Name: Yenidoğan Farelerde intravenöz enjeksiyonlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 17 s
Description: Öğrenin, yenidoğan farelerde damar içi enjeksiyon yöntemiyle pediatrik hastalık modellerinde tedavi etkinliğini nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu güvenilir teknik, erken yaşam evrelerinde test maddelerinin başarıyla uygulanmasını sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar mali destek SMA NINDS, FightSMA ve aileleri kabul etmek istiyoruz. Segl NINDS eğitim bursu # 5T32NS077984-02 tarafından desteklenmektedir.

Protokolde belirtilen tüm işlemler Ohio Devlet Üniversitesi Hayvan Kullanım ve Bakım komitesi (IACUC) Enstitüsü onaylanmıştır. Çalışma alanı hazırlanması 1. <ol><li> Çöp, bir mikroskop, 90 ° enjeksiyon (bir ışık kaynağı kullanımı bir açıyla yerleştirilmiş bir ışık kaynağından barajı ayırmak için, boş bir kafes fare yavrular uyutmak için ıslak buz toplamak &#160; enjeksiyon yerinde açı ven), enjeksiyon için hayvan yerleştirmek için temiz bir yüzey, pamuklu, 3/8 &quot;30 G iğne (hayvan başına) ve% 1 Evans Blue Dye ile 3/10 cc insülin şırınga (gizlemektedir eğitim için fosfat tamponlu salin (PBS)) çözeltisi ile yapılır. </li><li> Yavrular işlenirken ayrı bir kafese baraj çıkarın. </li></ol> 2. Enjeksiyon Yöntemi <ol><li> Hayvan uyutmak için 30-60 saniye boyunca ıslak buz üzerinde doğrudan bir tek yavru yerleştirin. T bırakmayınnedeniyle ventriküler fibrilasyon, doku hipoksi ve metabolik asidoz dahil hipotermi ile ilişkili komplikasyonların riski çok uzun buz üzerinde o hayvan. NOT: tecrübemiz 30-60 saniyelik bir enjeksiyonu sağlamak için yavru hareketleri yavaş için yeterli olmasıdır. Derin anestezi gerekiyorsa, bu tür 1-2 izofluran% olarak inhalantların uygun olabilir. </li><li> Hayvan buz üzerinde iken, Evans mavi boya, 30 ul şırınga yükleyin. </li><li> Hayvan tamamen uyuşturulduktan zaman, hala nefes alırken buz üzerinde hareket eksikliği tarafından onaylandıktan mikroskop altında hareket ettirin. Sağ elli bir enjeksiyon için sağa hayvanın ağzını yüz. Kulak tomurcuk parmağı ve orta parmak (Şekil 1) arasında olacak şekilde kulak tomurcuk namlu ve sol orta parmak kuyruğu üzerinde sol işaret parmağını yerleştirin. </li><li> Sadece cilt manipüle edildiğinde hareket yüzeysel kılcal için kulak tomurcuk ön Schulabschluss. Bu kılcal Ancak, hedef değilkimlik zamansal damar tanınmasında önemlidir. Sonra, ne olursa olsun cilt pozisyon sabit kalır kılcal aşağı bir karanlık, karanlık ven bulun. Temporal damar, gölgeli görünür dorsal ventral çalışır ve juguler ven (Şekil 1) beslenir. </li><li> Iğne konik yukarı zamansal ven girin. Doğru takılırsa, o iğne konik deri yoluyla kan ile doldurmak görmek mümkündür. Sonra yavaş yavaş piston bastırın ve not yüzün tarafında aşağı ven beyazlaşma. </li><li> Iğne injectant geri akmasını önlemek için ilave bir 10-15 saniye ven içinde kalmasını sağlar. </li></ol> 3. Post-enjeksiyon <ol><li> Uygun bir enjeksiyondan sonra, yavru hemen mavi dönmelidir. İğneyi çıkarın ve kan pıhtıları kadar enjeksiyon yerinde bir pamuklu bir bez uygulamak için yumuşak güç kullanmayın. </li><li> Sıkıntı belirtileri yavru izleyin. Yavru 2-3 dk kurtarmak ve yeniden ısıt için izin ver, ryavru kafesine dönmeden önce, bilinçli dik ve hareketli olduğunda ecognize. Kupa araştırmacının eldivenli elinde yavrular gerekirse kazanılmasında yardımcı uygun sıcaklık sağlamak için. Alternatif olarak, enjekte yavru ısınma kolaylaştırmak için evde kafes altında bir ısıtma yastığı yerleştirin. Genellikle, bir Evans mavisi enjeksiyonundan sonra, yavrular euthanize. Test malzemesi enjekte ederken boya dahil etmeyin. </li><li> Geri eve kafese yavru yerleştirin ve yavru baraj tarafından reacceptance sağlamak için yatak ve / veya nestlet ile kaplanmış olduğundan emin olun. </li><li> Sterilite korumak için her yavru için yeni bir şırınga ve pamuklu çubuk kullanın. </li></ol>

<ol><li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravascular+AAV9+preferentially+targets+neonatal+neurons+and+adult+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes.</a> Nature. 27, 59-65 (2009).</li>
<li>Dominguez, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+scAAV9+delivery+of+a+codon-optimized+SMN1+sequence+rescues+SMA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">Intravenous scAAV9 delivery of a codon-optimized SMN1 sequence rescues SMA mice.</a> Human molecular genetics. 20, 681-693 (2011).</li>
<li>Rahim, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+AAV2%2F9+to+the+fetal+and+neonatal+mouse+leads+to+differential+targeting+of+CNS+cell+types+and+extensive+transduction+of+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal+%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of AAV2/9 to the fetal and neonatal mouse leads to differential targeting of CNS cell types and extensive transduction of the nervous system.</a> FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 25, 3505-3518 (2011).</li>
<li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+the+spinal+muscular+atrophy+phenotype+in+a+mouse+model+by+early+postnatal+delivery+of+SMN%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Rescue of the spinal muscular atrophy phenotype in a mouse model by early postnatal delivery of SMN.</a> Nat Biotechnol. 28, 271-274 (2010).</li>
<li>Duque, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+self-complementary+AAV9+enables+transgene+delivery+to+adult+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of self-complementary AAV9 enables transgene delivery to adult motor neurons.</a> Mol Ther. 17, 1187-1196 (2009).</li>
<li>Bostick, B., Ghosh, A., Yue, Y., Long, C., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+AAV-9+transduction+in+mice+is+influenced+by+animal+age+but+not+by+the+route+of+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic AAV-9 transduction in mice is influenced by animal age but not by the route of administration.</a> Gene Ther. 14, 1605-1609 (2007).</li>
<li>Miyake, N., Miyake, K., Yamamoto, M., Hirai, Y., Shimada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+transfer+into+the+CNS+across+the+BBB+after+neonatal+systemic+delivery+of+single-stranded+AAV+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Global gene transfer into the CNS across the BBB after neonatal systemic delivery of single-stranded AAV vectors.</a> Brain research. 1389, 19-26 (2011).</li>
<li>Porensky, P. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+administration+of+morpholino+antisense+oligomer+rescues+spinal+muscular+atrophy+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">A single administration of morpholino antisense oligomer rescues spinal muscular atrophy in mouse.</a> Human molecular genetics. 21, 1625-1638 (2012).</li>
<li>Hua, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+SMN+restoration+is+essential+for+long-term+rescue+of+a+severe+spinal+muscular+atrophy+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Peripheral SMN restoration is essential for long-term rescue of a severe spinal muscular atrophy mouse model.</a> Nature. 478, 123-126 (2011).</li>
<li>Kienstra, K. A., Freysdottir, D., Gonzales, N. M., Hirschi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+neonatal+intravascular+injections%3A+modeling+newborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science+%3A+JAALAS%22%5BJournal%5D)">Murine neonatal intravascular injections: modeling newborn disease.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science : JAALAS. 46, 50-54 (2007).</li>
<li>Glascock, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+therapeutic+agents+through+intracerebroventricular+%28ICV%29+and+intravenous+%28IV%29+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Delivery of therapeutic agents through intracerebroventricular (ICV) and intravenous (IV) injection in mice.</a> J. vis. Exp. (56), (2011).</li>
<li>Sands, M. S., Barker, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+intravenous+injection+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animal+science%22%5BJournal%5D)">Percutaneous intravenous injection in neonatal mice.</a> Laboratory animal science. 49, 328-330 (1999).</li>
<li>Bevan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+heart+failure+in+the+SMNDelta7+model+of+spinal+muscular+atrophy+and+correction+by+postnatal+scAAV9-SMN+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">Early heart failure in the SMNDelta7 model of spinal muscular atrophy and correction by postnatal scAAV9-SMN delivery.</a> Human molecular genetics. 19, 3895-3905 (2010).</li>
<li>Valori, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+delivery+of+scAAV9+expressing+SMN+prolongs+survival+in+a+model+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+translational+medicine%22%5BJournal%5D)">Systemic delivery of scAAV9 expressing SMN prolongs survival in a model of spinal muscular atrophy.</a> Science translational medicine. 2, (2010).</li>
<li>Foust, K. D., Poirier, A., Pacak, C. A., Mandel, R. J., Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+intraperitoneal+or+intravenous+injections+of+recombinant+adeno-associated+virus+type+8+transduce+dorsal+root+ganglia+and+lower+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Neonatal intraperitoneal or intravenous injections of recombinant adeno-associated virus type 8 transduce dorsal root ganglia and lower motor neurons.</a> Hum Gene Ther. 19, 61-70 (2008).</li>
<li>Guggenbuhl, P., Grosbois, B., Chales, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gaucher+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Joint%2C+bone%2C+spine+%3A+revue+du+rhumatisme%22%5BJournal%5D)">Gaucher disease.</a> Joint, bone, spine : revue du rhumatisme. 75, 116-124 (2008).</li>
<li>Daly, T. M., Vogler, C., Levy, B., Haskins, M. E., Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+gene+transfer+leads+to+widespread+correction+of+pathology+in+a+murine+model+of+lysosomal+storage+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Neonatal gene transfer leads to widespread correction of pathology in a murine model of lysosomal storage disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96, 2296-2300 (1999).</li>
<li>Daly, T. M., Ohlemiller, K. K., Roberts, M. S., Vogler, C. A., Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+systemic+clinical+disease+in+MPS+VII+mice+following+AAV-mediated+neonatal+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Prevention of systemic clinical disease in MPS VII mice following AAV-mediated neonatal gene transfer.</a> Gene Ther. 8, 1291-1298 (2001).</li>
<li>Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Juvenile+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+experimental+medicine+and+biology%22%5BJournal%5D)">Juvenile neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Advances in experimental medicine and biology. 724, 138-142 (2012).</li>
<li>Forsythe, E., Beales, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bardet-Biedl+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+human+genetics%22%5BJournal%5D)">Bardet-Biedl syndrome.</a> European journal of human genetics. 21, 8-13 (2013).</li>
<li>Bevan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+gene+delivery+in+large+species+for+targeting+spinal+cord%2C+brain%2C+and+peripheral+tissues+for+pediatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic gene delivery in large species for targeting spinal cord, brain, and peripheral tissues for pediatric disorders.</a> Mol Ther. 19, 1971-1980 (2011).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab animal. 40, 155-160 (2011).</li>
<li>Saunders, N. R., Joakim Ek, C., Dziegielewska, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neonatal+blood-brain+barrier+is+functionally+effective%2C+and+immaturity+does+not+explain+differential+targeting+of+AAV9%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">The neonatal blood-brain barrier is functionally effective, and immaturity does not explain differential targeting of AAV9.</a> Nature biotechnology. 27, 804-805 (2009).</li>
<li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+AAV9-mediated+suppression+of+mutant+SOD1+slows+disease+progression+and+extends+survival+in+models+of+inherited+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Therapeutic AAV9-mediated suppression of mutant SOD1 slows disease progression and extends survival in models of inherited ALS.</a> Mol Ther. 21, 2148-2159 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Merkezi sinir sistemine veya tüm vücutta maddelerin damar yoluyla verilmesi hastalık yenidoğan sıçan modellerinde zordur. Açıklanan protokol intravenöz minimal teçhizatı gereksinimleri ile yenidoğan farelerin içine çözümleri yönetmek için hızlı, nispeten non-invaziv bir yoludur. Zamansal yüz damar çıplak gözle görülebilir rağmen, enjeksiyonlar özellikle bir unpracticed enjektör, mikroskop ve fiber-optik ışık kaynağı kullanımı ile daha doğru olabilir. Yenidoğan farelerde damar içine enjeksiyona yüksek bir başarı oranı <s...

Pediatrik hastalığı olan kemirgen modellerinde merkezi sinir sistemi (MSS) için terapötiklere teslimi bir sorundur. Model yenidoğan hastalık durumları doğrudan merkezi sinir sistemi içinde uygun yapıların enjekte etmek zor olabilir, bu nedenle cılız ve gelişimsel olgunlaşmamış ve olduğunu fareler. Terapötik maddelerin damar içi enjeksiyonu CNS 1-5 ve 3,5-9 retinanın da dahil olmak üzere bütün vücuda hücreleri, uyuşturucu ya da viral vektörler sunmak için invazif olmayan, iyi tolere edilen bir yöntemdir. Önceki yayınlar bir diseksiyon mikroskobu 11,12 olmadan, bir transilluminator 10,11 kullanarak zamansal yüz damar enjeksiyonu tarif veya iki birey gerektiren 10 enjekte etmek. Tek tek yavrular enjekte edebilir ve ışık kaynağı zamansal damar, yavru değen bir sabit yüzeye göre bir ameliyat bandı duyulan ihtiyacı ya da bir yavru yapışmalarını ortadan kaldırmamaktadır görüntülemek için, bu protokol açıklanan enjeksiyon tekniği avantajlıBir transilluminator 11 gibi. Farelerde adeno-ilişkili viral vektör serotip 9 (AAV9) teslim beyin ve omurilik (Şekil 1) boyunca nöronlar ve astrositlerde sağlam ifadesini üretir. Yüzeysel zamansal yüz damar içine viral vektörlerin damar yoluyla verilmesi güvenilir bir çocuk nöromüsküler bozukluğun spinal kas atrofisi (SMA) 2,4,13,14 tedavi etmek için yeni doğan farelerin çeşitli çalışmalarda kullanılan ve sonunda tedavi edilen farelerin ömrünü arttırılmıştır. Neonatal farelerin damar içi enjeksiyonu, aynı zamanda etkin bir şekilde, periferal sinir sistemi ve periferal organların (Şekil 2) hedefler. AAV enjeksiyonunun ardından, dorsal kök gangliyon, karaciğer, kalp, iskelet kası, akciğer, gut miyenterik pleksus transdüksiyon 1,3,6,7,15 gözlenmiştir. MSS ve çevrenin yaygın transdüksiyon küresel ifadesini gerektiren hastalıklar için enjeksiyon bu ideal yöntem yaparBu tür Gaucher hastalığı 16 ve diğer lizozomal depo hastalıkları 17,18, geçinmek hastalığı ve ilişkili nöronal seroıd lipofuksinoz, 19 ve Bardet-Biedl sendromu, erken çocukluk 20 meydana gelen belirtilerle başlayan bir genetik multisistemik bozukluk gibi bir transgen. Yenidoğan farelere damar içi enjeksiyonu, aynı zamanda modelleme sistem genelinde çocuk hastalıkları için yeni bir metod olarak kabul edilmelidir. Bu teknik büyük hayvan modellerinde 5,21 için tercüme edilmiştir ve damar içi enjeksiyon zaten terapötikleri teslim klinik olarak kabul edilebilir bir yöntem olarak var. Geçerli protokol doğum sonrası 2. gün Enjeksiyon daha geç yüzeysel zamansal yüz damar yoluyla yenidoğan farelere ajanları sunan basit, etkili bir yöntem tanımlayan bir tek tamamlanabilir, bireysel uygulanan ve iyi yavrular ve barajlar ikisi tarafından iyi tolere edilir. Yavrular az sıkıntı yaşayabilirsiniz ve hızlı bir şekilde kurtarmak. ImportanTLY, Başarılı bir enjeksiyon olarak uygulanan maddenin küresel uygulanmasına neden olur. Bu protokol, viral vektörler, yeni doğmuş farelerin farmasötik maddelerin veya bir hücre sağlanması için uygun değildir.

<table><tbody><tr><td>Thinpro insülin şırıngası</td><td>Terumo</td><td>SS30M3009</td><td>3/10 cc, 3/8" iğne, 30 G, fare başına 1</td></tr><tr><td>adet Evans mavi boya</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>1x Fosfat Tamponlu Tuzlu Su ile %1'e seyreltin</td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatörler</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>Fiber optik ışık kaynağı</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-562-36</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskop</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

yenidoğan farelerde intravenöz enjeksiyonlar

Intravenous Injections in Neonatal Mice

İntravenöz enjeksiyon, terapötikleri sunmak için bir klinikte uygulanabilir tarzıdır. Yetişkin kemirgenler ve büyük hayvanlar için, intravenöz enjeksiyon teknik olarak mümkün ve rutin vardır. Ancak, bazı fare modelleri potansiyel tedavilerin uygulanması zorlaştırır hızlı ilerlemesi ile hastalığının erken başlangıçlı olabilir. Temporal (veya yüz) ven sadece farelerde kulak tomurcuk ön ve bir mikroskop kullanarak başın iki tarafında doğumdan sonra da açıkça ilk iki gün boyunca görünür durumdadır. Bu pencerede, zamansal damar 50 ul hacme kadar enjekte edilebilir. Enjeksiyonu güvenli ve iyi yavrular ve barajlar ikisi tarafından tolere edilir. Tipik bir enjeksiyon yöntemi yavru kafese bunun ardından 1-2 dakika içinde tamamlanır. Üçüncü doğum sonrası gün ven görselleştirmek için zordur ve enjeksiyon prosedür teknik güvenilmez hale gelir. Bu teknik, adeno-ilişkili virüs (AAV) Vect verilmesi için kullanılmaktadırbu da seçilen viral serotip bağlı olarak hayvanın yaşam için yaklaşık vücut geniş dengeli transgen ekspresyonunu sağlayabilir ORS.

Uygun bir enjeksiyon sırasında, damar anlık açık veya blanch dönmelidir. Boya enjekte Eğer tüm yavru saniye içinde mavi dönmelidir. Bir yanlış enjeksiyon meydana gelmiş ise, genellikle enjeksiyon yerinde dışarı sızabilir baş veya boyun ve injectant bir konsantre subkutan bolus var. Yanlış enjeksiyonları da boğaz çevresinde morarma görünüme neden olabilir. (Enjeksiyon tam ven teslim edilmedi yani) genellikle hiçbir kötü yan etkileri karşılaşabilirsiniz ve düzgün enjekte fareler gibi rutin tedaviye yanıt derialtı...

Pediatrik hastalığın hayvan modelleri erken başlangıçlı ve agresif hastalığın ilerlemesini yaşayabilirsiniz. Klinik genç fare modelleri ile ilgili tedavi teslimat teknik olarak zor olabilir. Bu protokol, yaşamın ilk iki doğum sonrası gün içinde yeni doğmuş fareler için invazif olmayan bir damar içi enjeksiyon yöntemi tarif etmektedir.

Yenidoğan Farelerde intravenöz enjeksiyonlar

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are ...

Bu prosedürün genel amacı, yenidoğan bir fareye intravenöz olarak bir test makalesi vermektir. Bu, önce tedavi edilecek bir ila iki günlük farelerin tanımlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, enjeksiyon malzemelerinin hazırlanmasıdır.Daha sonra enjeksiyon yapılır. Son adım, tedavi edilen ve uyanan fareleri annelerine geri döndürmektir. Sonuç olarak, test makalesinin istenen etkiye sahip olup olmadığını belirlemek için bir aşağı akış tahlili gereklidir.Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan bireyler en çok uygun damarı belirleme ve hedefleme konusunda zorlanırlar. Başlamak için, enjeksiyon prosedürü için gerekli tüm ekipmanı bir araya getirin. Ek olarak, PBS'de %1 Evans mavi boyası ve enjekte edilecek hayvan başına 30 gauge iğneli bir insülin şırıngası hazırlayın.Ardından, yavruları manipüle ederken barajı ayrı bir kafese çıkarın. Hazır olduğunda. Tek bir yavruyu 30 ila 60 saniye boyunca doğrudan ıslak buzun üzerine yerleştirin.Anestezi yapmak için. Hayvan buz üzerindeyken hipotermi ile ilgili komplikasyon riski nedeniyle hayvanı buz üzerinde çok uzun süre bırakmayın. 30 mikrolitre Evan'ın mavi boyası ile Lotus şırıngası.Hayvan tamamen anestezi uygulandığında, hala nefes alırken buz üzerinde hareket eksikliği ile onaylandığında, sağ elle yapılan bir enjeksiyon için mikroskop altına alın, hayvanın ağzını doğru yere yerleştirin. Namludaki sol işaret parmağı ve sol orta parmak, kulaklık işaret ve orta parmaklar arasında olacak şekilde kulaklığa yapıştı. Cilt manipüle edildiğinde hareket eden yüzeysel bir kılcal damar için kulaklığın hemen ön tarafını inceleyin.Bu kılcal damar hedef değildir. Bununla birlikte, temporal ven tanımlaması için tanımlama önemlidir. Ardından, cilt pozisyonundan bağımsız olarak sabit kalan kılcal damardan daha düşük koyu gölgeli bir damar bulun.Temporal ven gölgeli görünür, dorsalden ventrale uzanır ve juguler veni besler. İğne eğimi yukarı gelecek şekilde temporal ven girin. Doğru yerleştirilmişse.İğne eğiminin kanla doldurulmasını deri yoluyla görmek mümkündür. Ardından pistona yavaşça bastırın ve yüzün yan tarafındaki damarın beyazlamasına dikkat edin. Enjeksiyonun geri akışını önlemek için iğnenin damar içinde 10 ila 15 saniye daha kalmasına izin verin.Uygun bir enjeksiyondan sonra, yavru maviye dönmelidir. Hemen. İğneyi çıkarın ve kan pıhtılaşana kadar enjeksiyon bölgesine pamuklu çubuk uygulamak için hafif bir kuvvet uygulayın.Yavrunun iyileşmesi ve yeniden ısınması için iki ila üç dakika bekleyin. Yavrunun bilinçli, dik ve hareket ettiğini onaylayın. Kafese dönmeden önce, yavrular, iyileşmeye yardımcı olmak için uygun sıcaklığı sağlamak için araştırmacının eldivenli ellerinde tutulabilir.Alternatif olarak, enjekte edilen yavrunun ısınmasını kolaylaştırmak için ev kafesinin altına bir ısıtma yastığı yerleştirin. Yavruyu ev kafesine geri yerleştirin ve yatak takımlarıyla örtün. Baraj tarafından reac kabulünü sağlamak için, yenidoğan intravenöz enjeksiyonunu takiben steriliteyi korumak için her yavru için yeni bir şırınga ve pamuklu çubuk kullanın AV dokuz Inod GFP transgen ekspresyonu, anterior striatum, pons ve beyincik de dahil olmak üzere beynin her yerinde görülür.GFP ekspresyonu omurilikte de tespit edilir ve hem spinal motor nöronlarda hem de dorsal kök gangliyon nöronlarında görülür. GFP immünofloresansı, kendi kendine tamamlayıcı A A V dokuz GFP'nin yenidoğan intravenöz enjeksiyonunu takiben yetişkin fare, kalp ve karaciğerde tespit edilebilir. Karşılaştırıldığında, bir kez ustalaştıktan sonra enjekte edilmemiş farelerin kalbinde ve karaciğerinde GFP ekspresyonu yoktur.Bu teknik hayvan başına üç ila beş dakika sürmelidir. Bu videoyu izledikten sonra, yenidoğan farelere intravenöz enjeksiyonların nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Merkezi sinir sistemi içine yenidoğan farelerin beyin (intraserebroventriküler) ve (intravenöz) 2) sistemik tedavi ajanları tanıtmak içine 1): Bu makale, enjeksiyon iki çok farklı yöntemler göstermektedir.

Fare intraserebroventriküler sayesinde Terapötik Ajanlar teslimi (ICV) ve intravenöz (IV) Enjeksiyon

Kaynak: Seman, B. G. ve diğerleri. Gram-negatif bakteriyel sepsisin neonatal görüntüleme modeli. J. Vis. Exp. (2020)Video, kapsüllü biyolüminesans bakteriler kullanılarak sistemik enfeksiyonu incelemek için yeni doğumlu fare modelini gösteriyor. Yenidoğan yavrulara yüksek veya düşük dozlu bakteriyel askı enjeksiyonu yapılır ve doğum sonrası bakım için annelerine geri verilir. Kapsüllü bakteriler erken bağışıklık tespitinden kaçınır, sistematik olarak yayılır ve zamanla lüminesans görüntüleme...

Kapsüllenmiş Biyolüminesans Bakterilerle Yenidoğan Farelerde Enfeksiyonun Modellenmesi

Bu video, yenidoğan fare beyninde murin sitomegalovirüs (MCMV) dağılımını incelemek için intraserebroventriküler enjeksiyon sürecini göstermektedir. Görünürlük için gelişmiş bir yeşil floresan proteini (EGFP) ifade etmek üzere tasarlanan MCMV, bir fare yavrusunun beyninin yan ventrikülüne enjekte edilir. Enjekte edilen virüs, beyin omurilik sıvısında dolaşır ve marjinal bölge, koroid pleksus ve subventriküler bölge dahil olmak üzere periventriküler bölgedeki hücreleri enfekte eder.

Yenidoğan Fare Beyninde Murin Sitomegalovirüs Dağılımını Analiz Etmek için İntraserebroventriküler Enjeksiyon

Yenidoğanların İnsan Sitomegalovirüs (HCMV) enfeksiyonu zeka geriliği önemli bir nedeni temsil, henüz virüs kaynaklı patogenezinde yol açan moleküler olayların hala tam olarak anlaşılamamıştır. Beyin enfeksiyon dinamiğini incelemek için, bütün hayvan...

Kullanımı<em&gt; In vivo</em&gt; Görüntüleme Yenidoğanlar Deneysel Fare Sitomegalovirüs Enfeksiyon ilerleme Monitör

Burada, adeno-ilişkili virüsün yenidoğan fare beynine intraventriküler enjeksiyonu ile yaygın nöronal transdüksiyon için bir teknik gösteriyoruz.  Bu yöntem, viral olarak verilen transgenlerin yaşam boyu ekspresyonunu elde etmek için hızlı ve kolay bir yol sağlar.

Kalıcı ve yaygın Nöronal İletim için Yenidoğan Fare Beyin intraserooroventriküler Viral Enjeksiyon

Burada, viral partiküllerin veya floresan mikroboncukların yenidoğan fare beynine intraserebroventriküler ve intravasküler enjeksiyonu için basit bir yöntemi açıklıyoruz. Virüs ve nanopartiküllerin lokalizasyon paterni, mikroskobik değerlendirme veya in situ hibridizasyon ile tespit edilebilir.

Yenidoğan Beyin içine Viral Parçacıklar ve Floresan mikro boncuklar intraserebroventriküler ve İntravasküler Enjeksiyon

Biz bir rahim içinde nakli (IUT) intravenöz ve içi amniyotik yolları enjeksiyon fare modeli gerçekleştirmek için bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı hücreleri, viral vektörel çizimler ve diğer maddelerin benzersiz bağışıklık dayanıklı fetal ortama tanıtmak için kullanılabilir.

İntravenöz ve içi amniyotik rahim içinde nakli fare modeli

Burada, farelerde serbest el yaklaşımı kullanarak (yani stereotaksik bir cihaz olmadan) intraserebroventriküler enjeksiyonlar yapmak için basit ve hızlı bir yaklaşım açıklanmaktadır.

Farelerde Serbest El İntraserebroventriküler Enjeksiyonlar

Bu protokol, yenidoğan dönemi boyunca sıçanlarda ve farelerde kullanılabilecek tekrarlanabilir bir venöz uygulama yolunu göstermeyi amaçlamaktadır. Bu prosedür, öncelikle intravenöz uygulama kullanarak yenidoğan bakım ünitelerinde ilaç uygulamasını yansıtmak isteyen klinik öncesi kemirgen çalışmaları için önemlidir.

Retroorbital Ven Enjeksiyonunun Yenidoğan Kemirgen Modeli

Mevcut protokol, gen düzenleme ve ilaç dağıtımı için yenidoğan farelerde intratekal enjeksiyonların gerçekleştirilmesi için adım adım talimatları özetlemektedir.

Genom Düzenleme ve İlaç Dağıtımı için Yenidoğan Farenin İntratekal Enjeksiyonu

Bu protokol, pediatrik kanser hücrelerinin yenidoğan farelere damar içi iletini göstererek, erken yaşamda kansere karşı bağışıklık yanıtlarının kesin ve tekrarlanabilir modellenmesini mümkün kılar. Bu yöntem, yenidoğan döneminde uygulandığında immünomodülasyon veya terapi gibi müdahalelerin etkisinin değerlendirilmesini sağlar.

Kanser Hücrelerine Karşı Erken Yaşamda Bağışıklık Aktivitelerinin Değerlendirilmesi İçin Yenidoğan Damar Nakli Modeli

Öğrenin, yenidoğan farelerde damar içi enjeksiyon yöntemiyle pediatrik hastalık modellerinde tedavi etkinliğini nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu güvenilir teknik, erken yaşam evrelerinde test maddelerinin başarıyla uygulanmasını sağlar.

Yenidoğan Farelerde intravenöz enjeksiyonlar

Daha fazla video keşfet