Tek kullanımlık Pnömatik Biyoreaktör Sistemi kullanılarak memeli hücrelerinde yetiştirme

Bu prosedürün genel amacı, büyük miktarlarda memeli hücresi yetiştirmektir. Bu, önce pH'ı ve çözünmüş oksijeni kalibre ederek veya probları yaparak ve ardından pH'ı, do problarını ve sıcaklık probu manşonunu otoklavlayarak gerçekleştirilir. İkinci adım, probları ve manşonu kaba yerleştirmek ve kabı biyoreaktör üzerine yerleştirmek ve egzozu, filtreyi, gaz hatlarını ve sıcaklık probunu bağlamaktır.

Bir sonraki adım, çözünmüş oksijen ve pH kablolarını bağlamak ve biyoreaktöre pompalanan ortam ve mikro taşıyıcıları aseptik olarak bağlamaktır. Son adım, biyoreaktörün istenen pervane hızına, sıcaklığına ve oksijen doygunluğuna ulaşmasını sağlamak için kontrolörleri başlatmaktır. Sonuç olarak, aşılama ve bilgisayar izlemesinden sonra, kültür, istenen ürünün ekstraksiyonu ve saflaştırılması için işlenebilir.

Bu tekniğin yeniden kullanılabilir karıştırma tankı biyoreaktörü gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, hava çarklı biyoreaktörün kullanımının kolay olması ve mikrobiyal kontaminasyon olasılığını en aza indirmesidir. Başlayalım. Protokolü başlatmak için merhaba ekranına giriş yapın.

Ardından, pH sensörünü inceleyin ve sensör ucunun elektrolit solüsyonu ile dolu olduğunu onaylayın. pH dört çözeltisi olan bir beher, pH yedi çözeltisi olan başka bir beher ve damıtılmış su içeren bir yıkama şişesi edinin. Ardından pH kablosunu pH sensörüne bağlayın.

Merhaba arayüzündeki eylemler sekmesine gidin, kalibre et'i seçin. Ardından PHA sekmesini ve iki nokta kalibrasyonunu seçin. Tampon sıcaklığını kalibrasyon çözeltisi sıcaklığı alanına girin.

Sensörü kalibre etmek için pH dört çözeltisine yerleştirin Sıfır alanına değeri girin. Grafik dengelendikten sonra pH sensörünü itin, kalibre edin ve damıtılmış suyla durulayın. pH yedi için kalibrasyonu tekrarlayın ve ayarları kaydedin.

Açıklık alanına tampon değerini girin ve greftin stabilize olmasını bekleyin. Çözünmüş oksijeni başlatmak veya kalibrasyon yapmak için. Çözünmüş oksijen sensörünün birkaç saattir sisteme bağlı olduğundan ve kalibre et sekmesinde polarize edildiğinden emin olun, DOA ve iki noktalı kalibrasyonu seçin.

Çözünmüş oksijen sensörünün bağlantısını kesin. Sıfır sekmesine sıfır girin ve grafik dengelenene kadar bekleyin. Birini kalibre etmeyi seçmeden önce, do sensörünü yeniden bağlayın ve açıklık alanına 100 girin.

Grafik dengelendiğinde, iki kalibre et'e tıklayın. Ardından ayarları kaydedin ve programı kapatın. Kalibrasyondan sonra, sensörleri ve termal kuyuyu otoklav torbalarına yerleştirin ve 30 santigrat derece ve 121 PSI'da 15 dakika otoklavlayın.

Otoklav bittikten sonra, otoklav poşetlerini %70 izopropil alkol ile sterilize edin ve poşetleri bir biyolojik güvenlik kabinine veya BSC'ye aktarın. Reaktif kabını sterilize edin ve BSC'ye sokun. İç ambalajı çıkarın ve kapta ve boruda hasar olup olmadığını kontrol edin.

Ardından, çözünmüş oksijen sensörünü reaktif kabının sol ön portuna ve termal kuyuyu sol arka porta takın. Takmak için pH sensörünü sağ ön bağlantı noktasına takın. Sensör kapağını açın ve sensörü kabın üst kısmındaki bağlantı noktasına hafifçe geçirin.

Ardından gemiyi BSC'den dışarı aktarın. pH ve çözünmüş oksijen sensörü kablolarının kap kılıfının dışında olduğundan ve kılıfın içinde hiçbir şey bulunmadığından emin olun. Tekneyi ön tarafa bakacak şekilde tutun ve önce tekne ayaklarını manşonun içine kaydırın.

Kabın tabanının ısıtıcıların üzerine oturduğundan emin olun. Ardından sıcaklık sensörünü dikkatlice kabın termiline yerleştirin. Kuyu. Ardından, boru setlerini çantadan çıkarın.

Boru üzerindeki renk kodlamasını biyoreaktör kontrol ünitesindeki ilgili konektörler ve pompalarla eşleştirin. Ortam ekleme ve örnekleme hatlarını çözünmüş oksijen sensörünün ve termalin arkasına yönlendirin. Boruyu biyoreaktörün sol tarafındaki renk kodlu pompaya iyice yerleştirin.

Ana ve mikro gaz hatlarını bağlayın. Ana gaz hattını kurmak için ana gaz hattı konektörünü gaz çıkışına bastırın. Ardından mikro gaz hattını takmak için mikro gaz hattı konektörünü saat yönünde çevirerek gaz çıkışına yerleştirin.

Filtre fırın borusunu takmak için filtre fırınını açın ve egzoz filtresi borusunu uan'a sabitleyin. Borunun iki kancadan filtreye geçtiğinden ve fırından çıktığından emin olun. Alt çizgiyi filtre fırınının altındaki kancadan geçirin ve kapağı kapatın.

Ardından kabloları çözünmüş oksijen ve pH sensörlerine bağlayın. Kurulum tamamlandıktan sonra, kullanılmayan bir orta baskı hattı ile orta boy şişe torbası kaynağı arasında yem bağlantı parçaları kullanarak steril bir bağlantı oluşturun. Merhaba arayüzündeki eylemler sekmesine gidin.

Kontrol pompalarına tıklayın, medya pompasını seçin ve medya pompasını açmak için kaydırıcıya tıklayın. Ardından 1,5 ila 3,0 litre ortam ekleyin ve pompayı kapatmak için kaydırıcıya tıklayın. Sistem artık önceden hazırlanmış mikro taşıyıcıları reaktöre pompalamaya hazırdır.

Bunlar bir toplama satırı kullanılarak eklenebilir. MICROCAR şişesini steril bir yem kilidi kullanarak uygun ekleme hattına takın. Kontrol pompası ekranındaki ekleme pompasını açın.

Mikro taşıyıcıların eklenmesinden sonra, kaydırıcıyı kullanarak pompayı kapatın, merhaba arayüzündeki ana ekrana geri dönün, eylemleri ve ardından gelişmiş'i seçin. Ayarları düzenlemek için uygun oyun kumandasını seçin. Denetleyicileri otomatik olarak ayarlayın ve ayar noktalarını girin.

Kontrolörleri ayarladıktan sonra hava pompasını açın. Hava çarkının döndüğünden emin olmak için reaktif kabının içine bakın. Çözünmüş oksijen sensörünün tamamen polarize olduğundan ve çözünmüş oksijen değerinin stabilize olduğundan emin olun.

Ardından, bir turuncu bantla tanımlanan kullanılmayan bir ortam ekleme hattı ile yem bağlantı parçaları kullanarak hücre şişesi torbası kaynağı arasında steril bir bağlantı olan do sensörü formunu kalibre edin. Ardından, borunun silikon bölümünü medya pompasına takın. Boru kelepçesinin açık olduğundan ve dallı boru kelepçesinin kapalı olduğundan emin olun.

Kontrol pompası sekmesine gidin ve ardından medya pompasını açın. Hücreleri ekleyin ve medya pompasını kapatın. Aşılamadan sonra eylemler sekmesine gidin ve örnek al'ı seçin.

S'nin olduğundan emin olunampling hortumuampling pompasında ve sampling durdurma musluğunu ekrandaki talimatlara göre manipüle edin. Hücre sayımı için numunenin bulunduğu şırıngayı çıkarın ve diğer aşağı akış uygulamaları hücre sayımları gerçekleştirir. Son olarak, hücreler mililitre başına 1.2 kez 10 ila altı hücre istenen yoğunluğa ulaştığında, septik olarak virüs aşısını 20 mililitrelik bir şırıngaya ekleyin.

Şırıngayı reaktör üzerindeki yedek bir ekleme portuna bağlayın. Ekleme pompasını açmak ve virüs aşısını eklemek için kontrol pompası ekranını kullanın. A 5 49 hücrelerinin çoğunluğu iki saat içinde mikro taşıyıcılara yapıştı.

12 saat sonra, hücreler mikro araba yüzeyinde düzleşme ve yayılma belirtileri gösterdi. 24 saat sonra, mikro taşıyıcılar hücrelerin eşit bir dağılımını gösterdi. Mikro araba kolonizasyonu, burada gösterildiği gibi hızlı bir şekilde gerçekleşir.

54 9 hücre tarafından mikro araba kolonizasyonunun yüzdesi 24 saat içinde %75'tir. Bu grafik, adenovirüs ile enfeksiyon öncesi ve sonrası kültürdeki canlı a 54 9 hücresinin sayısını göstermektedir. Hücreler 48 saat sonra katlanarak mililitrede 1 milyon hücreye kadar büyümeye devam eder.

Bu videoyu izledikten sonra, hücresel veya protein üretimi için memeli hücrelerini yüksek yoğunlukta büyütmek için bir hava çarkı biyoreaktörünün nasıl monte edileceğini ve çalıştırılacağını iyi anlamış olmalısınız. İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve deneylerinizde bol şans.