Name: Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: Öğrenin, farelerde intratrakeal enjeksiyonla Pseudomonas aeruginosa kaynaklı akciğer hasarı modeli oluşturmayı. Bu yöntem pnömoniye bağlı akut akciğer hasarı mekanizmalarını ve onarım süreçlerini incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri hibeleri HL105947-01 (YL), HL07829-16 (), HL090152 () tarafından desteklenmiştir.

Hayvan deneyleri Chicago Illinois Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi ve Kurumsal Biyogüvenlik Komiteleri tarafından onaylandı. NOT: maskesi, göz koruması, önlük veya tulum, ve çift eldiven: pseudomonas kapsayan tüm işlemler bunlarla sınırlı değildir Biyogüvenlik Seviye 2 (BSL2) uygulamaları ile yapılmalıdır. Sertifikalı Biyogüvenlik Kurulu çalışın. Çamaşır suyu veya klor dioksit bazlı dezenfektan ile bakteri ile temas aletleri davranın. Taşıma örnekleri için bir kapalı kutu kullanın. 1. P. aeruginosa Kültür ve Büyüme <ol><li> Mağaza P. -80 ° C de dondurarak saklamaya uygun vialler bir vidalı başlık bakteriyel bir stok olarak aeruginosa, PA103. </li><li> % 70 etanol ıslatılmış kağıt havlu ile bir kutu içinde bir rafa yerleştirin flakon ve Biyogüvenlik Seviye 2 (BSL2) laboratuvara götürmek. </li><li> Şerit koyun kanı agar plakalarına bakteri ve bir kuluçka makinesi içinde 15 saat ~ 37 ° C&#39;de büyütülmüştür. </li&gt; <li> Bir BSL2 kaputu, 5 ml PBS içinde bakteri döngü ve tekrar süspansiyon ile plaka bakterileri çizebilir. </li><li> 3 aya kadar 4 ° C &#39;de stok saklayın. Bununla birlikte, titre her 2 haftada bir belirler. </li><li> Seri olarak (01:10 ila 7 01:10 4 genellikle) PBS içinde bakteri sulandırarak koyun kanı agar plakaları üzerinde bilinen seyreltme plaka. </li><li> ~ 15 saat süreyle inkübe edin. Kolonileri sayın ve bakteri konsantrasyonunu belirlemek için Koloni Oluşturma Birimi (CFU) hesaplayabilirsiniz. </li><li> Uygun konsantrasyonlarda yeniden süspanse edin (~ 5 x 10 3 CFU / ml), 1.5 ml steril vida kapaklı bir küçük cryovials içinde 0.5 ml PBS içinde. Kriyotüplerin Seal ve bir çırpıda kapaklı kutu dezenfektan yüklü kağıt havlu üzerinde kriyotüpe rafa koyun. </li><li> BSL2 hayvan tesisine kutusuna taşıyın. Bir kez orada, BSL2 kabinede kutusunu açmak. </li></ol> 2. P. aeruginosa damlatma <ol><li> Sağkalım cerrahi aseptik (steril eldiven, steril aletler gerçekleştirinVe aseptik teknikler). Steril (otoklav) cerrahi aletler için bir çalışma yüzeyi sağlamak için steril örtüyü kullanın. Her trakea İnstilasyon prosedür arasında sıcak bir boncuk sterilizatör kullanılarak aletleri sterilize. </li><li> Anesthetization önce fareler tartılır. Ketamin (100 mg / kg), ksilazin (5 mg / kg) ile fareler anestezi 0.1 - 0.2 ml PBS intraperitoneal (ip). Ayak tutam cevapsızlıktan tarafından anestezik etkinliğini belirlemek. Anestezi altında kuruluğunu önlemek için gözleri bir veteriner merhem kullanın. </li><li> BSL2 kabinede bir cerrahi gemide fareler dizginlemek. </li><li> Kesim aşağı için bölgeyi belirlemek. Bu alanı tıraş ve 3 kez alkol ve povidon iyot bezlerden alternatif kullanılarak cildi hazırlar. </li><li> Bu anestezi gibi trakea erişmek için bir cilt kesisi olarak küçük bir ameliyat için yeterli olduğu gibi lokal anestezi (lidokain) ile kesi alanı davranın. </li><li> Boyun orta hatta küçük bir kesi (yaklaşık 5 mm) yapmak, ve künt f kullanınorceps hafifçe trakea erişim için kas taşımak için. Cerrahi diseksiyon ile trakea Açığa. </li><li> 27 G iğne ile 1 ml tek kullanımlık enjektöre bakteri çözüm çizin. Her bir fare için, uygun konsantrasyonda (10 5 CFU her bir fare kadar) bakteri 20-30 ul uygulayın. </li><li> Trakea içine iğne takın. Trakea içine yavaş yavaş bir çözüm enjekte edilir. </li><li> Genellikle bu çözümü gösterir hayvan soluk soluğa, akciğere ulaştığını emin olun. </li><li> Aseptik koşullarda steril sütür (6-0 lifli) ile yarayı kapatın. </li><li> 0.1 mg / ameliyat sonrası ağrıyı kontrol etmek için post-op analjezi gibi deri altı enjeksiyon yoluyla kg buprenorfin kullanın. </li><li> Kapatma insizyon ilk anestezi indüksiyon gerekli süre en az 15 dk olduğundan emin olun. </li><li> Enjeksiyonundan sonra, uygun bir biyolojik tehlikeli kabın içinde şırınga ve iğneler atmayın. </li><li> Klor dioksit bazlı bir dezenfeksiyon cerrahi aletler davranınnfectant 15 dakika için durulayın ve sterilizasyon için laboratuar dönmek ve gerektiğinde yeniden. </li><li> Tek başına sıcak bir ortamda temiz kafeslerde ev fareler. </li><li> Bu bilinç kavuşur ve hareket edene kadar hayvanın her 30 dakikada kontrol edin; ve daha sonra da ilk 3 gün sonra, cerrahi için 12 saatlik aralıklarla. </li><li> Deney boyunca, hayvan BSL2 tesiste fareler tutun. Mühürlü kutuda bulunan tek doku hayvan BSL2 tesisi bırakır emin olun. Fareler can çekişen davranışların bir ifade halinde çalışmada herhangi bir noktada (solunum güçlüğü, uyuşukluk, yumuşak bir uyarıya yanıt olarak ambulasyon durum olarak tanımlanmaktadır), servikal dislokasyon bir şişe bir kaynaktan CO2 soluma ile farelerin euthanize. </li><li> Anestezi altında kanı akıtılarak deneysel konuyu euthanize. <ol><li> Öldürülen farelerin akciğer dokusunu toplayın. Bir BSL2 kaputu bu işlemleri yürütmek. Gerekirse, rac içinde yerleştirilmekte, tüpler kullanılarak örnek aktarmakdaha fazla işlem için bir çırpıda kapaklı kutu dezenfektan yüklü kağıt havlu üzerinde k. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> N Engl J Med. 342, 1334-1349 (2000).</li>
<li>Matthay, M. A., Ware, L. B., Zimmerman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> J Clin Invest. 122, 2731-2740 (2012).</li>
<li>Shimabukuro, D. W., Sawa, T., Gropper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injury+and+repair+in+lung+and+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Injury and repair in lung and airways.</a> Crit Care Med. 31 (8), 524-531 (2003).</li>
<li>Wansleeben, C., Barkauskas, C. E., Rock, J. R., Hogan, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+of+the+adult+lung%3A+Their+development+and+role+in+homeostasis%2C+regeneration%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Stem cells of the adult lung: Their development and role in homeostasis, regeneration, and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2, 131-148 (2013).</li>
<li>Singleton, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamin+2+and+c-abl+are+novel+regulators+of+hyperoxia-mediated+nadph+oxidase+activation+and+reactive+oxygen+species+production+in+caveolin-enriched+microdomains+of+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Dynamin 2 and c-abl are novel regulators of hyperoxia-mediated nadph oxidase activation and reactive oxygen species production in caveolin-enriched microdomains of the endothelium.</a> J Biol Chem. 284, 34964-34975 (2009).</li>
<li>Sadikot, R. T., Blackwell, T. S., Christman, J. W., Prince, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-host+interactions+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Pathogen-host interactions in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> Am J Respir Crit Care Med. 171, 1209-1223 (2005).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxm1+mediates+the+progenitor+function+of+type+ii+epithelial+cells+in+repairing+alveolar+injury+induced+by+pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Foxm1 mediates the progenitor function of type ii epithelial cells in repairing alveolar injury induced by pseudomonas aeruginosa.</a> J Exp Med. 208, 1473-1484 (2011).</li>
<li>Kurahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+septic+shock+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of septic shock in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> J Clin Invest. 104, 743-750 (1999).</li>
<li>Kumar, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+airway+stem+cells+yield+alveoli+in+vitro+and+during+lung+regeneration+following+h1n1+influenza+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distal airway stem cells yield alveoli in vitro and during lung regeneration following h1n1 influenza infection.</a> Cell. 147, 525-538 (2011).</li>
<li>Delano, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis+induces+early+alterations+in+innate+immunity+that+impact+mortality+to+secondary+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sepsis induces early alterations in innate immunity that impact mortality to secondary infection.</a> J Immunology. 186, 195-202 (2011).</li>
<li>Lange, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+sepsis+following+smoke+inhalation+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">A murine model of sepsis following smoke inhalation injury.</a> Biochem Biophys Res Commun. 391 (3), 1555-1560 (2010).</li>
<li>Kobayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+chemokines+in+neutrophil+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">The role of chemokines in neutrophil biology.</a> Front Biosci. 13, 2400-2407 (2008).</li>
<li>Matute-Bello, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, L379-L399 (2008).</li>
<li>Sadikot, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+immunomodulation+of+the+nf-kappab+pathway+in+airway+epithelium+impacts+host+defense+against+pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Targeted immunomodulation of the nf-kappab pathway in airway epithelium impacts host defense against pseudomonas aeruginosa.</a> J Immunol. 176, 4923-4930 (2006).</li>
<li>Pinto, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+experimental+model+of+neutrophilic+pulmonary+response+induction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pneumologia%22%5BJournal%5D)">Development of an experimental model of neutrophilic pulmonary response induction in mice.</a> J Pneumologia. 29, 213-214 (2003).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Biz burada açıklamak Pseudomonas fare akciğer hasarı modeli akut akciğer hasarı veya zatürre sonrası oluştuğu inflamasyon, akciğer hasarı, onarım, ve çözünürlük tüm süreci taklit eder. Bu, klinik olarak ilgili ve içerisinde nispeten güvenli ve kullanımı kolay olduğu birçok başka yaralanması modelleri ile karşılaştırıldığında eşsiz avantajlara sahiptir. Prosedürdeki kritik aşama bakteri çözeltisi, enjeksiyon çok yavaş olması gerekiyor. Enjeksiyon çok hızlı ise, fareler bobini tarafından ölme ...

Akciğerler çevresel patojenlere maruz ve inflamasyon ve yaralanma 1-3 yatkındır vardır. Pnömoni veya yetişkinlerde solunum zorluğu sendromu (ARDS) gibi patolojik durumları sırasında, lökositler tarafından salgılanan patojen hem de enflamatuvar etkenlerin alveol hücreleri 1-3 yaralanma ve ölümünü indükler. Bu onarım yaralanma patoloji çalışma yanı sıra mekanizmasını kolaylaştırmak için akut akciğer hasarı hayvan modellerinin geliştirilmesi önemlidir. Şu anda, çoğu insan hiperoksia ve Bleomisine bağlı fare akciğer hasarı modellerini 4 kullanın. Ancak, hiperoksinin mekanizmaları yaralanma pnömoni veya ARDS 5 sırasında ortaya en sık akciğer yaralanmaları gibi aynı değildir neden oldu. Bleomisin ile oluşturulan akut hasarı klinik bağlamda 4 nadirdir. Burada P. içi trakeal enjeksiyon kullanılarak fare akciğer hasarı modeli rapor aeruginosa 6,7. Bu model klinik olarak önemlidir, ve taklit ppnömoni 8 Aşağıdaki olur rocesses. Bağışıklığı baskılanmış kişilerde bir fırsatçı, hastane patojen, P. gibi aeruginosa genellikle pulmoner sistem, üriner sistem, yanıklar, yaralar bozar, hem de diğer kan enfeksiyonlarına 6 neden olur. Bakteriler, virulans faktör ekzotoksin A serbest çarpma ve immün yanıtları 6 tetikler. P. içi trachael yönetim aeruginosa pnömoniye neden bakteri insan maruz kalma durumunu yansıtan ve patoloji son bildirilen grip virüsü H1N1 kaynaklı akciğer hasarı modelinde 9 farklı olması muhtemeldir. P. yana aeruginosa o daha öldürücü patojenlerin bazı karşılaştırıldığında işlemek için nispeten güvenli bir fırsatçı patojendir. Gözlemlediğimiz, çünkü burada bu yöntemin kıyasla akciğerin en uzak alveol bölgesine daha fazla bakterilerin ortaya koyduğu bakterileri yönetmek için içi trakeal enjeksiyon kullanılanBöyle ağız yoluyla bir kateter kullanarak gibi diğer bazı prosedürler. Diğer akut akciğer hasarı modelleri ile karşılaştırıldığında, S. Burada açıklanan model, aeruginosa, bakterilerin ve aşırı iltihaplanma ile kaynaklı akciğer hasarı çalışmak için uygundur. P. kullanan diğer hayvan modellerinde farklı aeruginosa burada lokalize akut akciğer hasarı oluşturmak için bu bakterilerin içi trakeal enjeksiyon kullanımı, sepsis 10,11 ikna etmek.

<table><tbody><tr><td>Anestezik: Ketamin, ksilazin, lidokain, buprenorfin</td><td></td><td></td><td>farmasötik sınıf</td></tr><tr><td>27 G iğne</td><td>Fisher</td><td>1482648</td><td></td></tr><tr><td>şırınga</td><td>Fisher</td><td>14823434</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>makas</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>forseps</td><td>Güzel Bilimler aletleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sütür&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>19-037-526</td><td></td></tr><tr><td>Göz ölçer, eldiven, önlük</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biyogüvenlik Kabini</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>klor dioksit bazlı dezenfektan</td><td></td><td></td><td>Clidox</td></tr><tr><td>koyun kanı agar plakaları&nbsp;</td><td>Medex kaynağı</td><td>HL-1160</td><td></td></tr></tbody></table>

pseudomonas aeruginosa kaynaklı akciğer hasarı modeli

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Insan akut akciğer hasarı ve pnömoni incelemek üzere, bu hastalığın çeşitli patolojik özelliklerini taklit etmek için hayvan modelleri geliştirilmesi önemlidir. Burada bakteriler Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa veya PA) intra-trakeal enjeksiyon yoluyla fare akciğer hasarı modeli geliştirdik. Bu modeli kullanarak, yaralanma erken dönemde akciğer iltihabı gösteren başardık. Buna ek olarak, alveol epitel bariyer leakiness bronkoalveoler lavaj (BAL) analiz ederek gözlenmiştir; ve alveolar hücre ölümü yaralı akciğerlerinden hazırlandı doku kullanılarak TÜNEL tahlili ile gözlemlenmiştir. Yaralanmasının ardından daha sonraki bir aşamada, biz tamir işlemi için gerekli hücre çoğalmasını gözlendi. Yaralanma 7 gün P. başlatılmasından çözüldü aeruginosa enjeksiyon. Bu model pnömoni sırasında akciğer iltihabı, yaralanma ve onarım sıralı ders taklit eder. Bu klinik açıdan anlamlı hayvan modeli f, onarım mekanizmasını patolojiyi incelemek için uygundurakut akciğer hasarı ollowing ve bu hastalık için potansiyel bir terapötik maddelerin test edilmesi için kullanılabilir.

72 saat sonrası P. - 24 başlayarak aeruginosa enjeksiyonu artan hücreli (Şekil 1A-D), akciğer bölümleri gözlenmiştir. Akciğer 96 saat sonrası yaralanma (Şekil 1E) kurtarmak için başladı. 7 gün sonra, P. yayınlamak aeruginosa normal alveol morfoloji büyük ölçüde (Şekil 1F) restore edildi. Tünel boyama kullanılarak akciğer kesitleri 24 saat sonrası P. hazırlanmış aeruginosa, alveol hücreleri (Şekil 1 G-I) 'de,<...

Pseudomonas aeruginosa bakterisinin intratrakeal enjeksiyonu ile bir fare akciğer hasarı modeli geliştirdik. Bu model pnömoni sırasında akciğer hasarını taklit eder ve klinik olarak önemlidir.

Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Bu prosedürün genel amacı, psödomonas aerojen uygulaması ile farede pnömoni, akciğer hasarı durumlarını taklit etmektir. Bu, önce enjeksiyon için uygun konsantrasyonda pseudomonas hazırlanarak gerçekleştirilir. İkinci adımda, fare trakeası dikkatlice açığa çıkarılır ve daha sonra bakteriler intratrakeal enjeksiyon ile akciğerlere uygulanır.Son adımda, faredeki hastalık ilerlemesi dikkatle izlenir. Sonuç olarak, akciğer iltihabı, alveolar bariyerdeki hücre ölümü değişiklikleri ve akciğer onarımı, pseudomonas aerojen enjekte edilen fare akciğerinde incelenebilir. Bu tekniğin etkileri, pnömoninin neden olduğu akut akciğer hasarının tedavisine kadar uzanır.Bu model pnömoni sonrası süreçleri taklit ettiğinden P Aerogen'in kuatlarını oluşturmak için, kurulum için PA 1 0 3, bakterilerin bir kriyo şişesini eksi 80 santigrat dereceden taşıyarak, biyogüvenlik seviyesine depolayarak başlayın iki veya BSL iki laboratuvar% 70 etanol ile ıslatılmış kağıt havlularla kaplı bir kutuda bir rafta. Daha sonra bir BSL iki başlık çizgisi altında, P aerogen PA 1 0 3 bakteri kolonilerini koyun kanı agar plakalarına yerleştirin ve kolonileri 37 santigrat derecelik bir inkübatörde büyütün. Yaklaşık 15 saat sonra, kolonileri beş mililitre PBS'ye aktarmak için bir bakteri döngüsü kullanın.Daha sonra bakterileri daha fazla PBS'de seri olarak bir ila 10'a, dörde, bir ila 10'a yedi konsantrasyona kadar seyreltin, taze koyun kanı agar plakaları üzerindeki seyreltmeyi kapatın. Daha sonra yaklaşık 15 saatlik bir inkübasyondan sonra, bakteri konsantrasyonunu belirlemek için her plaka için koloni oluşturan birimleri hesaplayın. Daha sonra, 1,5 mililitrede 0,5 mililitre PBS'de uygun miktarda bakteriyi, steril vidalı kapaklı kriyo şişelerini Eloqua ve daha sonra dezenfektan yüklü kağıt havlular üzerine bir kriyo flakon rafına kapatılmış şişeleri bir BSL iki dolaplı bir kapaklı kutuya yerleştirin, hayvanın gözlerini veto merhemi ile nazikçe kapatın.Kesiği hızlı bir şekilde tıraş edin ve üç kez alternatif alkol ve povidon iyot çubukları kullanarak cildi temizleyin ve ayak parmağıyla sedasyonu onaylayın. Cildi lokal anestezik ile tedavi ettikten sonra fareyi cerrahi bir tahta üzerinde sıkıştırın, kısıtlayın. Daha sonra, hayvanın boynunun orta hattında beş milimetrelik küçük bir kesi yapın ve trakeaya erişmek için kasları nazikçe hareket ettirmek için künt forseps kullanın.Trakea maruz kaldığında, 20 ila 30 mikrolitre PBS'de bakterilerin beş koloni oluşturan birimini 27 gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik tek kullanımlık şırıngaya 10 kere kadar çekin. Daha sonra iğneyi trakeaya yerleştirin ve çözeltiyi yavaşça enjekte edin. Hayvanın nefes aldığından emin olun, bu genellikle çözeltinin akciğere ulaştığını gösterir.Şimdi yarayı altı adet sıfır monofilament steril sütürle aseptik olarak kapatın ve postoperatif analjezi uygulayın. Ardından, her bir hayvana enjekte edildikten sonra şırıngaları ve iğneleri uygun biyolojik tehlike keskin alet kabına atın. Myers nasıl sıcak bir ortamda temiz kafeslerde tek başına?Hayvanları bilinçlerini geri kazanana ve hareket etmeye başlayana kadar her 30 dakikada bir kontrol edin. Cerrahi aletlere 15 dakika boyunca klor dioksit dezenfektan uygulayın. Ardından durulayın ve gerektiğinde daha fazla sterilizasyon için aletleri laboratuvara geri koyun.Fareleri deney boyunca BSL iki hayvan tesisinde barındırın ve daha sonra anestezi altında kan kaybından sonra, her hayvandan akciğer dokusunu bir BSL iki başlık altında toplayın. Son olarak, daha fazla işlem isteniyorsa, numuneleri dezenfektan yüklü kağıt havlular üzerindeki bir rafa yerleştirilmiş kapalı tüplerde, geçmeli kapaklı bir kutuda uygun işleme tesisine aktarın. P aerojen enjeksiyonundan 24 ila 72 saat sonra yapılan bu temsili deneyde, akciğer bölümlerinde artmış bir hücresellik gözlenebilir.96 saat sonra akciğer iyileşmeye başladı ve yedi gün içinde normal alveol morfolojisi büyük ölçüde geri yüklendi. P aerojen kurulumundan 24 saat sonra hazırlanan akciğer bölümlerinin tünel boyaması, onarım sürecini incelemek için alveol hücreleri içinde hücre ölümü sergiler. Bu yaralanmada, model BRDU, p aerojen uygulamasından üç gün sonra farelere enjekte edilebilir.Gösterildiği gibi, p aerojen ile tedavi edilen hayvanlar, kontrol ile tedavi edilen hayvanlara kıyasla akciğer dokusunda hiper proliferasyon sergiler. Yaralanma sonrası bariyer, geçirgenlik ve iltihaplanmadaki değişiklikleri incelemek için bronkoalveoler lavaj veya bağırsak sıvısı farklı zaman noktalarında toplanabilir. Örneğin, p aerojen enjeksiyonu sonrası, bağırsak içindeki protein konsantrasyonu, bakteri kurulumundan 48 saat sonra önemli ölçüde artar, bu da epitel bariyer sızıntısını hücre sayısını gösterir.Bağırsak da bu zamanda önemli ölçüde artar, bu da P aerojen enjeksiyonundan dört ila beş gün sonra inflamatuar bir yanıt olduğunu düşündürür, hem bağırsak protein seviyesi hem de hücre sayısı azalmaya başlar ve iyileşmeyi düşündürür. Ayrıca, nötrofil çekiminde yer alan bir sitokin olan makrofaj inflamatuar protein iki'nin bir seviyesi 48 saatte önemli ölçüde artar ve daha sonra 96 saatte bazal seviyelere geri döner. P aerojeni olmayan akciğer lizatlarında, bağırsak sıvısında sadece az sayıda monosit gözlenir.Buna karşılık, bağırsakta enjeksiyondan 48 saat sonra izole edilen çok sayıda nötrofil bulunur. 96 saate kadar, bağırsağın hücre bileşimi bu prosedürü takiben kontrol seviyelerine geri döner. Akut akciğer hasarından sonra inflamasyon ve onarımda hangi hücrelerin veya faktörlerin rol oynadığı gibi ek soruları yanıtlamak için histolojik, kesit alma veya bronkoalveoler lavaj toplama gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

pseudomonas-aeruginosa-induced-lung-injury-model

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu fare modelinde kalıcı, uzun vadeli kronik Pseudomonas aeruginosa enfeksiyonu kurmak için agar-boncuklar bir yöntem tarif eder.

Uzun Vadeli Kronik<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</emFarelerde&gt; Havayolu Enfeksiyon

Biz akut akciğer hasarı modeli, nebülizasyonu tarafından aerosolleşmiş lipopolisakkaride meydan tarafından nötrofilik akciğer inflamasyonu uyarılması için bir yöntem açıklanmaktadır. Buna ek olarak, akciğer izolasyonu, entübasyon ve bronkoalveoler lavaj temel cerrahi teknikler de tarif edilmiştir.

Aerosolize Lipopolisakarid kullanma Yaratma Pulmoner nötrofilisi için bir yöntem

Konak-patojen etkileşimlerinin in vitro çalışması spesifik immün yanıtların karakterizasyonuna izin verirken, karmaşık yanıtların etkilerini gözlemlemek için in vivo modeller gereklidir. Candida albicans maruziyetini ve ardından Pseudomonas aeruginosa aracılı akciğer enfeksiyonunu kullanarak, ventilatörle ilişkili pnömoni patojenitesinde yer alan mikrobiyal etkileşimlerin bir fare modelini oluşturduk.

Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt;: Arası Ana aracılı Etkileşim Modeli<em&gt; Candida albicans</em&gt; Ve<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airways

Çeşitli yöntemler, farelerde bakteriyel pnömoni modelleme için literatürde tarif edilmiştir. Bu yazıda, orofarinksin pipetle bakteriyel inokulum aspirasyonu (yani, inhalasyon) yoluyla zatürree uyarılması için bir non-invaziv, ucuz, hızlı bir yöntem açıklanmaktadır. akciğer doğal bağışıklık yanıtının değerlendirilmesi için aşağı akış yöntemleri de ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Farelerde Deneysel Bakteriyel Pnömoni İndüksiyonunun ve fenotipleme bir Non-invaziv ve Teknik Olmayan yoğun Yöntem

İmmün yetmezliği olan kemirgenlerde akciğer enfeksiyonları oluşturmak için bir yöntem tarif edilmiştir. Yeterlilikle, bu yöntem S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae ve A. baumannii birçok izolatı ile stabil enfeksiyonu indüklemek için hızlı ve kolay bir şekilde gerçekleştirilebilir.

Immünkompetan Kemirgenler bir Sağlam Pnömoni Modeli karşı antibakteriyel etkinliğini değerlendirmektir<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;<i&gt; H. influenza</i&gt;<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; ya da<em&gt; A. baumannii</em

Basit yöntem pulmoner endotel enfeksiyonu takip sitotoksik amyloids üretimini gösteren için Pseudomonas aeruginosatarafından açıklanmıştır.

Yöntemleri için algılama sitotoksik Amyloids aşağıdaki enfeksiyon pulmoner endotel hücre Pseudomonas aeruginosa tarafından

Burada sunulan bir adım-adım prosedür doğrudan intratrakeal lipopolisakkarid instilasyon tarafından fareler akut akciğer hasarı neden ve kan örnekleri, Bronkoalveoler Lavaj sıvısı ve akciğer dokusu FACS analizi gerçekleştirmek için. Minimal invasiveness, basit kullanım, iyi reproducibility, ve hastalık şiddeti titrasyon bu yaklaşımın avantajlarıdır.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

İmmün yetersiz farelerde kronik yara enfeksiyonları oluşturmak için gecikmiş bir aşılama protokolünü tanımladık.

Kronik Pseudomonas aeruginosa Yara Enfeksiyonu Gecikmiş Aşılama Modeli

Bu el yazması, farelerde enfeksiyöz bir pnömoni modelinin oluşturulmasını ve bakteri yetiştirme ve intratrakeal damlatma yöntemleri ile birlikte yaralanma çözünürlüğünün ilgili karakterizasyonunu açıklamaktadır. Bağışıklık ortamını değerlendirmek için yüksek boyutlu akış sitometrisi kullanan yeni bir yaklaşım da açıklanmaktadır.

Pnömoni Çözünürlüğünü Değerlendirmek için Deneysel Model

Şu anda kronik bakteriyel enfeksiyonlara karşı ilaç taramasına uygun in vivo modellerin eksikliği vardır. Burada, zebra balığı larvalarında kalıcı bir enfeksiyon oluşturmak için bir Pseudomonas aeruginosa klinik izolatı ile yara enfeksiyonu için bir protokol açıklıyoruz.

Yaralı Zebra Balığı Larvalarında Kalıcı Pseudomonas aeruginosa Enfeksiyonunun Modellenmesi

Bu çalışmada, invaziv olmayan endotrakeal instillasyon tekniğinin, akciğerlere hassas LPS iletimi sağlamak için temel bir laringoskop kullanılarak sıçanlarda ALI geliştirdiği gösterilmiştir. LPS, laringoskop kullanılarak endotrakeal tüp aracılığıyla yerleştirilir. Akciğer yaralanmasının büyüklüğü birden fazla zaman noktasında değerlendirilir.

Kemirgenlerde akut akciğer hasarını indüklemek için lipopolisakkaridin invaziv olmayan endotrakeal uygulaması

Öğrenin, farelerde intratrakeal enjeksiyonla Pseudomonas aeruginosa kaynaklı akciğer hasarı modeli oluşturmayı. Bu yöntem pnömoniye bağlı akut akciğer hasarı mekanizmalarını ve onarım süreçlerini incelemek için kullanılır.

Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli

Daha fazla video keşfet