Miyeloid hücrelerin Dynamics Gerçek zamanlı Görüntüleme Süm ^{Min / +} Bağırsak Tümörleri Disk Eşodaklı Mikroskopi Spinning tarafından

Bu prosedürün genel amacı, canlı bir hayvanın bağırsak tümörleri içindeki miyeloid hücre dinamiklerini görselleştirmektir. Bu, önce bir PC min faresine floresan molekülleri ve atropin enjekte edilerek gerçekleştirilir. İkinci adımda bağırsak görüntülemeye hazırlanır ve fare mikroskop aşamasına konumlandırılır.

Son adımda, canlı hayvan içindeki tümörün görüntüleri elde edilir ve sonuçta disk konfokal döndürülür. Mikroskopi, birkaç saat boyunca canlı bir PC min farelerinin tümörleri içindeki miyeloid hücrelerin davranışını görselleştirmek için kullanılabilir. Bu yöntem, kolorektal kanserde insan hücrelerinin rolü nedir gibi kanser alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.

Mikroskop görüntüleme platformunun sahne ekine iki kapak fişi sabitlemek için laboratuvar bandı kullanarak başlayın. Ardından eki sahneye yerleştirin ve alkollü mendillerle temizleyin. Ardından, sıcak boncuk sterilizatörünü 250 santigrat dereceye getirin ve ardından aletler soğurken cerrahi aletleri 30 saniye sterilize edin.

Bu strafor kapağı, ameliyat tezgahındaki iki laboratuvar ıslatıcısının arasına yerleştirin. Daha sonra fare derin ve yavaş nefes alırken, hayvanı yan ve retroorbital üzerine cerrahi aşamaya yerleştirin. DExT iplikçik, çubuk Domine ve GR bir antikor solüsyonu enjekte edin.

Enjeksiyondan sonra, fareyi burnu anestezi konisinde olacak şekilde sırt üstü çevirin ve tüyleri ventral yüzeyden ve hayvanın sol arka bacaklarından çıkarmak için elektrikli bir tıraş makinesi kullanın. Kürk çıkarıldığında, saç kontaminasyonunu önlemek için cerrahi aşamaya yeni bir laboratuvar ıslatıcı yerleştirin ve ardından hayvanın ventral yüzeyini alkollü mendiller ve Betadine ile dezenfekte edin. Daha sonra deri altında, atropin çözeltisini farenin bir tarafına enjekte edin ve ardından cilt ve periton boyunca bir santimetre ventral orta hat insizyonu yapmak için makas ve bir çift forseps kullanın.

Bağırsağı dikkatlice üç ila dört santimetre dışarı çekin ve görüntülenecek bir veya birkaç tümörü tanımlayın. Ardından, ilgilenilen tümörü içeren bağırsak halkasını bir cam mikroskop yuvasının üzerine yerleştirin. Yapıştırıcı bir dakika kuruduktan sonra slayta tutturmak için bağırsak boyunca birkaç damla süper yapıştırıcı yerleştirin, görüntüleme sırasında lokalizasyonunu kolaylaştırmak için slayt üzerine tümöre işaret eden bir çizgi çizmek için bir işaretleyici kullanın.

Şimdi fareyi ventral tarafı aşağı bakacak ve burnu burun konisinde olacak şekilde dikkatlice mikroskop aşamasına aktarın. Anestezi hattını laboratuvar bandı ile sabitleyin ve ardından kurulumu, bağırsak kapaklı pencerelerden birinin ortasında olacak şekilde yeniden konumlandırın. Slaytı nazikçe bantlayın ve kalp ve solunum hızlarını ve arteriyel oksijen doygunluk seviyelerini takip etmek için oksimetre probunu farenin sol uzvuna takın.

Ardından, hipotermiyi önlemek ve görüntüleme için ISO flor konsantrasyonunu azaltmak için fareyi ısıtma battaniyesiyle örtün. Son olarak, çok boyutlu alım penceresinde, alım işlemini başlatmak için al'a tıklayın. Alım tamamlandığında, film bir Mars yazılımı kullanılarak kaydedilir ve kaydedilir.

Eğirme diski konfokal mikroskopi, tümör olmayan ve tümöral dokular kullanılarak. Bir PC'nin ince bağırsağında, min, fareler, floresan dekstran rodin ve bir lenfosit antijeninin intravenöz enjeksiyonundan sonra serozal yüzeyden görüntülenebilir: altı kompleks lokus G 6 47 konjuge antikor, kan damarları ve polimorfonükleer hücreler sırasıyla tespit edilebilir. Lenfoid doku agregasyonları olan ve miyeloid hücrelerle dolu PI yamaları da kolayca gözlenebilir.

İnce bağırsağın Kripsleri kan damarları ve miyeloid hücrelerle çevrilidir. Tümöral doku genellikle daha vaskülarize olur ve miyeloid hücreler tarafından daha fazla sızar ve Crips'in yapısı, tümörün boyutuna bağlı olarak daha az iyi organize edilir. Aktin ECFP'nin düz kas tabakası tarafından ekspresyonu bazen bağırsak epitelinin keskin bir odağının elde edilmesini zorlaştırabilir, bu görüntüde görülebileceği gibi, tümörlerdeki miyeloid hücre dinamikleri bu filmde gösterildiği gibi birkaç saat boyunca gerçek zamanlı olarak takip edilebilirken, G bir pozitif nötrofiller kan damarlarında dolaşır ve dokularda devriye gezer.

Diğer miyeloid hücreler, çoğunlukla makrofajlar, Crips'i çevreler ve daha az modaldir. Bu videoyu izledikten sonra, canlı hayvanlarda bağırsak tümörlerinde miyeloid hücre dinamiklerini nasıl görselleştireceğinizi iyi anlamış olmalısınız.