Name: Cerrahi Alma, İzolasyon ve In vitro Doku Mühendisliği Uygulamaları için İnsan Ön Çapraz Bağ-türevli Hücreleri Genişleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Keşfedin insan ön çapraz bağ hücrelerinin izolasyonu ve genişlemesi için doku mühendisliği protokolünü. PLAGA iskeletlerinde hücre uyumluluğunu değerlendirmek amacıyla tarama elektron mikroskobu ve immünofloresan boyama yöntemleri kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar başlangıç ​​fonu ve Southern Illinois Üniversitesi Tıp Fakültesi&#39;nden cerrahi araştırma hibe bölümünü kabul etmek istiyorum; ve Memorial Tıp Vakfı hibe.

1.. Cerrahi Alma Not: Bir İDD onay ACL rekonstrüksiyon cerrahisi sırasında ACL güdük toplamak için elde edilmiştir. Kullanılan ACL güdük genel cerrahi atık olarak atılır olduğu gibi KİK muafiyet verildi. 20 hasta ACL güdük toplamak için kullanılmıştır. <ol><li> Hastaya kurumun protokol başına genel anestezi ve ameliyat öncesi antibiyotik uygulayın. </li><li> Turnike uygulamak ve sistolik kan basıncı üzerinde 100 mg şişirmek. </li><li> Sırtüstü pozisyonda hastayı yerleştirmek. 5 mm portalı için 30-45 ° fleksiyonda diz yatay anterolateral kesi yapmak ve 30 ° suprapatellar içine artroskopik trokarı ve kamera takın. </li><li> Bir rutin tanısal artroskopi gerçekleştirin. </li><li> Bir çentik girin ve yırtık ACL üzerinde membranöz sinovyumlu bileştireceğim. </li><li> ACL güdük tanımlamak için 4,5 mm tıraş makinesi ve ablator kullanın. </li><li> Birden SPE toplamak için düz acı bir safra kesesi kullanınkalan ACL güdük cimens. </li><li> Steril bir kap içinde, normal tuzlu su içinde örnek koruyun. </li><li> Çözme ve laboratuvar tesis nihai teslimat için patolojiye örnekleri gönderin. </li><li> Hastayı kurtarmak ve kurumun protokol başına gibi post-operatif bakım gerçekleştirin. </li></ol> 2.. Doku Sindirim ve hacl İzolasyon <ol><li> Steril tuzlu su / PBS ile bir petri tabağına konulacak patoloji alınan insan ACL doku aktarın (Fosfat tamponlu serum fizyolojik). </li><li> 1-2 mm 3 adet steril makas kullanılarak doku kıyma ve tuz ile en az 3 kez kıyılmış doku yıkayın. </li><li> DMEM/F-12% 0.4 Kollajenazının 37 ° C&#39;de 4-6 saat boyunca% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 Penisilin / Streptomisin ile desteklenmiş (50/50, 1x), orta ile kıyılmış doku Digest </li><li> 5 dakika boyunca 1000 x g&#39;de santrifüj ve hücreler daha sonra ortam içinde tekrar süspansiyon hücreleri. </li><li> S daha sonra, 2-3 defa ortamı ile yıkayın ve hücrelerineed / 2-3 gün boyunca T-25 şişelerinde kültürü. </li></ol> 3.. Hücresel Genişleme, Donma ve Çözülme <ol><li> Bir T-25 balonuna 2-3 gün süre ile kültüre hücreleri görselleştirmek için bir ışık mikroskobu kullanarak. </li><li> DMEM/F-12 içinde 37 ° C&#39;de hücreleri,% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 Penisilin / Streptomisin (P / S) ile desteklenmiş (50/50, 1x) orta koruyun. Not: Hücreler bağlılık ve standart morfolojisini göstermek zaman medya değiştirin. Hücreleri gözlemlemek için bir ışık mikroskobu kullanın. </li><li> 7. günde (~ 1.3 X 10 6 hücre / şişe) PBS ile konfluent hücreler yıkanır. Tripsin (0.5 g / L) ilave edin ve 5 dakika boyunca 37 ° C&#39;de hücreler inkübe edin. Tripsin nötralize etmek için askıya hücrelere ortam ekleyin. Üç T-25 şişeler arasındaki medya-hücresi karışımı bölün. </li><li> Tripsin (0.5 g / L) ekleyin, PBS ile yıkayın konfluent hücreler ve DMSO, FBS ve tam ortam içeren ortam dondurma bunları tekrar süspansiyon içinde (DMEM/F-12 orta +% 10 FBS +% 1 P / S) oranı 01:02:07. </li><li> Mağazahücreler daha uzun süreler için depolanan olması durumunda, hücreler bir ay içinde kullanılır ve sıvı nitrojen içinde olması durumunda -80 ° C de kriyojenik şişeler. </li><li> Yeniden kullanım için bir 37 ° C su banyosu içinde şişeleri çözülme. Not: Genellikle% 90-95 hücreleri hayatta. </li></ol> 4. 2-D Poly Laktik-ko-glikolik asit (PLAĞA) İskele Engineered Doku Fabrikasyon <ol><li> Bir 20 mL sintilasyon şişesine 12 ml diklorometan içinde 1 g PLAĞA çözülür ve sabit bir hızda (800 rpm) ile 8 saat için bir çözüm vorteks. Not:. Gupta et al, 15 Ayrıntılı açıklaması </li><li> Florlu koruma kağıdı ile kaplı cam bir Petri tabağına için çözünmüş çözelti aktarın. </li><li> 30 dakika boyunca bir vakum başlık altında Petri tabağına yerleştirin. Gece boyunca oda sıcaklığında ve daha sonra -20 ° C&#39;de Petri kabı bırakın. Polimerin ince filmler elde etmek için çözücünün buharlaşmasını sağlamak üzere tam liyofilizerde Petri kapları yerleştirin. </li><li> Polimer fi yerleştirin24 saat boyunca bir kurutucu içinde LMS. </li><li> 12 mm çapında dairesel bir disk halinde polimer filmler kesin ve gerekli olana kadar bir kurutucuda saklayın. </li></ol> 5.. Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) <ol><li> Hücreler (50.000 hücre / disk) yıkayın tohumlanma 7 gün daha sonra, PBS ile kontrol TCPS ile PLAGA yapı iskeleti üzerine serpildi. </li><li> Hücreleri düzeltmek ve sonrası tespiti için 0.1 M kakodilat tampon içinde% 2.5 OsO 4 0.1 M kakodilat tampon içinde% 1.5 Glutaraldehit kullanın. </li><li> 0.1 M kakodilat tampon ile sabitleştirilmiş hücreler yıkanır. 15 dakika her biri, ve bir gece boyunca heksametildisilazan (HMDS) içinde daha kuru için seri etanol su kaybı (% 50,% 70,% 80,% 90 ve% 100) ile sabitleştirilmiş hücreler kurutun. </li><li> Düğme vana ile SEM püskürtmeli kaplama sisteminin odasına havalandırma ve üst plakasını kaldırın. </li><li> Odası içinde kurutulmuştur numuneler. Üst plaka indirin. </li><li> Odasını boşaltılması başlatmak için pompa kontrol düğmesini açın. </li><li> Açık argon sızıntı valfi. Bekleyinvakum 0,05 mbar düşmesi için. </li><li> Altın / Palladium ince bir tabaka (0,13 nm) ile kaplayın kurutuldu örnekleri. </li><li> Kapalı konumuna argon sızıntı valfi döndürür. </li><li> Off kontrol düğmesini açın. </li><li> Düğme vanalı bölmesinin havalandırılması ve üst plakayı kaldırın. </li><li> Örnekleri çıkarın ve 24 saat boyunca bir kurutucu saklayın. </li><li> Bir taramalı elektron mikroskobu altında örnekleri gözlemlemek. </li></ol> 6.. İmmünofloresan Boyama <ol><li> Hücreler (50.000 hücre / disk) yıkayın tohumlanma 7 gün daha sonra, PBS ile kontrol TCPS ile PLAGA yapı iskeleti üzerine serpildi. </li><li> 10 dakika boyunca% 70 etanol (soğuk) kullanarak hücreleri düzeltildi. </li><li> PBS, 20 dakika boyunca,% 0.05 Triton X-100 olan% 1 Sığır Serum Albümini (BSA) ile, oda sıcaklığında sabit hücreleri inkübe edin. </li><li> 20 dakika boyunca oda sıcaklığında% 1 Tween içindeki örnekleri bırakın. </li><li> Fare monoklonal anti-β-aktin antikoru (1:400) ekleyin ve overnigh hücreleri inkübe4 ° C&#39;de t </li><li> % 0.05 Tween ile yıkayın. Hücrelere ikincil antikor (anti-fare F (ab &#39;keçi), bir floresan sonda, 1:400 ile konjuge edilmiş IgG 2 fragmanı) ilave edin ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca inkübe edilir. </li><li> Hücrelerin PBS ile yıkayın. Nükleer leke ile hücreleri leke ve Gliserin% 80 kullanarak monte edin. </li><li> Konfokal mikroskop altında hücreleri dikkate alınmalıdır. </li></ol>

<ol><li>Johnson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anterior+cruciate+ligament%3A+A+dilemma+in+sports+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">The anterior cruciate ligament: A dilemma in sports medicine.</a> Int J Sports Med. 3, 71-79 (1982).</li>
<li>Owings, M. F., Kozak, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambulatory+and+inpatient+procedures+in+the+United+States%2C+1996%5BTitle%5D)+AND+%22Vital+Health+Stats%22%5BJournal%5D)">Ambulatory and inpatient procedures in the United States, 1996.</a> Vital Health Stats. 13, 1-119 (1998).</li>
<li>Frank, C. B., Jackson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+science+of+reconstruction+of+the+anterior+cruciate+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">The science of reconstruction of the anterior cruciate ligament.</a> J Bone Joint Surg Am. 79, 1556-1576 (1997).</li>
<li>Miyasaka, K. C., Daniel, D. M., Stone, M. L., Hirshman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+incidence+of+knee+ligament+injuries+in+the+general+population%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Knee+Surg%22%5BJournal%5D)">The incidence of knee ligament injuries in the general population.</a> Am J Knee Surg. 4, 3-8 (1991).</li>
<li>Taylor, D. C., Posner, M., Curl, W. W., Feagin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament%3A+over+30+year+follow-up+of+patients+treated+with+arthrotomy+and+primary+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Isolated tears of the anterior cruciate ligament: over 30 year follow-up of patients treated with arthrotomy and primary repair.</a> Am J Sports Med. 37 (1), 65-71 (2009).</li>
<li>Liljedahl, S. O., Lindvall, N., Wetterfors, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+diagnosis+and+treatment+of+acute+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament%3A+a+clinical+and+arthrographic+study+of+forty-eight+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Early diagnosis and treatment of acute ruptures of the anterior cruciate ligament: a clinical and arthrographic study of forty-eight cases.</a> J Bone Joint Surg Am. 47, 1503-1513 (1965).</li>
<li>Oensten, M., Lysholdm, J., Gillquist, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suture+of+fresh+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament%3A+A+5+year+follow+up%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Orthop+Scan%22%5BJournal%5D)">Suture of fresh ruptures of the anterior cruciate ligament: A 5 year follow up.</a> Acta Orthop Scan. 55, 270 (1984).</li>
<li>Buckley, S. L., Barrack, R. L., Alexander, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+history+of+conservatively+treated+partial+anterior+cruciate+ligament+tears%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">The natural history of conservatively treated partial anterior cruciate ligament tears.</a> Am J Sports Med. 17 (2), 221-225 (1989).</li>
<li>Noyes, F. R., Mooar, L. A., Moorman, C. T. 3rd, McGinnis, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament.+Progression+to+complete+ligament+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Partial tears of the anterior cruciate ligament. Progression to complete ligament deficiency.</a> J Bone Joint Surg Br. 71 (5), 825-833 (1989).</li>
<li>Bak, K., Scavenius, M., Hansen, S., Norring, K., Jensen, K. H., Jorgensen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament.+Long+term+followup+of+56+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Knee+Surg+Sports+Traumatol+Arthrosc%22%5BJournal%5D)">Isolated partial rupture of the anterior cruciate ligament. Long term followup of 56 cases.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (2), 66-71 (1997).</li>
<li>Fritschy, D., Panoussopoulos, A., Wallensten, R., Peter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+we+predict+the+outcome+of+a+partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament%3F+A+prospective+study+of+43+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Knee+Surg+Sports+Traumatol+Arthrosc%22%5BJournal%5D)">Can we predict the outcome of a partial rupture of the anterior cruciate ligament? A prospective study of 43 cases.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (1), 2-5 (1997).</li>
<li>Sommerlath, K., Odensten, M., Lysholm, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+late+course+of+acute+partial+anterior+cruciate+ligament+tears.+A+nine+to+15+year+follow-up+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop%22%5BJournal%5D)">The late course of acute partial anterior cruciate ligament tears. A nine to 15 year follow-up evaluation.</a> Clin Orthop. , 281-2152 (1992).</li>
<li>Barrack, R. L., Buckley, S. L., Bruckner, J. D., Kneisl, J. S., Alexander, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+versus+complete+acute+anterior+cruciate+ligament+tears%3A+the+results+of+nonoperative+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Partial versus complete acute anterior cruciate ligament tears: the results of nonoperative treatment.</a> J Bone Joint Surg Br. 72 (4), 622-624 (1990).</li>
<li>Murray, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+and+potential+of+primary+ACL+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Current status and potential of primary ACL repair.</a> Clin Sports Med. 28 (1), 51-61 (2009).</li>
<li>Gupta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+walled+carbon+nanotube+composites+for+bone+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Single walled carbon nanotube composites for bone tissue engineering.</a> J Orthop Res. 9, 1374-1381 (2013).</li>
<li>Fruensgaard, S., Johannsen, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incomplete+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Incomplete ruptures of the anterior cruciate ligament.</a> J Bone Joint Surg Br. 71, 526-530 (1989).</li>
<li>Sandberg, R., Balkfors, B., Nilsson, B., Westlin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Operative+versus+non-operative+treatment+of+recent+injuries+to+the+ligaments+of+the+knee.+A+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Operative versus non-operative treatment of recent injuries to the ligaments of the knee. A prospective randomized study.</a> J Bone Joint Surg Am. 69, 1120-1126 (1987).</li>
<li>Lamar, D. S., Bartolozzi, A. R., Freedman, K. B., Nagda, S. H., Fawcett, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+modification+of+partial+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22Arthroscopy%22%5BJournal%5D)">Thermal modification of partial tears of the anterior cruciate ligament.</a> Arthroscopy. 21 (7), 809-814 (2005).</li>
<li>Indelli, P. F., Dillingham, M. F., Fanton, G. S., Schurman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monopolar+thermal+treatment+of+symptomatic+anterior+cruciate+ligament+instability%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop%22%5BJournal%5D)">Monopolar thermal treatment of symptomatic anterior cruciate ligament instability.</a> Clin Orthop. 407, 138-147 (2003).</li>
<li>Smith, D. B., Carter, T. R., Johnson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+failure+rate+for+electrothermal+shrinkage+of+the+lax+anterior+cruciate+ligament%3A+a+multicenter+follow-up+past+2+years%5BTitle%5D)+AND+%22Arthroscopy%22%5BJournal%5D)">High failure rate for electrothermal shrinkage of the lax anterior cruciate ligament: a multicenter follow-up past 2 years.</a> Arthroscopy. 24 (6), 637-641 (2008).</li>
<li>Buda, R., Ferruzzi, A., Vannini, F., Zambelli, L., Di Caprio, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Augmentation+technique+with+semitendinosus+and+gracilis+tendons+in+chronic+partial+lesions+of+the+ACL%3A+clinical+and+arthrometric+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Knee+Surg+Sports+Traumatol+Arthrosc%22%5BJournal%5D)">Augmentation technique with semitendinosus and gracilis tendons in chronic partial lesions of the ACL: clinical and arthrometric analysis.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 14 (11), 1101-1107 (2006).</li>
<li>Sekiya, J. K., Golladay, G. J., Wojtys, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autodigestion+of+a+hamstring+anterior+cruciate+ligament+autograft+following+thermal+shrinkage%3A+a+case+report+and+sentinel+of+concern%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Autodigestion of a hamstring anterior cruciate ligament autograft following thermal shrinkage: a case report and sentinel of concern.</a> J Bone Joint Surg Am. 82 (10), 1454-1457 (2000).</li>
<li>Farquharson-Roberts, M. A., Osborne, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament+of+the+knee%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Partial rupture of the anterior cruciate ligament of the knee.</a> J Bone Joint Surg Br. 65, 32-34 (1983).</li>
<li>Rue, J. P., Ghodadra, N., Bach, B. R. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+tunnel+placement+in+single-bundle+anterior+cruciate+ligament+reconstruction%3A+a+cadaveric+study+relating+transtibial+lateralized+femoral+tunnel+position+to+the+anteromedial+and+posterolateral+bundle+femoral+origins+of+the+anterior+cruciate+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Femoral tunnel placement in single-bundle anterior cruciate ligament reconstruction: a cadaveric study relating transtibial lateralized femoral tunnel position to the anteromedial and posterolateral bundle femoral origins of the anterior cruciate ligament.</a> Am J Sports Med. 36, 73-79 (2008).</li>
<li>Carey, J. L., Dunn, W. R., Dahm, D. L., Zege, S. L., Spindler, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+anterior+cruciate+ligament+reconstruction+with+autograft+compared+with+allograft%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg%22%5BJournal%5D)">A systematic review of anterior cruciate ligament reconstruction with autograft compared with allograft.</a> J Bone Joint Surg. 91, 2242-2450 (2009).</li>
<li>Murray, M. M., Martin, S. D., Martin, T. L., Spector, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+changes+in+the+human+anterior+cruciate+ligament+after+rupture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Histological changes in the human anterior cruciate ligament after rupture.</a> J Bone Joint Surg Am. 82, 1387-1397 (2000).</li>
<li>Andrish, J., Holmes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+synovial+fluid+on+fibroblasts+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop+Relat+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of synovial fluid on fibroblasts in tissue culture.</a> Clin Orthop Relat Res. (138), 279-283 (1979).</li>
<li>Murray, M. M., Spindler, K. P., Ballard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+histologic+repair+in+a+central+wound+in+the+anterior+cruciate+ligamentwith+a+collagen-platelet-rich+plasma+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Enhanced histologic repair in a central wound in the anterior cruciate ligamentwith a collagen-platelet-rich plasma scaffold.</a> J Orthop Res. 25, 1007-1017 (2007).</li>
<li>Carter, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+cruciate+ligament+thermal+shrinkage%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Anterior cruciate ligament thermal shrinkage.</a> Clin Sports Med. 21, 693-700 (2002).</li>
<li>Perry, J. J., Higgins, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+and+posterior+cruciate+ligament+rupture+after+thermal+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Arthroscopy%22%5BJournal%5D)">Anterior and posterior cruciate ligament rupture after thermal treatment.</a> Arthroscopy. 16, 732-736 (2000).</li>
<li>Cheng, M. T., Yang, H. W., Chen, T. H., Lee, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+multipotent+stem+cells+from+human+cruciate+ligaments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of multipotent stem cells from human cruciate ligaments.</a> Cell Prolif. 42 (4), 448-460 (2009).</li>
<li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+human+anterior+cruciate+ligament-derived+vascular+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of human anterior cruciate ligament-derived vascular stem cells.</a> Stem Cells Dev. 21 (6), 859-872 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu hACL/2D iskele çalışmanın temel amacı, kısmi ACL yırtığı primer onarım artırmak için bir yama elde edilen hücrelerin kullanımı oldu. Kısmi ACL yırtığı nonoperatif immobilizasyon, korse, ilerici bir rehabilitasyon programı ve düzenli izlem değerlendirme 13,16,17 kısa bir süre içerebilir. Ancak, birçok çalışma sporcular konservatif tedavi kötü sonuçlar ve başarısızlık ile ilişkili olduğunu göstermektedir. Buckley ve ark. Orta takipte kısmi ACL yırtığı olan 25 hasta değerlendirildi ve hastaların sade...

Ön çapraz bağ (ACL) diz sık yaralanan eklem içi bağ olduğunu. Yaklaşık 200.000 (ACL) yaralanmaları ABD&#39;de yıllık olarak rapor edilmiştir. Ortopedik rekonstrüktif cerrahi 1,2,3,4 için ACL yaralanması opt yaşayan hastaların% 75 üzerinde. Cerrahi girişim nedeniyle sık sık doğal olarak zayıf iyileşme potansiyeli 3 belirtilir. ACL yeniden tipik olarak bir otogreft veya allogreft tendon vasıtasıyla gerçekleştirilir. Onlar yüksek başarı oranları ve primer sütür onarımı, diğer tedavi seçeneği övünme gibi otogreft ve allogreft rekonstrüksiyonu için altın standardı temsil, 94&#39;e kadar% 5,6,7 başarısızlık oranları göstermiştir. ACL Kısmi gözyaşları tüm ACL yırtığı 8% 28 10% temsil eder. Prospektif bir çalışmada, Noyes ve ark. Daha ACL yarısından etkileyen kısmi gözyaşları ile hastaların% 50 sonra ACL yetmezliği tamamlamak için olmayan ilerledi tahminoperatif tedavi 9. Diğer çalışmalar kalıcı istikrarsızlığa rapor ve yaralanma öncesi aktivite düzeyi 9,10,11,12,13 dönmek mümkün hastaların az% 30 ile fonksiyonu azalmıştır. Tedavi seçenekleri sınırlıdır ve muhafazakar modaliteleri, kalan ACL termal büzülme ya da ACL rekonstrüksiyon içerir. Son zamanlarda, Augmented primer onarım ilgi artmış oldu. Bu teknikler primer sütür onarımı 14 geliştirmek için biyolojikleri kullanın. Son araştırmalar, mezenkimal gibi hacl, greft sınırlamaları aşmak için 31,32 kök hücreleri elde edilen fakat bu hücrelerin geçerliliği ve etkinliği halen bilinmemektedir hasat için çalıştı. Doku mühendisliği uygulamaları için ideal bir hücre kaynağı hacl fibroblast hücreleri kaynaklı olmayan mesechymal gibi görünüyor. Mevcut araştırma, uygun bir matris malzeme ve mühendislik iskele için hücre kaynağı belirlenmesi üzerine odaklanmıştır. Bu su gibi atılacak bir yırtık ACL için standart bir prosedür olduğunurekonstrüksiyonu ameliyatı sırasında rgical atık, ancak, bu bozuk bağ ACL değiştirme tasarlanmış ideal doku geliştirmek ve artırmak için gerekli hücrelerin edinimi için kaliteli bir kaynak olabilir. Bizim laboratuvar Bu hasat hacl türetilen hücrelerin in vitro genişlemesi için bir protokol geliştirilmiştir. Hacl türetilen hücreler ile aşılanmış bir mühendislik 2D matrisini kullanarak, potansiyel olarak kısmi ACL onarım artırmak ve yırtık ligament güçlendirmek olabilecek bir yama tasarladık.

<table><tbody><tr><td>Petri kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-103C</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>BP3994</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz</td><td>Gibco</td><td>17018-029</td><td>4 & # 176'da saklayın; C</td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Cellgro</td><td>10-092-CV</td><td>4 & # 176;C'de saklayın. 37 & # 176'da sıcak; Kullanmadan önce C su banyosu.</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10082</td><td>-80 & # 176'da saklayın; C</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>Lonza</td><td>17-602E</td><td>Mağazası 4 & # 176; C</td></tr><tr><td>Santrifüj Tüpleri- 15 ml</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>T-25 şişeleri</td><td>BD Falcon</td><td>3013</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-Versen karışımı</td><td>Lonza</td><td>17-161E</td><td>4 & # 176;C'de saklayın 37 & # 176'da ısıtın; Kullanmadan önce C su banyosu.</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP231-100</td><td>Yanıcı sıvı. Cilt, göz ve solunum yolu tahrişine neden olabilir.</td></tr><tr><td>Kriyojenik şişeler</td><td>Corning</td><td>430489</td><td></td></tr><tr><td>PLAGA</td><td>Purac Biomaterials</td><td>Purasorb PLG8523</td><td>-80 & # 176'da saklayın; C</td></tr><tr><td>TCPS diskleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-82</td><td></td></tr><tr><td>Diklorometan</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC36423-0010</td><td>Olası kanser tehlikesi. Kuru ve serin bir yerde saklayın.</td></tr><tr><td>Bytac kağıt</td><td>Saint gobin performans plastikleri</td><td>1420652</td><td></td></tr><tr><td>Sintilasyon şişesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-339-21G</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini (BSA)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td>Mağaza 4 & # 176; C</td></tr><tr><td>Tween</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>fare Anti-&beta;-aktin antikoru (1&#176; Ab)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>A5441</td><td>Mağazası -20 & # 176; C</td></tr><tr><td>keçi-anti-fare antikoru (2&#176; Ab)</td> <td>Hücre Sinyalizasyonu</td><td>4408</td><td>-20 & # 176'da saklayın; C</td></tr><tr><td>Hoechst boya</td><td>Sigma Aldrich</td><td>14530</td><td>Mağazası -20 & # 176'da; C</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehit</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2547-1</td><td>Solunması ve yutulması halinde toksiktir. Tüm maruz kalma yollarında yanıklara neden olur.</td></tr><tr><td>Heksametildisilazane</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC43085-1000</td><td>Yanıcı sıvı ve buhar. Tüm maruz kalma yollarında yanıklara neden olur.</td></tr><tr><td>Steril Makas</td><td>McKesson</td><td>25-716</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5804R</td><td></td></tr><tr><td>Işık Mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>CK40</td><td></td></tr><tr><td>Su Banyosu</td><td>Thermo scientific</td><td>2845</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Labnet</td><td>VX-200</td><td></td></tr><tr><td>Cam Petri plakaları</td><td>fisher Scientific</td><td>S31473</td><td></td></tr><tr><td>Acu-Punch</td><td>Acuderm A.Ş.</td><td>P1225</td><td>Acu-Punch, 12 mm diskleri kesmek için kullanıldı</td></tr><tr><td>Kakodilat tamponu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>97068</td><td>Yanıcı sıvı, kanserojen ve tahriş edici.</td></tr><tr><td>Osmiyum tetraoksit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>201030</td><td>Son derece toksik</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td>Yutulması halinde zararlı</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Labs</td><td>2705</td><td>Isıdan, kıvılcımlardan, alevden ve diğer tutuşturuculardan uzak tutun.</td></tr><tr><td>Genel / bölgesel Anestezi</td><td>Amphastar ilaçları</td><td></td><td>% 1 Lidokain,% 0.25 Bupivakain,İndüksiyon ve idame için anestezik</td></tr><tr><td>ajanlar Antibiyotikler</td><td>Hospira</td><td>0409-0805-01</td><td>Ancef 1 g iv</td></tr><tr><td>Artroskopi trokarı</td><td>Smith ve Yeğeni</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Artroskopi Kamerası</td><td>Smith ve Yeğeni</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Artroskopik kavrayıcı ve acı</td><td>Arthrex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4,5 mm tıraş makinesi</td><td>Arthrex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Girişim Vidaları</td><td>Arthrex</td><td></td><td>paslanmaz çelik vidalar</td></tr><tr><td>Püskürtme</td><td>Kaplayıcı Polaron</td><td>E5400</td><td></td></tr></tbody></table>

cerrahi alma, İzolasyon ve<em&gt; in vitro</em&gt; doku mühendisliği uygulamaları için İnsan Ön Çapraz bağ-türevli hücreleri genişleme

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

ACL yaralanma aktif kişilerde sık karşılaşılan bir sorundur. Fonksiyonu ve istikrarı olumsuz biyomekanik eksiklikler bu eklem içi diz bağ kurşun bile kısmi gözyaşları. Termal modifikasyon, tek paket onarım, tam bir yeniden yapılanma ve yerli ligament hasarlı bölümünün yeniden inşası: kısmi ACL yırtıklarının tedavisi için mevcut seçenekleri konservatif, muhafazakâr yönetimi gibi birden fazla cerrahi seçenekler değişir. Az sayıda çalışma varsa, yönetim sürekli olarak üstün olmak için tek bir yöntem ortaya koymuştur, ve birçok durumda hasta sürekli istikrarsızlık ve diğer komorbi göstermeye devam ediyor. Bu çalışmanın amacı, kısmen parçalanmış ACL onarımında uygulanabilecek bir doku mühendisliği yama geliştirilmesinde kullanımı için potansiyel bir hücre kaynağı tespit etmektir. Bir yeni protokol Patie türetilen hücre genişlemesi için geliştirilmiştirACL rekonstrüksiyonu geçiren NTS. Hücreleri izole etmek için, ACL yeniden sırasında elde kıyılmış hacl doku, kollajenaz çözelti ile dijeste edilmiştir. Genleşme% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 penisilin / streptomisin (P / S) ile desteklenmiş DMEM/F12 ortamı kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Hücreler daha sonra, DMSO, FBS ve genleşme ortamı oluşan bir dondurma ortamı içinde -80 ° C veya sıvı azot içinde depolanmıştır. Çözündükten sonra, hacl türetilmiş hücreler daha sonra bir doku mühendisliği iskelesi, PLAĞA (Poly laktik-ko-glikolik asit) ve kontrol doku kültürü polistiren (TCPS) üzerine ekilmiştir. 7 gün sonra, SEM kontrol TCPS karşı PLAĞA hücresel yapışma karşılaştırmak için gerçekleştirildi. Hücresel morfoloji İmmunofloresans boyama kullanılarak değerlendirildi. SEM (Taramalı Elektron Mikroskobu) mikrograflan hücreleri büyüdü ve PLAĞA ve TCPS yüzeylerde hem yapıştırılır ve 7 gün sonra tüm yüzeyler üzerinde birleştirilebilmeli olduğunu gösterdi. İmmünofloresan boyama, normal olmayan vurguladı morfolojik gösterdiher iki yüzeyde al desen. Bu teknik ACL yenilenme ve yeniden yapılanma uygulamaları için umut verici.

Cerrahi alma, Doku sindirimi ve insan ön çapraz bağ (hacl) türetilmiş hücreler izolasyonu için çalışma modeli, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Eksplantlar göç ve T-25 şişelerinde yapışmış hücreler. Bu hücreler, 3 gün süreyle kültürlendi ve sonra da bir ışık mikroskobu (Şekil 2) altında görselleştirilmiştir. Bir sık ​​tek tabaka 7 gün ile elde edilmiştir. Sağlıklı, yaşayabilir hücrelerin varlığı hacl türetilen hücrelerin başarılı alma ve kültür gösterilir. PL...

Ön çapraz bağ (ACL) kısmi gözyaşı onarmak için bir yama olarak gelecek uygulamalar için, insan ACL türetilmiş hücreler, in vitro olarak genişletilebilir ve doku mühendisliği iskeleleri yetiştirilen rekonstrüktif prosedürler sırasında elde edilen dokudan izole edilmiştir. Hücresel yapışma ve morfolojisi sonra iskele yüzeyinde biyouyumluluk onaylamak için yapıldı.

Cerrahi Alma, İzolasyon ve<em&gt; In vitro</em&gt; Doku Mühendisliği Uygulamaları için İnsan Ön Çapraz Bağ-türevli Hücreleri Genişleme

Injury to the ACL is a commonly encountered problem in active individuals. Even partial tears of this intra-articular knee ligament lead to biomechanical ...

Bu prosedürün genel amacı, kısmen yırtılmış bir çift ACL için doku mühendisliği yöntemiyle bir anterior krusiyat ligament (ACL) veya ACL yaması geliştirmektir. Bu işlem, öncelikle hastadan insan ACL dokusunun alınması ve serum fizyolojik içerisinde saklanmasıyla gerçekleştirilir. Elde edilen ACL örneği, ACL kaynaklı hücreleri elde etmek amacıyla kıyılır ve kollajenaz ile sindirilir.İzole edilen hücreler daha sonra kültüre edilir ve çoğaltılır. Bir sonraki adım, iki boyutlu bir polilaktik ko-glikolik asit iskelesi hazırlamaktır. Son adım olarak, hücreler bu polimer film üzerine ekilir.Son olarak, iskele yüzeyindeki biyouyumluluğu göstermek için taramalı elektron mikroskobu ve immünofloresan mikroskobu kullanılır. Bugün, kısmi ACL yırtıkları için bir yama geliştirme tekniğimizi uygulamak amacıyla buradayız. Bunun önemi, ACL'lerin kendi kendine iyileşmemesidir.Bu, ACL'nin iyileşmesine yardımcı olmak için geliştirdiğimiz yeni ve yenilikçi bir tekniktir. Başlamak için, patolojiden alınan insan ACL dokusunu steril salin ve fosfat tamponlu salin veya PBS içeren bir Petri kabına aktarın; dokuyu steril makas kullanarak bir ila iki kübik milimetrelik parçalar halinde kıyın ve kıyılmış dokuyu

surgical-retrieval-isolation-vitro-expansion-human-anterior-cruciate

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Tavşan diz ekleminde kıkırdak defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Bir matris üzerinde numaralı seribaşı otolog kondrosit implantasyonu tatmin edici uzun vadeli sonuçlar sağlayan eklem kıkırdağı lezyonların yeniden ve onarım için bir iyi kabul edilen bir yöntemdir. Matrix destekli otolog kondrosit transplantasyonu (MACT) bir standart ve klinik olarak kurulan implantasyon yöntem sunmaktadır.

Bir Tavşan Modelinde Kondral Kusurların Tadilat ve Onarım için matris destekli Otolog Kondrosit Nakli

Tavşan diz eklemi osteokondral defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Osteokondral kusurları içine allojenik mezenkimal kök hücrelerin implantasyon doku mühendisliği alanında umut verici bir gelişme sağlar. Fibrin pıhtısı hücre...

Fibrin pıhtısı içinde allojenik Mezenkimal Kök Hücre implantasyonu ile Tavşan Diz Eklemi içinde Osteokondral Kusur tedavisi

Hayvan modelleri, doku mühendisliği yapılmış greftlerin değerlendirilmesi için önemli araçlardır. Bu makale, ön çapraz bağ dokusu mühendisliğinde kullanılmak üzere elektroeğrilmiş biyobozunur polimer greft hazırlama protokolünün yanı sıra bir sıçan modelinde implantasyon için bir cerrahi protokol sunmaktadır.

Engineered Ön Çapraz Bağ Greftlerinin Değerlendirme Atimik Rat Modeli

Doku mühendisliği genellikle doku rejenerasyonu için Otogreft yaratmak için in vitro genişlemesinde içerir. Bu çalışmada, genişleme, doku, yenilenme ve in vivo olarak yeniden yapılanma için bir yöntem olup vücut dışında hücreleri ve biyolojik malzemelerin işlenmesi en aza indirmek için geliştirilmiştir.

Sıkıştırılmış Kolajen kıyılmış Doku: Tek aşamalı Rekonstrüktif Onarım için Cep içeren Biotransplant

Üç boyutlu yapıların insan egzersize şartlandırılmış serum ile muamele edildiği ve kollajen içeriği, fonksiyonu ve hücre biyokimyası için analiz edildiği bir ligament doku modeli sunuyoruz.

Egzersiz Koşullandırılmış Serum İle Ligament Yapılarının Tedavisi: Bir Translasyonel Doku Mühendisliği Modeli

Bu kağıt hazırlık ve göbek kordonu matris elde edilen Mezenkimal Kök hücre pulcuklarının bir ikili patellar tendon kusur modelinde bir fare ile değerlendirilmesi açıklanmaktadır. Bu model ile kabul edilebilir bir hastalık ilişkili ve tedavi edilmezse ve tedavi tendon arasındaki farklılıkları algılamak için bulundu ve iki tedaviler arasında test.

Kök hücre tedavileri Sıçanlarda bir ikili Patellar Tendon yaralanma modelinde değerlendirilmesi

Biz macroporous microcarriers bir hücre genişletme protokolü ve kullanımları decellularized doku matris temel için bir perfüzyon biyoreaktör teslim sistemi olarak öneriyoruz. Biz de hücre çoğalması ve canlılığı üzerinde microcarriers kültürlü hücre belirlemek için farklı teknikler içerir. Ayrıca, biyoreaktör kültürler sonra hücreleri işlevselliğini göstermektedir.

Rekombinant kolajen peptid Microcarriers hücre genişletme ve hücre teslim sistemi bir biyoreaktör olarak potansiyel kullanım için ben Model

Bu protokol, insan eklem kıkırdağından kondrositlerin, Fibronektin Adezyon Testinden türetilmiş Kondroprojenitörlerin (FAA-CP'ler) ve Göçmen Kondroprojenitörlerin (MCP'ler) izolasyonunu detaylandırır. Bu hücreleri izole etmek ve karakterize etmek için enzimatik sindirim, fibronektin yapışması ve migrasyon bazlı testleri kapsar.

Fibronektin Adezyonu ve Migrasyon Testi Kullanılarak Kondrosit ve Kondroprojenitörlerin İzolasyonu

Test sistemleri olarak insan 3D tümör dokuları oluşturmak için yöntemler tarif edilmiştir. Bu teknolojiler, decellularized Biyolojik Vaskülarize İskele (BioVaSc), primer insan hücreleri ve bir akış biyoreaktör içinde dinamik koşullar altında hem de statik altında kültürlenebilir bir tümör hücre hattı, dayanmaktadır.

İnsan 3D Doku Mühendisliği<em&gt; In vitro</em&gt; Tümör Test Sistemi

Biz üç boyutlu yeniden insan kornea gibi epitel (RHCE) doku modelini kullanan bir göz tahrişi testi geliştirdi. Test göz irritan ve korozif malzemeler (GHS kategorileri 1 ve kombine 2) ve etiketleme (GHS yok Kategori) gerekmez olanlar arasında ayrım yapabiliyor.

Yeniden İnşa İnsan Kornea gibi Epitelyal (RHCE) Doku Modeli kullanılarak Göz tahriş Kimyasalların Tehlike Tanımlaması Göz tahrişi Testi (EIT)

Keşfedin insan ön çapraz bağ hücrelerinin izolasyonu ve genişlemesi için doku mühendisliği protokolünü. PLAGA iskeletlerinde hücre uyumluluğunu değerlendirmek amacıyla tarama elektron mikroskobu ve immünofloresan boyama yöntemleri kullanılır.

Cerrahi Alma, İzolasyon ve

Daha fazla video keşfet