Name: Heterotopik Kalp Nakli bir Fare Modeli Kullanarak Pulmoner Vana Nakli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: Öğrenin, fare modelinde heterotopik kalp nakli ile pulmoner vana nakli yöntemini. Doku mühendisliği kalp kapakçıklarında neodoku oluşumu ve stenoz gelişiminin hücresel ve moleküler mekanizmalarını inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma CKB için NIH (RO1 HL098228) bir hibe, kısmen desteklendi.

Not: Bütün hayvan prosedürleri Nationwide Çocuk Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Kalp Vana Donör Fare 1. Pulmoner Kalp Vana Hasat <ol><li> Ameliyat öncesi tüm cerrahi aletler otoklava sokun: ince makas, 3x mikro forseps, 2x mikro vasküler kelepçeler, 1x kelepçe uygulayarak forseps, 1x mikro iğne tutucu, 1x yaylı makas, 1x ekartörünü 1x. </li><li> A 6-8 haftalık dişi C57BL / 6 fare, akciğer kalp kapak verici olarak kullanılmaktadır. Kafesinden fareyi çıkarın ve bunu tartmak, sonra bir ketamin / ksilazin kokteyl (ketamin, 200 mg / kg ve ksilizin, 20 mg / kg, IP) doz aşımı ile euthanize. </li><li> Göğüs alanı Klip ve bir yastık üzerinde bir dorsal recumbence pozisyonda fare yerleştirin. Sonra torakotomi yapmak. , Kalp maruz sağ atrium üzerinde küçük bir kesim yapmak ve buz soğuk tuzlu su ile sol ventrikül serpmek. </li><li> Açık açık artan a gelen pulmoner arter (PA) teşrihOrta. Pulmoner arter 2 mm manşet ile birlikte pulmoner kapak (PV) kesip. Kalbin kalan atınız. </li><li> Soğuk heparin ve tuzlu su çözeltisi (100 birim / ml) &#39;de PV saklayın. Not: PV verici kalp nakli önce iki saat boyunca çözelti içinde tutulabilir. </li></ol> 2.. Donör Kalp Hazırlık <ol><li> A 6-8 haftalık dişi C57BL / 6 fare kalp verici olarak kullanılır. Kafesinden fareyi çıkarın ve bunu tartmak, sonra bir ketamin / ksilazin kokteyl (ketamin, 200 mg / kg ve ksilizin, 20 mg / kg, IP) doz aşımı ile euthanize. Bu, bir terminal işlemdir. </li><li> Göğüs alanı Klip ve bir yastık üzerinde bir dorsal recumbence pozisyonda fare yerleştirin. Sonra torakotomi yapmak. Açık açık kalp, inferior vena kava (IVC), vena kava (SVK), çıkan aort, PA, ve pulmoner ven ayrı. Buz soğuk steril serum fizyolojik ile IVC serpmek. </li><li> IVC, SVC, ve daha sonra üstün kesti 6-0 ipek sütür ile pulmoner ven ligasyonubitişik harfler. </li><li> 2 mm manşeti ile aorta ve PA kesti. </li><li> PV kesip atın. </li></ol> Donör Kalp üzerine 3. Kalp Kapağı Nakli <ol><li> Hemen adım 2.5 sonra, donör kalbine 1.5 adım kalp kapakçığı yerleştirin ve kalp kapakçığı yönlendirin. </li><li> Konik iğne 10-0 monofilament dikiş kullanarak vananın sağ tarafında bir dikiş ile PV elde edin ve PV diğer taraftan 5-6 stiches sürekli dikiş başlar. </li><li> Ön tarafı bitirdikten sonra, yatay kalp döndürmek ve donör kalbin üzerine PV arka tarafını dikmek başlar. </li><li> Soğuk bir steril heparin / tuzlu su çözeltisi içinde kalp saklayın. Not: Donor kalp alıcı fareye implantasyondan önce iki saat boyunca çözelti içinde tutulabilir. </li></ol> Bir Alıcı Fare 4. Heterotopik Kalp Nakli <ol><li> Bir 6-8 haftalık dişi C57BL / 6 fare bir rezidüsünden olarak kullanılmıştırpient. Kafesinden fareyi çıkarın ve sonra ketamin / ksilazin kokteyl (ketamin, 100 mg / kg ve ksilizin 10 mg / kg) ile anestezi, tartılır. Ketoprofen (5 mg / kg) Anestezi öncesi analjesik olarak kullanılır. </li><li> Kısma kuyruk tarafından sedasyon düzeyini kontrol ettikten sonra, karın ve göğüs saç klibi. Steril Oftalmik merhem ile gözleri yağlayın ve bir yastık üzerinde bir dorsal recumbence pozisyonda fare yerleştirin. Betadine ve alkol pedleri ile karın dezenfekte edin. Daha sonra steril bir örtü ile fare kapak ve sadece kesik alana maruz kalmaktadır. </li><li> Suprapubik bölgeye xiphoid aşağıdan bir orta hat laparotomi kesi yapmak ve kendini tutma ekartörünü yerleştirin. Tuzlu çözelti ile nemlendirilmiş gazlı bez bağırsakları sarın. Açık açık infrarenal aorta ve vena kava tanımlar. </li><li> Kan dolaşımını dizginlemek aorta ve IVC etrafında proksimal ve distalde iki 6-0 ipek sütür koyun. </li><li> Abdominal aorta sağ tarafındaki donör kalbi yerleştirin ve steril GAÜ ile örtünze. Tuzlu su ile nemlendirmek. </li><li> Bir 30 G iğne kullanılarak abdominal aortta aortotomy yapın ve verici aort boyutuna makas ile açıklığı uzanır. </li><li> Konik iğne steril 10-0 monofilament sütür kullanarak bir tarafında uçtan anastomoz gerçekleştirin. Abdominal aortta açıklığın yakın ucunda bir tane dikiş ile verici aort elde edin ve abdominal aortun uzak ucundan 4-5 stiches sürekli dikiş başlar. </li><li> , Sol tarafa kalp çevirmek serum vermek gazlı bez ile örtün ve abdominal aorta uzak ucundan 4-5 stiches ile sürekli dikiş başlar. </li><li> Bir 30 G iğne kullanılarak IVC bir venotomi yapın ve verici pulmoner arter boyutuna açıklığı uzanır. </li><li> Konik iğne steril 10-0 monofilament sütür kullanarak yan anastomoz sona gerçekleştirin. IVC içinde açıklığın yakın ucunda bir tane dikiş ile verici PA elde edin ve 4-5 stiches sürekli dikiş başlarinferior vena kava uzak ucu. Aort şekilde, çünkü bu sefer, emin donörün PA sol duvarının sütür IVC iç olduğundan emin olun. </li><li> Heparin ve tuzlu su çözeltisi (100 birim / ml) ile IVC lümen yıkayın. Uzak ucuna sürekli olarak onları dikiş ile PA verici ve alıcı IVC sağ duvar kapatın. </li><li> Distal ligatürün çıkarın ve bir topikal emilebilir steril hemostat ajanı uygulayarak kanamayı kontrol. Kanama tamamen durduğunda, proksimal sütür kaldırmak ve kanama aynı şekilde kontrol. </li><li> Bağırsakları İade ve 6-0 siyah poliamid monofilament sütür kullanılarak iki kat karın kas ve deri kapatın. </li><li> 0.5 ml serum fizyolojik subkutan enjekte edilir ve fare tamamen mobil kadar bir ısınma pad üzerinde bir kurtarma kafes fare yerleştirin. Kurtarma üzerine, kağıt yatak ile yeni kafesine fareyi dönmek. 48 saat boyunca ağrı ilaç (ibuprofen, 30 mg / kg, içme suyu) ver. Dotamamen iyileşti kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan döndürmez. </li></ol>

<ol><li>Polito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+morbidity+and+mortality+in+very+preterm+VLBW+infants+with+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Intens+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Increased morbidity and mortality in very preterm VLBW infants with congenital heart disease.</a> Intens Care Med. 39, 1104-1112 (2013).</li>
<li>Wren, C., Reinhardt, Z., Khawaja, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty+year+trends+in+diagnosis+of+life+threatening+neonatal+cardiovascular+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Dis+Child+Fetal%22%5BJournal%5D)">Twenty year trends in diagnosis of life threatening neonatal cardiovascular malformations.</a> Arch Dis Child Fetal. 93, F33-F35 (2008).</li>
<li>Vacanti, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+transplantation+Third+annual+Samuel+Jason+Mixter+lecture%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+surgery%22%5BJournal%5D)">Beyond transplantation Third annual Samuel Jason Mixter lecture.</a> Archives of surgery. 123, Chicago Ill. 545-549 (1960).</li>
<li>Tudorache, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+replacement+of+aortic+heart+valves+with+tissue-engineered+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Orthotopic replacement of aortic heart valves with tissue-engineered grafts.</a> Tissue engineering Part A. 19, 1686-1694 (2013).</li>
<li>van Geldorp, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient+outcome+after+aortic+valve+replacement+with+a+mechanical+or+biological+prosthesis+weighing+lifetime+anticoagulant+related+event+risk+against+reoperation+risk%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+thoracic+and+cardiovascular+surgery%22%5BJournal%5D)">Patient outcome after aortic valve replacement with a mechanical or biological prosthesis weighing lifetime anticoagulant related event risk against reoperation risk.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 137, 881-886 (2009).</li>
<li>El Oakley, R., Kleine, P., Bach, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choice+of+prosthetic+heart+valve+in+today%27s+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Choice of prosthetic heart valve in today's practice.</a> Circulation. 117, 253-256 (2008).</li>
<li>Quinn, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+for+Bench+to+Bedside+Translation+of+Regenerative+Cardiac+Constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Pediatric+cardiology%22%5BJournal%5D)">Animal Models for Bench to Bedside Translation of Regenerative Cardiac Constructs.</a> Progress in Pediatric cardiology. 35, (2013).</li>
<li>Shinoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+heart+valves+valve+leaflet+replacement+study+in+a+lamb+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+thoracic+surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering heart valves valve leaflet replacement study in a lamb model.</a> The Annals of thoracic surgery. 60, S513-S516 (1995).</li>
<li>Sodian, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+of+heart+valves+in+vitro+experiences%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+thoracic+surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering of heart valves in vitro experiences.</a> The Annals of thoracic surgery. 70, 140-144 (2000).</li>
<li>Shinoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineered+heart+valves.+Autologous+valve+leaflet+replacement+study+in+a+lamb+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Tissue engineered heart valves. Autologous valve leaflet replacement study in a lamb model.</a> Circulation. 94, II164-II168 (1996).</li>
<li>Sodian, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+biodegradable+three+dimensional+matrices+for+tissue+engineering+of+heart+valves%5BTitle%5D)+AND+%22ASAIO+journal+%28American+Society+for+Artificial+Internal+Organs%22%5BJournal%5D)">Evaluation of biodegradable three dimensional matrices for tissue engineering of heart valves.</a> ASAIO journal (American Society for Artificial Internal Organs. 46, 107-110 (1992).</li>
<li>Sodian, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+in+vivo+experience+with+tissue-engineered+trileaflet+heart+valves%29%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Early in vivo experience with tissue-engineered trileaflet heart valves).</a> Circulation. 102, III22-III29 (2000).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Bu prosedürün ölüm oranı çoğunlukla alıcı abdominal aorta donör aort PV nakli site ve anastomoz de kanama neden oldu% 20, yakındır. Pek çok durumda, ölüm oranı önemli ölçüde 48 saat ameliyat sonrasında azalır. Sağkalım fareler implante PV yoluyla güçlü kalp atışlarını ve kan akışını gösterdi. Bütün bu süreç, deneyimli bir mikro cerrah için dört saat sürer. Bu tekniği ana kabaca 250 fareler alacaktır. Heterotopik kalp nakli donör kalbe PV implantasyon kıyasla öne nispeten düzdür. Başarılı bir HV nakli için en kritik adım...

Konjenital kalp kusurları batı dünyası 1,2 bebek ölümlerinin önde gelen nedenlerinden biridir. Bunlar arasında, pulmoner kapak darlığı ve aort kapağı kusurları sık görülen şeklidir 3 vardır. Kalp kapak değiştirme ameliyatı rekonstrüktif cerrahi rutin bir seçimdir; Ancak, darlık ve kireçlenmeye kalp kapakçığı ve antikoagülan ömür boyu bağımlılık dahil komplikasyonlar, kronik hastalık ve ölüm 4-7 önemli bir kaynağıdır. Ayrıca, büyüme potansiyeli eksikliği daha genç hastalarda, 4,8,9 ve mortaliteyi artırır, revizyon ameliyatları gerektirir. Biyolojik olarak parçalanabilir bir sentetik kalp kapakçığı 8 üzerine büyüme potansiyeli, Shinoka et al. Tohumlanmış otolog hücreler olan fonksiyonel değiştirme kalp valfi geliştirmek için bir girişim olarak. Büyüme potansiyeli olan bir yapı gibi yerli kalp kapakçığı dönüştü sentetik valfal. Ön büyük hayvan çalışmaları fonksiyonel bir kalp valfini 10 oluşturmak için bu yöntemi kullanarak fizibilite göstermiştir. Bununla birlikte, uzun süreli implantasyon çalışmaları nedeniyle, kalp valfinin daralması ile sonuçlanan valf neotissue ilerleyici kalınlaşmasına kötü dayanıklılığı göstermiştir. Sodian ikinci çalışma ark. Shinoka yöntem kullanılır, ancak sonuçta daha fizyolojik bir profil oluşturmak 9,11,12 doku mühendisliği vananın biyomekanik özelliklerini veren biyolojik olarak parçalanabilir bir elastomer ile PGA matris yerini aldı. In vivo çalışmada, implantasyon başarısı rağmen, birleşik endotel hücre astar bu iskele 12&#39;nin uzun sürede başarısını sınırı düşüren oluşmuş değildi. Rasyonel geliştirilmiş ikinci nesil sentetik kalp kapağı tasarlamak amacıyla, kalp kapakçığı nakli bir fare modeli hücresel ve moleküler mekanizmaları underlyin araştırmak için kuruldug neotissue oluşumu, valf kalınlaşma ve darlık gelişimi. Fare modelleri diğer türlerde 7 hazır değildir transgenikleri dahil olmak üzere moleküler belirteçlerin geniş bir dizi, sunuyoruz. Bu kalp kapakçığı nakli modelinde, ex vivo singenik pulmoner kalp kapak replasmanı ilk gerçekleştirilmiştir; ve daha sonra implante edilen kalp kapağı ile kalp bir mikrocerrahi tekniği kullanılarak bir konakçıya genetik olarak özdeş heterotopically implante edildi. Bu model, kardiyopulmoner baypas için gerek kalmadan kalp kapağı değişimi sağlar. Bu yazıda, bir kalp kapakçığı hasat ayrıntılı bir açıklama, donör kalp preparatları, kalp kapakçığı nakli ve heterotopik kalp nakli tarif edilir. Sonuçlar alıcı atışı bağımsız olduğu donör kalp, sürekli bir kalp atışı gösterdi. Implante pulmoner valf kan akışı, atımlı bir dalga fazlası ile yüksek frekanslı ultrason sistemi kullanılarak ölçüldüppler.

<table><tbody><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6J (H-2b), Kadın</td><td>Jackson Laboratuvarları</td><td>664</td><td>8-12 hafta</td></tr><tr><td>Ketamin Hidroklorür Enjeksiyonu</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin Steril Çözelti</td><td>Akorn Inc.</td><td>NADA # 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Hayvan Sağlığı</td><td>NDC 0856-4396-01</td><td></td></tr><tr><td>İbuprofen</td><td>Hassas Doz</td><td>NDC 68094-494-59</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodyum</td><td>Sagent Farmasötikler</td><td>NDC 25021-400</td><td></td></tr><tr><td>Tuzlu su çözeltisi (Steril% 0.9 sodyum klorür)</td> <td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-0138-22</td><td></td></tr><tr><td>%0.9 Sodyum klorür Enjeksiyonu</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum Oftalmik Merhem</td><td>Dechra Veteriner Ürünleri</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>İyot Hazırlama Pedleri</td><td>Triad Tek Kullanımlık, Inc.</td><td>NDC 50730-3201-1</td><td></td></tr><tr><td>Alkol Hazırlama Pedleri</td><td>McKesson Corp.</td><td>NDC 68599-5805-1</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatörler</td><td>Fisher Sientific</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>İnce Makas</td><td>FST</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Adson Forcep</td><td>FST</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Forcep FST</td><td></td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>S & T Vasküler Kelepçe</td><td>FST</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı Makas</td><td>FST</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>Colibri Ekartörler</td><td>FST</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forcep</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 - İnce Forseps</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Forseps</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Tish İğne Tutucu/ Forseps</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>Siyah Poliamid Monofilament Sütür, 10-0</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>TI638402</td><td>Greftin dikilmesi için</td></tr><tr><td>Siyah Poliamid Monofilament Sütür, 6-0</td><td>AROSurjik Aletler</td><td>SN-1956</td><td>Kas ve cilt kapanması için</td></tr><tr><td>Dokumasız Süngerler</td><td>McKesson Corp.</td><td>94442000</td><td></td></tr><tr><td>Emilebilir kanama</td><td>durdurucu Ethicon</td><td>1961</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Şırınga</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>3 ml Şırınga</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Şırınga</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>18 G 1 1/2 inç, İğne</td><td>BD</td><td>305190</td><td></td></tr><tr><td>25 G 1 inç, İğne</td><td>BD</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>30 G 1 inç, İğne</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Sıcak Su Sirkülatörü</td><td>Gaymar</td><td>TP-700</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma Pedi</td><td>Gaymar</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Düzeltici</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr><tr><td>VEVO2100 Yüksek Frekanslı Ultrason</td><td>VisualSonics</td><td><a href="http://www.visualsonics.com/vevo2100">http://www.visualsonics.com/vevo2100</a></td><td>Katalog numarası ve fiyatlandırma satış temsilcilerinden alınabilir.</td></tr><tr><td>Ultrason iletim jeli</td><td>Parker Laboratuvarları, A.Ş.</td><td>01-02</td><td></td></tr><tr><td>Masa Üstü Laboratuvar Hayvanları Anestezi Sistemi</td><td>VetEquip, INC.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>İzofluran</td><td>Baxter</td><td>1001936060</td><td></td></tr></tbody></table>

heterotopik kalp nakli bir fare modeli kullanarak pulmoner vana nakli

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Doku mühendisliği kalp kapakçıkları, özellikle decellularized vanalar, karışık sonuçlar rekonstrüktif cerrahi klinik kullanımda ivme kazanmaya başlıyor. Bununla birlikte, neotissue geliştirme, valf kalınlaşma ve stenoz gelişme hücresel ve moleküler mekanizmalar kapsamlı araştırılmış değildir. Yukarıdaki soruları cevaplamak için, biz bir kemirgen heterotopik kalp kapakçığı nakli modeli geliştirdi. Kalp valfi bir valf verici fareden toplanmış ve bir kalp verici fareye transplante edildi. Yeni bir vana ile kalp bir alıcı fareye heterotopically nakil oldu. Nakledilen kalp alıcının kalp atışı bağımsız, kendi kalp atışlarını gösterdi. Kan akışı, atımlı bir dalga Doppler ile yüksek frekanslı bir ultrason sistemi kullanılarak ölçülmüştür. Implante pulmoner valf üzerinden akış minimal yetersizliği akışını ileri gösterdi ve pik akım 100 mm / sn yakın oldu. Kalp kapağı nakli Bu fare modeli olan Highlçok yönlü y, değiştirilmiş ve bu nedenle farklı hemodinamik ortamlar sağlamak için ve / veya bir doku mühendisliği kalp valf neotissue gelişimini incelemek için çeşitli transgenik fareler ile birlikte kullanılabilir uyarlanabilir.

Şekil 1 heterotopik kalp nakli kullanarak kalp kapakçığı nakli modelinin şemaları göstermektedir. Kalp kapakçığı, bir donör kalbi hasat ve bir ikinci verici fareden alınan bir kalp üzerine yerleştirildi. Ardından yeni kalp kapak ile kalp bir alıcı fare karın implante edildi. 2. sağ kalp transplantasyonu (B) sonrasında, karın boşluğu (A) implante kalp bir örnek gösterir ve nakilden sonra 5 dk Şekil. Aort ve IVC her iki tarafta dikiş kald...

Doku mühendisliği kalp kapakçıklarında neotissue oluşumu ve darlık gelişimi altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaları anlamak için, heterotopik kalp kapakçığı nakli bir fare modeli geliştirilmiştir. Bir pulmoner kalp kapak heterotopik kalp nakli tekniği kullanılarak alıcıya nakil oldu.

Heterotopik Kalp Nakli bir Fare Modeli Kullanarak Pulmoner Vana Nakli

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Bu prosedürün genel amacı, doku mühendisliği ile üretilmiş bir kalp kapağında neo doku oluşumu, kapak kalınlaşması ve stenoz gelişiminin altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemektir. Bu işlem, öncelikle donör fare kalp dokusundan pulmoner kalp kapağının hasat edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda ise, ikinci bir donörden kalbin tamamı hasat edilir.Ardından donör pulmoner kalp kapakçığı donör kalbe implante edilir ve yeni kalp kapakçığına sahip kalp, alıcı fareye heterotopik olarak transplant edilir. Nihayetinde, transplant edilen kalbin fonksiyonu ve pulmoner kapakçık üzerinden kan akışı, yüksek frekanslı bir ultrason sisteminin pulse wave Doppler modunda izlenebilir. Fare modelinin diğer büyük hayvan modellerine göre temel avantajı, murine model kullanımının, stenoz gelişimi ve doku mühendisliği kalp kapakçıklarında vasküler neodoku oluşumunun altında yatan hücresel moleküler mekanizmaları incelememize olanak tanıyan geniş bir moleküler reaktif yelpazesinden yararlanmamızı sağlamasıdır. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, mikrocerrahinin karmaşıklığı nedeniyle zorluk yaşayacaklardır.Transplantasyon bölgelerinde uygun osmozu öğrenmek zor olduğu ve küçük kalibreli damarlarda kanama olmadan osmoz gerçekleştirmek güç olduğu için bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir. Donör pulmoner kalp kapakçığını toplamak için öncelikle altı ila sekiz haftalık dişi bir donör C 57 black six faresinin göğüs bölgesini klipleyin ve fareyi sırtüstü pozisyona getirin. Torakotomi yaptıktan sonra kalbi açığa çıkarın, sağ atriyumda küçük bir kesi yapın ve sol ventrikülü buz gibi soğuk serum fizyolojik ile perfüze edin. Ardından, pulmoner arteri çıkan aortadan kör diseksiyonla ayırın ve daha sonra pulmoner kapakçığı, pulmoner arterin iki milimetrelik bir manşetiyle birlikte kesip çıkarın; pulmoner kapakçığı, donör kalbe transplantasyon yapılana kadar iki saate kadar soğuk, heparinli ve serum fizyolojikli bir solüsyonda saklayın ve donör kalbi toplayın.Öyten gösterildiği üzere, ötanize edilmiş altı ila sekiz haftalık dişi donör C 57 black six fareye torakotomi uyguladıktan sonra; kalbi, vena cava inferioru, vena cava superioru, asendan aortu, pulmoner arteri ve pulmoner veni küt diseksiyonla ayırın. Vena cava inferioru buz gibi soğuk, steril salin ile yıkayın ve ardından vena cava inferioru, vena cava superioru ve pulmoner veni 6.0 ipek sütür ile bağlayın; daha sonra bağların üst kısmından kesin, aortu ve pulmoner arteri iki milimetrelik bir manşet şeklinde kesin ve pulmoner kalp kapakçığını donör kalbe nakletmek için pulmoner kapakçığı çıkarın. İlk olarak, kapakçığı donör kalbe yerleştirin ve dokuyu yönlendirin.Ardından, kapağı sabitlemek için konik iğneli 10 oh monoflaman sütürler kullanarak kapağın sağ tarafına bir dikiş atın. Daha sonra pulmoner kapağın diğer tarafı boyunca beş ila altı adet sürekli dikiş atın. Kapağın ön kısmını bitirdikten sonra, kalbi yatay olarak döndürün ve pulmoner kapağın arka kısmını donör kalbe sütüre edin.Ardından, donör kalbin pulmoner venini bağlayın ve kalbi çıkarın. Daha sonra kalbi, alıcı fareye implantasyon öncesinde iki saate kadar soğuk heparinli salin solüsyonu içinde bekletin. Şimdi, altı ila sekiz haftalık dişi bir alıcı C 57 black six farenin sedasyonunu ayak parmak sıkıştırma yöntemiyle doğrulayın.Karın kılları tıraşlanıp gözler steril oftalmik pomad ile yağlandıktan sonra, fareyi sırtüstü pozisyona getirin, karnı Betadine ve alkollü pedlerle dezenfekte edin ve sadece insizyon bölgesini açıkta bırakacak şekilde fareyi steril bir örtüyle örtün. Ardından, ksifoid altından suprapubik bölgeye kadar orta hat laparotomi insizyonu yapın. Daha sonra kendi kendine tutunabilen bir retraktör yerleştirin ve bağırsakları salyalle nemlendirilmiş gazlarla sarın.İnfrarenal aortayı ve vena cava'yı belirleyin. Ardından, iki adet 6/0 ipek sütür yerleştirin ve aort ile vena cava inferiorun proksimal ve distal kısımlarından ligasyon yapın. Kan dolaşımını durdurmak için, abdominal aortada bir aortotomi ve vena cava inferiorda bir venotomi yapmak üzere 30 gauge bir iğne kullanın.Açıklığı makasla donör aort ve pulmoner arter boyutuna getirin. Donör kalbi abdominal aortun sağ tarafına yerleştirin, nemlendirilmiş steril gazla örtün ve nemli tutun. Donör aortu, abdominal aorttaki açıklığın proksimal ucundan tek bir dikişle sabitleyin ve ardından abdominal aortun distal ucundan dört ila beş sürekli dikiş atın.Kalbi sol tarafa çevirin. Salin infüze edilmiş gazlı bezle örtün ve abdominal aortanın distal ucunu dört ila beş sürekli dikişle daha sütüre edin. Donör pulmoner arteri, vena cava inferior'daki açıklığın proksimal ucuna bir dikişle sabitleyin ve ardından vena cava inferior'un distal ucundan dört ila beş sürekli dikiş atın.Ardından, inferior vena CVA lümenini heparin ve salin çözeltisiyle yıkayın. Donör pulmoner arterin sağ duvarını ve resipiyent inferior vena CVA'yı distal uca kadar sürekli sütürlerle kapatın. Şimdi distal ligatürü kaldırın ve kanamayı kontrol etmek için topikal emilebilir steril bir hemostatik ajan uygulayın.Kanama tamamen durduğunda, proksimal sütürü çıkarın ve ikinci kanamayı aynı şekilde kontrol edin; başarılı anastomosun ardından nakledilen kalp beş dakika içinde atmaya başlayacaktır. Ardından bağırsakları yerine yerleştirin ve abdominal kas yapısı ile cildi iki katman halinde kapatmak için 6-0 sütürler kullanın. Son olarak, deri altına 0,5 mL salin enjekte edin ve hayvan tamamen hareketli hale gelene kadar fareyi ısıtma pedi üzerinde bir iyileşme kafesine yerleştirin.Fare ayıldıktan sonra, tamamen iyileşene kadar kağıt altlıklı yeni bir kafeste tek başına tutun ve ağrı kesici ilaç uygulayın. 48 saat boyunca içme suyu sağlayın. Bu görüntülerde, kalp transplantasyonunun hemen ardından ve transplantasyondan beş dakika sonra abdominal bölgeye implante edilmiş kalp gösterilmektedir.Aortun ve vena cava inferiorun her iki tarafındaki süturlar çıkarıldıktan sonra, kan dolaşımı başladıkça kalp bir ila iki dakika içinde atmaya başlar ve rengi daha pembe bir hal alır. Sağ atriumdaki belirgin genişlemeye dikkat edin. Kalp atışı kademeli olarak güçlenip 24 saat sonra stabilize olduğunda, implante edilen pulmoner kapaktan geçen kan akımı, implantasyondan 10 gün sonra perkütan yöntemle ölçülebilir.Atımlı dalga doppler moduna sahip yüksek frekanslı bir ultrason sistemi kullanılarak aorta, sağ ventrikül, implante edilen pulmoner kapak ve pulmoner arterin konumları B modunda gözlemlenebilir. Şemada gösterildiği gibi, sarı örnek hacim katmanı implante edilen PV üzerinde yer almaktadır. Grafikte belirtildiği üzere, donör kalbin QRS dalgası, alıcı kalbin dalgasından bağımsız olarak ritmik bir şekilde ve yaklaşık 100 millimeters per second civarında bir pik hızla tespit edilmektedir.Bu prosedürü uygularken, pulmoner kapak transplantasyon bölgesindeki veya donör aortun alıcı abdominal aortuna anastomoz yapıldığı yerdeki tüm kanamaları tamamen durdurmayı hatırlamak önemlidir. Hastalıklı kalp kapağını oluşturan hücrelerin kaynağına dair ek soruları yanıtlamak için, transgene farelere doku mühendisliği ile üretilmiş kalp kapaklarının transplantasyonu gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, bir fare modelinde pulmoner kalp kapağının nasıl hasat edileceği, kalp kapağı değişiminin ve heterotopik kalp transplantasyonunun nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız.

transplantation-pulmonary-valve-using-mouse-model-heterotopic-heart

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fare heterotopik kalp transplantasyonu modeli ret ve immün yanıt mekanizmaları eğitim için önemli bir yöntem olduğu birçok araştırmacı tarafından kanıtlanmıştır. Ancak, söz konusu teknikleri hala zorlu. Standart teknikler değiştirerek 1000 nakli ile daha fazla başarı elde ettiler.

Farelerde Heterotopik Kalp Nakli

Farelerde kalplerin heterotopik nakli için mikrocerrahi prosedür için, donör toplama ve alıcı damar anastomozu için basitleştirilmiş yöntemler de dahil olmak üzere bir teknik gösterilmiştir.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

El yazması fare heterotopik kalp nakli gerçekleştirmek için gereken adımları açıklar.

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

Kombine katı organ ve vaskülarize kompozit allotransplantasyonu incelemek için, servikal dikişsiz manşet tekniği kullanarak farelerde yeni bir heterotopik en blok göğüs duvarı, timus ve kalp nakli modelini açıklıyoruz.

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Burada, yeni kardiyokoruyucu stratejileri araştırmak için sıkı bir şekilde kurulan ve kullanılan ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi büyük hayvan (porcine) modelini tarif ediyoruz.

Ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi porcine modeli

Heterotopik abdominal fare kalp nakli modelinde kan devresi rekonstrüksiyonu için yeni bir teknik gösterilmiştir.

Abdominal Fare Kalp Nakli Modelinde Kan Devresi Rekonstrüksiyonu

Bu protokol, kalp kapaklarının alloreaktivitesinin incelenmesine izin vermek için renal kapsülün altına aort kapak broşürlerinin transplantasyonu için basit ve etkili bir yöntem tanımlamaktadır.

Kemirgenlerde Heterotopik Kalp Kapağı Transplantasyonu için Basitleştirilmiş Bir Model

Bu protokolde, kardiyak allogreft rejeksiyon mekanizmasını araştırmak için bir fare kalp nakli modeli kullanılmıştır. Bu heterotopik kalp nakli modelinde, modifiye Manşet tekniği kullanılarak kalp implantasyonunun servikal uçtan uca anastomozu ile operasyon etkinliği artırılır ve kalp greftlerinin sağkalımı sağlanır.

Fare Servikal Heterotopik Kalp Transplantasyon Modeli için Modifiye Manşet Tekniği

Fare kardiyak transplantasyon modelleri, transplantasyon immünolojisini incelemek için değerli araştırma araçlarını temsil etmektedir. Mevcut protokol, laminer kan akışına izin vermek için alıcının ortak karotis arterine ve donörün pulmoner arter gövdesine manşetlerin yerleştirilmesini içeren fare heterotopik servikal kardiyak transplantasyonunu detaylandırmaktadır.

Vasküler Manşetler Kullanılarak Fare Heterotopik Servikal Kardiyak Transplantasyonu

Bu protokol, sare servikal kalp nakli için basitleştirilmiş ve uçtan yana dikiş anastomozu tekniği sunarak nakil immünolojisini incelemek için sağlam ve tekrarlanabilir bir model sunar.

Nakil İmmünolojisini Çalışmak İçin Uçtan Yana Anastomoz Tekniği Kullanılarak Servikal Heterotopik Fare Kalp Nakli

Öğrenin, fare modelinde heterotopik kalp nakli ile pulmoner vana nakli yöntemini. Doku mühendisliği kalp kapakçıklarında neodoku oluşumu ve stenoz gelişiminin hücresel ve moleküler mekanizmalarını inceleyin.

Heterotopik Kalp Nakli bir Fare Modeli Kullanarak Pulmoner Vana Nakli

Daha fazla video keşfet