ArcturusXT Instrument için SIVQ-LCM Protokolü

Bu prosedürün genel amacı, ilgilenilen doku özelliklerini tanımlamak ve yönlendirilmiş mikrodiseksiyonu hızlı bir şekilde gerçekleştirmek için lazer yakalama MİKRODISEKSIYONU veya LCM ile birlikte uzamsal olarak değişmez, vektör niceleme veya SIVQ görüntü analizini kullanmaktır. Bu, önce SIVQ için hedef dokunun görüntülerinin yakalanmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra SIVQ analizi gerçekleştirilir ve SIVQ ek açıklaması işlenmek üzere mikrodiseksiyon cihazına aktarılır.

Sonuç olarak, ilgilenilen hücreler, aşağı akış moleküler analizi için S-I-V-Q-L-C-M ile izole edilebilir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, S-I-V-Q-L-C-M'nin, geleneksel lazer yakalama mikro diseksiyon teknikleriyle zorlu ve zaman yoğun olacak geniş hedef alanları seçme ve mikro diseksiyon sürecini kolaylaştırmasıdır. Prosedürü göstermek, laboratuvarımızda klinik bir araştırmacı olan Dr.Avi Rosenberg olacak, İlgilenilen doku örneklerini görüntülemek için.

İlk olarak, slaytları mikrodiseksiyon cihazının motorlu aşamasına yükleyin ve ilgili yazılımı başlatın. Ardından, yüklenen slaytların konumlarını belirlemek için uygun onay kutularını seçin ve yakalanan görüntü dosyalarının JPEG formatında kaydedileceğinden emin olun. Görüntü kalitesini optimize etmek için ekrandaki görüntünün parlaklığını ve odağını ayarlayın.

Ardından, inceleme araç kutusunu kullanarak difüzörü açın ve lamba parlaklığını 60 ve kamera kazancını iki 20 olarak ayarlayın. Genel bakış penceresinde, seçmek, ayarları hatırlamak ve kaydetmek için sağ tıklayın. Diseksiyon işlemi için bir yol haritası sağlamak üzere slaydın küçük resim genel bakış görüntüsünü yakalayın.

Bir büyütme ayarlayın ve ilgilendiğiniz alanı bulun. Ardından, yakalanan görüntülerin algoritma analizi için alanın bir görüntüsünü yakalayın. Görüntüleri SIVQ klasörüne aktararak başlayın.

Ardından SIVQ'yu açın ve yakalanan ilgilenilen görüntüyü yükleyin. İlgilenilen alana gidin ve görüntünün büyütme oranını ayarlamadan görüntü alanı beş ve altı ekran penceresinin boyutunu ayarlayın. Ardından halka vektörünün boyutunu ve analiz için kullanılacak halka sayısını seçin.

Görüntü alanı altı penceresinde yakalanacak yüklem görüntüsü özelliğine sağ tıklayın, ısı haritası'nı seçin ve ardından görüntüyü analiz etmek için X'e tara'ya tıklayın. Ardından, genel vektör özgüllüğünü ayarlamak için iki yatay kaydırma çubuğunun üst kısmını kullanın. Cilt gerçekleştirildikten sonra hassasiyeti artırmak için alt çubuğu kullanın.

Eşleşme olarak sınıflandırılan alanı artırmak için, SIVQ ısı haritasının tek tip bir kırmızı renge değiştirildiğinden emin olmak için ısı haritası radyo kutusunun işaretini kaldırın ve boya boyutunu artırın. Resmi kaydet düğmesine tıklayarak resmi kaydedin. Ardından BMP çıktısını bir JPEG dosya biçimine dönüştürün.

Ardından, mikro diseksiyona başlamadan önce orijinal diseksiyon aleti görüntüsünden görüntü işaretçisinin başlangıcı ile ilk tanımlanan niceleme tablosu işaretçisi arasında bulunan konumsal koordinatları analiz sonrası JPEG'in dosya başlığına yeniden kamış yapmak için bir onaltılık düzenleyici kullanın. Lazer yakalama MİKRODISEKSIYONUNU veya LCM kapağını, SIVQ analizi için görüntülerin çekildiği ilgili bölgenin merkezine yerleştirin. Ardından, UV ve kızılötesi lazerleri kalibre ettikten sonra, güç süresi, lazer konumları ve UV kesme hızı gibi parametreleri optimize edin.

Ardından otomatik seçim yazılımını açın ve analiz edilen görüntüyü içe aktarın. Otomatik seçim yazılımını SIVQ ek açıklamasını tanıyacak şekilde eğitmek için yeni bir analiz dosyası oluşturun. Şimdi, SIVQ analiz edilen görüntünün mavi kareleri ile işaretlenmiş arka plan alanlarını seçin.

Ardından, kırmızı dairelerle işaretlenmiş ilgili bölgeleri veya R OIS'i seçin ve eğitim dosyasını oluşturmak için öğren'e tıklayın. Seçilen alanları canlı görüntüye kopyalayın. Mikrodiseksiyona başlamak için mikrodiseksiyon araç kutusunu seçin ve uygun kızılötesi yakalama veya UV kesme düğmelerini seçin.

Diseksiyon tamamlandıktan sonra, LCM kapağını kalite kontrol istasyonuna taşıyın ve diseke edilen numunenin bir görüntüsünü yakalayın. Son olarak, istenen numuneler başarılı bir şekilde diseke edilmişse, mevcut aşama düğmesine tıklayın ve aşağı akış analizi için moleküler ekstraksiyon prosedürünü başlatmak için LCM kapağını çıkarın. Bu temsili deneyde, standart bir immünohistokimya protokolü kullanılarak sitokeratin AE bir, AE üç için formalin ile sabitlenmiş parafine gömülü insan meme dokusu kesiti immünostain edildi.

Bu doku mikrodiseksiyon için kaydırılamadığından, immünohistokimyasal lekeli hücrelerin görsel olarak değerlendirilmesi zor olabilir. Bu nedenle, daha iyi indeks eşleşmesi ve daha iyi bir görüntü sağlamak için, doku bölümüne ksilenler eklenerek yalancı bir örtü astarı oluşturuldu. Daha sonra sahte kapak kayması alanının bir JPEG görüntüsü yakalandı ve algoritma analizi için SIVQ'ya aktarıldı.

Koyu kahverengi DAB lekesi olarak gözlenen bir yüklem görüntü özelliği kullanıcı tarafından seçilmiş ve görüntü analizi için SIVQ algoritması başlatılmıştır. SIVQ ısı haritası daha sonra otomatik seçim yazılımı tarafından tanınan kırmızı bir boyaya dönüştürüldü ve ksilenlerin buharlaşmasına izin verildi. SIVQ ısı haritası daha sonra otomatik seçim yazılımına aktarıldı.

Son olarak, vurgulanan hücreler kızılötesi lazer ile diseke edildi. LCM kapağı daha sonra mikrodiseksiyon cihazının kalite kontrol istasyonuna taşındı ve diseksiyonun başarısını değerlendirmek için görsel olarak incelendi. Kalan doku da incelendi ve SIVQ ısı haritası yeniden içe aktarıldı.

Mikrodiseksiyonun verimliliğini daha da doğrulamak için, bir kez ustalaştıktan sonra, S-I-V-Q-L-C-M, slayt başına birkaç dakika içinde hızlı bir şekilde yapılabilir ve çeşitli aşağı akış analitik teknikleri için zenginleştirilmiş girdi sağlar. Bu videoyu izledikten sonra, S-I-V-Q-L-C-M'yi Mikrodiseksiyon iş akışınıza nasıl uygulayacağınızı iyi anlamış olmalısınız.