Name: Fare Akciğer Fibrin Gel implantasyonu Akciğer özel Anjiogenez Eğitim için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Öğrenin fare akciğerinde fibrin jel implantasyonu yöntemiyle anjiogenez ve alveoler rejenerasyon süreçlerini incelemeyi. Bu teknik, akciğer mikroçevresinin damar oluşumundaki rolünü araştırmada kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Amerikan Kalp Derneği (AM), ABD Savunma Bakanlığı (BC074986), Boston Çocuk Hastanesi Fakültesi Kariyer Geliştirme Bursu (TM, AM) fonları tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, teknik yardım için Amanda Jiang ve Elisabeth Jiang teşekkür ederiz.

NOT: in vivo hayvan çalışması Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanları Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu önerileri ile tam uyum içinde yürütülmüştür. protokol gözden ve Boston Çocuk Hastanesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (Protokol Numaraları: 13-10-2526R, 14-02-2568R) tarafından onaylandı. Bu protokolde kullanılan tüm ilaçlar, farmasötik dereceli olan ve bu ilaçlar, steril koşullar altında hazırlanır. 1. fibrin jel çözeltisi, <ol><li> VEGF ve bFGF içeren fibrin jel hazırlayın. <ol><li> Oda sıcaklığına kadar -80 ° C (25 ° C) saklanır fibrinojen ve trombin çözülme stok çözeltileri. </li><li> Fıbrinojene: (0-100 ng / ml nihai konsantrasyon), CaCl2 (nihai konsantrasyon: 45 mM), VEGF (nihai konsantrasyon 0-100 ng / ml) ve bFGF: trombin (2.5 U / ml nihai konsantrasyon) ilave çözeltisi (nihai konsantrasyon:% 0.9 sodiu içinde 12.5 mg / mlm 1,5 ml tüp klorür solüsyonu 43-45). </li><li> Pipetleme tarafından yavaşça karıştırın. </li><li> Yavaşça P200 pipet kullanarak damla damla steril bir plastik tabak üzerine karışımın 200 ul pipetle. </li><li> Katılaşma kadar, 30-60 dakika boyunca, 37 ° C&#39;de damla inkübe edin. Not: katılaşmış jel implantasyon (Şekil 1a) önce bir kaç saat için oda sıcaklığında (25 ° C) &#39;de kapalı bir plastik tabak içinde tutulabilir. </li></ol></li><li> Implantasyon öncesi küçük cerrahi makas kullanarak yaklaşık 3 x 3 x 3 mm küpler halinde fibrin jel Trim. </li></ol> 2. Fare Hazırlama <ol><li> Intraperitoneal ketamin ile (100 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) (IP) enjeksiyon yetişkin fare (8-12 hafta) uyutmak ve fare yeterince fare burnunu sıkıştırarak anestezi onaylayın. <ol><li> Deney sırasında kuruluğunu önlemek için fare gözleri veteriner merhem kullanın. </li></ol></li><li> Tıraş fufare göğüs kafesinin sol tarafında üzerinde r. </li><li> Fare endotrakeal entübasyon gerçekleştirin. </li><li> Entübasyon fare 70 ° açılı standı ve standın üst kısmında bulunan küçük bir lastik bant üzerinde üst kesicilerin çengel yerinde fareyi tutun yerleştirin. </li><li> Yavaşça künt forseps kullanarak bir tarafa dilini geri çekin. </li><li> Bir fiber-optik mikroskop boynu ışığı yardımı ile gırtlak gözünüzde canlandırın. </li><li> Trakea içine endotrakeal elastik kateter (21 G) yerleştirin. </li><li> Fare kendiliğinden (normal 100-150 solunum / dk, hiçbir paradoksal veya sığ solunum) sorunsuz bir biçimde nefes olduğunu doğrulayın. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında yüzüstü pozisyonda fare yerleştirin. </li><li> Mekanik bir kemirgen vantilatör kullanarak fare havalandırın (150 solunum / dk ve 7 ml / kg tidal hacmi). </li><li> 4. ve 5. kaburga arasındaki interkostal boşluk bulmak için kaburga sayın. </li><li> Alan b üzerinde steril bir alan oluşturuny iyice alkol ve Povidon-İyot ile silerek. Steril cerrahi örtü ile yeterince cerrahi alan örtün. </li></ol> 3. Fare Cerrahisi <ol><li> Deri içinde% 0.25 bupivakain (200 ul), lokal enjeksiyonundan sonra, kesme makasları kullanılarak interkostal aralığa boyunca enine cilt insizyonu (yaklaşık 1 cm uzunluğu) sunuyor. </li><li> Interkostal kas içine% 0.25 bupivakain (200 ul) enjeksiyonundan sonra, ince, küçük makas kullanarak 4. ve 5. kaburga arasında bir kas kesi yapmak. </li><li> Tam sol akciğer görselleştirmek için kaburga arasında bir diseksiyon retraktör yerleştirin. <ol><li> Ince forseps kullanılarak sol akciğer merkezinin viseral plevra küçük bir alanda (1 x 1 mm kare) Pençe. </li><li> Kanama ve hava kaçakları tamamen kontrol kadar steril bir pamuklu çubukla kullanarak alanda hafif basınç uygulayın. </li><li> Fibrinojen / trombin (fibrin yapıştırıcı) taze karışımı (adım 1.1.2. 20 &amp; # az miktarda koyun181; P200 pipet kullanarak alana l). </li></ol></li><li> Yavaşça alanı (Şekil 1b) üzerinde küçük forseps kullanarak bir fibrin jel (adım 1.2) yerleştirin. <ol><li> Jel de akciğer solunum hareketleri sırasında bölgede sabit olduğunu doğrulayın. </li></ol></li><li> Ne masif hava sızıntı veya akciğer kanaması olduğundan emin olun. </li><li> Bulunmamaktadır absorbe edilebilir sütür ile yakın insizyon (kas ve deri tabakaları) bertaraf edilmesi. </li><li> Pnömotoraks önlemek için 27 G iğne ile 1 ml şırınga kullanarak göğüs boşluğu aspire. </li><li> Mekanik ventilasyon sonlandırın. </li></ol> 4. Fare Kurtarma <ol><li> Fare kendiliğinden düzgün bir şekilde (normal 100-150 solunum / dk, hiçbir paradoksal veya sığ solunum) nefes emin olun. </li><li> IP 1 ml enjekte dehidratasyonu önlemek için NaCl% 0.9 önceden ısıtılmış. </li><li> Fare dolaşan sıcak su yastığı üzerinde kurtarmak için izin verin. </li><li> Endotrache kaldırFare istikrarlı nefes olduğunu onayladıktan sonra al tüpü. </li><li> Ameliyat sonrası ağrı kesici olarak 3 gün boyunca, meloksikam (5 mg / kg, deri altına enjeksiyon (SC) enjekte edilir. </li><li> O (kendi mide üzerine rulo mümkün ve dik kalması) sternum ve bilinçli kadar dikkatlice 15 dakika aralıklarla en az fare hareketlerini izlemek. </li><li> İyileştikten sonra, ameliyat olmadan farelerden izole bir yeni kafes fare dönün. </li><li> Günlük aşağıdaki enfeksiyon belirtileri (kızarıklık, şişme, akıntı), hayvanın temel biyolojik fonksiyonları (gıda ve su alımı, idrar, dışkılama, vücut ağırlığı artışı) yanı sıra klinik belirtileri sıkıntı cerrahi sitesini (piloerection, azaltılmış hareket) Monitör cerrahi prosedür. </li></ol> 5. Hasat Akciğer <ol><li> 7-30 gün implantasyondan sonra, sıkıştırılmış gazın kaynağı ile CO2 kullanılarak fare euthanize. </li><li> Xiphoid sürecin ucu ve Sternum arasında bir kesi yapmakçentik (medyan sternotomi) ve trakea kesme ve kalp, akciğerler, trakea tüm bağlantıları keserek histolojik ve biyokimyasal analiz için implante jel ile hasat tüm akciğer. </li><li> Gecede Ekim bileşik embed 4 ºC,% 4 paraformaldehit çözeltisi ile akciğer ile implante jel Fix ve 30 mikron kalınlığında seri adımı bölümlerini almak. </li><li> Histolojik (hematoksilen ve eozin boyama) ve immünohistokimyasal analizler gerçekleştirin (endotel işaretleyici: CD31, epitel işaretleyici: aquaporin (AQP) 5 ve surfaktan protein (SP) -B) konfokal mikroskop 22,37,40 kullanarak. </li><li> 3D görüntü analiz yazılımı kullanarak 37 akciğer endotel üç boyutlu görüntüler ve epitel hücreleri oluşturmak için optik bölümler (kalın 30 mikron) yığınlarını derleyin. </li><li> Görüntü analiz yazılımı 46 kullanılarak yeni oluşan kan damarlarının öngörülen alanları gösteren alanlardır. </li></ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Bu makalede, erişkin fare yaşayan akciğer yüzeyinde biyomalzemeleri implant için yeni bir yöntem tanıttı. Bu sistem ile, ana akciğer elde edilmiş angiogenesis men başarılı bir malzeme içinde değinmeyecek. Bu sistem, araştırmacılar, endotel hücreleri arasındaki karışma keşfetmek sağlar, diğer hücrelerin (örneğin, epitelyal hücreler, mezenkimal hücreler, bağışıklık hücreleri) yerel anjiyojenez 50-53 ve alveolar rejenerasyon 24,54 için gerekli olan ve ECM bileşenleri. Geleneksel in vivo o...

Bu protokolün genel amacı araştırmacılar, akciğer vasküler ve alveol gelişme moleküler mekanizmaları karakterize sağlar erişkin fare, akciğer yüzeyinde fibrin jel implant için bir yöntem tanıtmak ve yetenekli biyomimetik malzemelerin geliştirilmesi için bu bilgiyi kaldıraç için çeşitli akciğer hastalıkları tedavi etmek için fizyolojik akciğer vasküler ve alveol oluşumunu yansıtan bir. 35 milyondan fazla Amerikalı kronik obstrüktif akciğer hastalığı ve pulmoner fibrozis gibi kronik akciğer hastalıkları muzdarip. Bu hastalar önemli ölçüde günlük yaşam 1-3 bozan tür nefes darlığı, göğüste sıkışma hissi, öksürük nagging ve yorgunluk gibi uzun ömürlü kronik solunum semptomları var. Bu akciğer hastalıkları için etkili tedaviler geliştirmek için çaba büyük bir miktarda rağmen, şu anda tedavisi yoktur; Bu nedenle, bu hastalarda yaşam kalitesi zayıf ve ekonomik ve insani maliyeti merhaba vardırgh 4-7. Şu anda, akciğer transplantasyonu son dönem kronik akciğer hastalığı olan hastaları kurtarmak için tek yoldur. Ancak, nakli donör, yüksek maliyet, ciddi komplikasyonlar ve düşük sağkalım oranı 8-11 sıkıntısı, transplantasyon optimal yaklaşım değildir. Doku mühendisliği teknikleri son hızla ilerleme progenitör hücreleri veya uyarılmış pluripotent kök (iPS) hücrelerden 12,13 çeşitli tipleri ile decellularized bütün akciğeri repopulating tarafından implante akciğer biyomühendis araştırmacıların sağladı. Bununla birlikte, bu bulasıcı akciğerler sadece implantasyon 12,14,15 sonra birkaç saat süre ile bir ev sahibi, hayvanlarda işlevsel. Akciğerlerin karmaşık yapıları ve işlevleri yenilenmesine biomateryaller kullanmak da oldukça başarısız olmuştur. Erişkin akciğer rejenerasyon yöneten kilit biyolojik süreçler iyi araştırılmış değil çünkü bu olabilir. Akciğerde vasküler sistemin oluşumu erken ve en önemli olaylarından biri olan During geliştirme ve yenilenme 16-21. Yeni, sadece oksijen, besin ve organ oluşumu için gerekli olan çeşitli hücre bileşenleri teslim değil, aynı zamanda çevredeki hücrelere 22-25 öğretici düzenleyici sinyallerini sağlamaz akciğerde vaskülatürlerden kurdu. Böylece, anjiyogenez yetişkin akciğerlerde 24,26,27 rejeneratif alveolarization kilit roller oynar. Buna ek olarak, düzensiz anjiyogenez, kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH), 28, bronkopulmoner displazi (SKB), 21-23, ve pulmoner fibroz 29 gibi kronik akciğer hastalıklarına katkıda bulunur. Böylece, akciğerleri mühendislik veya kronik akciğer hastalıklarının tedavisi için daha etkili stratejiler geliştirmek, akciğer özel anjiyogenez temel mekanizmalarını anlamak için gereklidir. Her organ fizyolojik ve patolojik durumlarda 30-33 arasında farklılık benzersiz mekanik ve kimyasal özelliklere gösterir. Bu organa özgü microenvironrından endotel hücre davranışlarını düzenleyen ve bir organ-spesifik şekilde 24,34-36 vasküler ağı oluşumu sonucu alacak. Böylece, akciğer rejenerasyonu için daha etkin stratejilerin geliştirilmesi için, akciğer özgü angiogenesisi altında yatan mekanizmanın anlaşılması gerekir. Subkutan hidrojel implantasyonu gibi in vivo geleneksel anjiyojenez tahlilleri anjiyogenez araştırma 37-39 için yaygın olarak kullanılmış olmasına rağmen, bu yöntemler, organa özgü anjiyojenezi özetlemek yoktur. Son zamanlarda, fare akciğer elastik kalıp içinde Matrigel implant için yeni bir yöntem geliştirilmiştir ve başarılı bir jel 22, kan damarları ve akciğer epitelyal hücreleri iyileştirme gösterilmiştir. Bu eşsiz bir yaklaşım araştırmacılar fizyolojik ve patolojik durumlarda, kan damarları ve vasküler olmayan akciğer hücreleri arasında akciğer özgü anjiyojenezin mekanizması olarak etkileşimleri keşfetmek için izin verir. 1) Matrigel klinik uygulama için uygun olmadığı; 2) EBir klinik olarak daha uygun bir yaklaşım olarak, hidrojeller ve ev sahibi akciğer dokusunda ve 3) akciğer elastik kalıp potansiyel solunum sırasında akciğer fonksiyonu ve ağrı gibi yakınmalara yol açar arasındaki etkileşimi etkileyebilir jel döküm için kullanılan Lastic kalıp, bir 3D fibrin matriks anjiogenik faktörleri içeren (vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF) / temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF)) elastik kalıp döküm olmaksızın fare akciğer implante edilmiş ve başarılı bir şekilde ana akciğer türetilmiş angiogenesisi değinmeyecek olmuştur. Fibrin jel, trombinle ayrılmış fibrinojenden oluşan polimer fibriller yakalamak için in vivo 40,41 anjiyojenezi hızlandırmak için örneğin bFGF ve VEGF gibi anjiyojenik faktörlerin bir çeşitliliği bilinmektedir. Çünkü onun rejeneratif yeteneği ve biyobozunur doğa 42, fibrin jel yaygın doku mühendisliği alanında kullanılır. Bu makalede yaşayan Adul akciğer yüzeyinde fibrin jel implant bir roman ve benzersiz bir yaklaşım tanıttıt, fare ve ana akciğer elde edilmiş angiogenesis men in vivo jellerin içinde özetlenen olduğunu göstermektedir. Akciğer özel anjiyogenez çalışma araştırmacılar sağlayan bu yöntem, büyük olasılıkla akciğer hastalıkları çeşitli türleri için yeni tedavi yaklaşımlarının gelişmesine yol ve anlamlı başarıyla yetişkin akciğeri yeniden çabalarını ilerleyecektir.

<table><tbody><tr><td>İnsan plasentasından fibrinojen</td><td>Sigma</td><td>F4883</td><td>Fibrin jel üretimi için</td></tr><tr><td>Sığır plazmasından trombin</td><td>Sigma</td><td>T9549</td><td>Fibrin jel üretimi için</td></tr><tr><td>Rekombinant fare VEGF 164</td><td>R& D</td><td>493-MV</td><td>Fibrin jel takviyesi için</td></tr><tr><td>Rekombinant fare bFGF</td><td>R& D</td><td>3139-FB</td><td>Fibrin jel takviyesi için</td></tr><tr><td>Kemirgen Entübasyon Standı</td><td>Braintree Scientific INC</td><td>RIS 100</td><td>Entübasyon için</td></tr><tr><td>Fiber Optik Işık</td><td>Kaynağı Fisher Scientific</td><td>12-565-35</td><td>Entübasyon için</td></tr><tr><td>21 G Elastik kateter</td><td>B.Braun</td><td>4251652-02</td><td>Entübasyon için</td></tr><tr><td>MiniVent Ventilatör</td><td>Harvard Aparatı</td><td>CGS-8009</td><td>İçin ventilasyon</td></tr><tr><td>Stemi DV4 Steromikroskop</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-070-515</td><td>Cerrahi</td></tr><tr><td>Absobable sütür</td> için <td>Ethicon</td><td>PDP304</td><td>Cerrahi sütür</td></tr><tr><td>CD31'e karşı antikor</td><td>BD Biosciences</td><td>553370</td> AQP5'e karşı <td>İmmünohistokimya</td></tr><tr><td>Antikoru</td><td>Abcam</td><td>AB78486</td> SP-B'ye <td></td></tr><tr><td></td><td>karşı İmmünohistokimya AntikoruAbcam</td><td>AB40876</td><td>İmmünohistokimya</td></tr></tbody></table>

fare akciğer fibrin gel implantasyonu akciğer özel anjiogenez eğitim için

Implantation of Fibrin Gel on Mouse Lung to Study Lung-specific Angiogenesis

Kök hücre araştırma ve biyomühendislik tekniklerinden son önemli gelişmeler yeniden ve ortopedik ve periodontal alanlarda basit dokularda hasarı onarmak için biomateryaller kullanan büyük ilerleme kaydettik. Organ yenilenmesi biyolojik süreçleri iyi araştırılmış değil çünkü Ancak, yapılar ve akciğer gibi daha karmaşık üç boyutlu (3D) organların işlevlerini yeniden çalışır çok başarılı olmamıştır. Angiogenesisin, yeni kan damarlarının oluşumu, organ yenilenmesi kilit rol oynadığı açık hale gelmektedir. Yeni vaskülatürlerden oksijen, besinler ve organ yenilenmesi için gerekli olan çeşitli hücre bileşenleri sunmak değil, aynı zamanda rejenere dokularda lokal bir öğretici sinyallerini sağlamaz olarak, oluşturulmuş. Bu nedenle, başarılı bir yetişkinde akciğerlere yeniden oluşturmak, lokal, akciğer dokularının sürücüler rejenerasyonu angiogenesis olan akciğer özgü mikroçevrelerde özetlemek için gereklidir. Co rağmennventional, in vivo bu hidrojeller (örneğin, fibrin ve kollajen jelleri veya Matrigel - Engelbreth-Holm-Swarm fare sarkom hücreleri tarafından salgılanan ECM proteini karışımı) bakımından zengin hücre dışı matrisin (ECM), deri altından implante anjiyojenez tahlilleri, yoğun keşfetmek için kullanılır akciğer biyomateryaller ortotopik implantasyonu için yöntemler iyi tespit edilmemiştir çünkü anjiyojenez genel mekanizma, akciğer spesifik anjiyojenez iyi karakterize edilmemiştir. Bu protokolün amacı jel içinde ev sahibi akciğer kaynaklı anjiyogenez başarılı recapitulation sağlayan, yaşam yetişkin fare akciğer yüzeyinde fibrin jel implant benzersiz bir yöntem tanıtmaktır. Bu yaklaşım, akciğer özgü mikroçevresinin, normal ve patolojik durumlarda hem anjiyogenez ve alveol yenilenmesini kontrol eden mekanizmalar keşfetmek için araştırmacılar sağlar. Implante biyomalzemeler sunulduğundan beri komşu l fiziksel ve kimyasal sinyalleri tedarik veung dokular, hastalıklı akciğer bu biyomalzeme implantasyonu potansiyel akciğer hastalıkları çeşitli türleri için yeni tedavi yaklaşımları geliştirmek için araştırmacılar sağlayan, komşu hastalıklı dokuları normale olabilir.

Ana akciğer türevi damar oluşumu, akciğer implante biyomalzeme içinde özetlenen olup olmadığını incelemek için, fibrin jel büyük anjiyojenik faktörler VEGF ve bFGF ile desteklenmiş (0, 10 ve 100 ng / ml her biri) gibi canlı fare akciğer yüzeyine yerleştirildi Matrigel 22 kullanılarak bildirdi. Şekil 1a gösterildiği gibi bu anjiyojenik büyüme faktörleri içerir fibrin jeller 47 imal edildi. Torakotomi sonra, sol akciğer yüzeyinde küçük bir alanda forseps kullanılarak kazınmış ve fabr...

Lokal anjiyogenezi uyaran organa özgü mikroçevrenin rekapitülasyonu, hasarlı dokuların başarılı bir şekilde rejenerasyonu için vazgeçilmezdir. Bu rapor, akciğere özgü mikro çevrenin yetişkin farede anjiyogenezi ve alveolar rejenerasyonu nasıl modüle ettiğini araştırmak için canlı farenin akciğer yüzeyine fibrin jelleri implante etmek için yeni bir yöntemi göstermektedir.

Fare Akciğer Fibrin Gel implantasyonu Akciğer özel Anjiogenez Eğitim için

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and ...

Aşağıdaki prosedürün genel amacı, fare akciğerinde vasküler ve alveoler rejenerasyonu incelemek için fibrin jel implantasyonunu kullanmaktır. Bu, önce anjiyojenik faktörlerle desteklenmiş fibrin jel damlaları hazırlanarak gerçekleştirilir. İkinci adımda, deney hayvanı mekanik olarak havalandırılır ve göğüs açılır.Daha sonra, bir fibrin jeli, fibrin tutkalı ile fare akciğerine dikkatlice tutturulur. Daha sonra son adımda, akciğer ve implante edilen jel, histolojik analiz için yedi ila 30 gün sonra hasat edilir. Sonuç olarak, jel implant içindeki kan damarı ve alveolar oluşum immünohistokimyasal analiz ile değerlendirilebilir.Bu yöntem, vasküler biyoloji alanında, organların mikroçevreyi nasıl riske attığı, anjiyogenezi nasıl kontrol ettiği ve prosedürü gösteren organ morfogenezi gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Hem VEGF hem de BFGF içeren fibrin jelleri hazırlamak için eksi 80 santigrat derece, fibrinojen ve trombin stoklarını oda sıcaklığına ısıtarak başlayın. Stoklar tamamen çözüldüğünde, 1.5 mililitrelik bir tüpte fibrinojen çözeltisine trombin kalsiyum klorür VEGF ve BFGF ekleyin. Ve sonra çözeltiyi pipetleyerek karıştırın.Daha sonra, karışımın 200 mikrolitresini steril bir plastik tabağa damla damla pipetleyin. Damlaları katılaşana kadar 30 ila 60 dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Ardından, jelleri yaklaşık üçe üçe üç milimetre küpler halinde kesmek için küçük cerrahi makas kullanın.Sekiz ila 12 haftalık bir farede ayak parmağı çimdikleme ile tam sedasyonu onayladıktan sonra, kuruluğu önlemek için hayvanın gözlerini veteriner merhemi ile kapatın ve ardından kürkü göğüs kafesinin sol tarafına tıraş edin. Endotrakeal entübasyon için, fareyi 70 derece açılı bir entübasyon standına yerleştirin ve hayvanı yerinde tutmak için üst kesici dişleri standın üst kısmında bulunan küçük bir lastik bandın üzerine asın. Dili nazikçe bir tarafa çekmek için künt forseps kullanın ve ardından bir fiber optik deveboynu mikroskobu aydınlatıcısı yardımıyla gırtlağı görselleştirin.Ardından, trakeaya 21 gauge endotrakeal elastik kateter yerleştirin. Farenin kendiliğinden düzgün bir şekilde nefes aldığını onaylayın ve ardından hayvanı diseksiyon mikroskobu altında yüzüstü pozisyona getirin. Hayvanı dakikada 150 nefes ve kilogram tidal hacim başına yedi mililitre mekanik olarak havalandırmak için bir kemirgen ventilatörü kullanın.Ve sonra dördüncü ve beşinci kaburga arasındaki interkostal boşluğu bulmak için kaburgaları sayın. Daha sonra steril bir alan oluşturmak için alanı alkol ve povidon iyot ile iyice silin ve jeli akciğere yerleştirmek için cerrahi alanı steril bir tra ile kaplayın. Ardından, interkostal boşluk üzerinde bir santimetre enine cilt kesisi yapın.Ve sonra dördüncü ve beşinci kaburga arasında bir kas kesisi yapın. Sol akciğeri tam olarak görselleştirmek için kaburgalar arasına bir diseksiyon ekartörü yerleştirin ve ardından steril bir pamuklu çubuk kullanarak sol akciğerin merkezinden bir milimetre kare viseral plevrayı kazımak için ince forseps kullanın. Daha sonra, kanama ve hava sızıntıları tamamen kontrol altına alıncaya kadar bölgeye hafif bir baskı uygulayın ve ardından bölgeye az miktarda katılaşmamış fibrinojen trombin yapıştırıcısı dağıtın.Daha sonra, bir fibrin jelini tutkalın üzerine yavaşça yerleştirin ve jelin iyi sabitlendiğini belirlemek için akciğerin solunum hareketlerini gözlemleyin. Daha sonra kesileri emilebilir bir dikişle kapatın. Pnömotoraksı önlemek için göğüs boşluğunu 27 gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik bir şırınga ile aspire edin ve ardından mekanik ventilasyonu sonlandırın.Farenin düzgün nefes aldığını onayladıktan sonra, dehidrasyonu önlemek için bir mililitre savaş öncesi% 0.9 sodyum klorür intraperitoneal enjekte edin ve farenin dolaşımdaki bir ılık su pedi üzerinde iyileşmesine izin verin. Hayvan stabil solunum gösterdiğinde, endotrakeal tüpü çıkarın ve postoperatif bir analjezik enjekte edin. Hayvan tamamen iyileştiğinde, ameliyatsız farelerden izole edilen yeni bir kafese geri koyun, hayvanı enfeksiyon veya komplikasyon belirtileri açısından günlük olarak izleyin.İmplantasyondan yedi ila 30 gün sonra, fareyi protokole göre ötenazi yapın ve ksifoid işleminin ucu ile sternal çentik arasında bir kesi yapın. Daha sonra akciğerden kalbe ve trakeaya giden tüm bağlantıları kesen trakeayı kesin, tüm akciğeri ve implante edilen jeli toplayın ve ardından jel ve akciğer dokusunu ertesi gün dört santigrat derecede gece boyunca% 4'lük bir paraform aldehit çözeltisi içinde sabitleyin, akciğer dokusunu OCT bileşiğine gömün ve daha sonra akciğerin ve jelin seri adım bölümlerini 30 mikrometre kalınlığında toplayın. Bölümleri hematin ve eoin ve antikorlarla uygun ilgilenilen belirteçlere karşı boyayın.Daha sonra bölümlerin Zack görüntülerini aldıktan sonra, akciğer endotel ve epitel hücrelerinin üç boyutlu görüntülerini oluşturmak için optik bölümlerin yığınlarını derleyin. 3D görüntü analiz yazılımı kullanma. Son olarak, uygun görüntü analiz yazılımını kullanarak yeni oluşturulan kan damarlarının öngörülen alanlarını ölçün.İmplantasyondan yedi gün sonra, fibrin jel konakçı akciğere dahil edilir Konfokal floresan görüntülerinin 3D rekonstrüksiyonu, konakçıdan türetilmiş CD 31 pozitif endotel hücrelerinin, implantasyondan yedi gün sonra A-V-E-G-F-B-F-G-F doza bağlı olarak jellerin içinde vasküler ağlar oluşturduğunu göstermiştir, tip bir aquaporin beş pozitif ve tip iki yüzey aktif madde protein B pozitif akciğer epitel hücreleri de takviye edilen jellerin içindeki yeni oluşan kan damarları boyunca işe alınır daha yüksek VGF ve B, FGFH ve d konsantrasyonları ile. Histolojik bölümlerin boyanması, diğer konakçı hücre tiplerinin de implantasyondan yedi gün sonra jele göç ettiğini ortaya koymaktadır. Bu bulgular birlikte, konak akciğer kaynaklı rejeneratif vasküler ağların ve alveolar oluşumun, anjiyojenik faktörlerle takviye edildikten ve geliştirildikten sonra yetişkin fare akciğerinin yüzeyine implantasyondan sonra fibrin jelleri içinde başarılı bir şekilde oluşturulduğunu göstermektedir.Bu teknik, akciğer biyolojisi ve birincil tıp alanında daha az sayıda araştırmacının normal anjiyogenez mekanizmasını ve fare akciğerlerinde hastalık durumunda nasıl bir rol oynadığını keşfetmesinin yolunu açtı.

implantation-fibrin-gel-on-mouse-lung-to-study-lung-specific

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, anjiyogenezin erken aşamalarında endotel filizlenmesini incelemek için perisitleri içeren modifiye edilmiş bir mikro taşıyıcı boncuk bazlı testi göstermektedir. Test, anjiyogenezin moleküler mekanizmalarını ve anti-anjiyogenetik terapötiklerin etkisini anlamak için in vitro deneysel bir model sağlar.

Erken Evre Anjiyogenez Değerlendirmesi için Boncuk Filizlenme Testi: Perisitlerin Varlığında Endotelyal Filizlenmeyi İncelemek İçin İn Vitro Boncuk Tabanlı Bir Model

Akciğer sistemik bronşiyal arter ve pulmoner arterler hem perfüze edilir. Çoğu akciğer patolojilerinde, bu sağlam neovaskülarizasyonu gösterir küçük sistemik damar olduğunu. Pulmoner kan akımının kesilmesi tempolu bronşiyal anjiyogenez teşvik etmektedir. Biz bronşiyal neovaskülarizasyon teşvik sol pulmoner arter iskemi oluşturulmadan cerrahi ayrıntıları.

İskemik Sıçan Akciğer Angiogenezis

Endotelyal endotel / glycocalyx yüzey tabakası ideal intravital mikroskobu kullanılarak incelenmiştir. Intravital mikroskop teknik gibi akciğer gibi hareketli bir organ zordur. Biz eş zamanlı aydınlık ve floresan mikroskop serbestçe-hareket eden endotel yüzey tabakasının kalınlığını belirlemede nasıl kullanılabileceğini...

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

Hücresel ve moleküler neotissue oluşumu hakkındaki bilgi geliştirmek için, TEVG bir fare modeli yakın zamanda geliştirilmiştir. Greftler C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Bu model bizim klinik araştırmada elde edilenlere benzer sonuçlar elde, ama çok kısaltılmış zaman zarfında.

Fare Modeli Inferior Vena Cava İnterpozisyon Greft İmplantasyonu

Biz matris jel fiş anjiyogenez testinin bir varyasyon kullanarak fare insan endotel-pericyte etkileşimleri incelemek için bir protokol mevcut.

Fare Matrix Jel Plug Test kullanma İnsan endotel-pericyte Etkileşim Vivo Çalışmasında

Burada, damar oluşumu içinde vivo görselleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut ve gerçek zamanlı olarak 3D İskele tarafından multiphoton mikroskobu. Genetiği değiştirilmiş iskele anjiogenez bir fare grefti kritik Kemik defekti modelinde incelenmiştir. Daha fazla yeni kan damarları tedavi grubunda denetimlerde tespit edildi.

Angiogenez Multiphoton mikroskobu In Vivo genetiği değiştirilmiş 3D-PLGA/nHAp İskele tarafından grefti kritik Kemik defekti tamir için görselleştirme

Biz bir non-invaziv multimodal bleomycin Çift Kişilik boğaza korumak tarafından indüklenen fare akciğer fibrozis modelinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı yaklaşım Imaging tanımlamak.

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Burada, C57BL yılında bleomisin endotrakeal enjeksiyonu ile akciğer yaralanması indüksiyonu sonrasında tüm göbek kordonundan elde edilen intravenöz infeksiyon insan mezenkimal stromal hücrelerin Antifibrotik aktivitesini araştırmak için etkili bir yöntem sunuyoruz. /6 fare. Bu protokol, diğer terapinin preklinik testine kolayca uzatılabilir.

Bleomisin endotrakeal enjeksiyon tarafından fare akciğer hasarı indüksiyon

Burada sunulan yöntem, reaktiflerin anjiyogenez veya vasküler geçirgenlik üzerindeki etkisini in vivo boyamadan değerlendirebilir. Yöntem, neo-damarları veya vasküler sızıntıyı görselleştirmek için kuyruk damarı yoluyla dekstran-FITC enjeksiyonunu kullanır.

Anjiyogenez Çalışmaları için Modifiye In Vivo Matrix Jel Plug Testi

Bu makale, hücreden arındırma ve yeniden hücreselleştirme yöntemleri kullanılarak biyomühendislik ürünü fare akciğerlerinin nasıl oluşturulacağını açıklamaktadır. Ayrıca sonraki ortotopik akciğer naklini de detaylandırır.

Hücreden Arındırılmış Fare Akciğerleri ve Primer İnsan Endotel Hücreleri Kullanılarak Biyomühendislik Ürünü Akciğerin Transplantasyonu

Hücre tedavisi, hasarlı dokuyu onarmak ve akciğer fonksiyonunu iyileştirmek için progenitör hücreleri kullanarak pulmoner fibroz için umut verici bir müdahale sunar. Görüntüleme, hücre entegrasyonunun izlenmesinde çok önemli bir rol oynadığından, burada, bir fare modelinde pulmoner fibroz için hücre tedavisinin manyetik parçacık görüntüleme kılavuzluğunda in vivo takibini açıklıyoruz.

Manyetik Parçacık Görüntüleme Kullanılarak Pulmoner Fibroz için Nakledilen Distal Akciğer Epitelyal Progenitör Hücrelerinin Görüntü Kılavuzluğunda In Vivo İzlenmesi

Öğrenin fare akciğerinde fibrin jel implantasyonu yöntemiyle anjiogenez ve alveoler rejenerasyon süreçlerini incelemeyi. Bu teknik, akciğer mikroçevresinin damar oluşumundaki rolünü araştırmada kullanılır.

Fare Akciğer Fibrin Gel implantasyonu Akciğer özel Anjiogenez Eğitim için

Daha fazla video keşfet