Name: İnsan Safen Ven Prosedürü Ex vivo Perfüzyon ve Dış Takviye (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Öğrenin, insan safen venlerinde intimal hiperplaziyi azaltmak için dış takviye ve yüksek basınçlı perfüzyon kullanarak vasküler biyoloji araştırmalarında damaraft sonuçlarını iyileştirme yöntemlerini.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma nükleer yakıtın [31003A-138528], Octav ve Marcella Botnar Vakfı, Novartis Vakfı ve Emma Muschamp Vakfı hibe ile desteklenmiştir. Biz onların mükemmel teknik yardım için Martine Lambelet, ve Jean-Christophe Stehle teşekkür ederim.

Lozan Üniversitesi Etik Komitesi, insan dokularının kullanımı için 1983 yılında revize edilen 1975 Helsinki Bildirgesi&#39;nde belirtilen ilkelere uygun olan deneyleri, onayladı. 1. İnsan Büyük Safen Ven Hasat <ol><li> Iskemi için alt ekstremite bypass cerrahisi uygulanan hastalarda non-variköz insan safen venlerin arta kalan kısmında. Ameliyathanede, bir iyot çözeltisi ile tüm bacak dezenfekte ve ayak kasık bacak maruz hastayı asmak. </li><li> Diz kasıktan bir medyan kesi yapmak (kesintiye cilt kısmını bırakarak). </li><li> Doku (no-touch tekniği) çevreleyen bir sap ile büyük safen ven hasat. 4-0 ipek kravatlar ile venlerin Güvenli yan dalları. Derhal bir RPMI-1640 G&#39;de 4 ° C&#39;de 9 cm 2.5-4 mm&#39;lik bir çapa sahip büyük safen ven uzun fazla segmenti, en az depolamaklutamax ortamı,% 12.5 fetal dana serumu ile takviye edilmiş ve laboratuara getirin. </li></ol> 2. Evps Tasarım <ol><li> . Şekil 1&#39;de gösterildiği genel ekipman monte tüm ekipman Otoklav ve steril koşullar altında tüm bileşenleri tutmak. Buna ek olarak, sistem, su geçirimsizdir ve ortama kimyasal sızıntı olmamasını sağlamak. Kapak için polimetakrilat&#39;lı metil (PMMA-GS) kullanın. Çelik (X5 Cr Ni 18 10) ve damar destek olarak polioksimetilenhomo plastik (POM). </li><li> Ven ve bağlantı yerleşimini sağlamak için istenen geometriye perfüzyon odasına tasarlayın. Bu kültür ortamı (Şekil 1) ile sabit kapsamıyla birlikte kabın en az fleksiyon dilatasyon sağlar kadar (silindirik ya da eğer yapı ile yarıçapı) en az 2.5 cm olmalıdır derinliği olun. Sızdırmazlık önemli bir konudur ve dikdörtgen PMMA-GS inşaat kullanılan nedeni budur. </li><li> İstediğiniz Geometr için ven destek tasarlayınY. Ven bükülmeden veya şişliği üzerinde önlemek için, (ven vida ile birlikte bükülmüş olacak gibi vida, bu amaçla kullanılan olamaz) iterek ya da çekerek uzunluğu ayarlaması sağlar. Not: L-şeklindedir (damara uymak için 5 mm çaplı) 2 damar silindirleri destek parçaları ve ven (Şekil 1B ve Şekil 2) 2 sürme ile bağlanmış olan bir tam çelik çubuk burada kullanılmıştır. </li><li> P = 0-10 = hx ρ xg, burada p = basıncı (N / m 2, Pa) akışkan sütunu (m) h = yükseklik ρ: basınç sütun, bu sisteme uygulanan &quot;istirahat basıncı&quot; olduğunu Tasarım = sıvı (kg / m 3) ve g = yerçekimi sabiti (9.81 m / san 2) bir yoğunluğa sahiptir. Yukarıdan aşağıya tasarım dört bağlantı kanalları,:, (damardan) çıkış için, (ven) girişini baskı uygulamak ve orta değişikliğe izin vermek. </li><li> Ortamı hazırlayın. Daha önceki çalışmalarda 5,11-14 göre, 12.5 Glutamax ile takviye edilmiş RPMI-1640 tercih% Fetal dana serumu ve% 1 antibiyotik-antimisotik çözelti (10.000 U / ml penisilin G, artı 10 mg / ml streptomisin sülfat, artı 25 mg / ml amfoterisin B, artı 0.5 mg / ml: gentamisin). Kesme gerilmesi (SS), SS = 4 μQ / π * R3, Q ile verilir akış hızı (ml / sn), damar segmentinin uzunluğu (cm) r, ve μ, perfüzyon ortamına viskozitesidir. <ol><li> 70 kDa dekstran ilave edilmesi viskozitesini ayarlayarak SS modüle. Bir viskometre ile viskozitesi ölçülür. Burada, din / cm 2 9-15 üzere SS ayarlamak için 8% 70 kDa dekstran ekleyin. </li></ol></li><li> 60 darbe / dakika, sabit genlikte, bir bilgisayar tarafından sisteminde uygulanan ve kontrol basıncından bağımsız 150 ± 15 ml / dak bir tek yönlü akışı üreten bir pulsatil kardioid sinyalini indüklediği dişli pompa ayarlayın. Sürüş yazılım sabit toplama ve baskıların izleme, akış hızı, nabız ve sinyal entegre emin olun. İstenirse ikinci bir pompa kullanmak (sigara senkronhronized) olmayan bir laminar, türbülanslı bir akış oluşturmak için. </li></ol> 3. Evps Meclisi (Şekil 1) <ol><li> Başlamadan önce, tüm ekipman steril olduğundan emin olun. Laminar akış asepsi altında şu adımları uygulayın. </li><li> Ortam ile doldurulmuş bir Petri kabındaki ven yerleştirin. Cerrahi bıçak kullanın ve 3 eşit parçaya içine ven bölmek. </li><li> Hemen PBS içinde bir segment yıkayın. , 3 parça kesimi bölün morfometre için formalin sabitleyin. Nicel transkripti (RT-PCR) ve protein (Batı leke) analizi için diğer iki dondurun. Bir kontrol, perfüze olmayan ven olarak bu segmentleri düşünün. </li><li> Perfüzyon için kalan 2 segmentleri kullanın. <ol><li> Çok yavaşça damara madde enjekte ve normal akış yönünü belirler; valf mevcudiyetinde damar tersine çevrilir. </li><li> Damarları Sızdırmazlık deneysel başarısı için büyük önem taşımaktadır. Teminat ile sızıntıları kontrol edin. 6-0 ipek dikişlerle sızıntıları sabitleyin. </li> &lt;/ Ol&gt; </li><li> Bir seferde (bir 2.3, Şekil 1) damar iki metal silindir arasında bir bölümü, bir ucunu. Çentikler (Şekil 1A ve B) etrafında Ethibon 3-0 silindirleri sabitleyin. <ol><li> Daha önce ortam ile doldurulur perfüzyon odasına tüm venöz parçayı. Ikinci segment için aynı işlemi tekrarlayın. Düzgün silindire ven mühürlemek için başarısızlık sızıntı kaynağı olacaktır tekrar girişim gerektiren, ve önemli ölçüde enfeksiyon ve deneysel başarısızlık riskini artırır: NOT. </li></ol></li><li> Ikinci segmenti pekiştirmek (mesh) için L-şekilli parçalar (2.3 ve Şekil 1) den (ekli ven) ile iki silindir bırakın. <ol><li> Nazik olun ve herhangi aletleri ile damar dokunmayın. Ven üzerine daha sonra silindir ilk örgü kaydırın. Bir itme / çekme Jostling ven örgü alacak. </li><li> Örgü kapsayan kez venin tüm yüzeyi j sabitlemekEthibon 3-0 silindirlere acketed damar. </li><li> L-şekilli destek ven / silindir bileşiği yeniden birleştirmek ve daha önce ortam ile doldurulur perfüzyon odasına transfer. </li></ol></li><li> 3.2 mm&#39;lik bir iç çapa sahip peroksit ile muamele edilmiş silikon tüp kullanılarak Y-ayırıcıya her bir metal silindir (in ve çıkış) bağlanır. </li><li> Hortumun aynı türünü kullanarak ikinci bir Y-splitter için çıkış splitter bağlayın. Bu Y-splitter, hem damarları aracılığıyla perfüzyon basıncını ölçmek için bir tüp kullanın. Kapalı devre sistemi (Şekil 2) oluşturulması için tekrar sütuna diğer birini kullanabilirsiniz. </li><li> Inkübatör içinde, pompa kafasına basınçlı sütun bağlamak için bir uzun (bir metre uzunluğunda) boruyu kullanır. </li><li> Başka bir uzun boyu tüp ile giriş Y-splitter için pompa kafasını bağlayarak kurmak (Şekil 1) tamamlayın. </li></ol> 4. Damarlar Perfüzyon <ol><li> Evps montaj ko olmuştur sonrampleted, orta sütunu dolduran (dolumu izin ven çıkış kanalı altında kalmak). Sistem tam kadar sütuna daha orta ekleyin. Bir pH 37 ± 0.1 ° C sıcaklıkta muhafaza inkübatör içine tüm sistemi hareket (Henderson-Hasselbach denkleme dayalı CO2 / pH algoritmasını kullanarak) 7.40 ± 0.01 &#39;de sabit tutulur. </li><li> Inkübatör dışında dişli pompa kafasını getirin ve dişli pompa sürücüye takın. Düzeneğini sabitlemek için çubuklar vida. </li><li> Pompa gücü açın, bu sürüş yazılımında aktif olduğundan emin olun ve orta derecede her kompartımanda dağıtılmak üzere 5 dk bekleyin. </li><li> Basıncını izlemek için, bir arteriyel hat izleme kullanın. Bilgisayara bağlı basınç transdüktörüne Evps basınç çıkışı (bu arteriyel kateter karşılık gelir) takın. <ol><li> Tüp tamamen ortam ile doldurulur ve kabarcıkları içermeyen emin olun. &quot;Arteriyel li yoluyla De-kabarcık kültür sistemine &quot;tüp (Şekil 2). Ekrana dikkat edin ve 60 darbe / sabit genlikli dk pulsatil Kardioit sinyali arayın. Bu noktada, ortalama basınç, 0-10 mm Hg arasındadır. Basıncı &lt;0 ve sütun kademeli (ven ve tüp arasındaki ven teminat veya yetersiz mühür) bir sızıntı bakmak boşaltır edin. </li></ol></li><li> Venöz testi ya da bir atardamar test için 90 mm Hg&#39;de 6 mm Hg için en az bir baskı ayarlayın. Bu koşullar altında, bir hava enjektörü, kolon ve sistem için gerekli basıncı uygular. </li><li> Basınç kolonuna bağlanır tüp kullanarak her 2 günde bir ortam değiştirme. , Basınç değişimi zarar görmesini önlemek İlk sütun fişi açmak için. </li></ol> Perfüzyonunun 5. Tamamlama <ol><li> Perfüzyon 3 veya 7 gün sonra: kuluçka Evps almak ve damarları kaldırılıyor. 5 mm yakınma atın ve distal damar ekipmanlara bağlı uçları. Merkezi, 5 mm kalınlığında rin KesmeKalan segmentinden gs ve formalin (morfometrisi) düzeltmek. Kalan parçaları dondurun ve daha fazla moleküler analizler için toz haline azaltır. </li></ol>

<ol><li>Sal Go, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Executive+summary%3A+heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update%3A+a+report+from+the+american+heart+association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the american heart association.</a> Circulation. 129, 399-410 (2014).</li>
<li>Sal Conte, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Results+of+PREVENT+III%3A+a+multicenter%2C+randomized+trial+of+edifoligide+for+the+prevention+of+vein+graft+failure+in+lower+extremity+bypass+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Results of PREVENT III: a multicenter, randomized trial of edifoligide for the prevention of vein graft failure in lower extremity bypass surgery.</a> Journal of Vascular Surgery. 43, 742-751 (2006).</li>
<li>Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Bai, Y., Ozaki, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+vein+graft+hemodynamic+manipulations+to+enhance+experimental+utility%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Mouse vein graft hemodynamic manipulations to enhance experimental utility.</a> The American Journal of Pathology. 178, 2910-2919 (2011).</li>
<li>Davies, M. G., Hagen, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprinted+article+%26%2334%3BPathophysiology+of+vein+graft+failure%3A+a+review%26%2334%3B%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+vascular+and+endovascular+surgery+%3A+the+official+journal+of+the+European+Society+for+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Reprinted article &#34;Pathophysiology of vein graft failure: a review&#34;.</a> European journal of vascular and endovascular surgery : the official journal of the European Society for Vascular Surgery. 42, Suppl 1. S19-S29 (2011).</li>
<li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+hemodynamic+forces+in+the+ex+vivo+arterialization+of+human+saphenous+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Role of hemodynamic forces in the ex vivo arterialization of human saphenous veins.</a> Journal of Vascular Surgery. 57, 1371-1382 (2013).</li>
<li>Vijayan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+reduction+of+medial+and+intimal+thickening+in+porcine+saphenous+vein+grafts+with+a+polyglactin+biodegradable+external+sheath%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Long-term reduction of medial and intimal thickening in porcine saphenous vein grafts with a polyglactin biodegradable external sheath.</a> Journal of Vascular Surgery. 40, 1011-1019 (2004).</li>
<li>Jeremy, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+biology+of+saphenous+vein+grafts+fitted+with+external+synthetic+sheaths+and+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">On the biology of saphenous vein grafts fitted with external synthetic sheaths and stents.</a> Biomaterials. 28, 895-908 (2007).</li>
<li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constrictive+external+nitinol+meshes+inhibit+vein+graft+intimal+hyperplasia+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Constrictive external nitinol meshes inhibit vein graft intimal hyperplasia in nonhuman primates.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136, 717-725 (2008).</li>
<li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilization+of+shape+memory+in+external+vein-graft+meshes+allows+extreme+diameter+constriction+for+suppressing+intimal+hyperplasia%3A+a+non-human+primate+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Utilization of shape memory in external vein-graft meshes allows extreme diameter constriction for suppressing intimal hyperplasia: a non-human primate study.</a> Journal of Vascular Surgery. 49, 1532-1542 (2009).</li>
<li>Yeoman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+constitutive+model+for+the+warp-weft+coupled+non-linear+behavior+of+knitted+biomedical+textiles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A constitutive model for the warp-weft coupled non-linear behavior of knitted biomedical textiles.</a> Biomaterials. 31, 8484-8493 (2010).</li>
<li>Longchamp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+external+mesh+reinforcement+to+reduce+intimal+hyperplasia+and+preserve+the+structure+of+human+saphenous+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of external mesh reinforcement to reduce intimal hyperplasia and preserve the structure of human saphenous veins.</a> Biomaterials. 35, 2588-2599 (2014).</li>
<li>Saucy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+pulsatile+perfusion+of+human+saphenous+veins+induces+intimal+hyperplasia+and+increased+levels+of+the+plasminogen+activator+inhibitor+1%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research.+Europaische+Chirurgische+Forschung.+Recherches+Chirurgicales+Europeennes%22%5BJournal%5D)">Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 45, 50-59 (2010).</li>
<li>Dubuis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atorvastatin-loaded+hydrogel+affects+the+smooth+muscle+cells+of+human+veins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pharmacology+and+experimental%22%5BJournal%5D)">Atorvastatin-loaded hydrogel affects the smooth muscle cells of human veins.</a> The Journal of pharmacology and experimental. 347, 574-581 (2013).</li>
<li>Deglise, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+connexin43+expression+in+human+saphenous+veins+in+culture+is+associated+with+intimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Increased connexin43 expression in human saphenous veins in culture is associated with intimal hyperplasia.</a> Journal of Vascular Surgery. 41, 1043-1052 (2005).</li>
<li>Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+vein+graft+adaptation+to+the+arterial+circulation%3A+insights+into+the+neointimal+algorithm+and+management+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Journal+%3A+Official+Journal+of+the+Japanese+Circulation+Society%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies.</a> Circulation Journal : Official Journal of the Japanese Circulation Society. 74, 1501-1512 (2010).</li>
<li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> The American Journal of Pathology. 182, 277-287 (2013).</li>
<li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salvage+treatment+for+venous+aneurysm+complicating+vascular+access+arteriovenous+fistula%3A+use+of+an+exoprosthesis+to+reinforce+the+vein+after+aneurysmorrhaphy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery+%3A+the+Official+Journal+of+the+European+Society+for+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Salvage treatment for venous aneurysm complicating vascular access arteriovenous fistula: use of an exoprosthesis to reinforce the vein after aneurysmorrhaphy.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery : the Official Journal of the European Society for Vascular Surgery. 40, 100-106 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu çalışma, insan damarlarında yoğun hemodinamik çalışmalar gerçekleştirmek için bir ex vivo ven perfüzyon sistemi (Evps) ortaya çıkarır. Bu sistem, in vivo hücreleri tarafından serbest dolaşan ağırlaştırıcı iltihaplı ve büyüme faktörlerinin yokluğunda tanımlanmış hemodinamik parametreleri altında, safenöz ven perfüzyon sağlar. Bu nedenle, insan damar greftleri 5,11,12,15 içinde IH kontrolü ile ilgili temel yolakların daha iyi anlaşılmasını sağlar. Tekrarlanabili...

Kardiyovasküler hastalıklar Batı ülkelerinde 1 morbidite ve mortalite nedenidir. Endovasküler tedavilerde kaydedilen ilerlemelere rağmen, bypass cerrahisi böylece yarım milyondan fazla ven greft Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde yılda yapılır, çağdaş tedavilerin ayağıdır. Ancak, araştırma yıllardır rağmen, alt ekstremite ven greft% 30-60 bağlı intimal hiperplazi (H) 2 ilk yıl içinde başarısız. Mekanik kuvvetler, özellikle düşük kayma gerilmesi (SS) ve yüksek duvar gerilimi, bu hiperplastik yanıt 3,4 başlamasında ve gelişmesinde hayati önem taşıyor. Bu sorunu gidermek için, bir ex vivo damarları perfüzyon sistemi (Evps) sıkı kontrol hemodinamik koşulları (basınç ve kayma gerilmesi), insan safen venlerin davranışın altında incelemek için oluşturuldu. Bu çalışmada, arter gibi dolaşıma sokulmak sonra, yüksek basınçlı Prolif teşvik etmek için yeterli olduğu (= 100 mm Hg ortalama)işleyişi ve intimal katmana (İH), 5 düz kas hücrelerinin göç. Memeli çalışmalar &quot;arteriyelize ven&quot; desteklemek ve akut hemodinamik ven bir kez arteriyel ortamı içine implante yüzleri değişiklikleri dengelemek için etkili bir yöntem olarak dış donatı kullanımı önerilmektedir. Örgü, aşırı gerilmenin önlenir artan kesme stresi, ve duvar ve buna bağlı olarak gerginlik İH 6-10 azalır. Ancak, altta yatan mekanizmalar ve baypas açıklığını geliştirerek insan damarlarına uygulanabilirliği tam olarak karakterize edilmemiştir. Bizim Evps damar kez bir atardamar rejimine karşı karşıya yerleştirilmiş değişiklikleri (yüksek kesme stresi ve basınç) bir dış poliester gözenekli boru şekilli örgü varlığında ve yokluğunda insan safenus damarları davranışını taklit durumda, karşılaştırmak için kullanıldı. Patolojik biçimlenme ve IH önleyerek, örgü potansiyel klinik etkinlik 11 kanıt sağladı </sup&gt;. Bu çalışma 1) dış makro-gözenekli polyester örgü IH azaltır ve potansiyel klinik uygulama için önemli bilgiler sağladığını göstermektedir kontrollü basınç ve kayma gerilmesi 2) altında ex vivo olarak insan safen damarlar perfüzyon modeli tanıttı.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 - Glutamax</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>61870-010</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin / Fungizone</td><td>Bioconcept</td><td>4-02F00-H</td><td></td></tr><tr><td>Leuconostoc spp.'den Dekstran 500 g</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31390</td><td></td></tr><tr><td>Tampon PBS CHUV pH 7.1-7.3 1 L</td><td>Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG</td><td>100 0 324 00</td><td></td></tr><tr><td>Kriyoseksiyon gömme ortamı - Tissue-Tek OCT Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-373-65</td><td></td></tr><tr><td>Silikon Boru (Peroksit) L/S 16 (96400-16 ) - 7,5 m</td><td>Idex Health & Bilim GMBH</td><td>MF0037ST</td><td></td></tr><tr><td>Y-ayırıcı&nbsp;</td><td>Idex Sağlık & Science GMBH</td><td>Y-konnektör</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Kültür</td><td>kabı Sigma-Aldrich</td><td>CLS430165-100EA</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Falcon tube</td><td>BD Bioscence 352096</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 ml Falcon tube</td><td>BD Bioscence</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Dişli pompa - Reglo-Z</td><td>Idex Health & Bilim GMBH</td><td>SM 895&nbsp;</td><td>&nbsp; App-Nr 03736-00194</td></tr><tr><td>Pompa Kafası</td><td>Idex Health & Bilim GMBH</td><td>MI0008&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>İzleme Kiti TRANSPAC IV</td><td>icumedical</td><td>011-0J736-01</td><td></td></tr><tr><td>20 ml Şırıngalar</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>4612041-02</td><td></td></tr><tr><td>Etibon 3-0 FS-2</td><td>Ethicon- Johnson& Johnson</td><td>EH7346H</td><td></td></tr><tr><td>Mesh ProVena 6-8mm</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>1105012-14</td><td></td></tr><tr><td>NaCl: Sodyum klorür çözeltisi perfüzyonu %0,9 (100 ml)</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>534534</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Standart Sürücü</td><td>Cole-Parmer Instrument Co</td><td>7521-10</td><td></td></tr><tr><td>Satın alma kartı</td><td>National Instruments</td><td>PCI-6024 E</td><td></td></tr><tr><td>Akış Ölçer modül</td><td>Transonik Sistemler A.Ş.</td><td>TS410 ve T402</td><td></td></tr><tr><td>3</td><td>BD Connexta Luerlock</td><td>394600</td><td></td></tr><tr><td>Millex Filtreli</td><td>Milian SE2M229I04</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan safen ven prosedürü ex vivo perfüzyon ve dış takviye

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Geniş tıkayıcı arter hastalığı için çağdaş tedavilerin dayanak venöz bypass greft. Ancak, dayanıklılık sonunda damar tıkanıklığı ve greft yetmezliğine yol açar intimal hiperplazi (IH) tarafından tehdit edilmektedir. Mekanik kuvvetler, özellikle düşük ve yüksek kesilme baskısı duvar gerilimi başlatmak için ve bu hücresel ve moleküler değişiklik sürdürmek için düşünülmektedir, bununla birlikte bunların tam katkı ortaya çıkarılmak üzere kalır. Seçici fıtığın biyolojisi üzerinde baskı ve kayma gerilmesi rolünü değerlendirmek için, bir ex vivo perfüzyon sistemi (Evps) arter rejimi altında insan safen venlerin (yüksek kayma gerilmesi ve yüksek basınç) segmentleri serpmek için oluşturuldu. Ayrıca teknik yenilikler Aynı şekilde, harici bir ağ ile güçlendirilmiş bir iki segment eşzamanlı perfüzyon izin verdi. Damarlar no-touch tekniği kullanılarak hasat ve hemen Evps montaj için laboratuara transfer edildi. Taze isol bir kademeliated ven (kontrol, gün 0) perfüze değildi. Diğer iki segment kadar 7 gün boyunca sıvandılar, biri tamamen bir 4 mm (çap) dış mesh ile korunaklı ediliyor. Basınç, akış hızı ve nabız hızı sürekli ve femoral arter içinde hakim olan hemodinamik koşulları taklit edecek şekilde ayarlanmıştır. Perfüzyon tamamlanmasından sonra, damarlar, demonte edilmiş ve histolojik ve moleküler analizi için kullanılmıştır. Ex vivo koşullar, yüksek basınç altında perfüzyon (arteryel, = 100 mm Hg ortalama) ve insan IH damarların yeniden modellenmesinin oluşturmak için yeterlidir. Bu değişiklikler harici bir poliester örgü mevcudiyetinde azaltılır.

Evps insan safen ven biçimlenme ve IH greftler üzerinde bağımsız hemodinamik güçleri değerlendirmek için değerli bir araç sağlar. Şekil 1, perfüzyon odasına ve damar desteğini göstermektedir. Şekil 1A ve B, önce ven destek (Şekil 1A) ve sonrası (Şekil 1B) montaj, sırasıyla, resmedilmiştir. Kolayca (soldan sağa) kayabileceği 2 L şeklinde parçaları için bir destek olarak hizmet 9 cm çapında 1 düz paslanmaz çel...

Intimal hiperplazi (İH) ve ven greft yetmezliği gelişimine yol açan mekanizmalar hala tam olarak anlaşılamamıştır. Bu çalışma kontrollü akış ve basınç altında, insan damarları serpmek için bir ex vivo sistemini anlatmaktadır. Ayrıca dış hasırlı verimliliği fıtığın gelişimi değerlendirildi sınırlamak için.

İnsan Safen Ven Prosedürü Ex vivo Perfüzyon ve Dış Takviye

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, baskının, katıksız stresin ve dış takviyenin insan intimal hiperplazisi üzerindeki etkisini değerlendirmektir. Bu, aynı damardan iki segmentin aynı anda yüksek basınçlı perfüzyonu ile elde edilir. Bir segment harici bir ağ ile güçlendirilirken, damar segmentleri daha sonra histolojik ve moleküler analiz için bölümlere ayrılır.Bu analizler, harici bir takviyenin intimal hiperplazi üzerindeki etkisini değerlendirmek için kullanılır. Sonuçlar, harici bir takviyenin, normalde yedi günlük perfüzyondan sonra gözlenen intimal hiperplaziyi azaltabileceğini göstermektedir. Seno van baypas grefti, periferik arter hastalığından muzdarip hastalarda tercih edilen tedavilerden biridir.Bununla birlikte, greft başarısızlığına yol açan t hiperplazisinin gelişimi, bu tür el sanatlarında ana sınırlayıcı faktördür. Bu yeniden şekillenme, yeni tedaviler geliştirmek için minibüsün arteriyel ortama adaptasyonundan kaynaklanmaktadır. Bu fenomende yer alan moleküler mekanizmaların anlaşılması esastır.Bu nedenle, ex vivo bir perfüzyon modeli geliştirdik. Sistemimizin en önemli avantajlarından biri, başka herhangi bir kafa karıştırıcı bağışıklık veya endokrin faktör olmadan hemodinamik parametrelerin incelenmesine izin vermesidir. Laboratuvarımızdan bir MD Doktora öğrencisi tekniği gösterecektir.Alt ekstremite baypas ameliyatı geçiren hastalardan insan öz ven örnekleri alınır. Damar toplanır ve steril şartlarda laboratuvara getirilir ve laminer akış başlığı altına yerleştirilir. Bu tür damarların minimum boyutu dokuz santimetre uzunluğundadır.İç çap 2,5 milimetrenin üzerinde ve dış çap dört milimetrenin üzerindedir. Damar üçe ayrılır. Segmentler bile hasat edilen damarlar buz gibi soğuk RPMI 1640 glut max ortamında saklanır ve %12,5 FBS ile desteklenir, bir segment PBS'de durulanır.Yine üç kısma ayrılan kontroldür. Bir parçayı morfo için Formin'e sabitleyin ve diğer iki parçayı moleküler analiz için dondurun. EVPS, polimetil akrilik, metil polioksietilen ve çelik gibi kimyasalları sızdırmayacak su geçirmez malzemeden yapılmalıdır.Damarın minimal fleksiyonu ve genişlemesi ve kolay medya değişiklikleri için perfüzyon odası en az 2,5 santimetre derinliğinde olmalıdır. Damar desteği, yukarıdan aşağıya L şeklindeki ataşmanlara bağlı çelik bir çubuktur. Basınç kolonundaki bağlantı kanalları, normal akış yönünü belirlemek için damara giriş ve çıkışta basınç ayarlamalarına ve ortam değişimine izin verir.Perfüzyon için kalan iki segmente nazikçe besiyeri enjekte edilir. Segmentin valfleri varsa, akış daha yavaş olacaktır. Valflerin akışı engellememesi için EVPS'de damar ters çevrilmelidir.Damarı iki metalik silindire bağlayın. Her seferinde bir son. Silindirleri Vicryl üç oh ile sıkı bir düğüm kullanarak girintilerin etrafına sabitleyin.Daha sonra damarı besiyeri yüklü perfüzyon odasına aktarın. Üçüncü damar segmenti için, damarın bir ucunu daha önce gösterildiği gibi silindire takın. Ardından ağı damar üzerinde yavaşça kaydırın.Daha sonra silindirin üzerindeki ağı ve damarı dikişlerle sabitleyin. Son olarak, ağ uzunluğunu ayarlayın ve damarın diğer ucunu ve ağı silindire sabitleyin. Düzeneği ikinci perfüzyon odasına taşıyın.EVPS, silikon boru ile kapalı bir döngüye monte edilir. Her bir çıkış silindirini, peroksit ile işlenmiş silikon borunun bir segmentini kullanarak bir Y ayırıcıya bağlayın. Her bir giriş metal silindiri için aynısını yapın.Ardından, çıkış ayırıcıyı ikinci bir Y ayırıcıya bağlayın. Bu Y ayırıcıdan. Bir çıkışı basınç dönüştürücüsüne bağlı boruya bağlayın ve diğer çıkışı basınç kolonuna bağlamak için, basınç kolonunu pompaya bağlamak için bir metrelik bir tüp kullanın.Pompayı giriş ve ayırıcıya bağlayarak kurulumu tamamlayın. Başka bir metre boru ile kalan tüpleri basınç kolonuna bağlayın. En alttaki kanal, medya değişimine hizmet eder.EVPS'yi monte ettikten sonra, sütunu damar çıkış kanalının hemen altına kadar orta ile doldurun. Şimdi, sistemi karbondioksit kullanarak 37 santigrat dereceye ayarlanmış inkübatöre taşıyın. İnkübatörün dışında pH'ı sabit 7.4'te tutun.Basıncı izlemek için pompa dişli kafalarını dişli tahrikine takın. EVPS'nin basınç çıkışını basınç dönüştürücüsüne bağlayın. Tüpün tamamen dolu olduğunu ve kabarcık olmadığını kontrol edin.Sabit genlikli dakikada 60 darbede bir darbeli ital kardiyo sinyali, dişli pompayı bağımsız olarak yönlendiren bilgisayar yazılımı aracılığıyla ayarlanır. Elde edilen akış dakikada yaklaşık 160 mililitredir. Basınç, bilgisayar tarafından kontrol edilen ayarlanabilir bir basınç regülatörüne sahip seri bir santrifüj pompa tarafından bağımsız olarak ayarlanır ve düzenlenir.Üç ila yedi gün sonra, perfüze edilen her segment için perfüzyonu bitirin. Damarların bağlanmış kısmını atmak için her iki uçtan beş milimetre çıkarın. Daha sonra damarın orta kısmından sabitlemek için beş milimetrelik bir halka kesin.Moleküler analiz için kalan parçaları dondurun. Üçüncü segmenti histoloji ve moleküler analiz için formin içine gömün. Yedi günlük yüksek basınçlı perfüzyon sonrası ven kesitleri histolojik analiz için hazırlandı.Tüm koşullar için, h ve e boyama, ortam katmanındaki SMC'lerin lümenini ve çekirdeklerini kaplayan endotel hücrelerinin çekirdeklerini ortaya çıkardı. Doku elastini görmek için V jel ile boyandığında, perfüze edilmiş damarlarda intimada kalınlaşma, patolojik olarak dışa doğru yeniden şekillenme ve media incelmesi görüldü. Masson'un trikom boyaması, üç kas katmanından sadece birinin iç katmanda biriken düz kas hücrelerini sürdürdüğünü gösterir.Buna karşılık, damarın dış takviyesi SMC dağılımını ve medya yapısını korumuştur Bu tekniğin titiz sepsis altında çalışması gerekir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu sistem kullanılarak iki saatten daha kısa sürede gerçekleştirilebilir. Türbülanslı akış gibi diğer koşullar, laner olmayan akışta ağ takviyesinin verimliliği gibi ek soruları yanıtlamak için test edilebilir.

procedure-for-human-saphenous-veins-ex-vivo-perfusion-external

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kapillaroskopisi doğrudan mikrosirkülasyonu görselleştirmek için bir non-invaziv, nispeten ucuz yöntemdir. Önkol kan akımı tekniği endotel fonksiyonu kabul non-invaziv önlemleri sağlar.

Mikrovasküler ve Endotel Fonksiyonu Noninvaziv Değerlendirilmesi

Bu, bir doku mühendisliği odası içinde mikrocerrahi arteriyovenöz döngü veya akışlı bir pedikül konfigürasyonu kullanarak in vivo vaskülarize doku oluşturmak için bir kılavuzdur. Üretilen vaskülarize dokular, organ rejenerasyonu ve doku defektlerinin değiştirilmesinin yanı sıra ilaç testi ve hastalık modellemesi için de kullanılabilir.

Bir ıntrinsic Vaskülarizasyon tarafından Doku Mühendisliği<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku Mühendisliği Odası

Burada, deterjanlar ve recellularization tarafından periferik kan ve endotel orta perfüzyon kullanarak safen ven decellularization için bir protokol açıklayın.

Decellularization ve Recellularization metodoloji insan safen damarlar için

Burada sunulan alt bacaktan antegrad endoskopik ven hasat için bir protokoldür, hangi güvenle rutin koroner arter bypass greftleme tanıtılabilir. Ven greftleri, bacakların konumlandırılması, vene minimal invaziv erişim ve antegrad endoskopik ven hasadı ile bu standart protokole göre mükemmel greft kalitesi sunar.

Alt Bacaktan Büyük Saphenous Ven Greft Kalitesinin İyileştirilmesi için Köprüven Damar Hasat ile Sinerji Antegrade Endoskopik

Burada bir kursiyerin manyetik demirleme tekniği kullanarak in vitro manuel vasküler rekonstrüksiyonu tek tek tamamlayabildiği bir eğitim ve test sistemi saiyoruz. Sistem aynı zamanda yeniden yapılanma kalitesini test etmek için kullanılabilir.

Vasküler RekonstrüksiyonUn Tüp Bebek Tespini Için Eğitim ve Test Sistemi

Burada, N-butil siyanoakrilat ve metakrioksi sülfolandan (NBCA + MS) oluşan orijinal bir sklerozan ve embolize edici siyanoakrilat bazlı yapıştırıcı kullanarak, şiddetli patolojik reflüden etkilenen büyük safen veni (GSV) ve küçük safen veni (SSV) tedavi etmek için bir protokol sunuyoruz.

N-Butil Siyanoakrilat ve Metakrilokoksi Sülfolana Dayalı Kopolimerik Yapıştırıcı Kullanılarak Büyük ve Küçük Safen Veninin Tıkanması

Geleneksel olarak, alt ekstremite derin ven trombozu (DVT) radyoloji ile yapılan venöz dupleks ultrason ile teşhis edilir. Odaklanmış bakım noktası ultrasonunda (POCUS) uygun şekilde eğitilmiş sağlayıcılar, kritik hastalarda yüksek duyarlılık ve özgüllükle hızlı bir yatak başı muayenesi yapabilir. Bu çalışmada odaklanmış POCUS DVT alt ekstremite muayenesi için tarama tekniği tanımlanmıştır.

Proksimal Alt Ekstremite Derin Venöz Tromboz için Bakım Noktası Ultrason Taraması

İnsan safen ven endotel hücrelerini (hSVEC'ler) izole etmek ve kültürlemek için bir protokol tanımladık. Ayrıca, hSVEC'lerde mekanik gerilimi incelemek için kesme gerilmesi ve gerilme üretmek için ayrıntılı yöntemler sunuyoruz.

İnsan safen ven endotel hücre izolasyonu ve kontrollü kayma stresi ve gerilme seviyelerine maruz kalma

Bu tür yağlı karaciğerleri, yaşlı donörden greft veya kardiyak ölüm (DCD) sonra alınan karaciğerinin Marjinal greftler, sadece kötü konvansiyonel, soğuk statik depolama tahammül. Biz transplantasyon öncesinde marjinal karaciğer greft korunması, değerlendirilmesi, ve onarımı için subnormothermic ex vivo karaciğer perfüzyon yeni bir model geliştirdi.

Subnormothermic Tekniği<em&gt; Ex vivo</em&gt; Karaciğer Depolama, Değerlendirme Perfüzyon ve Marjinal Karaciğer Greft Onarımı

Ex-Vivo Akciğer Perfüzyon (EVLP) insanlarda akciğer transplantasyonu daha kolay kullanılabilir donör havuzu organları değerlendirmek ve genişletmek için yeteneği sağlayarak haline izin verdi. Burada, bir sıçan EVLP programı ve gelecekteki genişleme için bir tekrarlanabilir model izin ayrıntılandırmaları gelişimini açıklar.

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

Öğrenin, insan safen venlerinde intimal hiperplaziyi azaltmak için dış takviye ve yüksek basınçlı perfüzyon kullanarak vasküler biyoloji araştırmalarında damaraft sonuçlarını iyileştirme yöntemlerini.

İnsan Safen Ven Prosedürü Ex vivo Perfüzyon ve Dış Takviye

Daha fazla video keşfet