleri seçeneği penceresi açıldığında, yakalama aygıtı olarak web kamerasını seçin seçin. Çoğu deneyler için 640 x 480 video çerçeve boyutu yeterli değildir. </li><li> Sıkıştırma için Intel IYUV codec seçin ve nöbet tahlil için 0.1 sn / kare seçebilir veya hareket tahlil için 0.1-0.5 sn / çerçeve seçmek. Gelişmiş sekmesinde, her yakalamak için bir. Bmp resim dosyası oluşturmak seçin ve o (Görüntü yığını) alır görüntüleri saklamak için program için bir klasör seçin. </li><li> Kağıdın üzerinde bir ölü sinek yerleştirin. Video ayarları kutusuna tıklayın ve parlak beyaz arka plan ve koyu sinek ile açık bir karşıtlık olduğunu böylece Cihaz ayarları sekmesi altında ayarlarını. </li><li> Kayda başlamak için start düğmesine tıklayın. Kayıt dönemi bittikten sonra, durdurma düğmesine basın. Görüntü yığını şimdi seçili klasörde olmalıdır. Not: Kayıttan önce, emin olun folGörüntü yığını için seçilen der boştur. </li></ol> 4. ImageJ kullanma Veri Analizi <ol><li> Indirilebilir açık NIH ücretsiz görüntü işleme yazılımı ImageJ, <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</a> . Not: Programı indirmek için ek olarak, MultiTracker plug-in indirilen ve de belirtildiği gibi monte edilmelidir <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</a> . </li><li> Dosya sekmesini tıklayarak ve daha sonra ithalat → Görüntü dizisi seçerek ImageJ içine Görüntü yığını aktarın. <ol><li> Görüntü yığını içeren klasörü seçin, görüntülerden birini vurgulayın ve açık seçin. Bir Dizi Seçenekleri iletişim kutusu açılacaktır. Sayısal Sıralama adlarını tıklatın ve sonra Tamam &#39;ı seçin ve görüntü yığını ImageJ yüklenecektir. </li></ol></li><li> Eşik tüm görüntüler her sinek olmak beyaz bir arka plan oluşur, böylecesiyah bir nokta ile dönüştürüldü. , Bu süreci başlatmak Görüntü sekmesi altında Tipi → 8 bit seçerek bir 8-bit biçimine dönüştürmek görüntü. <ol><li> Yine Görüntü sekmesine tıklayın ve → Eşik ayarlayın belirleyin. Bu eşik noktası ayarlanabilir kesti hangi Eşik diyalog kutusu açılacaktır. </li><li> Bir dilim siyah bir nokta yoksun eğer orada ekstra siyah noktalar veya görmek için görüntüleri ile tarayın. Bu durumda ise, bu sorunu hafifletmek için eşik ayarlayın. Genellikle uygun bir eşik değere programı, varsayılan olarak ayarlanması gerekmez. Not: yığını Her slayt sineğin konumunu temsil eden sadece bir siyah nokta olmalıdır. </li><li> Eşik diyalog kutusunda uygulamak seçin ve diyalog kutusunu Maske için bir dönüştürme açılacaktır. Seçeneklerden herhangi birini tıklatın ama sadece eşik OK görüntü yığınını tıklatın etmeyin. </li></ol></li><li> Görüntü yığını eşikleyerek sonra, seçin MultiTracker plug-in Eklentiler sekmesi altında amacıylapiksel sineğin hareketini ölçmek. Nesne Tracker diyalog kutusu görünecektir. <ol><li> Diyalog kutusunda verilen dört tüm seçenekleri tıklatın ve ardından Tamam seçeneğini seçin. MultiTracker plug-in sonra her dilim siyah nokta için koordinatları eklemek ve Sonuçlar yanı sıra pencere piksel toplam yol uzunluğu bu listeler. Yollar penceresi sinek aldı yolun bir grafik görüntü verir. </li><li> Sonuçlar penceresinden x-ve y-koordinatı listesini kopyalayın ve bir Excel tablosuna veri yapıştırabilirsiniz. Yığını herhangi bir slayt içinde siyah bir nokta yoksa, MultiTracker program o slayta durur. Bu durum ortaya çıkarsa, bu sağlamak için 4.2 ve yeniden eşik yığını adıma geri dönmek için gerekli olduğunu söz slayt siyah bir nokta olarak sinek kaydolur. </li></ol></li><li> Boş bir kağıt parçası üzerinde beyaz bir cm aralıklı iki nokta ayrı bir görüntü almak, yol cm piksel uzunlukları dönüştürmek için. <ol><li> Yukarıda izleyinadım (3.1-4.4.2), x belirlemek için, y piksel iki nokta koordinatları ve bir cm&#39;ye karşılık piksel sayısını belirlemek için bu bilgileri kullanabilirsiniz. Bu dönüşüm faktörü cm olarak hareket verilerini oluşturmak için beş adımda kullanılır. Not: Bu yapıldıktan sonra, gelecekteki tüm kayıtlar için sabit kamera tutmak için önemlidir. Kamera taşınır veya ayarlanır Her zaman, bir cm piksel dönüştürmek için bu adımı tekrarlayın gerekiyor. </li><li> Vücut pozisyonu ve ışık şiddeti / yansıması hafif dalgalanmalar görüntüleri eşikleyerek çıktığında oluşturulan siyah nokta boyutunu ve merkezini etkileyecek çünkü MultiTracker plug-in tarafından oluşturulan yol uzunluğu hareketi overestimates. Bu parazit sinek hareketin doğru bir tahminini elde etmek için uzaklaştırılmalıdır. </li></ol></li></ol> 5. Excel kullanma Veri Analizi <ol><li> X serisi ithal tarafından kaydedilen verilerden gürültü çıkarmak, y MultiTracker pr tarafından oluşturulan koordinatlarıFly Analizi, yazarlar tarafından oluşturulan bir Excel Visual Basic programına Ogram. (Program yazarları başvurarak edinilebilir.) </li><li> Click Me düğmesini tıklatın ve bir eşik değeri cut-off seçin. SLA analizi için 0.5 cm / sn bir eşik değer seçin veya hareket analizi için 0,1-0,3 cm / sn arasında bir değer seçin. Tamam&#39;a tıklayın ve programın hız, zaman ve hareket mesafesini hesaplar. Not: Program sıralı 0.5-1.0 sn kutularına verileri değerlendirmek için bir sürgülü pencere analizi kullanır ve bu pencerede sırasında hızı hesaplar. Kullanıcı-tanımlı kesim üzerinde bir şey sinek hareketi olarak kabul edilir. </li></ol>

<ol><li>Stone, B., Evans, L., Coleman, J., Kuebler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+manipulations+that+alter+metabolism+suppress+seizure-like+activity+in%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological manipulations that alter metabolism suppress seizure-like activity in.</a> 1496, 94-103 (2013).</li>
<li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+mutants+of+Drosophila+isolated+by+countercurrent+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 58, 1112-1119 (1967).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+Video+Tracking+of+Locomotion+in+Adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li>
<li>Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A., Buma, M. O., Noldus, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EthoVision+video+tracking+systema+tool+for+behavioral+phenotyping+of+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">The EthoVision video tracking systema tool for behavioral phenotyping of transgenic mice.</a> Physiol. Behav. 73, 731-744 (2001).</li>
<li>Kohlhoff, K. J., Jahn, T. R., Lomas, D. A., Dobson, C. M., Crowther, D. C., Vendruscolo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+iFly+tracking+system+for+an+automated+locomotor+and+behavioural+analysis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The iFly tracking system for an automated locomotor and behavioural analysis of Drosophila melanogaster.</a> Integr. Biol. 3, 755-760 (2011).</li>
<li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, (2002).</li>
<li>Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+analysis+of+ethanol-induced+locomotor+stimulation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">High-Resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila.</a> J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).</li>
<li>Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+portrait+of+locomotor+behaviour+in+Drosophila+determined+by+a+video-tracking+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Processes%22%5BJournal%5D)">A portrait of locomotor behaviour in Drosophila determined by a video-tracking paradigm.</a> Behav. Processes. 67, 207-219 (2004).</li>
<li>Meunier, N., Belgacem, Y. H., Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+feeding+behaviour+and+locomotor+activity+by+takeout+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of feeding behaviour and locomotor activity by takeout in Drosophila.</a> J. Exp. Biol. 210, 1424-1434 (2007).</li>
<li>Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+variability+of+sleep+and+activity+as+biomarkers+of+ageing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biogerontology%22%5BJournal%5D)">Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila.</a> Biogerontology. 13, 489-499 (2012).</li>
<li>Catterson, J. H., Knowles-Barley, S., James, K., Heck, M. M., Harmar, A. J., Hartley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+modulation+of+Drosophila+sleep-wake+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dietary modulation of Drosophila sleep-wake behaviour.</a> PLoS One. 5, (2010).</li>
<li>Donelson, N., Kim, E. Z., Slawson, J. B., Vecsey, C. G., Huber, R., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%27%27Tracker%27%27+program%5BTitle%5D)+AND+%22PLos+ONE%22%5BJournal%5D)">High-Resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the ''Tracker'' program.</a> PLos ONE. 7, (2012).</li>
<li>Duboff, B., Fridovich-Keil, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediators+of+a+long-term+movement+abnormality+in+a+Drosophila+melanogaster+model+of+classic+galactosemia%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Mediators of a long-term movement abnormality in a Drosophila melanogaster model of classic galactosemia.</a> Dis. Model Mech. 5, 796-803 (2012).</li>
<li>Seiger, M. B., Kink, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+anesthesia+on+the+photoresponses+of+four+sympatric+species+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">The effect of anesthesia on the photoresponses of four sympatric species of Drosophila.</a> Behav. Genet. 23, 99-104 (1993).</li>
<li>Pavlidis, P., Ramaswami, M., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+easily+shocked+gene%3A+a+mutation+in+a+phospholipid+synthetic+pathway+causes+seizure%2C+neuronal+failure%2C+and+paralysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Drosophila easily shocked gene: a mutation in a phospholipid synthetic pathway causes seizure, neuronal failure, and paralysis.</a> Cell. 79, 2333 (1994).</li>
<li>Royden, C. S., Pirrotta, V., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tko+locus%2C+site+of+a+behavioral+mutation+in+D.+melanogaster%2C+codes+for+a+protein+homologous+to+prokaryotic+ribosomal+protein+S12%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The tko locus, site of a behavioral mutation in D. melanogaster, codes for a protein homologous to prokaryotic ribosomal protein S12.</a> Cell. 51, 165-173 (1987).</li>
<li>Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+epilepsy%3A+bss+is+a+gain-of-function+mutation+in+the+para+sodium+channel+gene+that+leads+to+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures.</a> Genetics. , 187-534 (2011).</li>
<li>Hardie, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+AMP-activated+protein+kinase+in+the+metabolic+syndrome+and+in+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Role of AMP-activated protein kinase in the metabolic syndrome and in heart disease.</a> FEBS Lett. 582, 81-89 (2008).</li>
<li>Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+metformin+on+fatty+acid+and+glucose+metabolism+in+freshly+isolated+hepatocytes+and+on+specific+gene+expression+in+cultured+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharma%22%5BJournal%5D)">Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes.</a> Biochem. Pharma. 62, 439-446 (2001).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Drosophila da hareket veya hareket kalıplarını incelerken, bu kat edilen mesafe ile ilgili bilgiler, hareket hızı ve hareket deseni elde edebilmek için yararlıdır. Bu bilgileri ayıklamak için, pahalı ekipman geleneksel genellikle idareli 4,8,9 gibi deneylerin kullanmak isteyen küçük laboratuarları veya laboratuarları için yasak olduğu istihdam edilmiştir. Burada tarif edilen deney, mesafe (Şekil 2 ve 6) hareketinin, seyahat hızı belirleme...

Kısa ömürlü ve mevcut güçlü genetik araçlar göz önüne alındığında, Drosophila melanogaster çeşitli hastalıkların etiyolojisi ve çeşitli biyolojik süreçlerin temelinde yatan fizyolojisi araştırmak için mükemmel bir model sistemidir. Birçok durumda, bu davranış, genetik ya da farmakolojik işlemi bu model organizmaların 1,2 hareket yeteneği üzerindeki sahip olduğu etkilerini ölçmek için avantajlıdır. Genel olarak, iki boyutta 3-7 uçucu hareket ölçmek için kullanılan çeşitli yöntemler vardır. Bu sistemler aynı anda birden fazla sinek izlemeyi desteklemek ve hız, rekor yol uzunluklarını ölçmek ve bir sinek hareketli geçirdiği zaman yüzdesini kaydedebilirsiniz. Onlar hareketlilik ve sinek hareketi 6-9 cinsel dimorfik doğası üzerine ilaçların etkileri dahil çeşitli bağlamlarda içinde hareketini incelemek için kullanılır olmuştur. Bu sistemlerin en önemli dezavantajı izleme sys maliyetidirtem veya ilgili yazılım ve kamera. Bazı durumlarda, bu dolar binlerce çalıştırabilirsiniz. Maliyet, sadece yeni izole edilmiş mutant lokomotif kalıpları miktarının belirlenmesi, örneğin, bu tür bir sistemin sınırlı kullanımı gerekir bir laboratuar için özel bir sorundur. Daha basit ama daha az sağlam bir yöntem rekor hareketi, bir sinek, bir kapalı tüp 10,11 ortasına yerleştirilen bir kızılötesi ışın yolu haçlar kaç kere tabanlı sistemleri kullanmaktır. Bu tür sistemlerin hareket ve uyku-uyanıklık döngüsü hakkında değerli bilgiler verebilir iken, onlar sineğin gerçek yolu yakalamak için başarısız üzerinden veya tahmin hareketi altında çünkü. Ek yüksek çözünürlüklü yöntemleri bu sınırlamadan 12 denemek ve aşmak için kullanılmış olmakla birlikte, örneğin, tüpün uçlarında önemli bir hareket sergileyen sinekler gibi düşük hareket kaydedecektir uçar. Basit ve ucuz hala geotaxi ölçmek cihazları tırmanıyors, bir tek tüp veya tüplerin 2,13 bir dizi sinekler yukarı doğru hareketi,. Bu tür sistemleri ucuz ve kolayca geotaxis kusurları tespit ederken, onlar araştırmacılar için ilgi olacağını hareketinin pek çok diğer yönlerini yakalamak için başarısız. Birçok laboratuvar, set-up ve işletmek D. melanogaster suşları davranış farklılıkları karakterize için avantajlı bir araç olacaktır basit, düşük maliyetli sağlam analiz sistemi için. Burada az iki yüz dolar için set-up ve sineğin hareketinin yolu, hızı ve süresi hakkında bilgi vermek mümkün olabilir bir deneyi tarif. Tayinin etkinliğini göstermek için, bunun belirlemek için kullanılabileceğini gösteren verileri sunmak, nöbet ve ilaç metformin 2) yeteneği, açık olan bir Bang duyarlı (BS) mutant 1) bir lokomotor kusur hangi yaygın olarak nöbet benzeri etkinliği (SLA) i yoğunluğunu azaltmak için, tip II diyabet tedavisinde kullanılann iki BS mutantlar.

<table><tbody><tr><td>Web Kamerası</td><td>Logitech</td><td>Pro900</td><td>Herhangi bir kaliteli web kamerası yeterli olacaktır.</td></tr><tr><td>HandiAVI time-lapse yazılımı</td><td>Azcendant yazılımı</td><td></td><td>En son sürüm http://www.azcendant.com/</td></tr> <tr><td>ImageJ</td><td>NIH'de</td><td></td> bulunabilir <td>En son sürüm http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</td></tr><tr><td>Multiracker Plug-In</td><td>NIH'de</td><td></td> bulunabilir <td>En son sürüm şu adreste bulunabilir: http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>VWR</td><td>Vortex Genie 2</td><td>Vortex Genie 2 gibi standart boyuttaki girdapların çoğu yeterli olacaktır.</td></tr><tr><td>5 cm Petri kabı kapağı</td><td>LabM Limited</td><td>D011</td><td>Hareket tahlilinde bir arena için daha küçük veya daha büyük Petri kabı kapakları kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Işık kutusu</td><td>özel yapım</td><td></td><td>Hurda malzemeden üretilmiştir. Aydınlatma, hareket testi için kullanılır. Oda aydınlatmasına bağlı olarak, testi ışık kutusu olmadan da yapmak mümkündür.</td></tr></tbody></table>

nöbet gibi aktivite analizi ve hareket için a düşük maliyetli yöntemi<em&gt; drosophila</em

A Low-cost Method for Analyzing Seizure-like Activity and Movement in Drosophila

Video izleme sistemleri Drosophila melanogaster hareketini analiz ve lokomotif davranış çeşitli anormallikleri tespit etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu sistemler davranışsal bilgi hazinesi sağlayabilir, bu sistemlerin maliyeti ve karmaşıklığı birçok laboratuvar için engelleyici olabilir. Biz, D. melanogaster lokomotif davranışı ve nöbet hareketinin ölçülmesi için düşük maliyetli bir analiz geliştirdik. Sistem mesafe hareket izlemek için ucuz ve serbest bir yazılım kombinasyonu kullanılarak işlenebilir görüntüleri yakalamak için bir web-cam kullanan, belirli bir zaman dilimi sırasında hareket ve hareket süresi, ortalama hız. Bu sistemin kullanılmasını göstermek için, D&#39;nin bir grubu, 3-10 kat daha duyarlı nöbet benzeri aktiviteye (SLA) vahşi tip sinekler göre olan mutantlar, Bang duyarlı (BS) Felç melanogaster incelenmiştir. Bu yeni bir sistem kullanarak, tespit etmek mümkün olduğu BS mutant patlama anlamsız (BSS) vahşi tip sinekler daha yeni bir ortamda keşif hareketlilik düşük seviyelerini sergiler. Buna ek olarak, sistem yaygın tip II diyabet tedavisinde kullanılan ilaç metformin, BS mutantlar SLA yoğunluğunu azalttığını tespit etmek için kullanıldı.

Burada anlatılan teknik Drosophila BS mutantlar 1 SLA farklılıkları analiz etmek için daha önce kullanılan olmuştur. Burada sunulan sonuçlar kolayca şok BS suşları (EAS), patlama anlamsız (BSS), ve teknik nakavt (TKO) içerir. EAS eğrisi fosfatidil etanolamin 15 sentezinde rol oynayan bir kinaz kodlayan etanolamin ve tko lokus bir mitokondriyal riboprotein 16 kodlar. Bss mutasyon paralitik (para) voltaj-kapılı sodyum ...

Özgür ve ucuz yazılım programları bir web kamerası ve bir arada kullanarak, Drosophila melanogaster lokomotif desenler hız, mesafe, ve çeşitli motor etkinlikler zamanında farklılıkları tespit etmek için analiz edilebilir.

Nöbet gibi Aktivite Analizi ve Hareket için A Düşük maliyetli Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Video tracking systems have been used widely to analyze Drosophila melanogaster movement and detect various abnormalities in locomotive behavior. While ...

Bu prosedürün genel amacı, drosophila'da lokomotor veya nöbet davranışlarındaki değişiklikleri belirlemektir. Bu işlem, öncelikle sineklerin anestezi kullanılarak tekli tüplere ayrılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, sineklerin hareketlerini kaydetmek için basit bir web kamerası kullanılır.Analize başlamak için veriler daha sonra Image J'ye aktarılır. Son olarak, kayıt süresi boyunca hareketin mesafesini, hızını ve süresini belirlemek için özel olarak yapılmış sinek analiz yazılımı kullanılır. Nihayetinde, bu deney genetik ve farmakolojik manipülasyonlarla ilişkili lokomotor veya nöbet davranımındaki değişiklikleri gösterebilir.Şimdi, açıklayacağımız bu düşük maliyetli kayıt tekniği, meyve sineklerinde hem nöbet davranışını hem de lokomosyonu analiz etmek için kullanılabilir. Özellikle, bu sineklerde nöbet davranışını değiştiren genetik ve farmakolojik manipülasyonları belirlemek için bu yöntemi kullandık. Bugün, laboratuvarımdaki lisans araştırma asistanı Chris Burner bu tekniği uygulamalı olarak gösterecek. Başlamak için, lokomotor ve nöbet analizleri sırasında sinekleri kaydedecek olan web kamerasını kurun.Kamera yerleştirildikten sonra, handy a VI yazılım programını açın. Kayıt ayarlarını düzenlemek için yakalama sekmesi altındaki hızlandırılmış çekim görüntüleri seçeneğini seçin ve yeni pencere açıldığında, yakalama cihazı olarak web kamerasını seçin. Çoğu deney için 640 x 480 video kare boyutu yeterlidir. Sıkıştırma seçeneği altında Intel IUV kodeğini seçin ve saniyede kare sayısını deneye göre ayarlayın.Gelişmiş (advanced) sekmesi altında, her bir çekim için bir bitmap görüntü dosyası oluşturun ve kayıt işlemi tamamlandığında programın görüntü yığınını saklayacağı bir klasör seçin. Ardından, bir kağıt üzerine ölü bir sinek yerleştirin. Video ayarları kutusuna tıklayın ve cihaz ayarları sekmesi altında, parlak beyaz arka plan ile daha koyu renkli sinek arasında net bir kontrast oluşana kadar ayarları düzenleyin.Kaydı başlatmak için başlat düğmesine tıklayın. Kayıt süresi sona erdiğinde durdur düğmesine tıklayın. Görüntü yığını, lokomotor aktivite deneyi başlatılabilmesi için seçilen klasörde yer almalıdır.Sinekleri, pamuk tıpa ile kapatılmış bireysel flakonlara aktarın. İşleme devam etmeden önce sineklerin 20 ila 30 dakika boyunca rahatsız edilmeden beklemesine izin verin. Bu sürenin sonunda, test edilecek sineği flakondan nazikçe vurarak çıkarın ve bir Petri kabı kapağının altına alın.Hava akışına izin vermek için kapağın üzerinde küçük yarıklar bulunmalıdır; sineği daha önce kurulmuş olan web kamerası düzeneğinin altına yerleştirin. Hazır olduğunuzda, lokomotor aktivite kaydını başlatmak için başlat düğmesine basın. Nöbet deneyi aşamasının ilk adımı, iki günlük nöbete duyarlı sineklere ya standart besiyeri ya da test edilecek ilaçla karıştırılmış besiyeri vermektir.İki günlük beslemenin ardından, sinekleri hafifçe vurarak tek tek boş flakonlara aktarın ve flakonların ağzını pamuk tıpalarla kapatın. Gözlemden önce sineklerin 20 dakika boyunca rahatsız edilmeden beklemesini sağlayın. Hazır olduğunuzda, bir flakonu laboratuvar vorteks cihazında en yüksek ayarlarda 10 saniye boyunca vorteksleyin.Hareketsiz hale getirilmiş sineği, web kamerasının hemen altına, beyaz bir kağıt üzerine yerleştirin. Yerleştirdikten sonra kayda başlayın. Bu, sineğin aktivitesidir.Sinek, felç dönemleriyle kesintiye uğrayan hızlı ve koordinasyonsuz hareketler sergileyecektir. Sinek tekrar düzeldiğinde kayıt sonlandırılır. Verileri analiz etmeye başlamak için, ücretsiz görüntü işleme yazılımı olan Image J'yi açın.Önce dosya sekmesine tıklayıp ardından içe aktar'ı ve son olarak görüntü dizisi'ni seçerek istenen görüntü yığınını içeri aktarın. Görüntü yığınını içeren klasörü seçin ve bir görüntü açın.Sıralama seçenekleri iletişim kutusu açıldığında, isimleri sayısal olarak sırala seçeneğini işaretleyin ve ardından Tamam'ı seçin. Görüntü yığını şimdi Image J'ye yüklenecektir. Ardından, görüntü sekmesini seçin ve değer türünü sekiz bit olarak ayarlayın. Tekrar görüntü sekmesine tıklayın ve ayarla seçeneğinin altındaki eşik değerini seçin.Bu işlem, tüm görüntülerde eşik değerini ayarlayarak her birinin, sineğin siyah bir noktaya dönüştürüldüğü beyaz bir arka plandan oluşmasını sağlar. Bu işlem aynı zamanda, kesme noktalarının ayarlanabileceği eşik iletişim kutusunu açar. Herhangi bir görüntüde fazladan siyah noktaların olup olmadığını veya noktanın eksik olup olmadığını görmek için görüntüleri tarayın.Gerekiyorsa, sorunları gidermek için eşik değerini ayarlayın. Ayarlamalar yapıldıktan sonra, eşik diyalog kutusunda "apply" seçeneğini seçin. "convert to mask" diyalog kutusu açıldığında, görüntü yığınını eşiklemek için "okay" düğmesine tıklayın.Sinek hareketini piksel cinsinden ölçmek için, eklentiler (plugins) sekmesi altından multi tracker eklentisini seçin. Nesne takipçisi (object tracker) iletişim kutusu göründüğünde, verilen dört seçeneğin tamamını tıklayın ve Tamam'ı seçin. Multi tracker eklentisi daha sonra siyah alana koordinatlar atayacaktır.her dilimde ve bunları sonuçlar penceresinde toplam piksel uzunluğuyla birlikte listeleyin. Yollar penceresi, sineğin izlediği yolun grafiksel görüntüsünü sunar. Sonuçlar penceresindeki X ve Y koordinat listesini kopyalayın ve verileri bir Excel hesap tablosuna yapıştırın.Yığındaki herhangi bir slaytta siyah alan yoksa, çoklu takip programı o slaytta duracaktır. Bu durum gerçekleşirse, sineğin siyah olarak kaydedildiğinden emin olmak için yığını yeniden eşikleyin.söz konusu lamda. Yol uzunluklarını pikselden santimetreye dönüştürmek için, boş beyaz bir kağıt üzerinde birbirine bilinen bir uzaklıkta yerleştirilmiş iki noktanın görüntüsünü alın. İki nokta için XY piksel koordinatlarını belirleyin ve daha doğru sonuçlar elde etmek için bu bilgiyi, bir santimetreye karşılık gelen piksel sayısını belirlemek amacıyla kullanın.XY koordinatlarını özel yapım bir sinek analiz programına aktararak görüntülerdeki gürültüyü giderin. Program açıldığında, her bir genotipten veya işlemden gelen verileri ayrı hesap çizelgelerine aktarın. Ardından, özet sayfası sekmesini seçin ve "click me" butonuna tıklayın.Analiz türüne göre bir eşik değer seçin, tamam'a tıklayın; program hız, zaman ve hareket mesafesini hesaplayacaktır. Bu temsili yollar, metformin tedavisi gören ve görmeyen mutant sineklerde nöbet benzeri aktiviteyi göstermektedir. Test edilen iki mutantta tedavi ile nöbet aktivitesi azalmıştır.Metformin, hem nöbet deneyi sırasında katedilen mesafeyi hem de nöbet benzeri aktivitenin toplam süresini önemli ölçüde azaltmıştır. Buna karşılık, bu bireysel lokomotor yollardaki ortalama hızda herhangi bir değişiklik gözlemlenmemiştir. Vahşi tip CS sineğinin izlediği yol, dairesel arenanın çevresinde bir yoğunlaşma göstermektedir.Mutant BSS sineğinin izlediği yol aynı konsantrasyonu gösterse de genel olarak daha az hareket sergilemektedir. Yeni bir ortamda lokomosyon testi yapıldığında, BSS mutantları CS sineklerine kıyasla yol uzunluğunda belirgin bir azalma göstermiştir. Deney, lokomosyon testi sırasında CS sineği keşif yaparken hareket hızindeki değişimleri de tespit etmiştir.BSS sineği, birkaç aktivite patlaması dışında deney boyunca nispeten hareketsiz kaldı. Bu tekniği kullanarak bu davranışsal analizlerden herhangi birini gerçekleştirirken akılda tutulması gereken en önemli noktalardan biri, kayıtları yapmadan önce sinekleri anestezi altına almadığınızdan emin olmaktır. Anestezinin hem nöbet davranışını hem de lokomotor davranışı etkilediği ve sonuçlarınızı önemli ölçüde değiştirebileceği ortaya çıkmıştır.

a-low-cost-method-for-analyzing-seizure-like-activity-movement

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Yetişkin Drosophila melanogaster Locomotion Yüksek Çözünürlüklü Video Takip

Yüksek frekanslı elektrik stimülasyonu, nöbet benzeri aktivite kullanma...

, Epilepsi Mutants Nöbetler Neurocircuit Tahliller Drosophila</em

Belirlenen Nöronlar ve Beslenme Davranışı Kalsiyum sinyaller aynı anda kayıt Drosophila melanogaster</em

Bu videoda, genel hareket kabiliyetlerini değerlendirmek için serbestçe yürüyen sineklerin nasıl izleneceği açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol, video izleme yazılımı kullanarak tahlilin kurulumunu ve veri analizini gösterir.

Serbestçe Yürüyen Sineklerin İzini Sürmek: Drosophila'da Hareketi Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Bu rapor, TriKinetics Drosophila Activity Monitor kullanılarak Drosophila larva aktivitesini ölçmek için bir yöntemi açıklar. Cihaz, 16 adede kadar bireysel hayvanın hareketlerini algılamak için kızılötesi ışınlar kullanır. Veriler, oranlar ve hayvanların tahlil odaları içindeki konumları dahil olmak üzere hareket parametrelerini temsil etmek için analiz edilebilir.

Larvaların Faaliyet Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Ada tahlil Drosophila melanogastertemel Lokomotor davranışını değerlendirmek için kullanılan nispeten yeni, düşük maliyetli bir tahlil olduğunu. Bu el yazması için otomatik veri işleme ve ada tahlil veri, bu hassas, yüksek üretilen iş göstergesi büyük genetik veya farmakolojik ekranlar için tahlil yaparken objektif miktar algoritmaları açıklar.

Yüksek üretilen iş analiz Locomotor davranış Drosophila Adası tahlil

Bu iletişim kuralı maliyet-etkin ve uygun farmakolojik ajanları, sinirsel proteinlerin genetik mutasyonlar test etkinleştirmek için Drosophila melanogaster merkezi sinir sistemi azalan elektriksel aktivitesinin kaydetmek için bir yöntem açıklar, ve/veya keşfedilmemiş fizyolojik yolları rolü.

Üçüncü-biçim Drosophila Melanogaster merkezi sinir sisteminin etkinliğinin elektrofizyolojik kayıt

Mevcut protokol, Drosophila'nın lokomotor aktivitesini, hız, mesafe vb. parametreleri hesaplamak için yüksek tanımlı video kaydına dayalı olarak her karenin piksellerini segmentlere ayırmak için eklentilerle uyumlu açık kaynaklı yazılım Fiji'yi kullanarak el yapımı bir arenada sineklerin hareketini izleyerek ve analiz ederek değerlendirir.

Drosophila'da Lokomotor Aktiviteyi Test Etmek İçin Basit Bir Teknik

Burada, epileptiform aktiviteleri izlemek için GCaMP6 eksprese eden yetişkin Drosophila'da ex vivo kalsiyum görüntüleme için bir protokol sunuyoruz. Protokol, ex vivo kalsiyum görüntüleme yoluyla yetişkin Drosophila'daki iktal olayları araştırmak için değerli bir araç sağlar ve hücresel seviyelerde epilepsinin potansiyel mekanizmalarının araştırılmasına olanak tanır.

Ex Vivo (Canlı Canlı) Drosophila Epilepsi Modeli için Kalsiyum Görüntüleme

Bu protokol, epilepsi tedavisi için benzersiz nöbet önleyici bileşikleri tanımlamak için Drosophila larvalarının kullanımını detaylandırır.

Drosophila larvalarında elektroşok ile indüklenen nöbet aktivitesi

Öğrenin Drosophila melanogaster'da lokomotor ve nöbet benzeri davranışları analiz etmek için düşük maliyetli bir yöntemi. Web kamerası ve yazılım araçları kullanarak hareket ölçütlerini nicel olarak değerlendirin.

Nöbet gibi Aktivite Analizi ve Hareket için A Düşük maliyetli Yöntemi

Daha fazla video keşfet