Sıçangiller Kornea Nakli: Katı Organ Nakli En Yaygın Formu Eğitim için Bir Model

Aşağıdaki prosedürün genel amacı, akut kornea allogreft reddi için bir model tanıtmaktır. Bu, önce donör korneanın çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün sonraki adımları, alıcı greft yatağını hazırlamak ve donör korneayı yerine dikmektir.

Daha sonra greftin bütünlüğü test edilir ve herhangi bir sızıntı yoksa göz kapağı dikilerek kapatılır. Bir hafta sonra, allogreftin reddini ölçmek için kornea greftinin opaklığı değerlendirilir. Sonuç olarak, model kullanılabilir, katı organ nakillerinin allogreft reddi ile bağlantılı en önemli faktörleri tanımlamak için çeşitli terapötik stratejileri test edebilir.

Kornea nakli Amerika Birleşik Devletleri'nde en yaygın olanıdır. Bu prosedür için birkaç hayvan modeli mevcuttur, ancak fareler en yaygın kullanılanlardır. Bu model, kornea naklinin hem reddini hem de kabulünü içeren faktörleri tanımlamak için kullanılmıştır.

Donör ve alıcı fareleri uyuşturduktan ve anestezi durumlarını bir ayak parmağı tutamıyla doğruladıktan sonra, ameliyat geçirmeyen gözlere saf kayganlaştırıcı merhem sürün. Ardından, boyun boyunca bir bant şeridi kullanarak başı, donör gözü yatay olacak şekilde sağlam, hareketli bir desteğe sabitleyin. Şimdi, ucu metil mavisi ile boyanmış iki milimetre çapında bir çatal kullanarak, merkezi kornea greft bölgesini ana hatlarıyla belirtin.

Ardından, alttaki lense zarar vermemek için 15 derecelik bir oftalmik bıçakla korneaya nüfuz edin. Viskoelastik çözeltiyi ön kamaraya enjekte edin, böylece oda daha derin hale gelir. Şimdi donör greftini Venedik makasıyla eksize edin ve grefti, madres elde etmek için kullanılana kadar buz üzerinde bir HBSS kabına aktarın, alıcı göze birkaç damla %1 tpic yardımcı ve %2.5 efrin hidroklorür uygulayın.

Daha sonra, 1.5 milimetrelik bir çatal kullanarak, daha önce tarif edildiği gibi greft bölgesini ana hatlarıyla belirtin, 15 derecelik bir oftalmik bıçak bıçağı kullanarak, korneaya nüfuz edin ve derinleştirmek için ön kamaraya viskoelastik bir çözelti enjekte edin. Donör kornea ile lens arasındaki boşluğu korumak için bu, alttaki lense ve donör endotelyumuna zarar verme olasılığını azaltır. Venedik makasıyla, belirtilen merkezi kornea düğmesini alıcıdan çıkarın ve atın.

Kornea endotel hücrelerini lensle doğrudan temastan kaynaklanan hasardan korumak için kornea deliğinin çıkarılmasıyla boşalan alana viskoelastik ortam ekleyin. Şimdi donör korneayı süper ince uçlu mikro forseps kullanarak greft yatağının üzerine yerleştirin. 11.0 naylon sütürün ilk ısırığını donör korneanın içinden tam kalınlığın yaklaşık% 90'ına kadar donör tarafa yerleştirin.

Daha sonra aynı derinlikte alıcı tarafa, sonra bağlayın. Orta kardinal kesintili dikişler kullanarak nakledilen korneayı sabitlemeye devam edin. İhtiyaç duyulan tek şey toplam sekiz ila 10 dikiştir.

Şimdi ön kamarayı yeniden düzenleyin ve tuzlu su enjeksiyonu ile yıkayın. Alternatif olarak, yeniden oluşturmak için ön odaya hava enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, bir selüloz sünger kullanarak greftin bütünlüğünü nazikçe test edin.

Son olarak, gözü değerlendirin. Gözbebeğinin yuvarlak olup olmadığını ve ön kamaranın normal görünüp görünmediğini belirleyin. Greft iyi görünüyorsa, antibiyotikli merhem sürün ve isteğe bağlı olarak ameliyat sonrası göz kapağını koşu 7.0 ipek dikiş ile kapatın.

Fareyi tamamen uyanana kadar izleyin ve ardından iki gün boyunca ev kafesinde gözlemlemeye devam edin. Ameliyattan sonraki dört ila yedi gün arasında anestezi uygulanmış fareden dikişleri çıkarın. Dikişleri çıkardıktan sonra, fareyi birkaç gün gözlemleyin.

Bir opaklık ölçeği kullanarak, her korneayı sıfırdan beşe kadar bir puanla değerlendirin. Sıfır, opaklık olmadığını gösterir. Bir puan, minimum yüzeysel opaklığa karşılık gelir.

İki puan, fark edilebilir bir altta yatan göz bebeği ile hafif ila daha derin opaklığı gösterir. Ve iris, stromal opaklığa sahip kornealara üç puanlık bir işarettir, burada iris, göz bebeği kenarları dışında ayrıntılı olarak görülemez. Yoğun stromal opaklık varsa ve altta yatan herhangi bir yapı görülemiyorsa, grefte dört puan verin.

Eğer, yoğun stromal ödem ile tam opaklık varsa ve hem göz bebeği hem de iris tamamen gizlenmişse, grefti beşe kadar puanlayın. Metin protokolü ayrıca kan damarı infiltrasyonunda sıfırdan sekize kadar bir ölçek önermektedir. Greft modeli kullanılarak çok çeşitli manipülasyonlar yapılabilir.

Örneğin, dalak hücreleri donör fareden ön kamaraya eklenebilir. Donör ötenazi yapıldıktan sonra, dalağı çıkarın ve üç mililitrelik bir şırınga pistonu kullanarak bir hücre süzgecine aktarın, dalağı bozun, daha sonra dalak hücrelerini 10 mililitre HBSS'de yıkayın, yıkanmış hücreleri 10 mililitre HBSS'de yeniden süspanse edin ve hücreleri bir hemo sitometre ile sayın. Hücreleri daha sonra kullanılana kadar oda sıcaklığında tutun.

Kornea naklini gerçekleştirmeden önce, hücreleri bir diseksiyon mikroskobu kullanarak karşı gözdeki ön kamaraya enjekte edin, 33 gauge iğneden beş mikrolitre HBSS'ye 1 milyon dalak hücresi enjekte edin. Model, donör kornea allogrefti tarafından eksprese edilen allo antijenlerine sistemik allo antijen T hücresi toleransının greft sağkalımını iyileştirip iyileştiremeyeceğini test etmek için kullanıldı. BC fareleri, B 10 dalak hücrelerinin ön kamaraya enjeksiyonu ile C 57 siyah 10 allo antijenlerine tolere edildi.

Bu, kornea allogreft kabulünü iyileştirmedi. Çalışmalar, DTH yanıtları ile ölçülen allo antijene karşı antijene spesifik tolerans oluşturulmasının, deri veya kornea allogreftlerinin sonucunu etkilemediğini göstermektedir. Benzer bir çalışma, BAB c farelerinde B 10 allo antijenlerine karşı DTH toleransı oluşturulduğunda, B 10 allo antijenlerinin bir kısmını veya tamamını koruyan deri greftinin sağkalımı artırmadığını göstermiştir.

Bu nedenle, yerleşik antijene özgü DTH'ye sahip bağırsak C, kornea veya deri allogreftlerinden ölçülebilir şekilde fayda görmedi. Bugünkü deneyden de görebileceğiniz gibi, kornea nakli teknik olarak zorlu bir işlemdir. Bununla birlikte, bu, grafiğin başarısını veya başarısızlığını belirleyen hücreleri ve faktörleri incelemek için en iyi modeldir.