Bozulmamış Vomeronasal Organ ve Aksesuar Koku Ampul Ex Vivo Hazırlıklar

Fare aksesuar koku ampul (AOB) duyusal kodlama bağlamında çalışma zor olmuştur. Burada, biz AOB nöronlar fare feromonlar ve Kayromonlar bir bilgi işleme araştırmalarını kolaylaştırmak, onların çevresel girişlerine işlevsel bağlı kaldığı bir ex vivo hazırlık üreten bir diseksiyon göstermektedir.

Bu prosedürün genel amacı, fonksiyonel olarak bağlı fare ro nazal organının veya VNO'nun, bir aksesuar koku ampulünün veya bir OB'nin ex vivo bir preparatını üretmektir. Bu, ilk önce burun ve koku soğancığının tek bir yarım küresini izole etmek için fare kafatasının kaba bir diseksiyonu yapılarak gerçekleştirilir. İkinci adımda, hassas VNO aksonları ve bir OB, bir doku perfüzyon odasında ikincil bir diseksiyon yoluyla açığa çıkarılır. Son olarak, VNO'ya koku ve uyaranın sokulabileceği ince bir kanül yerleştirilir.

Sonuç olarak, VNO stimülasyonu sırasında A OB içindeki nöral aktiviteyi ölçmek için elektrofizyolojik kayıtlar kullanılabilir. Bu tekniğin in vitro kesit elektrofizyolojisi gibi mevcut tekniklere göre avantajı, bu teknikle duyu organı ve aşağı akış nöral devrelerinin işlevsel olarak bağlı kalmasıdır. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritiktir, çünkü öğrenmesi zor olan birçok hassas diseksiyon adımı vardır ve bu adımlardan herhangi birindeki hatalar başarısız bir diseksiyonla sonuçlanabilir Birincil diseksiyona başlamak için, önce farenin kafatasının parietal ve frontal kemiklerini çıkarmak için Addin forseps kullanın, koku soğancıklarıyla temas etmemeye dikkat edin.

Daha sonra, frontal lobdan koronal bir kesim yapmak için bir neşter kullanın, sinüslere iki milimetre sarkın ve ardından beyin kucağını kesiğe çıkarın. Ventral kafatasının açıkta kalan kıvrak yönlerini çıkarmak için düz makas kullanın, sinüsleri ve kalan sinir dokusunu bırakın. Kafatasının anatomik sağ tarafındaki elmacık kemerini ve yüz kaslarını çıkarın ve ardından burun ventral tarafını yukarı çevirin.

Ağzın çatısını ortaya çıkarmak için, neşter bıçağının ucunu hemen ağzın çatısına paralel paletin altına sokun ve ardından bıçağı kesici dişlere doğru hareket ettirin. Paletin serbest kalan rostral kenarını forseps ile kavrayın ve damağı hafifçe çekerek çıkarın. Daha sonra kafatasının anatomik sol tarafında, azı dişlerinin yakınındaki boşluğa sadece neşter bıçağının ucunu sokun ve palatin foramenini coddly uzatmak için bileği döndürün.

Azı dişlerinin yakınındaki küçük foramenlerden başlayarak, palatin forameninden kesici dişler boyunca kesmeye devam etmek için neşter bıçağının ucunu kullanın, rostraldan anatomik sol VNO'ya kadar çoklu puanlama kesimleri ile başlayın. Daha sonra dokuyu dorsal kafatası yukarı bakacak şekilde çevirin ve düz bir tıraş bıçağını dokunun ventral kenarındaki preparatın alt kenarında orta hatta dikey ve paralel olarak yönlendirin, tıraş bıçağının kesici kenarına orta hattın hemen soluna dokunun ve Raymond için sol palatin boyunca hareket eden bıçağı hafifçe sallayın, bıçağı orta hat kayasına paralel tutmak. Tıraş bıçağı, dokunun ön kısmına doğru yavaşça baskı uygulayarak kribriform plakadaki direnci kırdıktan hemen sonra durur.

Eldivenli parmaklarınızla burun kenarlarının yakınındaki açıkta kalan yarım küreleri kavrayın ve dokuları ayırmak için hafifçe yanal ve öne doğru döndürün. Şimdi ince bir plastik tahtaya 50 ila 100 mikrolitre doku tutkalı uygulayın. Dokuyu forseps ile kavrayın ve yan tarafındaki fazla nemi almak için hazırlığı bir kağıt havluyla kurulayın.

Sağ yarım kürenin yan kenarını tutkalın üzerine nazikçe yerleştirmek için forseps kullanın. Daha sonra, ikincil bir diseksiyon odasının ortasına üç ila beş milimetre çapında, iki milimetre derinliğinde bir vakum gresi damlası yerleştirin ve tahtanın dokunun karşısındaki tarafını grese sıkıca yerleştirin. Diseksiyon odasını hemen soğutulmuş diseksiyon, yapay beyin omurilik sıvısı veya A BOS ile doldurun ve odayı ince diseksiyon alanına aktarın.

Daha sonra, oksijenli standart A BOS ile haznenin bolluğuna başlayın, tahtayı koku alma ampulünün doğrudan taze oksijenli sıvının akışında olması için yönlendirin. İkincil diseksiyon: Herhangi bir görünür kontralateral koku ampulü veya kortikal dokuyu çıkarmak için ince forseps kullanarak başlayın. Hazırlıktan, koku soğancığının dorsal medial yüzeyi boyunca beyaz dura materini bulun ve ardından iki çift ince forseps kullanarak, durayı en beyaz kısımdan kavrayarak ve forsepsleri ayırarak yırtın.

Daha sonra, yavaş ve dikkatli bir şekilde, alttaki koku ampullerine zarar vermeden frontal korteksi ince forsepslerle soyun. Frontal korteks ayrıldıktan sonra, glomerüler tabakaya zarar vermemeye dikkat ederek ventral ve A OB'nin arkasındaki dokuyu kesin ve çıkarın. Daha sonra septal kıkırdak ile VNO kanadı arasındaki ince forsepslerin tek bir noktasını, her iki VN'nin dorsal kenarı boyunca uzanan ince bir kemik dokusu parçasını çalıştırın Os.To VNO'yu tamamen çıkardıktan sonra kontralateral VNO'yu dikkatlice çıkarın, septal kıkırdağın ventral coddle kenarında bir kesim yapmak için ince forseps kullanın, burada septal kemiğin ventral kenarı boyunca uzanan beyaz bir avasküler damara daralır.

Yarı künt bir nokta oluşturmak için ince forsepsleri bir araya getirin ve kıstırma forsepslerini kesimin yanlarına yerleştirin. Daha sonra kıkırdağı yavaşça septal dokudan uzaklaştırın, roly ilerleyin ve alttaki septum dokusunu rahatsız etmeyin. Kemiği forseps ile kavrayın ve beşik reform plakasının yakınında çatlayana kadar kemiği nazikçe ileri geri hareket ettirin.

Şimdi, hızlı bir perfüzyon cihazına bir poliamid kanül takın ve poliamid kanül boyunca dakikada 0,1 ila 0,3 mililitrelik bir zil çözeltisi akışı başlatın. Akış hızını hat içi küçük hacimli akış ölçer ile ölçün. Son olarak, kanülü VNO girişine paralel olarak yönlendirin.

Kanül yerindeyken, çıkış basıncının VNO'nun şişmesine ve kan damarının boşaltılmasına yol açmasına neden olduğunu gözlemleyin. Daha sonra kanülü hemen VNO'ya yerleştirin, kanülün açısını VNO açıklığına paralel kalacak şekilde sabit tutun ve fizyolojik fonksiyonun değerlendirmesine başlayın. Preparatlar arasında büyük bir değişkenlik kaynağı, deney hayvanlarının kafatası ve burnunun kemiklerinin yoğunluğu ve kırılganlığıdır.

Septal dokuların, özellikle burnun dorsal kemiklerine bağlanma noktalarının yakınında, kontralateral hemisfere bağlı kalması nadir değildir. Diğer yaygın diseksiyon hataları, RO nazal sinirinin aksonlarının VNO yakınındaki septal dokuda veya a OB yakınında hasar görebileceği sekonder ince diseksiyon sırasında ortaya çıkar. Bu ve benzeri olaylar, RO nazal duyu nöronları ile A OB oluşturma arasında eksik bağlantıya neden olacaktır. Prosedürün başarıyla tamamlanmasının ardından hazırlıklar kullanılamaz hale gelir.

Fonksiyonel bağlantı, koku maddeleri ile VNO stimülasyonuna yanıt olarak nöral aktivitenin tek birim elektrofizyolojik kayıtları gibi fizyolojik bir test kullanılarak doğrulanabilir. Bu prosedürü denerken sakin kalmak ve kısa molalar vermek önemlidir. Yorulursanız, bu tekniğin performansındaki küçük hatalar bu hassas sinir yapılarına zarar verebilir.

Bu videoyu izledikten sonra, elektrofizyolojik veya görüntüleme çalışmaları için erken aksesuar fabrika sisteminin ex vivo diseksiyonlarının nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.