Name: Takip inişi, Apoptosisi tersine Cep Survival Fenomeni için Stratejiler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 55 s
Description: Öğrenin, canlı hücre mikroskobisi ve biyosensörler kullanarak memeli hücrelerde anastazisi (apoptozis tersine çevrimi) tespit etme ve izleme yöntemini. Bu teknik, hücre ölümü sürecinden kurtulan hücrelerin morfolojik ve moleküler değişikliklerini gözlemlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz kelime &quot;Anastasis&quot; apoptoz ters açıklamak için öne için Rev Dr Ralph Bohlmann ve Rev Dr James Voelz teşekkür; Stabil sitokrom c GFP ifade HeLa hücreleri Douglas R. Yeşil; H446 hücreleri Charles, M. Rudin ve Eric E. Gardner; Video karikatür çizim konusunda yardım almak için Heather Kuzu; Bu yazının değerli tartışma için Yee Hui Yeo. Bu çalışma Sir Edward Youde Memorial Fellowship (HLT), Dr. Walter Szeto Memorial Bursu (HLT), Fulbright hibe 007-2009 (HLT), Yaşam Bilim Araştırma Vakfı bursu (HLT) tarafından desteklenen, NIH NS037402 (JMH) verir ve NS083373 (JMH), ve Hong Kong Üniversitesi Hibeler Komitesi AoE / B-07/99 (MCF). Ho Lam Tang Yaşam Bilimleri Araştırma Vakfı Shurl ve Kay Curci Vakfı üyesidir.

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Anastasis hücre ölümü yolu aktive olan hücreler daha sonra ölüyor süreci tersine ve hayatta fenomen ifade eder. Burada, canlı hücre görüntüleme aslında aynı tek tek hücreler bir son aşamada, apoptotik hücre ölümü sürecinin tersine ve yaşam ve çoğaltmaya devam onaylamak için kullanılabileceğini göstermişlerdir. Bizim protokolleri apoptoz teşvik ve doğrulama için çeşitli biyomarkerler ile izlenen apoptoz dönüşümüne maruz hücrelerin büyük bir kısmını sağlamak için birçok optimize hücre tipine özel tedavi koşullarını açıkla...

Apoptoz (&quot;ölüme düşen&quot; Yunanca), genellikle hücre intihar 1-7 biten tek yönlü bir süreç olarak kabul edilir. Zaten apoptoz yolu 8,9 başlatmış bulunuyoruz hücreleri dahil aksi takdirde bütün hayvanlarda öleceğini ekstra hücrelerin, hayatta yanlısı ölüm genleri sonuçları Genetik bozulması. Benzer şekilde, genetik manipülasyonlar yapay görüntüler sinyalleri &quot;Bana yemek&quot; ya da hücre dışı matriks yapışma kaybetmek sağlıklı memeli hücreleri tam hücre fagositozu veya entosis, sırasıyla 10,11 ölümü kaçmasına izin. Ancak bizler ve başkaları da apoptoz 12-15 erken aşamalarında kurtulabilir Genetik manipülasyon, normal, sağlıklı, memeli hücreleri ve hücre çizgileri olmadan göstermiştir. Hücreler tipik önemli kontrol noktaları geçtikten sonra tek tek hücrelerin izlemek için araçlar kullanarak, daha fazla, apoptoz 12,13 geç aşamalarında kurtarma göstermiştirly 2-6 &quot;dönüşü olmayan noktaya&quot; işaretleyin. Geç evre apoptoz Bu kontrol noktaları mitokondriyal sitokrom c salınımını, kaspaz aktivasyonu, nükleer parçalanma ve apoptotik cisimlerin oluşumunu içerir. Biz hücre ölümü 2-6 eşiğinde apoptoz bu ters tanımlamak için, &quot;hayata yükselen&quot; anlamına gelen Yunanca bir bileşik sözcük &quot;inişi&quot;, kabul. Tüm ölüyor-kurtarma işlemi canlı hücre görüntüleme tarafından gözlemlenen sürece, bu apopitozisin yaşamamış hücrelerden Anastasis geçiren hücreleri ayırt etmek zordur. Iş Yılların apoptoz hücre intihar morfolojik özellikleri evrimsel olarak korunmuş biyokimyasal ve moleküler olayların 16-19 tarafından tahrik olduğunu ortaya koymuştur. Bu olaylar hasarlı veya d ortadan kaldırarak ile tek hücreli ve çok hücreli organizmalarda gelişimsel ve homoeostatic süreçleri düzenleyen hücrelerin kendini imha teşvikangerous hücreler 16-19. Apoptotik hücreler hali hazırda apoptoz 1,5,6,16,20 standart, morfolojik, biyokimyasal ve moleküler belirtileri ile ayırt edilebilir olsa da, şu anda inişi 12,13 özgü bilinen bir işaretleyici yoktur. Önemlisi, Anastasis geçirmiş hücreler normal sağlıklı hücreler, sadece apoptoz ters başlayın hücreleri görünür olarak apoptotik hücreler ölüyor 12,13 olduğu görülmektedir. Böylece, yeni araçlar belirli bir hayatta hücre önce aktif apoptotik süreçleri yaşamış kesinlikle sonuçlandırmak için gerekli. Bu hızlı ve kitlesel imha süreci olduğundan Apoptoz genellikle geri dönüşümsüz kaskad olarak kabul edilir. Mitokondri gibi sitozolüne 21,22 içine sitokrom-c gibi apoptogenic faktörler yayımlandı kez bazı hücreler, apoptoz başlatmak için bu güne dakika sürebilir iken, kaspazlar, 5 dakika içinde aktif 23,24 sitoplazmik tarafından takip edilebilir veNükleer 10 dakika 25-27 içinde yoğuşma ve hücre ölümü kısa bir süre sonra 25-27. Aktif kaspazlar yarılması ve endonukleaz inhibitörü DFF45 / ICAD 29,30 olarak hücresel yıkım 2,28, amacıyla önemli yapısal ve işlevsel bileşenleri inaktive ederek apoptozu düzenlemişlerdir. Kaspazlar ayrıca 31,32 c sitokrom mitokondriyal serbest teşvik etmek mitokondri translocates BCL-2 aile üyesi BID, pro-apoptotik faktörler, etkinleştirin. Kaspaz aktivitesi fagositoz 33 ile makrofajlar veya komşu hücreleri hücreleri ölüyor yutulmasına teşvik etmek için bir &quot;beni ye&quot; sinyali olarak fosfatidilserin hücre yüzey maruz sonuçlanır. Ayrıca, apoptotik olaylar hücresel biyoenerjitiklerinin ve metabolizma 34,35,36 bozarak işlevsiz mitokondri, hale. Dolayısıyla, bu tür imha kurtarma sezgisel olası görünüyor. Orijinal aksine bekliyoruzations, hücreler bile geç bir aşamada apoptotik hücre ölümü sürecini tersine çevirebilirsiniz. Sürekli kültür içinde ölen hücrelerden kaderi izleyerek, primer hücreler ve hücre çizgileri 12,13 bir dizi son evre apoptoz geri döndürülme oranı gözlendi. Ölüm uyaran kaldırılması gibi mitokondriyal parçalanma, kromatin yoğunlaşması, DNA hasarı, plazma zar kabarmasını, fosfatidilserin hücre yüzey maruz, mitokondriyal sitokrom c salınımı, kaspaz aktivasyonu, nükleer parçalanma, hücre büzülmesi gibi apoptoz açık özelliklerinden, kurtarma izin apoptotik cisimlerin ve oluşumu. Bu gözlemler inişi fonksiyonları, sonuçları ve mekanizmaları ile ilgili cevapsız soruları gündeme. Bu sorulara yanıt için, bir ön güvenilir Anastasis geçiren hücreleri tespit etmektir. Burada, biz canlı mikroskopi yöntemleri ve daha önce geç evre apoptoz ve th tersine çevirdi hücreleri tespit için bir kaspaz biyosensör tariftr kurtuldu.

<table><tbody><tr><td>LSM780 konfokal mikroskopi</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cam alt kültür kabı</td><td>MatTek Corporation</td><td>P35G-0-14-C</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf CultFoi</td><td>Carl Zeiss</td><td>000000-1116-084</td><td></td></tr><tr><td>CO2 bağımsız ortam</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>18045-088</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>C34552</td><td></td></tr><tr><td>Mitotracker Kırmızı CMXRos</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>M-7512</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>H1399</td><td></td></tr><tr><td>Floresan etiketli annexin V</td><td>Biovision</td><td>K201</td><td></td></tr></tbody></table>

takip inişi, apoptosisi tersine cep survival fenomeni için stratejiler

Strategies for Tracking Anastasis, A Cell Survival Phenomenon that Reverses Apoptosis

Anastasis (&quot;hayata yükselen&quot; Yunanca) ölen hücrelerin iyileşme anlamına gelir. Bu hücreler kurtarmak önce, mitokondriyal parçalanma, sitozolüne mitokondriyal sitokrom c salınımı, kaspaz aktivasyonu, kromatin yoğunlaşması, DNA hasarı, nükleer parçalanma, plazma zar kabarmasını, hücre büzülmesi, hücre yüzeyi maruz kalma dahil olmak üzere apoptoz önemli kontrol noktaları aracılığıyla geçti fosfatidilserin ve apoptotik cisimlerin oluşumu. Apoptotik uyaranlara böylece ölen hücrelerin apoptoz ve potansiyel diğer ölüm mekanizmaları ters izin ölüm öncesinde kaldırıldığında Anastasis oluşabilir. Bu nedenle, inişi de uygunsuz hasarlı hücreleri sürdürmek olabilir fizyolojik iyileşme süreçleri dahil görünüyor. fonksiyonları ve inişi mekanizmaları görünüşte sağlıklı hücrelerin kurtarma sonra geçmiş olayları algılamak için sınırlı araçları tarafından kısmen engel, hala belirsiz. Stratejiler Anasta tespit etmek içinsis Anastasis modüle fizyolojik mekanizmaların çalışmalarını, hastalık patoloji ölümsüz hücre tehlikeleri ve potansiyel terapötik sağlayacaktır. Burada, canlı hücre mikroskopi ve memeli hücrelerinde Anastasis tespit ve takip etmek için, memeli bir kaspaz bio-sensor aracılığıyla etkili stratejiler açıklanmaktadır.

Apoptoz ters çalışma yapmak için, doku kültürü hücreleri ilk apoptoz tetiklemek için bir ölüm uyarıcıya maruz kalmaktadır. Hücreler apoptoz işaretlerinden gösterilecek zaman taze kültür ortamı daha sonra uyaran yıkayacak ve ardından kurtarma (Şekil 1A) izin ölüyor hücreleri inkübe uygulanır. Burada, ele alınan temel soru, bireysel ölüyor kültür hücreleri apoptoz doğru ilerleme ve hala Anastasis tabi ne kadar olduğunu. Bu soru kesinlikle aşağıda açıklanan yöntemler kullanılarak hücre kaderi izlemek için ...

Anastaz terimi, ölmekte olan hücrelerin geç bir aşamada hücre intihar sürecini tersine çevirdiği, kendilerini onardığı ve nihayetinde hayatta kaldığı fenomeni ifade eder. Burada, anastaz geçiren hücreleri tespit etmek ve izlemek için protokoller gösteriyoruz.

Takip inişi, Apoptosisi tersine Cep Survival Fenomeni için Stratejiler

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) refers to the recovery of dying cells. Before these cells recover, they have passed through important ...

Bu prosedürün genel amacı, canlı hücre mikroskobu ile apoptotik hücre ölüm sürecinin ve kültürlenmiş hücrelerin tersine çevrilmesini tespit etmek ve izlemektir. Sağlıklı hücreler substrat üzerine yayılır ve çekirdeğin etrafında boru şeklinde filamentli mitokondri içerir. Bununla birlikte, hücreler apoptoz yoluyla intihar ettiğinde, ölmekte olan hücreler, apoptozun tersine çevrilmesini tespit etmek ve izlemek için benzersiz morfolojik özellikler gösterir.Hücreler cam tabanlı hücre kültürü kaplarına kaplanır. Bir sonraki adım, mitokondri ve çekirdekleri etiketlemek için canlı hücre boyama yapmaktır. Bu, sağlıklı ve apoptotik hücrelerin morfolojik özelliklerinin tespit edilmesini sağlar.Canlı hücre mikroskobu ile, etiketlenmiş sağlıklı hücreler daha sonra apoptozu indüklemek için bir ölüm uyaranına maruz bırakılır. Apoptoz tespit edildiğinde, ölmekte olan hücreler yıkanır ve daha sonra hücre iyileşmesine izin vermek için taze hücre kültürü ortamı ile inkübe edilir, canlı hücre görüntüleme, apoptozun tersine çevrilmesini ve hücre morfolojik geri kazanımı ve göçü ile gösterildiği gibi hücre onarımı ve hayatta kalma gibi sonuçlarını tespit etmek ve izlemek için kullanılır. Apoptoz, vücudumuzdaki istenmeyen veya tehlikeli hücreleri ortadan kaldırmak için önemli rol oynayan bir tür programlanmış hücre ölümüdür.Bu hücre sentezlenen sürecin genellikle geri döndürülemez olduğu varsayılır, çünkü bir kez hücre bir kez başladıktan sonra kesinlikle ölür, ancak aslında, ölen hücrenin hücre ölüm sürecini tersine başlatabileceğini ve daha sonra hayatta kalabileceğini ve hatta türetebileceğini keşfettik. Sito C, salınım, vaka bazlı aktivasyon, nükleer parçalanma ve apoptotik cisim oluşumu gibi düşük getiri noktası olmaya zorlanmış olası kritik adımlara sahiptirler. Yunan uzmanlara danıştıktan sonra, hayata yükselmek anlamına gelen bir terim, bir durağanlık benimsiyoruz.Apoptozu ve diğer hücre ölümü süreçlerini tersine çevirme fenomenini tanımlamak için, apoptozu tersine çeviren hücre normal ağır hücreler gibi göründüğü için antezin tespit edilmesi zordur. Bununla birlikte, sürekli canlı hücre mikroskobu ile, hücrelerin büyük bir kısmında meydana gelen anastazı tespit edebiliriz. Bu tekniğe hakim olmak önemlidir çünkü antezin yeniden yaratılmasını incelememize izin verir.Bu antezin dokuya zarar verebileceğini, ancak aynı zamanda hasarlı hücrelerin hayatta kalmasına ve kanser oluşturmasına da izin verebileceğini öne sürdük. Bu nedenle, anestezileri kontrol eden mekanizmaların belirlenmesi, kanser, kalp yetmezliği ve dejenerasyon gibi enjekte edilebilir hastalıklarda hücre ölümü ve sağkalımına aracılık ederek anastazı tespit etmek ve izlemek için bize yeni yaklaşımlar sağlayabilir. Apoptotik olaylardan sonra, geçici hücre ölümü indüksiyonundan sonra hangi hücrelerin apoptozu tersine çevirebileceğini izlemek için hızlandırılmış canlı hücre mikroskobu yapılır.Başlamak için, daha ince bir cam tabana sahip 35 milimetrelik bir hücre kültürü kabına bir mililitre poli de lisin çözeltisi ekleyin. Cam yüzeyi kaplamak için bir dakikalık bir inkübasyonun ardından, çözeltiyi aspire edin ve camı iki mililitre fosfat tamponlu tuzlu su ile yıkayın Hücreleri hazırlamak için önce tripsin gözleri, topuk hücreleri% 80 ila 90 birleşim Hücreler ayrıldıktan sonra, hücreleri askıya almak için 10 mililitre 37 santigrat derece ortam ekleyin. Daha sonra hücre süspansiyon çözeltisini 10 mililitrelik steril bir tüpe aktarın ve bir ila iki dakika boyunca 160 kez G'de santrifüjleyin.Döndürmeyi takiben, ortamı dikkatlice aspire edin. Tüpün altındaki hücre peletini rahatsız etmeyin. Nazik pipetleme ile hücreleri 10 mililitre hücre kültürü ortamı ile yeniden süspanse etmeye devam edin.Ardından, 35 milimetre önceden kaplanmış cam üzerinde asılı hücrelerin iki mililitresine bakın. Alt hücre kültürü kapları. Hücreleri bir gün boyunca% 5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede nemlendirilmiş bir inkübatörde inkübe edin.Hücrelerin görüntüleme sırasında %80 co akıcılığına ulaşabilmesi için hücre sayılarının ayarlanması gerekebilir. Mitokondriyal ve nükleer parçalanma, apoptozun morfolojik özellikleridir. Mitokondri ve çekirdekleri görselleştirmek için canlı hücre görüntülemeden kısa bir süre önce boyama yapın.Önce iki mikrolitre mitokondriyal boya ekleyerek boyama protokolüne başlayın. MIT izleyici kırmızı 50 mikromolar stok çözeltisi ve steril bir mikro santrifüj tüpünde mililitre stok çözeltisi başına 3 3 3 4 2 10 miligram kancalı iki mikrolitre DNA lekesi, hücre kültürü kabından bir mililitre şartlandırılmış kültür ortamı ekleyin mikro santrifüj tüpüne ve pipetleme ile lekelerle iyice karıştırın. Daha sonra karışımı tekrar kültür kabına ekleyin.Çanağı 37 santigrat derecede% 5 karbondioksit ile 20 dakika inkübe ettikten sonra, ortamı aspire edin ve lekeli hücreleri bir mililitre ılık hücre kültürü, orta veya fosfat tamponlu tuzlu su ile üç kez yıkayın. Daha sonra hücreleri, beş dakika daha% 5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede hücre kültürü ortamı ile inkübe edin. Leke hücrelerinin spesifik olmayan arka plan sinyali aşırı lekelenme nedeniyle artabileceğinden, uzun süreli boyama süresinden kaçının.İnkübasyondan sonra, ortamı aspire edin, hücreleri tekrar yıkayın ve daha sonra% 5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede iki mililitre hücre kültürü ortamı ile hücrelere inkübe etmeye devam edin. Mikroskop bileşenleri, bileşenlerin termal genleşmesi ve büzülmesi nedeniyle XY düzleminin odak kaymasını ve kaymasını önlemek için termo dengeye ulaşmalıdır. Termo dengenin sağlandığından emin olmak için, görüntüleme başlamadan en az iki saat önce mikroskobu 37 santigrat dereceye kadar önceden ısıtmak için çevresel kontrol odasını ve sahne inkübatörünü açın.Ardından, çevre kontrol odasına %5 karbondioksit sağlamak için karbondioksit regülatörünü açın. Karbondioksit kaynağı mevcut olmadığında, hücre büyümesini desteklemek için karbondioksitten bağımsız ortam kullanılabilir. Görüntülemeden önce, 1,4 sayısal diyafram açıklığına sahip 40 x objektife doğrudan bir damla daldırma yağı yerleştirin.Ardından, lekeli hücrelerin bulunduğu kültür kabını 37 santigrat derece aşamalı inkübatörün üzerine nazikçe yerleştirin. Diferansiyel girişim kontrast mikroskobu yapmak için numunenin buharlaşması ve kontaminasyonu yoluyla su kaybını önlemek için kabı şeffaf soğuk folyo ile örtün. Plastik ışık polaritesini bozabileceğinden plastik kültür kabı kapağını kullanmayın.Ardından, boru şeklindeki mitokondri ve yuvarlak çekirdeklerle cam yüzeye yayılan bir grup sağlıklı hücreyi bulun ve odaklanın. Hücrelerin bir kez yerleştirildikten sonra aynı odak düzleminde olduğundan emin olmak için kültür kabının merkezindeki veya yakınındaki hücreleri seçin, hücrelerin ve organellerinin net görüntülerini elde etmek için minimum lazer yoğunluğunu ve maruz kalma süresini belirlemek için konfokal mikroskopi ile hızlı bir pozlama yapın. Bu adım çok önemlidir.Lazer ışığı hücreler için fototoksik olduğundan, optimizasyon ve ayarlama gereklidir Odak kaymasını ortadan kaldırmak için, kızılötesi ışık yayan diyot kullanan sürekli bir otomatik odak kayması dengeleme cihazı kullanın. Alternatif olarak, odak düzlemi manuel olarak düzeltilebilir. Hücreler ve odak düzlemi tanımlandığında, canlı hücre görüntülemeye başlamadan önce tüm parametreleri optimize edin ve bir test görüntüsü alın.Ardından, apoptozu indüklemek için sağlıklı hücreleri 10 döngü boyunca bir dakikalık aralıklarla görüntülemek için canlı görüntülemeye başlayın. Hücre ortamını şeffaf bir pipetle çıkarın. Tabağa 37 santigrat derece hücre kültürü ortamı ile önceden karıştırılmış bir hücre ölümü uyarısı uygulayın.Çanağı şeffaf kült folyo ile örtmeye devam edin. Hücre ölümü uyaranının uygulanmasını takiben hızlandırılmış görüntüleme sırasında, plazma zarı blobbingi, mitokondriyal parçalanma, nükleer yoğunlaşma ve parçalanma, sitoplazmik yoğunlaşma, hücre büzülmesi ve apoptotik vücut oluşumu gibi apoptozun morfolojik özelliklerini yakalayarak apoptozu tespit etmek için tedavi edilen hücreleri görüntülemek için zaman aralığını ayarlayın. Apoptoz gözlendiğinde, hücre ölümü uyaranı olan ortamı çıkarın ve hücreleri inkübe etmek için iki mililitre taze hücre kültürü ortamı uygulayın.Hücrelerin morfolojik iyileşmesini ve anastazın sonucunu gözlemlemek için hızlandırılmış görüntülemeye devam edin. İnsan akciğer kanserinde ölen bir hücre ölüm uyaranının çıkarılmasından sonra, H 4 46 hücreleri apoptozu tersine çevirebilir. Hücreler, hücre küçülmesi, zar çatlaması, mitokondriyal parçalanma, nükleer yoğunlaşma ve parçalanma ve apoptotik gibi apoptozun ayırt edici özelliklerini gösterse de, anastaz hücre bölünmesinden sonra vücut oluşumu anormal olabilir.Bu örnekte, iki nokta çekirdeği yerine, hücre bölünmesinden sonra üç ana çekirdek oluşur ve mikro çekirdeklerin oluşumu, nokta hücrelerinde genetik değişikliklere işaret eder. Bu, bir hücrenin bir hücre ölüm uyaranına maruz kalmasından sonra anastazın mutajenik olabileceğini düşündürmektedir. Pro apoptotik faktörler, sitokrom C salınımını tetiklemek için mitokondriye translokasyon yapar, bu da hücre yıkımı için bir protozomun montajına ve döküm bazlı aktivasyona yol açar ve ardından hücre ölümü gösterilir.İşte apoptoz indüksiyonundan sonra mitokondriye lokalize olan GFP etiketli sitokrom C'yi eksprese eden HELOC hücreleri. Sitokrom C, sitozole salınır. Bununla birlikte, hücreler yıkandıktan ve daha sonra taze orta sitozol ile inkübe edildikten sonra, eski sitokrom C normal seviyelere geri döner, bu da sitokrom C salınımından sonra anastazın meydana gelebileceğini gösterir.Burada, beklendiği gibi apoptoz indüksiyonundan sonra ilk olarak sitozole lokalize olan CA tabanlı biyosensör N-E-S-D-E-V-D-Y-F-P-N-L-S'yi eksprese eden hela hücreleri gösterilmektedir. Y-F-P-N-L-S, DEVD'nin aktive edilmiş döküm bazlar tarafından bölünmesi nedeniyle çekirdeğe yer değiştirir. Bununla birlikte, ölüm uyaranı yıkandıktan ve hücreler taze ortam ile inkübe edildikten sonra, hücreler normal morfolojiyi geri kazanırken, Y-F-P-N-L-S çekirdekte kalır ve bu da alçı baz aktivasyonundan sonra ters VA pitozisinin meydana gelebileceğini gösterir.Bu videoyu izledikten sonra, antezi ve sonucunu tespit etmek için canlı hücre görüntülemenin nasıl kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız. Bu gösteride, ATO indükleyicisi olarak etanol kullanıyoruz. Aynı zamanda hücre, teso DMSO ve sporin gibi diğer ölüm uyaranları tarafından indüklenen hücre ölüm sürecini tersine çevirebilir Floresan ışığı hücrelere fototoiktir, bu nedenle canlı hücrelerin görüntülenmesi sırasında bir numuneyi ısıtan geceleri en aza indirmek kritik öneme sahiptir.Apoptoz ve gece anastazı süreci sıcaklığa duyarlı ve sematik aktivitelere bağlıdır. Bu nedenle, tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için deney için hücreleri aynı sıcaklıkta tutmak önemlidir.

strategies-for-tracking-anastasis-cell-survival-phenomenon-that

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz fare embriyolarının programlanmış hücre ölümü bölgeleri (PCD) ve LysoTracker adlı oldukça çözünür boya kullanarak embriyonik kök (ES) hücre kültürleri ayırt görselleştirmek için basit bir protokol mevcut.

Embriyolar yılında Programlı Hücre Ölümü Algılama LysoTracker kullanımı ve Embriyonik Kök Hücreler Farklılaşan

E4orf4 ile uyarılan hücre ölümüne ACF kromatin yeniden faktör katkı ölçüldü. Protokol doksisiklin tedavi ACF alt birimleri ACF1 ve SNF2h koşullu devirme neden olduğu hücre klonlarının seçimi içermektedir, ve indüklenebilir hücre hatlarında E4orf4 ile uyarılan hücre ölümü ölçmek için DAPI tahlil kullanımı.

E4orf4 Bağlı Hücre Ölümü üzerine Nakavt Etkilerinin Gen Ekspresyonu ve Ölçüm Şartlı Nakavt için Hücre hatları hazırlanması

Bu protokol, zaman içinde belirli bir noktada S fazında olan hücrelerin zamansal izleme izin vermek için bromodeoksiüridin (BrdU) alımından kullanımını tarif eder. DNA boyalar ve antikor etiketleme eklenmesi daha sonraki zamanlarda S fazı hücrelerinin kaderi detaylı analizini kolaylaştırır.

Senkronizasyon Need for olmadan Akım Sitometri Kullanımı Hücre Döngüsü ilerleme zamansal İzleme

Burada, anti-kanser terapötiklerine yanıt olarak tek hücreleri uzunlamasına izlemek için uzun süreli hızlandırılmış mikroskopi yöntemini açıklıyoruz.

Looking Glass sayesinde: Time-lapse Mikroskopi ve Tek Hücre Boyuna izleme Anti-kanser Therapeutics Eğitim için

Anastasis teknik olarak hücre ölüm süreci tersine çevirdin mi hücreler morfolojik normal sağlıklı hücrelerden ayırt edilemez olabilir çünkü vivo içinde tespit etmek zordur. Burada tarif biz tespit ve yeni geliştirilen vivo içinde CaspaseTracker Biyoalgılayıcı sistemimizi kullanarak canlı hayvanlarda anastasis geçmesi hücreleri izleme için kullanılan protokol.

Anastasis Vivo içinde CaspaseTracker Biyoalgılayıcı tarafından tespit

Burada, bitişik ölü veya ölmekte olan hücrelerle fiziksel etkileşim yoluyla canlı hücrelerde indüklenen hücre içi sinyal olaylarının belirlenmesi için bir protokol sunuyoruz. Protokol, fagositik alımlarının veya çözünür aracıların salınmasının aksine, ölü hücrelerin reseptör aracılı tanınmasıyla indüklenen sinyal olaylarına odaklanır.

Hücre içi Komşu maruz kalan hücreler, apoptotik hücre ölümü ile etkileşim yoluyla canlı hücreler İndüklenen sinyal olaylarının tanımlanması

Canlı hücre görüntüleme bilgi hazinesi tek hücreler veya tüm nüfus üzerinde ulaşılamaz olan sabit hücre tek başına Imaging tarafından sağlar. Burada, hücre kader kararlar tedavi Anti-Mitotik uyuşturucu Paklitaksel ile aşağıdaki değerlendirmek için canlı hücre görüntüleme iletişim kuralları açıklanır.

Uzun vadeli canlı hücre kader Paklitaksel karşılık olarak değerlendirmek için Imaging hücreli

Burada, apoptotik meme kanseri hücreleri floresan aktif hücre sıralayarak yalıtmak ve daha fazla meme kanseri olmayan kök hücreleri meme kanser kök hücre gibi hücrelere geçişten sonra apoptosis ters akış sitometresi tarafından algılamak için bir iletişim kuralı mevcut.

Apoptozis ters sonra yeni kurulan meme kanser kök hücre benzeri hücre akış sitometrik algılama

Sunulan yöntem DNA çift iplikçiks breaks (DSBs), hücre döngüsü dağılımı ve apoptosis kantitatif analizi birleştirerek DSB indüksiyon ve onarım hücre döngüsü özgü değerlendirilmesi yanı sıra onarım başarısızlık sonuçları sağlar.

ΓH2AX ve Apoptosis'in Genotoksik Stres sonrası Akış Sitometrisi ile Hücre Döngüsüne Özgü Ölçümü

Bu protokol, mitokondriyal kalsiyum akıları floresan görüntüleme ile gerçek zamanlı ölçümü için bir yöntem açıklanır. Yöntemi seçici mitokondri ifade dairesel permutated bir çift uyarma YFP tabanlı oranlı metrik kalsiyum sensör (oranlı metrik pericam-mt) yararlanır.

Apoptozis sırasında Mitokondrial Kalsiyum Düzeyleri Dinamik değişiklikler izlenmesi Genetiği Kodlanmış Kalsiyum Sensor Kullanımı

Öğrenin, canlı hücre mikroskobisi ve biyosensörler kullanarak memeli hücrelerde anastazisi (apoptozis tersine çevrimi) tespit etme ve izleme yöntemini. Bu teknik, hücre ölümü sürecinden kurtulan hücrelerin morfolojik ve moleküler değişikliklerini gözlemlemeyi sağlar.

Takip inişi, Apoptosisi tersine Cep Survival Fenomeni için Stratejiler

Daha fazla video keşfet