Kronik Böbrek Hastalarında Vasküler Fonksiyon Değerlendirilmesi

Aşağıdaki deneyin genel amacı, vasküler fonksiyonu değerlendirmektir Kronik böbrek hastalığı olan hastalarda, bu ilk olarak hastalardan vasküler endotel hücrelerinin toplanmasıyla elde edilir. Aort nabız dalgası hızı daha sonra büyük elastik arter sertliğini ölçmek için değerlendirilir. Daha sonra vasküler endotel fonksiyonunu değerlendirmek için brakiyal arter akım aracılı dilatasyon ölçülür.

Sonuçta, vasküler endotel fonksiyonunu karakterize eden sonuçlar elde edilebilir. Bu yöntem, hücresel düzeyde çeşitli proteinlerin ekspresyonuna ne olduğu gibi vasküler alandaki temel soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler, ultrason görüntülemede ustalaşmak için kapsamlı uygulama ve eğitim gerektiğinden mücadele edeceklerdir.

Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan bir araştırma görevlisi olan Lonnie Perino olacak. Başlamak için siteyi topikal antiseptik ile hazırlayın. Daha sonra sitenin üzerine steril delikli perdeler yerleştirin.

Eğitimli bir hemşire veya doktor bir IV yerleştirmeli ve bir hep kilit adaptörü takmalıdır. J şeklini açmak için perdelerin üzerine iki J kablosu yerleştirin. J'nin yayını her iki kablodan çekin.

Çözüldükten sonra, hep kilidini açın ve JWI'yi yaklaşık sekiz santimetre damara besleyin. Tel üzerinde çok fazla kan birikmesini önlemek için teli çıkarmadan önce birkaç kez ileri geri itin. Daha sonra, telleri yaklaşık 30 mililitre ayrışma tamponu içeren 50 mililitrelik konik bir tüpe sığacak şekilde kesmek için tel kesiciler kullanın.

Numune toplama tamamlandığında ikinci kablo için bu adımları tekrarlayın. Islak laboratuvara geri dönün. Telleri bir çift forseps ile sıkıştırın ve tüpün içinde, ancak çözeltinin üzerinde 10 dakika tutun.

Telleri tüpten ayrılma tamponu ile durulamak için motorlu bir pipetleyici kullanın. Tamponu, tellerin uzunluğu boyunca akacak şekilde serbest bırakın ve fazla sıvıyı tüpe silkeleyin. Telleri çıkarın ve numuneyi pelete santrifüjleyin.

Numuneleri alın ve santrifüjlemeden önce peleti PBS'de yeniden süspanse edin. Daha sonra beş dakika daha, tüpte yaklaşık iki mililitre bırakmak için emme hortumunun ucundaki bir pipet ucunu kullanın. Peleti bozmadan geri kalanını vakumlayın.

Peleti yeniden süspanse edin ve numuneyi önceden etiketlenmiş sekiz slaytın oval alanlarına eşit şekilde pipetleyin. Slaytları, analizin başlamasına hazır olana kadar eksi 80 santigrat derecede saklamadan önce beş saat boyunca 37 santigrat derecede inkübatöre yerleştirin. Denek tek kullanımlık şort giymeli ve sessiz, loş, iklim kontrollü bir odada sırtüstü yatmalıdır.

Başlamaya hazır olduğunuzda, elektrotları ultrason ve arteriyel sertlik cihazımız için konumlandırın. Ardından, kan basıncı manşetini konunun üzerine yerleştirin. Kan basıncı ölçümlerine 20 dakika sonra başlayın, ölçümler cıvanın beş milimetre yakınında olana kadar okumaları tekrarlayın.

Her okuma arasında iki dakika dinlenmek ve en az üç performans sergilemek. Daha sonra brakiyal arter nabzı için palpe edin ve brakiyal dalga formlarını kaydetmek için sonometreyi yerleştirin. Radyal, femoral ve karotis arterler için tekrarlayın.

Brakiyal, radyal ve karotis arterler için bir mezura ve femoral için özel cetvel kullanarak bu bölgelerin her birine olan mesafeyi süper sternal çentikten ölçün. Ardından, özel bir yazılım kullanarak karotis brakiyal karotis radyal ve karotis femoral nabız dalga hızını hesaplayın. Önkol kan basıncı manşetini reon işleminin hemen distaline yerleştirin.

Vasküler yazılımı tetikleme moduna ayarlayın ve en az 10 kardiyak başlangıç brakiyal arter döngüsünü, ultrason görüntülerini ve kan akış hızı ölçümlerini kaydedin. İstenirse ultrason probunu sabitlemek için mekanik bir kol kullanılabilir. Daha sonra, önkol kan basıncı manşetini 250 milimetre cıvaya şişirin.

Ve bir zamanlayıcı başlatın. Katılımcıya çok hareketsiz kalmasını söyleyin. Zamanlayıcı dört dakika 45 saniye tetiğini okuduğunda hızları kaydetmeye başlayın.

Manşeti beş dakikada serbest bırakın ve B modu görüntülerini kaydetmek için ultrasonu değiştirin. Saat beş dakika okuduğunda, 10 saniye. Saat yedi dakikayı gösterene kadar kayda devam edin.

Ardından, deneğin kan basıncını alın. Sistolik kan basıncı 100 milimetre cıvaya eşit veya daha büyükse, deneğin dilinin altına 0.4 miligram dil altı nitrogliserin yerleştirin ve zamanlayıcıyı başlatın. Saat üç dakikayı gösterdiğinde B modunu kaydetmeye başlayın ve kaydı durdurun.

Saat sekiz dakikayı gösterdiğinde. Boyanmış endotel hücrelerini analiz etmek için, tek bir kör deneyci slaytları sistematik olarak taramalıdır, endotel hücreleri VE kaderin için pozitif boyama ile tanımlanır ve nükleer bütünlük dapi için pozitif boyama ile doğrulanır. Ek olarak, ilgilenilen protein için hücreler boyanmalıdır.

Daha sonraki analizler için slayt başına toplam 30 hücre görüntülenmelidir. VE kontrol slaytı da dahil olmak üzere lekeli partideki her slayt için bu işlemi tekrarlayın. İlgilenilen birincil antikor için boyamanın yoğunluğunu analiz etmek için kalitatif yazılım kullanılır.

Bu görüntü, kronik böbrek hastalığı olan bir hastanın iki dakika boyunca manşet serbest bırakıldıktan sonra değerlendirilmesi sırasında elde edilen başlangıç brakiyal arter çapını göstermektedir. Bu kayıt, çapta bir R dalgası kapılı değişikliği gösterir. Bu dalga formları karotis ve femoral arterlerin her birinde elde edildi.

Zaman ve mesafedeki fark, aort nabız dalga hızının bir raporunu hesaplamak için kullanıldı. Burada, kontrol ve hasta hücreleri, VE kaderin ile DPI endotel hücre ekspresyonu ve oksidan enzim N-A-D-P-H oksidaz ile nükleer bütünlük açısından analiz edildi. Bu prosedürü denerken, doğru ve kantitatif değerlendirme için mümkün olan en yüksek kalitede ultrason görüntülerini, dalga formlarını ve endotel hücre görüntülerini elde etmeyi unutmamak önemlidir.

İnsan numuneleriyle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman uygun kişisel koruyucu ekipman giymek gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.