Name: Kronik Böbrek Hastalarında Vasküler Fonksiyon Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Keşfedin kronik böbrek hastalarında vasküler fonksiyon değerlendirmesi için brakiyal arter akım aracılı vazodilatasyon ve aortik nabız dalga hızı ölçüm yöntemlerini. Bu teknik damar sağlığını karakterize eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar onu teknik yardım için Nina Bispham teşekkür ederim. Bu çalışma, Amerikan Kalp Derneği (12POST11920023) ve NIH (K23DK088833, K23DK087859) tarafından desteklenmiştir.

Bu protokol Colorado Çoklu Kurumsal Değerlendirme Kurulu (COMIRB) yönergeleri takip eder. Test Oturum 1. Hazırlık <ol><li> Katılımcılar en doğru ölçümler için bu kısıtlamalar takip etmelidir: Gıda ve kafein hızlı 12 saat, egzersiz, sigara, 12 saat kısıtlama, 12 saat kısıtlama ilaçlar uygulanabilir,&gt; 4 yarılanma ömrü kısıtlama mümkünse (bir de mümkün olmayabilir eğer gibi CKD hastalar gibi nüfus), ve menopoz öncesi kadınlarda günde hormonal etkilerini en aza indirmek için menstrüel siklusun 1-7 test edilmelidir. </li><li> Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) içinde 476,8 ml &#39;de 2 ml 0.5 M etilendiamin tetraasetik asit (EDTA), heparin (180 USP birim / mg) 0.05 g ve büyük baş hayvan serum albümini, 2.5 g eklenmesiyle ayrışma tampon 500 ml hazırlayın 7.4 &#39;lük pH. Bu birkaç ay boyunca 4 ° C&#39;de saklanabilir. </li><li> Ultrason, bilgisayar ve Non-invaziv hemodinamik açınİş İstasyonu (NIHem; arteriyel sertlik ekipman). Bilgisayar R-dalgası tetikleme kutusuna ultrason çıktısı kablolarını bağlayın. </li></ol> Vasküler Endotel Hücreleri 2. Toplanması ve işlenmesi <ol><li> Eğitimli bir hemşire veya doktor toplama gerçekleştirir (2.2-2.5, 2.7 adım) ve araştırmacı teller toplar ve işler (2.6, 2,8-2,19 adımlar) </li><li> , Bir topikal antiseptik ile Antekübital siteyi hazırlık turnike uygulamak, ven bulun, ve 18 G kateter ile kanüle. IV ucunda bir heplock adaptörü yerleştirin. </li><li> Steril eldiven giyin ve sitesi üzerinden steril fenestre perdeler koymak. </li><li> Örtüler üzerinde 2 J-tellerini yerleştirin. Her iki teller &quot;J&quot; şeklinde çözülmek için &quot;J&quot; nin ark çekin. </li><li> Heplock kapağını açmak ve damar yaklaşık 8 cm içine J-teli beslemek. Telini çıkarmadan önce ileri geri birkaç kez itin. Tel üzerinde brüt kan kaçının. </li><li> Onlar bir uyum böylece teller makasla tel kesiciler kullanınDisosiasyon tamponu ~ 30 ml içeren 50 ml konik bir tüp </li><li> Ikinci tel için adımı 2.5 tekrarlayın. </li><li> Ikinci tel için adımı 2.6 tekrarlayın. Islak laboratuvara tüp dönün. </li><li> Forseps bir çift tel bağı ve tüp içindeki teller tutmak, fakat bir çözüm, yukarıda. 10 dakika boyunca, art arda 50 ml konik tüp ayrışma tamponu toplamak için bir motorlu pipetter kullanmak ve tüp içine teller aşırı sıvı silkeleyin sonra, teller durulayın ve titreşime tellerin uzunluğu aşağı çalışır, böylece bırakın. </li><li> 400 x 7 dakika ve 4 ° C için santrifüj </li><li> 100 ml formaldehit çözeltisi + 900 ml PBS ile bir araya folyo kaplı tüp içinde formaldehit çözeltisi hazırlayın. </li><li> Yavaşça, santrifüj tüpü çıkarmak vakum pompası açmak, emme hortumunun ucuna bir pipet yerleştirmek ve pelet bozmadan kalanı kapalı vakumlama, tüp içinde ~ 400 ml bırakın. </li><li> Folyo ve pipet 1 ml formaldehit çözeltisi içine ile kaplayınörnek düzeltmek için tüp. Tekrar süspansiyon etmeyin. Oda sıcaklığında 10 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> Konu ve çalışma ziyareti bilgi etiketleme ve pap kalem ile her slaytta bir oval çizerek 8 slaytlar hazırlayın. </li><li> 15 ml 400 x g&#39;de 5 dakika ve 4 ° C&#39;de PBS, tekrar süspansiyon ve santrifüj Ekle </li><li> Adımı yineleyin 2.15, 12 ml 400 x g&#39;de 6 dakika ve 4 ° C&#39;de PBS, tekrar süspansiyon ve santrifüj eklemek </li><li> Yavaşça, santrifüj tüpü çıkarmak vakum pompası açmak, emme hortumunun ucuna bir pipet yerleştirmek ve pelet bozmadan kalanı kapalı vakumlama, tüp içinde ~ 2 ml bırakın. </li><li> Eşit oval bölgelerde 8 slayt boyunca süspanse ve pipet. </li><li> 5 saat boyunca 37 ° C&#39;de ve sonra, (örnek uzun yıllar iyi olacaktır) analiz için hazır olana kadar -80 ° C&#39;de saklayın inkübatörü içinde yer. </li></ol> FMD BA ve aPWV 3. Değerlendirilmesi <ol><li> Tek şort içine araştırma konusu değişiklik var ve saat varsessiz, loş, iklim kontrollü odada im / onu yalan yatar. </li><li> Uygun spesifik ultrason ve arteriyel sertlik cihazı için EKG sayısını (bu prosedür Non-İnvaziv hemodinamik Workstation [NIHem] 4 elektrotlar gerektirir arteriyel sertliği ölçmek için kullanır), ve konu üzerinde kan basıncı kolluğu yerleştirin. </li><li> 20 dakika sonra, kan basıncı değerlerini başlar. En az 3 gerçekleştirmek ve ölçümler 5 mmHg dahilinde kadar her okuma arasında 2 dk dinlenme, tekrarlayın. </li><li> Brakiyal arter nabzı palpe ve yazılım programı kullanılarak brakiyal dalga formları kaydetmek için tonometresi yerleştirerek tonometre başlayın. </li><li> , Radyal femoral ve karotis arterler için tekrarlayın. </li><li> Bir mezura (brakiyal, radyal ve karotis) ve özel cetvel / pergeli (femur) kullanarak supersternal çentik bu sitelerin her mesafeyi ölçün. </li><li> Yazılım programını kullanarak karotis-brakial, karotis-radyal, ve karotis-femoral (aPWV) hesaplayın. </li><li> Yermodunu tetiklemek için ayarlanmış bir damar yazılımı ile olekran süreci ve rekor bazal brakiyal arter ultrason görüntüleri ve kan akım hızı ölçümleri en az 10 kardiyak siklus hemen distalinde önkol kan basıncı manşet. Mekanik bir kol arzu edildiği takdirde, ultrason probu sabitlenmesi için de kullanılabilir. </li><li> 250 mmHg önkol kan basıncı şişirin ve zamanlayıcı başlar. Çok hareketsiz kalması katılımcı bilgilendirin. </li><li> Zamanlayıcı 04:45 okuduğunda modu tetiklemek için bir damar yazılım seti ile kayıt hızları başlayın. Tetik 05:00 de manşet bırakın ve saat 05:10 okuduğunda B-mod (çap) görüntüleri kaydetmek için ultrason değiştirin. </li><li> Saat 07:00 okuyana kadar kayda devam. </li><li> Modunu tetiklemek için ayarlanmış bir damar yazılım ile bazal brakiyal arter ultrason görüntüleri rekor en az 10 kardiyak çevrimleri. </li><li> Kişinin kan basıncını ölçünüz. Eğer sistolik kan basıncı&gt; 100 mmHg, konu altında dilaltı nitrogliserin 0.4 mg koyun &amp;# 39; nin dil ve hastanın başka bir kontrendikasyon olmadıkça, zamanlayıcı başlar. </li><li> Saat modunu tetiklemek için damar yazılımı ile 03:00 okuduğunda B-mode (çap images) kaydetmeye başlarsınız. </li><li> Saat 08:00 okuduğunda Kaydı durdur. </li><li> Başlangıca döner kadar kan basıncını izlemek </li></ol> 4. İnsan göbek damarı endotel hücre hazırlanması (HUVEC) Kontrol Slaytlar <ol><li> Pasajda 5-6 HUVECler büyümek ve ~% 80 kaynaşma. </li><li> 3 tripsin ml veya ne olursa olsun çanak / şişesi için gerekli olan Trypsinize. </li><li> Tripsin nötralize çözeltisi eşit hacmi kullanılarak tripsin nötralize. </li><li> ~ 5 dakika boyunca 200 x g de santrifüj ve vakum ile tripsin ve nötralize edici bir çözüm çıkarın. </li><li> Yıkamak için ~ 10 ml PBS içinde süspanse edin. </li><li> 200 xg ~ 5 dk santrifüj. PBS çıkarın. </li><li> PBS çıkarın ve 1800 ul PBS + 200 ul formaldehit düzeltmek. </li><li> PBS (~ 10 mi) içerisinde yeniden süspanse edin. </li><li> ~ 200 x g&#39;de santrifüj5 dak. Slayt başına ~ 200 ul eklemek için uygun bir hacimde PBS, tekrar süspansiyon çıkarın. </li><li> -80 ° C&#39;de saklayın slaytlar analiz için hazır olana kadar (örnekler uzun yıllar boyunca iyi olacak). </li></ol> Vasküler Endotel Hücreleri 5. Boyama <ol><li> -80 ° C dondurucu üzerinden slaytlar alın ve (bu işlem bir HUVEC kontrol slayt dahil, 10 slaytlar bir parti için), oda sıcaklığında 5 dakika bekleyin. </li><li> Hassas bir görev silme (slayt merkezini dokunmayın) ile aşırı su silin. </li><li> Her bir slayt değiştirilmiş PBS eklenerek slaytlar yeniden hidrat ve 10 dakika boyunca bırakın. </li><li> Slaytlar ayakta iken,% 5 eşek serumu ve diğer çözümler hazırlar. <ol><li> Kadar 10 slaytların (7.4 arasında bir pH değerine kadar) değiştirilmiş PBS 5700 ul eşek serumu 300 ul ekleyerek% 5 eşek serumu hazırlayın (Daha fazla bilgi için bu miktar artış). </li><li> % 5 serum 1000 ul ilgi duyulan birincil antikor seyreltin. Örneğin, nitrotirozin ve NADPH içinoksidaz (1:300 ve 1:1,500) oksidatif stres belirteçleri olarak kullanılabilir. </li><li> % 5 serum 1.500 μll için AF568 5 ul seyreltilmesi ile ikincil AF568 hazırlayın. </li><li> Hazırlama 2 ul seyreltilmesiyle cadherin VE% 5 serum 1000 ul VE kaderin. </li><li> 5 ul seyreltilmesiyle AF488 hazırlanması% 5 serum 1000 ul VE kaderin. </li><li> AF568 tutmak, tüm süreç boyunca folyo altında kaderin ve AF488 VE ve slaytları hazırlarken daha sonra 4 ° C&#39;de buzdolabında rocker üzerine yerleştirin. </li></ol></li><li> Rehidrasyon 10 dakika sonra, hassas bir görev ile kuru slaytlar silin. </li><li> 60 dakika boyunca% 5 eşek serumu ilave edin ve kimyasal tam kapsama sağlamak için daire içine alınan alanın üzerinde plastik filmin parafın bir parça yerleştirin. </li><li> Hassas bir görev ile plastik parafin film ve kuru slaytlar atın silin. Yıkamayın. 60 dakika için primer antikor ilave edin ve sağlamak için daire içine alınan alanın üzerinde plastik filmin parafın bir parça yerkimyasal tam kapsama. </li><li> Fışkırtma şişesinden değiştirilmiş PBS ile yıkayın ve 5 dakika boyunca slayt sütunlar emmek, plastik parafin filmi atın. Slaytlar sırılsıklam olsa da, karanlık bir odaya taşıyabilirsiniz. Kalan tüm adımlar için karanlıkta çalışın. </li><li> Kimwipes Kuru slaytlar, 45 dakika boyunca AF568 (sekonder antikor) ekleyin ve kimyasal tam kapsama sağlamak için daire içine alınan alanın üzerinde plastik filmin parafın bir parça yerleştirin. Işıktan örtün. </li><li> Biohazard çöp bidonuna plastik parafin filmi atın. Fışkırtma şişesinden değiştirilmiş PBS ile durulayın ve daha sonra 5 dakika boyunca sütunlar içinde bekletin. </li><li> Kimwipes Kuru slaytlar, daha sonra 60 dakika boyunca eklemek kaderin VE ve kimyasal tam kapsama sağlamak için daire içine alınan alanın üzerinde plastik filmin parafın bir parça yerleştirin. Işıktan örtün. </li><li> Biohazard çöp bidonuna plastik parafin filmi atın. Fışkırtma şişesinden değiştirilmiş PBS ile durulayın ve daha sonra 5 dakika boyunca sütunlar içinde bekletin. </li><li> Kuru slaytlarhassas bir görev 30 dakika AF488 ekleyebilir ve kimyasal tam kapsama sağlamak için daire içine alan üzerinde plastik parafin film bir parça yer, silin. Işıktan örtün. </li><li> Biohazard çöp bidonuna plastik parafin filmi atın. Fışkırtma şişesinden değiştirilmiş PBS ile durulayın ve daha sonra 5 dakika boyunca sütunlar içinde bekletin. </li><li> Hassas bir görev ile Kuru slaytlar silin ve slaytlar 20 dakika kurumasını bekleyin. Işıktan örtün. </li><li> Her bir slayt 4 ile orta montaj fluoroshield tek bir damla &#39;,6-diamidino-2-fenilindol hidroklorür (DAPI) ekleyin ve bir kayar kapak ile birlikte kapsar. </li><li> Folyo ile kaplanmış 4 ° C buzdolabında slaytlar yerleştirin. Görüntüleme 48 saat içinde tamamlanması gerekmektedir. </li></ol> 6.. Görüntüleme ve Vasküler Endotel Hücreleri Analizi <ol><li> Özel mikroskop özelliklerine göre lekeli endotel hücreleri görüntüleme için mikroskop hazırlayın. Bir tek kör teknisyeni bir yarasa için herhangi bir protein analiz etmelidirhücre ch. </li><li> Sistematik slaytları tarayın. Kaderin VE ve DAPI için pozitif boyanması ile nükleer bütünlüğünü doğrulamak için pozitif boyanması ile endotel hücreleri tanımlamak. </li><li> Daha sonra analiz için slayt başına görüntü 30 hücreleri. HUVEC&#39;e dahil, lekeli toplu iş her slayt için tekrarlayın. </li><li> Niteliksel bir yazılımı kullanarak, ilgi konusu birincil antikor için boyama yoğunluğunu analiz eder. </li><li> Farklı boyama oturumları, HUVEC aynı protein ekspresyonu için toplanan endotel hücrelerinde protein ifade oranı olarak rapor değerleri arasındaki yoğunluk boyama farklılıklar olası etkisini minimize etmek için karıştırıcı. </li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

FMD BA ve aPWV için doğru sonuçlar elde edilmesi sırasıyla, yüksek kaliteli ultrason görüntüleri ve basınç dalga şekilleri elde gerektirir. Bu merkezi operatörü 44 her tekniğin uygun ve sürekli eğitim ve kullanımıdır. Buna ek olarak, bu test oturumu (örneğin önceki 12 saat hızlı, iklim kontrollü odası, vb) 44,45 standartlaştırılması ile mümkün sonuçlarını etkileyebilecek birçok dış değişkenler için kontrol etmek önemlidir. Yukarıda belirtildiği gibi, ticari olarak R-dal...

Kronik böbrek hastalığı (KBH) yalnız 1 Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde ~ nüfusun% 11.5 etkileyen salgın boyutlarına ulaşmıştır önemli bir halk sağlığı sorunudur. KBH olan hastalarda kardiyovasküler ölüm ya da kardiyovasküler olay riski önemli ölçüde genel nüfusa 2-4 ile karşılaştırıldığında artmaktadır. KBH olan hastalar geleneksel kardiyovasküler risk faktörleri yüksek bir görülme sıklığı gösteren rağmen, bu sadece kardiyovasküler hastalık onların insidansında artış (CVD) 5 kısmını açıklıyor. Vasküler disfonksiyon nefroloji 6-9 tarlada artırılmış tanınmaya önemli bir geleneksel olmayan kardiyovasküler risk faktörüdür. Birçok değişiklikler büyük olasılıkla arteriyel disfonksiyon gelişimine katkıda ederken, en büyük endişe olanlar arasında en yaygın endotel bağımlı dilatasyon (EDD) olarak değerlendirilen vasküler endotel disfonksiyonu gelişimi, ve la sertleşme olanrge elastik arterlerin 10. Çeşitli teknikler EDD&#39;nin ve büyük elastik arter sertliğini değerlendirmek için var, ama en sık kullanılan sırasıyla brakiyal arter akım aracılı dilatasyon FMD BA ve aort nabız dalga hızı (aPWV) vardır. EDD&#39;nin değerlendirmek için başka sık kullanılan bir tekniktir venöz oklüzyon pletismografisi 11,12 kullanarak asetilkolin gibi farmakolojik ajanlar kol kan akımı tepki ölçülmesidir. Ancak, bu metodoloji FMD BA daha invaziv ve KBH olan hastalarda kontrendike olabilir brakiyal arterin kateterizasyonu gerektirir. Arteriyel sertliği değerlendirmek için alternatif bir teknik olarak bu yaygın olarak kullanılan veya aPWV 13 gibi klinik uç noktaları ile doğrulanmış olmasa da, karotid arter yerel arteriyel uyumu (sertliğin ters) ölçmektir. KBH olan hastalarda bozulmuş FMD BA 14-16 ve artan aort nabız dalga hızını aP hem göstermekWV 13,17,18, hatta öncesinde diyaliz ihtiyacı için. Önemlisi klinik bakış açısıyla, vasküler disfonksiyonu bu noninvaziv önlemlerin hem CKD 19-21, hem de diğer toplumlarda 22-26 yılında hastalarda hem de gelecekteki kardiyovasküler olaylar ve mortalite için bağımsız risk faktörüdür. Bu teknikler de dahil olmak üzere CKD hastaların CVD riski çeşitli toplumlarda, eğitim uygulanabilir. Arteriyel disfonksiyon CKD gelişir hangi kesin mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır; Ancak, azalmış nitrik oksit (NO) biyoyararlanım önemli bir katkıda 27-30 ve engelli EDD hem de ortak bir mekanizma ve artmış arteriyel sertlik 10,31 olduğunu. CKD olarak, oksidatif stres artar ve biyo NO 32-34 olarak azaltılmasına katkıda bulunmaktadır. Oksidatif stres antioksidan savunma göre, reaktif oksijen türlerinin (ROS) aşırı biyolojik olarak tanımlanır. Fizyolojik uyaranlar, incinflamatuar sinyal luding, oksitleyici enzim sistemlerini geliştirmek süperoksit anyon (O ● 2 -) da dahil olmak üzere, ROS üretmek için (örneğin, oksitleyici enzim NADPH oksidaz.) 35. Süperoksit üretimi nihayetinde bir nitrik oksit (NO) ve biyolojik olarak kullanılabilirliğini azaltmaktadır yol açar. Endotel disfonksiyonu olay CKD 36 bağımsız bir belirleyicisi olduğu gibi bozulmuş NO biyoyararlanım sırayla, CKD gelişimine katkıda bulunabilir. Bu hayvan veri eNOS inhibisyonu hipertansiyon (sistemik ve glomerular) neden olduğunu gösteren ile tutarlıdır, glomerular iskemi, glomerüloskleroz, ve tubulo-interstisyel yaralanma 37. Nitekim, NO biyoyararlanımını insan CKD 38,39 endotel disfonksiyonu için kilit rol düşündüren, insan hastalığı taklit eden deneysel böbrek hastalığının gelişimi ve ilerlemesinde gerekli görülmektedir azalır. Vasküler oksidatif stres belirteçleri v değerlendirilebilirbaşlangıçta Colombo ve ark. 40 tarafından geliştirilen ve Seals ark 41-43 modifiye bir teknik kullanarak, insan deneklerle araştırma toplanan endotel hücrelerini ascular. 2 steril J-teller kullanılarak, hücreler antekubital damardan toplanır, geri kazanılır, sabit ve daha sonra pozitif endotel hücreleri olarak tanımlanmış ve immünofloresan kullanılarak ilgi konusu olan proteinlerin ifadesi için analiz edildi. Biz burada bir) ölçü FMD BA için kullanılabilecek bu yöntemin bir tartışma sağlamak; b) aPWV ölçmek; c) oksidatif stres belirteçlerinin vasküler endotelyal hücre proteini ekspresyonunu ölçer. Odak kronik diyaliz gerektirmeyen, KBH olan hastalar üzerinde.

<table><tbody><tr><td>J-wire</td><td>St. Jude</td><td>404584</td><td>Koleksiyon başına 2</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık şort (MediShorts)</td><td>Quick Medical</td><td>4507</td><td></td></tr><tr><td>Non-invaziv hemodinamik iş istasyonu (NIHem)</td><td>Kardiyovasküler Mühendislik</td><td>N/A</td><td>Özel cetvel içerir.&nbsp; Alternatif bir sistem Sphygmocor</td></tr><tr><td>Ultrason</td><td>GE'dir.</td><td>Model: Vivid7 Dimension</td><td>Bir GE kullanıyoruz, ancak birçok şirket ve model var</td></tr><tr><td>Vasküler yazılım (Vascular Imager)&nbsp;</td><td>Tıbbi Görüntüleme Uygulamaları</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>R-dalgası tetik kutusu</td><td>Tıbbi Görüntüleme Uygulamaları</td><td>N/A</td><td>özel yapım</td></tr><tr><td>Hızlı Manşet Şişirme Sistemi</td><td>Hokanson</td><td>Model: Hokanson E20</td><td></td></tr><tr><td>Önkol tansiyon manşeti</td><td>Hokanson</td><td>N/A</td><td>6,5 x 34 cm mesaneli özel manşet&nbsp;</td></tr><tr><td>HUVEC'ler</td><td>Invitrogren</td><td>C-015-5C</td><td></td></tr><tr><td>Eşek serumu</td><td>Jackson</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Pap kalem</td><td>Araştırma Ürünleri Uluslararası</td><td>195505</td><td></td></tr><tr><td>VE Cadherin</td><td>Abcam</td><td>ab33168</td><td></td></tr><tr><td>AF568</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>A11011</td>, <td>mikroskobun özelliklerine bağlıdır;</td></tr><tr><td>AF488</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>A11034</td>, <td>mikroskobun özelliklerine bağlıdır;</td></tr><tr><td>Nitrotirozin antikoru&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab7048</td><td></td></tr><tr><td>NADPH oksidaz antikoru</td><td>Upstate</td><td>07-001</td><td></td></tr><tr><td>DAPI&nbsp;</td><td>Vector</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Hassas görev silme (Kimwipe)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>Plastik parafin film (parafilm)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-374-10</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>Modeli: FV1000 FCS/RICS</td><td>birçok seçenek mevcut&nbsp;</td></tr></tbody></table>

kronik böbrek hastalarında vasküler fonksiyon değerlendirilmesi

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Kronik böbrek hastalığı (KBH) olan hastaların belirgin olarak genel nüfusa oranla kardiyovasküler hastalık (CVD) riski arttı, ve bu sadece kısmen geleneksel KVH risk faktörleri ile açıklanmaktadır. Vasküler disfonksiyon vasküler endotelyal disfonksiyon (en yaygın endotel bağımlı dilatasyon [EDD] olarak değerlendirilmiştir) ve büyük elastik arterlerin sertleşmesi ile karakterize önemli bir geleneksel olmayan risk faktörüdür. Çeşitli teknikler EDD&#39;nin ve büyük elastik arter sertliği, değerlendirmek için mevcut olsa da en sık, sırasıyla brakiyal arter akım aracılı dilatasyon (FMD BA) ve aort nabız dalga hızı (aPWV) kullanılacak. Vasküler disfonksiyon bu noninvaziv önlemlerin ikisi de ve böbrek hastalığı olmayan hastalarda gelecekteki kardiyovasküler olayların bağımsız belirleyicileri vardır. KBH olan hastalar hem bozulmuş FMD BA göstermek ve aPWV arttı. Iken tarafından kesin mekanizmalar vasküler disfonksiyon deveCKD LOP&#39;lar tam olarak anlaşılmamıştır, artmış oksidatif stres ve nitrik oksit (NO) biyoyararlanım bir sonraki azalma önemli katkıda bulunmaktadır. Oksidatif stres hücresel değişiklikler antekubital damardan, vasküler endotelyal hücrelerin toplanması ve immünofloresan ile oksidatif stres belirteçlerinin protein ekspresyonunu ölçerek değerlendirilebilir. Biz, FMD BA, aPWV ve vasküler endotelyal hücre proteini ifade ölçmek için burada, bu yöntemleri hakkında bir tartışma sağlar.

FMD BA reaktif hiperemi aşağıdaki brakiyal arter çapı tepe değişiklik olarak ölçülür. Böylece, bekleme durumunda çap, 5 dakika tansiyon manşet oklüzyon döneminde (Şekil 1) sona ermesinden sonra çapına karşılaştırılır. Panel A brakiyal arterin temsili bir ultrason görüntüsünü gösterir, ve piyasada mevcut yazılımı kullanılarak elde Panel B, aşağıdaki 2 dakika manşet sürümünden çapı R-dalgası kapılı bir değişim grafiğini görüntüler. Değişim (Şekil 1&#39;de değişim% 4.8) çoğunluk...

Vasküler disfonksiyon ve fizyolojik mekanizmaları katkı derecesi brakiyal arter akım aracılı dilatasyon, aort nabız dalga hızı ve vasküler endotelyal hücre proteini ifade ölçülerek, kronik böbrek hastalığı olan hastalarda değerlendirilebilir.

Kronik Böbrek Hastalarında Vasküler Fonksiyon Değerlendirilmesi

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, kronik böbrek yetmezliği olan hastalarda vasküler fonksiyonu değerlendirmektir; bu, öncelikle hastalardan vasküler endotel hücrelerinin toplanmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, büyük elastik arter sertliğini ölçmek için aortik nabız dalga hızı değerlendirilir. Son olarak, vasküler endotel fonksiyonunu değerlendirmek amacıyla brakiyal arter akım aracılı dilatasyon ölçülür.Nihayetinde, vasküler endotel fonksiyonunu karakterize eden sonuçlar elde edilebilir. Bu yöntem, vasküler alandaki çeşitli proteinlerin ekspresyonuna hücresel düzeyde neler olduğu gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler, ultrason görüntülemede uzmanlaşmak için kapsamlı uygulama ve eğitim gerektiğinden zorluk yaşayacaklardır.Prosedürü, laboratuvarımdan araştırma asistanı Lonnie Perino gerçekleştirecek. Başlamak için bölgeyi topikal antiseptik ile hazırlayın. Ardından, bölgenin üzerine steril pencereli örtüler yerleştirin.Eğitimli bir hemşire veya hekim IV hattı yerleştirmeli ve bir hep-lok adaptörü takmalıdır. J şeklini açmak için örtülerin üzerine iki adet J teli yerleştirin. Her iki teldeki J yayını çekin.Kıvrımları açıldıktan sonra, hep lock kapağını açın ve JWI'yi venin içine yaklaşık sekiz santimetre boyunca ilerletin. Tel üzerinde çok fazla kan birikmesini önlemek için, teli çıkarmadan önce birkaç kez ileri geri hareket ettirin. Ardından, telleri, yaklaşık 30 mililitre disosyasyon tamponu içeren 50 mililitrelik konik bir tüpe sığacak şekilde tel kesicilerle kesin.Örnekleme tamamlandığında bu adımları ikinci tel için tekrarlayın. Islak laboratuvara dönün. Telleri bir pens ile kavrayın ve 10 dakika boyunca tüpün içinde ancak çözeltinin üzerinde tutun.Telleri, tüpteki disosyasyon tamponu ile durulamak için motorlu bir pipet kullanın. Tamponu, tellerin uzunluğu boyunca akacak şekilde bırakın ve fazla sıvıyı tübe sallayarak boşaltın. Telleri çıkarın ve örneği peletlemek için santrifüjleyin.Numuneleri geri alın ve santrifüjlemeden önce pellet kısmını PBS içinde yeniden süspande edin. Ardından beş dakika daha, tüpte yaklaşık iki mililitre bırakmak için bir vakum hortumunun ucuna pipet ucu takın. Pelleti rahatsız etmeden geri kalanını vakumla çekin.Pelleti yeniden süspande edin ve örneği daha önce etiketlenmiş sekiz lamın oval alanlarına eşit şekilde pipetleyin. Lamları, analiz aşamasına geçilene kadar -80 °C'de saklamadan önce beş saat boyunca 37 °C'deki inkübatöre yerleştirin. Denek tek kullanımlık şortu giymeli ve sessiz, loş, iklim kontrollü bir odada sırtüstü uzanmalıdır.Başlamaya hazır olduğunuzda, ultrason ve arteriyel sertlik cihazı için elektrotları yerleştirin. Ardından, kan basıncı manşonunu denek üzerine takın. Kan basıncı ölçümlerine 20 dakika sonra başlayın ve ölçümler beş milimetre cıva farkının altına düşene kadar tekrarlayın.Her okuma arasında iki dakika dinlenin ve en az üç okuma gerçekleştirin. Ardından brakiyal arter nabzını palpe edin ve brakiyal dalga formlarını kaydetmek için sonometreyi yerleştirin. Aynı işlemi radial, femoral ve karotis arterler için tekrarlayın.Ölçüm bandı kullanarak brakiyal, radial ve karotis arterleri için; özel cetvel ise femoral arter için her bir bölgenin suprasternal çentikten olan mesafesini ölçün. Ardından, özel bir yazılım kullanarak karotis-brakiyal, karotis-radial ve karotis-femoral nabız dalga hızını hesaplayın. Ön kol kan basıncı manşonunu, olekranon çıkıntısının hemen distaline yerleştirin.Vasküler yazılımı tetikleme moduna ayarlayın ve bazal brakiyal arterin en az 10 kardiyak döngüsüne ait ultrason görüntülerini ve kan akış hızı ölçümlerini kaydedin. İstenirse, ultrason probunu sabitlemek için mekanik bir kol kullanılabilir. Ardından, ön kol kan basıncı manşonunu 250 mmHg değerine kadar şişirin.Ve bir zamanlayıcı başlatın. Katılımcıya çok hareketsiz kalması talimatını verin. Zamanlayıcı dört dakika 45 saniyeyi gösterdiğinde hızların kaydına başlayın.Beşinci dakikada manşeti serbest bırakın ve ultrasonu B modunda görüntüler kaydedecek şekilde değiştirin. Saat beş dakika 10 saniyeyi gösterdiğinde kayda başlayın. Saat yedi dakikayı gösterene kadar kayda devam edin.Ardından, deneğin kan basıncını ölçün. Eğer sistolik kan basıncı 100 mmHg veya daha fazla ise, deneğin dilinin altına 0,4 mg sublingual nitrogliserin yerleştirin ve zamanlayıcıyı başlatın. Saat üç dakikayı gösterdiğinde B modunda kayda başlayın ve kayıt işlemini durdurun.Saat sekiz dakikayı gösterdiğinde, boyanmış endotel hücrelerini analiz etmek için, tek körleme yöntemiyle çalışan bir deneyci lamları sistematik olarak taramalıdır; endotel hücreleri VE cadherin için pozitif boyanma ile tanımlanır ve nükleer bütünlük dapi için pozitif boyanma ile onaylanır. Ek olarak, hücreler ilgili protein için de boyanmalıdır.Sonraki analizler için lam başına toplam 30 hücre görüntülenmelidir. VE kontrol lamı da dâhil olmak üzere, boyanmış gruptaki her bir lam için bu işlem tekrarlanır. İlgi duyulan birincil antikorun boyama yoğunluğunu analiz etmek için kalitatif yazılım kullanılır.Bu görüntü, kronik böbrek hastalığı olan bir hastanın değerlendirmesi sırasında, manşonun iki dakika boyunca serbest bırakılmasının ardından elde edilen bazal brakiyal arter çapını göstermektedir. Bu kayıt, R dalgasına göre senkronize edilmiş bir çap değişimini göstermektedir. Bu dalga formları, karotis ve femoral arterlerin her birinde elde edilmiştir.Zaman ve mesafe farkı, aortik nabız dalgası hızının raporunu hesaplamak için kullanılmıştır. Burada, kontrol ve hasta hücreleri; DPI ile nükleer bütünlük, VE cadherin ile endotel hücre ekspresyonu ve oksidant enzim N-A-D-P-H oksidaz açısından analiz edilmiştir. Bu prosedürü uygularken, doğru ve kantitatif bir değerlendirme yapabilmek için mümkün olan en yüksek kalitede ultrason görüntüleri, dalga formları ve endotel hücre görüntüleri elde etmenin önemli olduğunu unutmamak gerekir.İnsan örnekleriyle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın ve bu prosedürü gerçekleştirirken uygun kişisel koruyucu ekipman giymek gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

assessment-vascular-function-patients-with-chronic-kidney

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Endo-PAT 2000 kullanıyorsanız endotel fonksiyonunu değerlendirmek için bir non-invaziv prosedür gösterilmiştir.

Endo-PAT 2000 ile Endotel Vazodilatör Fonksiyon değerlendirilmesi

Kapillaroskopisi doğrudan mikrosirkülasyonu görselleştirmek için bir non-invaziv, nispeten ucuz yöntemdir. Önkol kan akımı tekniği endotel fonksiyonu kabul non-invaziv önlemleri sağlar.

Mikrovasküler ve Endotel Fonksiyonu Noninvaziv Değerlendirilmesi

Bu makale, aterosklerozun farklı aşamalarını değerlendirmek için tıbbi araştırmalarda yaygın olarak kullanılan vasküler fonksiyon ve morfolojinin çeşitli invaziv olmayan değerlendirmeleri için metodolojik hususları açıklamaktadır.

Vasküler Fonksiyon ve Morfoloji Non-invaziv Değerlendirmelerine Bir Metodolojik Yaklaşım

Bu iletişim kuralı bir tam böbrek iş-up glomerular hastalığı fare modellerinde yürütülmesi gereken açıklar. Yöntemler glomerular hastalığı tüm fare modelleri uygulanabilir glomerular işlevinin ayrıntılı işlevsel, yapısal ve mekanik analiz için olanak sağlar.

Fare modelleri Glomerular hastalığı böbrek fonksiyonlarının değerlendirilmesi

Parafoveal yüzeyel kılcal pleksusun damar ve perfüzyon yoğunluğu arasındaki belirleme katsayısının değerlendirilmesini, kılcal damarlardan daha büyük damarların perfüzyon yoğunluğuna katkısını tanımlamak için tanımladık.

Optik Koherens Tomografi Anjiyografi ile Ölçülen Maküler Perfüzyon Yoğunluğuna Kılcal ve Diğer Damar Katkılarının Değerlendirilmesi

Bu protokol, murin ortak iliak arteriyovenöz fistül oluşumunun cerrahi adımlarını detaylandırır. Bu modeli hemodiyaliz erişimi ile ilişkili ekstremite patofizyolojisini incelemek için geliştirdik.

Hemodiyaliz Erişimi ile İlişkili El Disfonksiyonunun Bir Murine Modeli

Bakım noktası ultrasonu (POCUS) genellikle hemodinamik devreyi değerlendirmek ve venöz tıkanıklığın varlığını tespit etmek için kullanılır. Venöz Aşırı Ultrason (VExUS) skorlama sistemi, klinisyenlerin venöz tıkanıklığın organ disfonksiyonu üzerindeki etkisini tahmin etmelerine yardımcı olmak için geliştirilmiştir. Bu makale, VExUS görüntü elde etme ve yorumlamayı açıklamayı amaçlamaktadır.

Venöz Aşırı Ultrasonun (VExUS) Gizeminin Çözülmesi: Görüntü Elde Etme ve Yorumlama

Bu makale, insan renal arter dallarının izolasyonu ve fonksiyonel değerlendirmesi için adım adım bir protokol sunmakta ve farmasötik geliştirme için klinik öncesi çalışmaları kolaylaştırmaktadır.

İnsan Renal Arteriyel Dallarının Çok Düzeyli Mikrodiseksiyonu ve Fonksiyonel-Yapısal Profillemesi

Alzheimer hastalığı olan hastalarda tanıma belleği görev yaparken, yüksek yoğunluklu bir olay ile ilgili olası veri toplanması için metodolojinin gözden geçirilir. Bu protokol konu hazırlama, kalite güvencesi, veri toplama ve veri analizi içerecektir.

Alzheimer hastalığı olan hastalarda olaya ilişkin potansiyeller kullanarak Episodik Bellek Özellikleri incelenmesi

Spektral Karyotipik (SKY), genomik ve kromozomal sapmaları belirlemek için gelişmiş bir sitogenetik bir yöntemdir. Bu teknik, bütün kromozomlar sınıflamasına izin verir, kromozom boyayan problar yararlanır. SKY da polikistik böbrek hastalığı dahil olmak üzere çeşitli hastalıklar, farelerde ve insanlarda kompleks kromozom anomalileri ve ayrımcılığın kusurları tespit edebilir.

Polikistik Böbrek Hastalığı Olan İnsanlar ve Fareler kromozom anomalileri Eğitim Spektral Karyotipik

Keşfedin kronik böbrek hastalarında vasküler fonksiyon değerlendirmesi için brakiyal arter akım aracılı vazodilatasyon ve aortik nabız dalga hızı ölçüm yöntemlerini. Bu teknik damar sağlığını karakterize eder.

Kronik Böbrek Hastalarında Vasküler Fonksiyon Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet