Deneysel Ajanların Fareye Tanıtılması

Birçok deney, ajanların farelere uygulanmasına bağlıdır. Sıklıkla, bu ajanlar biyolojik bir süreç üzerindeki etkilerini test etmek için tanıtılır. Ajanlar, hayvanları deney için hazırlamada da önemli bir rol oynayabilir. Bu videoda, deneysel ajanların uygulanmasıyla ilgili önemli hususları, ajan dağıtım araçlarını, bazı özel uygulama yollarını ve bu temel tekniklerin uygulamalarını tartışacağız.

Peki, bir deney ajanının uygulanmasını planlarken hangi faktörler göz önünde bulundurulmalıdır?

Birincisi uygun dozdur. Genellikle hayvanın ağırlığına göre hesaplanan, bir ajanın doğru dozunu sağlamak kritik öneme sahiptir.

Uygulama yolunun da dikkate alınması önemlidir. Ajanın lezzeti, viskozitesi, uygulanacak miktar, hedef doku ve istenen yayılma hızı gibi özellikler, mevcut birçok uygulama yolundan hangisini seçmeniz gerektiğini belirleyecektir. Bu videoda, ajan dağıtımının en verimli yöntemlerinden biri olan enjeksiyona odaklanacağız.

Bir enjeksiyonun nasıl gerçekleştirileceğini tartışmadan önce, tekniğin temel araçlarını tanıyalım.

Şırınga ile başlayacağız. Sıvılar, doğru hacim ölçümlerine izin vermek için işaretlenmiş olan varil içinde tutulur. Piston, namlunun içine sığar ve içeriğinin hareketini sağlamak için kullanılır. Son olarak, şırınga ucu, iğne göbeğinin bağlanma yeridir. İğne milinin diğer ucunda eğimli bir uç bulacaksınız. Dikkatli olun, çok keskin!

İğne göbekleri, boyutlarını veya "ölçülerini" yansıtacak şekilde renk kodludur ve daha yüksek ölçü numaraları daha küçük iğneleri gösterir. Göstergeler, istenen teslimat rotasına göre seçilir: alan ne kadar küçük veya hassas olursa, gereken iğne o kadar küçük olur.

Deneyiniz için uygun iğne ve şırıngayı seçtikten sonra, pistonu geri çekerek ajanı namluya çekin. Ajan ile birlikte enjekte edilen hava kabarcıkları dokuları bozabilir ve deney hayvanına zarar verebilir. Bu nedenle, şırıngayı ters çevirin ve namluyu hafifçe vurun, böylece kabarcıklar uca doğru hareket edecek ve çıkacaktır. Mümkünse, baloncukların tamamen çıkarıldığından emin olmak için fazla maddeyi dışarı atın.

Artık şırınganız kilitlendiğine ve yüklendiğine göre, neredeyse bir enjeksiyon yapmaya hazırsınız!

Başlamadan önce, kendinizi eldivenler de dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipmanla donatmanız önemlidir. Hayvanların uygun şekilde ele alınması da önemlidir ve kullanılan enjeksiyon bölgesine bağlı olarak biraz değişir.

Genellikle hayvanın boynunun dermisinin altında hedeflenen deri altı enjeksiyonlar için, fareler "tırmalama" ile kısıtlanır. İlk olarak, hayvanı kuyruğundan tutun ve kafes kapağını kavramasına izin verin. Ardından, tırnağı sıkıca kavrayın ve hayvanın omuzlarına bir deri çadırı kaldırın.

İğne, çadırlı cildin tabanına yerleştirilmeli ve ajan, pistona sıkı ve tutarlı bir basınçla dağıtılmalıdır. Enjekte edilen sıvı yavaş yavaş kan dolaşımına emilir.

Vücut boşluğuna intraperitoneal enjeksiyonlar, yutmaya benzer bir oranda emilir. Karına erişmek için, tırmıklı hayvanı ters çevirin ve kuyruğunu serçe parmağınızın altına güvenli bir şekilde sokun.

Ardından, hayvanın karnını zihinsel olarak 4 çeyreğe bölün ve iğneyi sol veya sağ alt kadrana yerleştirin. Birkaç yüz mikrolitreye kadar ajan iletmek için pistona sıkı ve tutarlı bir basınç uygulayın. Alternatif olarak, intravenöz enjeksiyonlar, deneysel ajanın daha verimli, sistemik bir şekilde uygulanmasına izin verir.

IV enjeksiyonlar en sık kuyruk damarlarında yapılır. İlk olarak, fareler birkaç dakika boyunca bir ısı lambası altında ısıtılır, bu da damarların şişmesine neden olur ve iğne yerleştirmeyi kolaylaştırır. Enjeksiyon sırasında fareyi sabit tutmak için, kuyruğu arkadaki özel bir delikten geçirerek plastik bir tutucuya yerleştirin.

Başarılı intravenöz enjeksiyonlar için doğru damarı belirlemek zorunludur. Kuyruğun her iki yanındaki iki kuyruk damarından birini bulduğunuzdan emin olun; kuyruğun alt tarafındaki atardamar değil.

İğne eğimli tarafı yukarı bakacak şekilde tutarak damarın içine yerleştirin. İğne doğru yerleştirilirse, enjeksiyon, ajan damar boyunca hareket ettikçe damarın koyu maviden soluk beyaza dönüşmesine neden olur.

Her enjeksiyondan sonra, iğneyi tekrar kapatmadan biyolojik olarak tehlikeli bir kesici alet kabına atın. İğneyi asla tekrar kullanmayın, çünkü uçlar körelebilir ve farenin yaralanmasına neden olabilir.

Artık yaygın enjeksiyon yöntemlerine aşina olduğunuza göre, deneysel ajan dağıtımının bazı pratik uygulamalarına bakalım.

Birçok deneyde, fareler, hastalığın ilerlemesini ve konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için spesifik bir patojen ile enfekte edilir. Örneğin, antibiyotiğe dirençli bakterilerin deri altı enjeksiyonları, boyutu patojenin virülansı için bir okuma olan lezyonlara neden olur. Alternatif olarak, ayak pedine yapılan enjeksiyonlar, enfeksiyon bölgesine bağışıklık hücresi alımının canlı görüntülenmesi için kullanılabilir.

Fare modelleri, kanserin ilerlemesi ve terapötiklerinin incelenmesi için de yararlıdır. Bu modelleri oluşturmak için, hem kanserojen bileşiklerin verilmesi hem de kanser hücrelerinin konakçı dokulara implantasyonu yoluyla farelerde kötü huylu büyümeleri hızlı ve verimli bir şekilde indüklemek için enjeksiyonlar kullanılabilir.

Bununla birlikte, ajan teslimatı için her zaman enjeksiyon gerekli değildir. Örneğin intranazal aşılama, solunum yolu hastalığının ilerlemesini taklit etmek ve incelemek için akciğerlere ilgi çekici bir ajan uygulamak için kullanılabilir. Başka bir yol olan gavaj, gıda veya su bazlı tedavi ile elde edilemeyen kesin ve doğru bir dozlama sağlamak için ajanın mideye doğrudan uygulanmasına izin verir.

Az önce JoVE'nin deneysel ajanları fareye tanıtmaya ilişkin genel bakışını izlediniz. Bu videoda, deneysel bir ajan seçerken göz önünde bulundurulması gereken faktörleri, fare enjeksiyonları için araçları ve stratejileri ve bu kritik tekniklerin bazı uygulamalarını gözden geçirdik. İzlediğiniz için teşekkürler!