İnsan Epileptik Ameliyat sonrası Kortikal Doku Çok elektrot Dizi Kayıtlar

Bu prosedürün genel amacı, insan epileptik kortikal dokusundan ex vivo, interiktal ve nöbet benzeri olayların çoklu elektrot dizisi kayıtlarını gerçekleştirmek, böylece epileptik aktivitelerin altında yatan temel mekanizmaları, başlatmayı, yayılmayı ve anti-epileptik ilaçların hem hücresel hem de ağ düzeyindeki etkilerini ele almanın bir yolunu sağlamaktır. Bu, ilk olarak, ameliyat sırasında farmakoya dirençli epilepsili hastalardan insan kortikal dokusunun dikkatlice rezeke edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, dilimlemeden önce kan pıhtılarını, damarları ve meninksleri ve fazla beyaz maddeyi çıkarmaktır.

Daha sonra, doku bloğunu 400 mikronluk dilimler halinde kesin. Son adım, dilimleri yavaş perfüzyon ile yüksek oksijenasyon ve kontrollü sıcaklık arayüz koşullarında tutmaktır. Sonuç olarak, çoklu elektrot dizisi tekniği, spontan interiktal benzeri aktiviteyi ve uyarılmış iktal benzeri olayları kaydetmek için kullanılır.

Laboratuvarımız, nöral hücrelerin insanlarda nasıl patolojik ağ aktivitesi oluşturabileceğini incelemek için serebral fizyopatolojide nöroglial etkileşimlerin rolünü araştırmaktadır. Yakın zamanda, boyun bakımı ve lap Petri hastaneleri ile işbirliği içinde insan epileptik, postoperatif kortikal dokunun çoklu elektrot dizisi kayıtlarını oluşturduk. Bugün, Boyun Bakım Hastanesi'nde beyin cerrahı olan Thomas Blo, Lapis Hastanesi'nde Feld epileptolog ve araştırmacı ve laboratuvarımdaki Elena DOI doktora sonrası ile birlikte size bu tür tekniklerin nasıl uygulanacağını ve iyi bir şekilde kullanılacağını gösterecek.

İnsan epileptik dokusunun toplanmasından MEA kayıtlarına ex vivo, Epileptik hastaları tedavi etmek için insan kortikal doku EKT'sinin kullanılması, belirli ağlarda birbirine bağlı olan işlevsel olarak korunan insan epileptik nöronlarının ve glial hücrelerin doğrudan araştırılmasına izin verir. İn vitro araştırmalar, bir insan dokusu, in vivo olarak tam olarak ele alınamayan tek hücrelere ve ağ aktivitelerine, iyonik tabanlı mekanizmalara erişim sağlar. İnsan kortikal dokusunun MEA kaydı, epilepsi alanında, ekzogenezin altında yatan hücresel mekanizmalar ve nöbet yayılımı gibi önemli bir soruyu yanıtlamaya yardımcı olabilir.

Bu tekniğin anlamı, lezyonel epilepsiye ve tedavisine kadar uzanır, çünkü farmako direncinin mekanizmalarını ve anti-epileptik ilacın insan kortikal dilimlerinde kaydedilen nöbet benzeri olay üzerindeki etkisini anlamaya izin verir. Laboratuvar ortamında. Çoklu elektro dizilerin e, e, g veya in vivo mikro elektrotlar gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, dokunun çeşitli tarafından alan potansiyellerinin ve çok birimli aktivitenin invaziv olmayan, eşzamanlı stimülasyonuna ve kaydedilmesine izin vermeleridir.

Prosedüre başlamak için, önce alt kısmı damıtılmış suyla doldurarak arayüz odasını hazırlayın. Ardından odayı bir karbojen kaynağına bağlayın. Ardından, dilim haznesinin düz alanına sığacak şekilde bir parça lens dokusu kesin.

Dilimlere ulaşmadan önce kabarcıkların giriş hattından kaçmasına izin vermek için giriş borusunun yanına yerleştirin. Bundan sonra, lens dokusu parçasıyla aynı uzunlukta iki parça telli pamuk ipliği kesin. Bunları odanın düz alanının yanlarına yerleştirin, peristaltik pompanın akış hızını dakikada bir mililitreye ayarlayın.

Daha sonra, odanın alt kısmındaki su için oksijenasyonu açın. Ardından sıcaklık kontrol cihazını 37 santigrat dereceye ayarlayın. Arayüz odasının üst kısmını bir parça paraform ile örtün ve sıcaklığın artması ve stabilize olması için en az 30 dakika bekleyin.

Şimdi, iki ince forseps, bir spatula, küçük bir kaşık ve bir bıçak, iki cam Petri kabı, iki fırça ve siyanoakrilat yapıştırıcısı içeren diseksiyon aletlerini hazırlayın. Ardından, dilimleme parametrelerini ayarlayarak vibratoyu hazırlayın. Bu prosedürde, hazırlanan sükroz bazlı A CSF'yi eksi 80 santigrat derece dondurucudan çıkarın ve sulu kar haline getirin.

Karbojen ile oksijenlendirin. Daha sonra 250 mililitre A BOS sulu karını bir cam şişeye aktarın ve ameliyathanede doku toplanması için buzla dolu bir şişede saklayın. Standart genel anestezi altında, korteksin kesin bir lokalizasyonuna izin vermek için bir nöronavigasyon sistemi kullanın.

Daha sonra deride bir kesi yapın, ardından kemikte bir frez deliği oluşturun ve ardından bir kraniyotomi yapın. Ardından, kemik kanadını yavaşça kaldırın ve durayı makasla açın. Daha sonra epileptik korteksin blok rezeksiyonu üzerinde çalışın ve yoğun pıhtılaşmayı önleyin.

Bir santimetre kalınlığında bir kortikal blok kesin ve donmuş oksijenli sükroz bazlı A BOS'a yerleştirin. Daha sonra, donmuş sükroz bazlı A CS'deki dokuyu mümkün olduğunca hızlı, ancak mekanik şoklardan kaçınarak laboratuvara aktarın. Şimdi, bir Petri kabını ve vibrato tampon tepsisini sakaroz bazlı oksijenli A BOS sulu karı ile doldurun ve A BOS sulu karını karbojen ile oksijenlendirmeye devam edin.

Daha sonra dokuyu bir kaşıkla şişeden dikkatlice çıkarın ve Petri kabına yerleştirin. Forseps kullanarak, dilimleme sırasında direnci önlemek için kan pıhtılarını, damarları ve meninksleri dikkatlice çıkarın. Dokunun karşı tarafına mümkün olduğunca paralel düz bir yüzey elde etmek için dokunun yan tarafını bir bıçakla kesin.

Daha sonra enine kortikal dilimler hazırlamak için dokuyu vibrato numune plakasına yapıştırın. Daha sonra tampon tepsisine yerleştirin ve düşük hızda 400 mikron kalınlığında dilimler kesin. Ardından, bir spatula ve bir fırça ile birkaç parça lens dokusu kesin.

Bu lens dokusu dilimlerini arayüz odasına aktarın. Kaydetmeden önce en az bir saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Bu prosedürde, perfüzyon sistemini peristaltik bir pompaya ve MEA sistemini bir bilgisayara takın.

Ardından amplifikatörün içine boş bir MEA çipi yerleştirin. Ardından, MEA odasındaki kanül elemanını ısıtmak için sıcaklık kontrol cihazını 37 santigrat dereceye ayarlayın. Oksijenli A BOS'un perfüzyonunu dakikada beş ila altı mililitre olarak başlatın.

Bundan sonra, kayıt yazılımını açın. Tüm MEA elektrotlarının iyi bağlandığından ve perfüzyon nedeniyle gürültü olmadığından emin olun. Şimdi bir cam petri kabına biraz ısıtılmış kayıt A CSF dökün.

Lens dokusunu tutarak arayüz odasından bir dilimi Petri kabına aktarın. Daha sonra dilimi çözeltiye batırarak dokudan dikkatlice ayırın veya ayrılmayı kolaylaştırmak için küçük bir fırça kullanın. Ardından, MEA çipini bir miktar A CSF ile doldurun.

Dilimi, plastik bir pipet ile bir spatula ile MEA çipine aktarın. Dilimin elektrot alanına yapışmasını sağlamak için çözeltiyi nazikçe çıkarın ve platin bir ankraj ile yerinde tutun. Bundan sonra, MEA çipine bir mililitre CSF kaydı ekleyin ve amplifikatöre yerleştirin.

Ardından perfüzyonu dakikada beş ila altı mililitre olarak başlatın. Ardından, MEA kayıt alanındaki dilim konumunu kontrol edin. MEA monitör yazılımını kullanarak, gerekirse ayarlayın.

Kortikal tabakalardan kayıt yapmak ve fotoğraf çekmek için kayda başlayın. Bu, bir MEA elektrodu tarafından kaydedilen insan kortikal dilim aktivitesinin temsili bir izidir. Normal A BOS'ta, magnezyum içermeyen altı milimolar potasyum A BOS ile perfüzyondan 15 dakika sonra interiktal benzeri spontan aktivite gözlemlemek mümkündür.

İlk nöbet ortaya çıkar ve bunu iki ila üç dakikalık aralıklarla diğer olaylar takip eder. Mavi iz, yakınlaştırılan etkinliği gösterir. Bu panel, 250 hertz'de filtrelenmiş veri yüksek geçişini gösterir, bu da yakınlaştırıldığında çok birimli aktiviteyi ortaya çıkarır, burada magnezyum içermeyen tüm MEA elektrotlarından bir nöbetin temsili bir kaydı vardır.

Altı milimolar potasyum A BOS. Her kare, 12'ye 12 MEA dizisinin bir elektrotunu temsil eder ve 82. bir zaman penceresi gösterir. Noktalı çizgi, kortikal yüzeyin MEA dizisine göre konumunu gösterir.

Bu videoyu izledikten sonra, insan kortikal dokusunun nasıl güvenli bir şekilde taşınacağını, canlı kortiko sedef hastalığının nasıl hazırlanacağını ve saklanacağını ve spontan ve indüklenmiş epileptik aktivitelerin MEA kayıtlarını nasıl gerçekleştireceğinizi iyi anlamalısınız Bu prosedürü denerken, hastanedeki klinik ekip ile laboratuvardaki araştırmacılar arasında yakın bir işbirliğine sahip olmak önemlidir. İnsan dokusu ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini asla unutmayın ve bu prosedürü takiben olası herhangi bir bulaşıcı hastalıktan kaçınmak için eldiven giymek gibi her zaman koruma sağlanmalıdır. Floresan görüntüleme, yama lambası, kayıt, spike sıralama ve histolojik analiz gibi diğer teknikler, sinaptik özellikleri, tek hücre davranışını, iyon dinamiklerini ve hücre ve moleküler anormallikleri popülasyon aktiviteleriyle ilişkilendirmek için em EA kayıtlarına bağlanabilir.

İnsan epileptik dokularının MEA kayıtlarının yapılması, araştırmacının ekzogenez ve farmakodirencin altında yatan mekanizmaları ve bu fenomende nöroglial etkileşimin rolünü açıklığa kavuşturmak için lezyonel epilepsileri keşfetmesinin yolunu açabilir. İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve denemenizde iyi şanslar.