Name: Aracı Olarak bir lipozomal-kapsüllü Yakın-Kızılötesi floroforun Floresan-söndürme İn Vivo Optik Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Keşfedin lipozomal kapsüllü yakın-kızılötesi florofor kullanarak yüksek duyarlılıklı in vivo inflamasyon görüntüleme yöntemini. Bu teknik biyolojik süreçleri görselleştirmede araştırmacılara önemli avantajlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Deutsche Forschungsgemeinschaft HI-698 / 10-1 hibe ve RU-1652 / 1-1 ile desteklenmiştir. Biz mükemmel teknik yardım ve destekleri için şirket DYOMICS GmbH, Jena için Doreen Mayıs teşekkür ederiz.

NOT: Tüm işlemler, bölgesel hayvan komitesi tarafından ve hayvanların etik kullanımı ile ilgili uluslararası kurallara uygun olarak onaylanmıştır. Malzeme ve Araçların 1. Hazırlık <ol><li> Kendiliğinden oluşan kese dağılımının hazırlanması (SFV) <ol><li> Aşağıdaki fosfolipidlerin stok çözelti çözülür ve hazırlanması: 214 mg / ml, yumurta fosfatidilkolini (EPC), 134 mg / ml kolesterol, 122 mg / ml 1,2-distearoil, sn -glisero-3-phosphoethanolamine- A ^ - [metoksi (polietilen glikol) -2000] (amonyum tuzu) (mPEG 2000 -DSPE) ve 2 mg / ml 1,2-dioleoil-sn--glisero-3-phosphoethanolamine- A ^ - (7-nitro-2-1,3-benzoksadiazol-4 Cam şişeler içinde kloroform ve mağaza il) (amonyum tuzu) (NBD-DOPE). </li><li> Yuvarlak tabanlı bir şişe içinde, yaklaşık 3 mi kloroform vermek ve EP oluşan lipozomlar elde etmek için yuvarlak dipli bir şişeye fosfolipid stok çözeltisinin uygun hacim transferiC: 3: 0.5 Kol: 6.5 bir mol oranında, mPEG 2000 -DSPE. Lipozomlar çift floresan etiketleme için lipit çözeltisine 0,3 mol% NBD-DOPE ekleyin. </li><li> Bir döner buharlaştırıcı kullanılarak 55 ° C&#39;de indirgenmiş basınç altında (300 mbar) altında organik fosfolipid çözeltisinden kloroform buharlaştırın. </li><li> Homojen bir fosfolipid filmi oluşturulduktan sonra, kalıntı kloroform para çıkarmak için 1-2 saat boyunca 10 mbar basınç azaltır. </li><li> Kloroform buharlaştırılır iken, 10 mM Tris tamponu pH 7.4 içinde DY-676-COOH (6,181 uM) çözülür ve sıvı azot ile birlikte bir Dewar kabı doldururlar. Ultrasonik banyoda açınız ve 50 ° C&#39;ye ayarlanmış. </li><li> DY-676-COOH (6,181 uM) bir kendiliğinden oluşan kese (SFV) dağılım oluşana kadar kuru fosfolipid filmi ve kuvvetli bir şekilde girdap hidrat yuvarlak tabanlı bir şişeye çözeltinin uygun hacmi (0.5-1 mi) aktarın. Fosfolipidlerin tüm lipit kaybını önlemek için dağınık emin olun. </li><li> Dikkatle transfer yuvarlak dipli sıvı azot içine SFV dağılımını içeren şişe ve 3-5 dakika dağılımını dondurma. Daha sonra dağılım çözülme 1-2 dakika boyunca kuvvetli bir şekilde dağılmasını vorteks 50 ° C&#39;de ultrasonik bir banyo içine tabanı yuvarlak bir şişe yerleştirin. Yedi dondurma ve çözülme döngüleri toplam yapım, bu prosedürü altı kez tekrarlayın. </li></ol></li><li> SFV&#39;nin Ekstrüzyon homojen lipozom veziküller oluşturmak için <ol><li> 1 ml şırınga (enjektör-a) içine SFV dispersiyon aktarın ve şırınga-b bir LiposoFast-Temel ekstrüder kullanılarak 100 nm&#39;lik polikarbonat zardan dispersiyon a&#39;ya. </li><li> Geri şırınga-a içine şırınga-b dağılımını a&#39;ya, sonra döngüden on kez tekrarlayın. Nedeniyle ekstrüzyon, zaman ile belirgin bir dispersiyona bulanık bir görünüm şırınga değişir çözelti. On döngüleri (yirmi tek ekstrüzyon adım) cihazdan şırınga-b kaldırmak ve steril içine şırınga doğrudan son kez dağılımını a&#39;ya sonra1.5 ml&#39;lik tepkime tüpü. </li></ol></li><li> Lipozomal saflaştırılması serbest boyadan DY-676-COOH kapsüllü <ol><li> 10 mM Tris tamponu, pH 7.4 (kolon uzunluğu 28 cm, çap 0.8 sm), batırılmış G25 boncuklar kullanılarak, bir jel kromatografi kolonu hazırlayın. </li><li> Jel matrisi içine örnek drenaj jel yatağa çekilmiş vezikül dağılımı 0.5 ml aktarın ve izin. </li><li> 10 mM Tris tamponu pH 7.4 (Şekil 1A) ile lipozomlar Zehir ve sütun tamamen ücretsiz boya drene kadar sütun yıkayın. Ihtiyaç olması halinde, toplamak ve üreticinin talimatlarına göre tuzsuzlaştırma ve dehidrasyon ile ücretsiz boya geri dönüşüm. </li><li> Daha sonra 10 steril mM Tris tamponu, pH 7.4 içinde yeterli hacim içinde eritilmek, ultra santrifüje (200,000 x g, 8 ° C &#39;de 2 saat) ile elüte lipozomlar konsantre edilir. </li></ol></li><li> Kapsüllenmiş DY-676-COOH konsantrasyonunun miktarının belirlenmesi <ol><li> DY-676-COOH (0, 82, 124 eritilmesi ile bir kalibrasyon eğrisi hazırlamak,, 10 mM Tris tampon maddesi içinde 247, 494, 988 nM), pH 7.4,% 0.1 Triton X100 ihtiva etmektedir. </li><li> Veziküller yok etmek ve kapsüllenmiş boya serbest bırakmak için% 1 Triton X100 içeren 100 ul Tris tamponu içinde oda sıcaklığında 5 dakika boyunca lipozomların, 2 ul (50 mmol / lt stokunun, 100 nmol son lipid) içinde çözülür. Daha sonra% 0.1 bir son Triton-X100 konsantrasyonda 10 mM Tris tamponu, pH 7.4 ile seyreltilmiş numuneleri (h / h) 1 ml&#39;lik bir toplam hacim adrestir. Nüsha halinde tüm örnekleri hazırlayın. </li><li> Bir uyarma λ = 645 nm ve emisyon λ = 700 nm emilimi ve emisyon tüm numunelerin (ücretsiz DY-676-COOH ve Triton-X100 tedavi lipozomlar) ölçün. Kurmak ve kapsüllenmiş boyanın konsantrasyonu belirlemek için serbest bir boya kalibrasyon eğrisi kullanır. </li></ol></li><li> Lipozom karakterizasyonu <ol><li> Dinamik ışık saçılması ile lipozomların boyutları ve zeta potansiyeli belirlemek. Ac steril filtre (0.2 um), 10 mM Tris tamponu, pH 7.4 ile lipozomal örnekleri seyreltin100-300 uM (lipit) olarak oncentration. Düşük hacimli tek kullanımlık bir küvet içinde seyreltilmiş örnekleri aktarın ve üretici talimatlarına göre numune ölçer. </li><li> Standart protokollere göre lipozomal veziküllerin boyutu, bütünlüğünü ve homojenliği kanıtlamak için elektron mikroskobu ile lipozomlar karakterize etmektedir. </li></ol></li></ol> 2. Floresan-söndürme Doğrulama ve Hazırlanmış Liposome&#39;lara Aktivasyon <ol><li> Floresans ve aktivasyon fiziko kimyasal analizi <ol><li> Dudak-Q iki 1.5 ml tüpler ve ücretsiz DY-676-COOH için 2 tüpleri hazırlayın. Aktarım, 100 nmol toplam lipitler uygun tüplere (kapsül haline DY-676-COOH 138 ug / ml içeren 42 mmol / L olarak Dudak-S stok çözeltisi 2.38 ul). Dudak-Q boya içeriği (138 ug / 1.000 ul kullanılan Dudak-Q ul x 2.38 örneğin sonuçları 0.38 mikrogram) ücretsiz DY-676-COOH eşdeğer aktarın. Bir küvet inkübe4 ° C &#39;de her bir prob e ve -80 ° C&#39;de gece boyunca (16 saat), ikinci boru dondurma. </li><li> 30 ° C bir ısıtma bloğu ısıtın. Ezilmiş buz ile soğutma kutusu doldurun ve oda sıcaklığına kadar, 10 mM Tris tampon maddesi pH 7.4 bir kısım dengeye getirin. </li><li> 4 ° C ila probları çıkarın ve 5 dakika boyunca 30 ° C &#39;de -80 ° C ila problar (ışıktan korunması için bir alüminyum folyo ile sarılmış) ve hızlı bir şekilde çözülme oda sıcaklığında dengeye getirin. (Ayrıca ışıktan korumak için aliminyum folyoya sarılmıştır), oda sıcaklığında aktarmadan önce 1 dakika boyunca buz üzerinde eritildi probları soğutun. </li><li> 100 ul son hacim olması için sondaların her biri için, 10 mM Tris tampon (pH 7.4) ilave edilir ve 10 dakika boyunca oda sıcaklığında bütün sondalar dengeye getirin. </li><li> Pipet 80 düşük hacimli cam küvetin içine her sonda ul ve bir spektrometre üzerinde 400-900 nm her sonda emilimini ölçmek. Bunlara karşılık gelen tüplere probu dönün. </li><li> Uygun bir cam küvet içinde her bir prob 80 ul transferve 674 nm heyecan verici prob tarafından spektroflorometre floresan emisyon ölçümü ve 694-800 nm floresan ölçüm. </li></ol></li><li> Bir hücresel kabul etme ve floresan aktivasyon <ol><li> Standart koşullar (37 ° C,% 5 CO2 ve% 95 nemlendirilmiş atmosfer içinde) &#39;e uygun mukabil kültür ortamı aşağıdaki hücre çizgileri almak ve kültür. Burada, mürin makrofaj hücre çizgisi J774A.1 kullanımı (Dulbecco tadil edilmiş Eagle ortamı,% 10 (h / h) fetal dana serumu ile takviye edilmiş), insan glioblastoma hücre çizgisi olan U-118 mg (temel vitaminler ve% 10 gliserol içeren MEM (h / h) fetal dana serumu) ve insan fibrosarkoma hücre çizgisi, HT-1080 (% 5 FCS ile RPMI). </li><li> Poli-L-lisin ile kaplayın 8 oyuklu bölmeli lamlar (her bir oyuğa 100 ul% 0.001 poli-L-lisin ilave edin ve 10 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edilir. Aspire çözeltisi ve bölmeli lamlar en az 4 için kuruması steril bir tezgah üzerinde oda sıcaklığında saat. odacık slaytları durulayın 3gerekli kadar 200 ul Hank tamponlu salin solüsyonu ile katı daha sonra 4 ° C de parafin, alüminyum folyo ve mağaza ile kapatın. </li><li> Odası slaytlar kuruyor iken gerekli kadar, 4 ° C&#39;de lipozomlar ve boya çözüm ve mağaza filtre sterilize. </li><li> In vivo, NIR floresan görüntüleme sisteminde tüm vücutla sistemi alım analizi için 3 test hücre çizgilerinin her biri için 5, küçük kültür şişeleri (toplam 15 şişeler) hazırlanması. Tohum, 2 x 10 6 J774A.1 U-118 mg ve (beşe olarak) ilgili kültür ortamına 5 ml kültür şişesi başına HT-1080 hücreleri ve 16-24 saat süre ile büyür. , Kültür şişeleri paralel sırasıyla odası slayt 2 kuyuları her hücre hattı (J774A.1 ve HT-1080) veya 20.000 hücreleri (U-118 mg) 30.000 hücrelerini tohum ve 16-24 saat 500 ul kültür ortamında büyümek . </li><li> Bir sonraki gün, hücre hattı başına slaytı üzerinde her bir hücre hattı bir oyuğuna 2 şişelere Dudak-Q, 100 nmol (nihai yağ miktarı) ekleyin.Hemen 1 4 ° C&#39;ye hücre hattı başına şişeyi geri inkübatör ikinci şişeyi aktarmak. NOT: odacık slaytlar üzerinde konsantrasyon yapma, prob hacmi şişelere ilave ve oda slaytlar aynı 10 kat daha yüksek (5 ml 500 ul kültür ortamı için). Mikroskobik algılama şişeler hücre topakları görüntülü NUR floresan görüntüleme sistemi daha az duyarlı olduğu için bu gereklidir. </li><li> Hücre hattı başına slaytı üzerinde her bir hücre hattı bir oyuğuna 2 şişelerinde hücrelere Dudak-Q boya içeriğinin eşdeğer bir konsantrasyonda serbest DY-676-COOH eklenmekte, daha sonra, hemen hücre çizgisi başına 1 bir balona 4 ° C&#39;de (enerji tüketimi) ve arka inkübatör slaytı ile birlikte başka bir şişeye alın. Karşılık gelen koşullar altında, 24 saat süre ile, tüm hücreleri inkübe edin. prob olmadan şişede hücreler işlemden geçirilmemiş kontrol vermektedir. </li></ol></li><li> NIRF görüntüleme ve yarı-kantitatif analizi <ol><li> 24 saatlik bir bekletme süresinden sonra, Hanks ile hücreler 2 defa yıkayarak şişelerinde hücreler hasat 500 ul tüplerinde tuz çözeltisi (HBSS), daha sonra santrifüj (200 xg 5 dakika) ile 500 ul HBSS içinde hücreleri ve pelet kazıma tamponlu. </li><li> Uyarma (615-665 nm) ve emisyon (&gt; 700 nm olarak kesme) için hücre pelet (ve HBSS) bir NIRF görüntüleyici ve görüntü kullanarak filtreleri tüpleri yerleştirin. </li><li> Otofloresans düşeriz ve üretici talimatlarına göre otofloresansı karşı hedefin yoğunluğunu değerlendirmek. Bu ölçümler birbirleri arasında karşılaştırılabilir, böylece pozlama süresi, kamera kazanç, binning ve bit derinliği ölçeklendirme sonra sayım düzeylerini temsil eden ortalama sinyali olarak floresan yoğunluğu (ölçekli sayım / sn), yarı-kantitatif seviyelerini verecektir. </li></ol></li><li> Konfokal mikroskopik analizler <ol><li> 24 saat inkübasyondan sonra, 500 ul HBSS ile 2 kez yıkayarak odası slaytlar üzerinde hücreleri hasat. </li><li> Ce Fix200 ul HBSS, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 3.7 (h / h) formaldehid içeren rf. </li><li> Fiksasyon devam ederken, DNA leke montaj çözümü ile, Hoechst-33258 01:50 sulandırmak. </li><li> Tespit edildikten sonra, daha sonra HBSS ile hücreleri 2 kez yıkayın cam slaytlar gelen odaları ayrı. Kamara slayt kuyulara gelen her yerinde DNA leke içeren 50 ul montaj çözümü ekleyin. RT (karanlık) saydam tırnak cilası ve havada kurumaya 10 dakika boyunca kenarları mühür, cam kapak slipleri ile hücreleri örtün. </li><li> Uygun bir floresan mikroskop veya konfokal mikroskop görüntü hücreleri. Çekirdekler (Hoechst-33258: Uyarma 405 nm, emisyon 420-480 nm) karşılık gelen bileşenlerin görünüm için aşağıdaki uyarma ve emisyon ayarlarını kullanın. NBD-DOPE (lipozom, lipid: eksitasyon 488 nm, emisyon 530 nm). DY-676-COOH (NUR floresan boya: Uyarma 633-645 nm, emisyon 650-700 nm). NOT: emin olun floresan mikroskop birgurupları yüksek 630 nm&#39;den daha dalga boylarının uyarılma ve emisyon izin uygun filtreler ile donatılmıştır. </li></ol></li></ol> 3. iltihabın canlı Floresans görüntülenmesi Lipozom temelli <ol><li> Hayvanlar ve malzemelerin hazırlanması <ol><li> Ev 8-12 haftalık yiyecek ve su ad libitum ile, standart koşullar altında, yaklaşık 36 g ağırlığında, erkek NMRI fareleri. </li><li> Yedi gün önce deney başlamadan önce, doku otoflüoresan azaltmak için tüm fareler düşük pheophorbide diyet verir. </li><li> Yirmi dört saat, her bir deney başlamadan önce, arzu edilen alanda, fareler tıraş (örneğin, arka ayak ödemi görüntüleme arzu edildiği takdirde, tüm arka bölge). </li><li> Hayvanlar tartılır ve prob miktarını hesaplamak Dudak-Q kullanılan içeriğini boya ağırlık ve ücretsiz DY-676-COOH (eşdeğeri kg başına) 10 ľmol (lipit konsantrasyonda fare (Dudak-Q ve Dudak-dK&#39;un başına enjekte edilecek) . </li><li> Resim hayvanlardaHücre pelet için kullanılan aynı ayarlarla bir tüm vücut NUR Floresan görüntüleyici. Bu ölçüm, hayvanların otoflüoresanı içerir. </li><li> 1 ml izotonik tuzlu su çözeltisi, 10 mg zimosan-A çözülür ve 4 ° C de bir gece boyunca muhafaza ediniz. </li></ol></li><li> Enflamasyon ve in vivo NIRF görüntüleme İndüksiyon <ol><li> Aşağıdaki çözümleri içeren fare başına 3 şırınga hazırlayın. 50 ul zimosan-bir (10 mg / ml) ve 50 ul izotonik tuzlu su çözeltisi ile ikinci şırınga ile bir şırınga doldurun. Kontrol hayvanlar için Dudak-Q ve Dudak-dK (10 mmol / kg ağırlık (lipit)) (Dudak-Q gibi konsantrasyon) deney hayvanlarında ve ücretsiz DY-676-COOH için belirlenmiş sayede sondalar, üçüncü şırınga doldurun. Sondalar 150 ul son hacim olması için steril HBSS ile seyreltildi olduğundan emin olun. </li><li> (Kuruluğu önlemek ve derinden uykuda kadar% 2 izofluran ile hayvanları uyutmak ve pençeleri üzerinde dokunulduğunda tepki yok etmek için hayvanların gözleri göz kremi uygulayınBu) yaklaşık 2 dakika sürer. </li><li> (Hala anestezi altında) sıcak minder üzerinde fareyi yerleştirin ve sağ arka bacağında zimosan-A çözüm deri altına ve sol arka bacak üzerinde tuzlu su çözeltisi enjekte. (T 0 saat = gibi) enjeksiyonu / ölçüm kayıt süresi hemen intravenöz prob enjekte ve daha sonra sonra görüntü hayvan. Görüntü küp olarak ortaya çıkan görüntüleri kaydetmek ve tüm diğer hayvanlar ve ilgili problar için yukarıdaki adımları tekrarlayın. </li><li> Görüntü hayvanlar ölçüm odasının aşaması (örneğin, altında sıcak mat koyarak) sıcak olduğundan emin her 10 saat sonrası enjeksiyon için 2 saat ve daha sonra 24 saat sonrası enjeksiyon, hipotermi önlemek için. Her ölçümden sonra, yiyecek ve su ad libitum bir kafese hayvanları yerleştirin ve ılıman bir hayvan odasında kafes yerleştirin. Hayvanlar artık dokunmak tepki kadar, daha sonra, 5-10 dakika boyunca karbon dioksit ile euthanize yapma% 2 izofluran ile ilk anestezi ile hayvanlar EuthanizeEmin hayvanlar tamamen nefes durdurmak ve rigor mortis oluşur. </li><li> Standart çevrimiçi değerlendirilebilir protokoller (http://www.freebookez.com/mouse-dissection-lab-report/) ve görüntü organları göre fareler parçalara ayır. </li><li> İlk hayvanlarda (karışmama) (serum fizyolojik ile arka bacak sol) otofloresansı ilgi ve iltihaplı bölgenin hedef floresan (zimosan-A ile sağ arka bacak) sonra atama bölgelerin genel floresan indirilmesiyle üreticinin talimatlarına göre ölçüm sonuçlarını değerlendirmek. </li></ol></li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Lipozomlar aynı zamanda flüoresan boyalar için iletim sistemleri olarak kullanılabilir olduğundan, bunlar hedef hastalıklar görüntüleme sağlar. örneğin NIRF boya, burada kullanılan DY676-COOH, gibi floresan boyalar yüksek konsantrasyonlarda kapsülleme tutulmuş boyanın flüoresan söndürme yüksek düzeyde olur. Floresan söndürme, yüksek konsantrasyonda birçok floroforlar görülen bir olgu hedef alan bir yüksek hassasiyet ve güvenilir algılama talep edilen in vivo görüntüleme uygulamaları, birkaç istismar ed...

Lipozomlar, yoğun bir şekilde araştırılmıştır ve klinik uygulamalarda 1,2 en, biyo-uyumlu biyomedikal ilaç verme sistemlerinden biri olarak hizmet edilmiştir. Bunlar ağırlıklı olarak doğal hücre zarlarının bölümleri taklit eden biyolojik olarak uyumlu bileşikler, her ikisi de fosfolipidler ile kolesterol, oluşmaktadır. Hidrofilik maddelerin sulu iç kısım içinde kalan edilebilir iken, lipofilik maddeler, lipozomal fosfolipid çift-katlı 3 içine dahil edilebilir. Lipozomların, sulu iç kısmında maddelerin kapsüllenmesi, in vivo bozulmaya karşı koruma sağlar ve aynı zamanda tümör hücreleri yok etmeyi amaçlayan, örneğin kemoterapi için hastalıkların tedavisi için kullanılan sitotoksik ilaçların toksik etkileri ana sistemi engeller. polietilenglikole gibi polimerler ile lipozomal yüzeyinin modifikasyonu (PEGylation) ayrıca nedeniyle sterik stabilizasyon 4 in vivo lipozomal kan dolaşımı süresini uzatır. Moreover, lipozomlar gibi proteinler 5,6, hidrofil maddeler 7,8 ve enzimler 9 gibi çeşitli maddelerin yüksek konsantrasyonları çekilmek olabilir. Bu nedenle kanser tedavisi 4 doksorubisin gibi sitotoksik ilaçların verilmesi için onların onayını hak güvenilir klinik tedavi ve tanı araçları hizmet vermektedir. Dolayı esneklik, lipozomlar da teşhis ve görüntü kılavuzluğunda cerrahi amaçlı fluorochromes ile yüklenebilir. Floresan görüntüleme sağlayan bir maliyet-etkin ve ancak, bazı temel gereksinimleri talep in vivo teşhis aracı non-invaziv. Bu, in vivo görüntüleme için en uygun fluorokromun ışık dağılımı ve saçılma yanı sıra sudan kaynaklanan doku otofloresansı ve hemoglobin düşük aralıkta karakteristik absorpsiyon ve emisyon maksimum seviyesine sahip olduğu gösterilebilir. Böylece, bu tür sondalar 650 nm ve 10 900 arasında kendi abs / em maxima var.<html> Opsonizasyon ve hızlı temizleme büyük ölçüde, in vivo görüntüleme 11 için bunların uygulanmasını kısıtlar; gibi bu yanı, in vitro ve in vivo olarak florokromlar stabilitesi çok önemlidir. Bu tür zayıf kararlılık ve düşük hassasiyet ya da indosiyanin yeşilinin (ICG) 12-16 görüldüğü gibi hedef organlarda üzerinde sitotoksik etkiler gibi diğer etkiler, istenmeyen ve in vivo görüntüleme için sondalar tasarlarken dikkate alınması gerekir. Bu gözlemler, birçok ön-klinik NIR florokromlar, nanopartiküller olarak enflamatuar süreçler, kanser, in vivo görüntüleme ve görüntü kılavuzlu ameliyat 17-20 için yeni teknikler aktif gelişmesine yol açmıştır. En klinik öncesi NIRF (yakın kızıl ötesi floresan) stabilitesi rağmen boyalar in vitro karaciğer ve böbrek yoluyla hızlı bir perfüzyon ve temizlik hastalıkları ve inflamatuar süreçlere in vivo optik görüntüleme kullanılmasını engellemektedir. ntent &quot;&gt; Bu nedenle örneğin florokrom kapsüllenmesi için bir protokol mevcut iyi karakterize yakın kızılötesi lipozomlar içinde oldukça yüksek konsantrasyonlarda 21 kendi kendini söndürme eğiliminden bilinen fluoresan boya DY-676-COOH. Yüksek konsantrasyonlarda H dimer oluşumu ve / veya bir pi-istiflenmesi, flüorofor molekülleri artışı arasındaki düşük bir konsantrasyonda. alan florokrom moleküller arasında Förster rezonans enerji transferi (FRET) birbirlerinin Förster yarıçapı sonucu içinde bulunan florofor molekülleri arasındaki etkileşimi ve böylece bir pi-istifleme etkileşimi önleme ve &#39;H-dimer oluşumu ve yüksek floresan emisyonu. Yüksek ve düşük konsantrasyonu ve eşlik eden floresans ve aktivasyonu arasında geçiş optik görüntüleme 22 yararlanılabilir gelecek vaat eden bir stratejidir. NIRF boyanın yüksek konsantrasyonlarda Bu bağlamda, sarma Lipozomlar, sulu iç DY-676-COOH daha falıdırserbest boya daha in vivo görüntüleme için vorable. Yöntemin meydan boya yüksek konsantrasyonlarda kapsüllenmesi kaynaklanan faydaların doğrulama, ikincisi doğru kapsülleme tüm ilk ve yatıyor. Boya düşük konsantrasyonlarda olmayan bir söndürüldü lipozom formülasyonu ile ücretsiz boya o ile söndürüldü lipozomlann görüntüleme özelliklerinin karşılaştırılması ve vazgeçilmezdir. Biz lipozomlarda DY-676-COOH söndürme konsantrasyonlarının kapsülleme mümkündür alternatif donma ve çözülme döngüleri ile birlikte basit, ama son derece etkili bir film hidrasyon ve ekstrüzyon protokolü tarafından gösteriyor. Bu tür ters fazlı buharlaştırma yöntemi 23 olarak etanol enjeksiyon metoduna 24 gibi lipozomlar elde etmek için kullanılan diğer yöntemler, bir çok hidrofilik madde için yüksek bir kapsülleme randımanı olan lipozom preparatı sağlamaktadır. Bununla birlikte, maddenin doğası kapsülleme etkinliğini etkileyebilir haline getirilir. Sonuç olarak,Burada sunulan film, hidrasyon ve ekstrüzyon protokolü DY-676-COOH enkapsülasyonunda en yüksek verimi ortaya çıkardı. Birkaç saat içinde iltihap işlemlerinin çalışmasına izin verir DY-676-COOH, bir zimosan kaynaklı ödem modelinde, lipozomal kapsülleme yararlarını göstermek için kullanılmıştır. Burada, bu kapsüllenmiş DY-676-COOH konsantrasyonu yüksek olan lipozomlar, serbest boya ya da düşük boya konsantrasyonları olmayan söndürüldü lipozom formülasyonuna göre ateşli süreçlerin ve in vivo optik görüntüleme bütün vücut için daha uygun olduğu gösterilmiştir. Böylece, alt protokol söndürüldü floresan lipozomlar ve in vitro ve in vivo olarak hem aktivasyonu ve görüntüleme potansiyelinin doğrulama üretmek için hızlı ve basit bir yöntem temin etmektedir.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Lipozomların</kuvvetli></td></tr><tr><td>yumurta fospahtidilkolin</td> hazırlanması için malzeme ve ekipmanlar <td>Avanti Polar Lipids</td><td>840051P</td><td>Kloroformda çözün ve cam şişelerde saklayın (214 mg / ml)</td></tr> <tr><td>kolesterol</td><td>Sigma</td><td>C8667</td><td>Kloroformda çözün ve cam şişelerde saklayın (134 mg / ml)</td></tr><tr><td>1,2-distearoil-sn-glisero-3-fosfoetanolamin-N-[metoksi (polietilen glikol)-2000] (amonyum tuzu)Avanti</td> <td>Polar Lipids</td><td>880120P</td><td>Kloroformda çözün ve cam şişelerde saklayın (122 mg / ml)</td></tr> <tr><td>1,2-dioleoil-sn-glisero-3-fosfoetanolamin-< > N-(7-nitro-2-1, 3-benzoksadiazol-4-il) (amonyum tuzu)</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>810145P</td><td>Kloroformda çözün ve cam şişelerde saklayın (2 mg/ml</td></tr><tr><td>)Sartorius MC1 (d = 0.01 mg)</td><td>Sartorius AG</td><td>Research RC 210 P</td><td>, fosfolipidleri tartmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Rotavapor</td><td>B&uuml; chi Labortechnik AG</td><td>R-114</td><td>fosfolipid film</td></tr><tr><td>Waterbath</td><td>B&uuml'un hidrasyonu için kullanılır; chi Labortechnik AG</td><td>R-481</td><td>fosfolipid film</td></tr><tr><td>Vakum Kontrol Cihazı</td><td>B&uuml'un hidrasyonu için kullanılır; chi Labortechnik AG</td><td>B-720</td>, <td>fosfolipid film</td></tr><tr><td>Vacobox</td><td>B&uuml'un hidrasyonu için kullanılır; chi Labortechnik AG</td><td>B-177</td><td>fosfolipid filmin hidrasyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Sirkülasyon Soğutucu</td><td>LAUDA DR. R. WOBSER GMBH & CO. KG</td><td>WKL 230</td><td>fosfolipid filmin hidrasyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>DY-676-COOH</td><td>Dyomics GmbH</td><td>676-00</td><td>10 mM Tris'te çözün ve stoğu -20 ° C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>Tris- (Hidroksimetil) -aminometan</td><td>Applichem</td><td>A1086</td><td>tamponu 10 mM, pH 7.4</td></tr><tr><td>Triklormetan</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>Y015.2</td><td>lipozom hazırlığı için kullanılır</td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Merck Eurolab GmbH</td><td>USR 170 H</td><td>lipozom hazırlığı için kullanılır</td></tr><tr><td>Vortex Genie 2 (Pop-off Cup, No. 146-3011-00)</td><td>Scientific Industries Inc.</td><td>Lipozom hazırlama için kullanılan</td> <td>SI-0256</td></tr><tr><td>Sephadex G25 medium&nbsp;</td><td>GE Healthcare Europe GmbH</td><td>17-0033-01</td><td>lipozom saflaştırması için kullanılır</td></tr><tr><td>Triton X100</td><td>Ferak Berlin GmbH</td><td>505002</td><td>lipozomları yok etmek için kullanılır&nbsp; boya miktar tayini için</td></tr><tr><td>LiposoFast-Basic</td><td>Avestin Inc.</td><td></td><td>lipozomların ekstrüzyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Polikarbonat filtre membranı, 100 nm (Whatman Nucleopore Trans Etch Membran, NUCLEPR PC 19 MM, 0.1 U)</td><td>VWR</td><td></td><td>LiposoFast-Basic</td></tr><tr><td>Fluostar Optima</td><td>BMG ile</td> lipozomların ekstrüzyonu için kullanılır Boya <td></td><td>miktar tayini için kullanılan</td></tr><tr><td>Zetasizer Nano ZS</td><td>Malvern</td><td></td><td>lipozom boyutu ve zetapotansiyelin belirlenmesi için kullanılır</td></tr><tr><td>Ultrasantrifüj&nbsp;</td><td>Numunelerin konsantrasyonu için kullanılan</td> <td>Beckmann Coulter GmbH</td><td>XL 80</td></tr><tr><td>Numunelerin</td><td></td><td></td><td></td> konsantrasyonu için kullanılan Rotor Beckmann Coulter GmbH SW 55 TI</tr><td colspan="4">Saccharomyces cereviciae'den lipozom ve optik görüntülemenin değerlendirilmesi için malzeme ve ekipmanlarZymosan-A Sigma Z4250-250MG inflamasyonun indüksiyonu için kullanılır <tr></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzotonik Salin (% 0.9)</td> <td>Fresenius GmbH</td><td>PZN-2159621</td>, <td>Zymosan-A</td></tr><tr><td>İzofluran buharlaştırıcının</td> seyreltilmesi için kullanılır, <td>Ohmeda Isotec 4</td><td></td>, <td>hayvanları anestezi yapmak için kullanılır</td></tr><tr>,<td>Isoflurane</td><td>Actavis GmbH&nbsp;</td><td>PZN-7253744</td><td>anestezi</td></tr><tr><td>Thermo Mat Pro 20 W</td><td>Şanslı Sürüngen</td><td>61202-HTP-20</td><td>anestezi sırasında hayvanları sıcak tutmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Omnican-F (1 ml enjeksiyon)&nbsp;</td><td>Probların deri altı ve intravenöz uygulaması için kullanılan</td> <td>Braun</td><td>PZN-3115465</td></tr><tr><td>Panthenol göz kremi</td><td>Jenapharm</td><td>PZN-3524531</td><td>anestezi sırasında hayvanların gözlerinin kuruluğunu önlemek için kullanılır</td></tr><tr><td>Hanks tamponlu tuzlu su çözeltisi</td><td>PAA Laboratories /Biochrom AG</td><td>L2045</td><td>Mg2+, Ca2+ ve fenol kırmızısı olmadan. Probların seyreltilmesi ve hücrelerin yıkanması için</td></tr><tr><td>8 Kuyulu oda slaytları</td><td>BD Biosciences</td><td>354108</td><td>hücre kültürü ve ardından mikroskopi için kullanılır;</td></tr><tr><td>Hücre kültürü şişeleri</td><td>Greiner BioOne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü ortamı</td><td>Gibco (life technologies GmbH)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal buzağı serumu&nbsp;</td><td>İnvitrojen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-Lizin çözeltisi (% 0.01, 50 < ml)</td> <td>Sigma</td><td>P4832</td>, <td>hücre kültürü odası slaytlarını kaplamak için kullanılır,</td></tr><tr><td>Mountant Permafluor</td><td>ThermoScientific&nbsp;</td><td>S21022-3</td><td>Mikroskopi için montaj çözümü</td></tr><tr><td>Hoechst-33258</td><td>Mikroskopi için AppliChem</td><td></td><td>DNA boyası</td></tr><tr><td>Hera-Safe</td><td>Heraeus Instruments</td><td></td><td>hücre kültürü için kullanılan steril çalışma tezgahı</td></tr><tr><td>HERA hücresi</td><td>Heraeus Instruments</td><td></td><td>Hücre kültürü için kullanılan inkübatör</td></tr><tr><td>LSM510-Meta</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Konfokal mikroskopi</td></tr> <tr><td>için kullanılırMaestro-TM in vivo floresan görüntüleme sistemi</td><td>CRi, Woburn</td><td></td>, <td>küçük hayvanların tüm vücut floresan görüntülemesi için kullanılır</td></tr><tr><td>Spektrofotometre (Ultrospec 4300 pro UV)</td><td>Absorpsiyon ölçümü için kullanılan</td> <td>GE Healthcare</td><td></td></tr><tr><td>Spektroflorometre (Jasco FP-6200)</td><td></td><td>Floresan emisyonu</td> ölçümü için kullanılan Jasco<td></td></tr><td colspan="4">Animals<tr></td></tr><tr><td>NMRI fareleri (8-12 haftalık, erkek)</td><td>Elevage Janvier, Fransa</td><td></td><td>inflamasyon denemeleri için kullanılır</td></tr></tbody></table>

aracı olarak bir lipozomal-kapsüllü yakın-kızılötesi floroforun floresan-söndürme İn vivo optik görüntüleme

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Optik görüntüleme, çok çeşitli tanı yöntemleri sunar ve biyomedikal görüntüleme için bir araç olarak büyük ilgi görmüştür. Şu anda mevcut olan çok sayıda görüntüleme tekniğine ve enstrümantasyondaki ilerlemeye rağmen, in vivo görüntüleme için uygun olan son derece hassas problara hala ihtiyaç vardır. Mevcut preklinik floresan probların tipik bir sorunu, görüntüleme hassasiyetlerini azaltan in vivo hızlı temizlenmeleridir. Hızlı klerensi atlatmak, hedef bölgedeki boya moleküllerinin sayısını artırmak ve böylece arka plan otofloresansını azaltmak, yakın kızılötesi floresan boyanın, lipozomlarda DY-676-COOH'nin kapsüllenmesi ve inflamasyonun in vivo görüntülenmesi için potansiyelinin doğrulanması yapıldı. DY-676, yüksek konsantrasyonlarda kendi kendine sönme özelliği ile bilinir. Önce kendi kendine su verme için uygun konsantrasyonu belirledik ve daha sonra bu su verme konsantrasyonunu PEGile lipozomların sulu iç kısmına kapsülledik. Lipozomların su verme ve aktivasyon potansiyelini doğrulamak için, kapsüllenmiş boyayı etkilemeden lipozomal membranların hasar görmesine yol açan sert bir dondurma yöntemi kullanıyoruz. Yüksek düzeyde floresan söndürme ile karakterize edilen lipozomlar Lip-Q olarak adlandırıldı. Farklı hücre dizileri ile yapılan deneylerle, Lip-Q alımının ağırlıklı olarak fagositoz ile olduğunu ve bunun da fare modellerinde inflamasyonun in vivo görüntülenmesi için bir araç olarak potansiyelinin karakterizasyonunu sağladığını gösterdik. Ayrıca, in vivo inflamasyonun optik görüntülemesinde Lip-Q'nun potansiyelini doğrulamak için farelerde zimozan kaynaklı bir ödem modeli kullanıyoruz. Enflamasyonun neden olduğu gelişmiş geçirgenlik ve tutma (EPR) etkisine bağlı olası alım göz önüne alındığında, düşük, söndürülmemiş DY-676-COOH (Lip-dQ olarak adlandırılır) ve serbest DY-676-COOH konsantrasyonuna sahip her zaman açık bir lipozom formülasyonu Lip-Q ile karşılaştırıldı hayvan deneylerinde.

lipozomlar, sulu iç Burada kullanılan NIRF boya DY676-COOH gibi floresan boyalar yüksek konsantrasyonlarda kapsülleme floresans yüksek bir seviyeye neden olur. Floresan söndürme, yüksek konsantrasyonda birçok floroforlar görülen bir fenomen, hedef alan bir yüksek hassasiyet ve güvenilir algılama talep edilen in vivo görüntüleme uygulamalarında çeşitli istismar edilebilir. Lipozomların kullanımı, aynı zamanda, in vivo uygulamalar için gerekli olan boya koruma sağlar. Lipozomların ayrıntılı bir ...

in vivo görüntüleme için floroforların kullanımı, opsonizasyon, hızlı klirens, düşük saptama hassasiyeti ve konakçı üzerindeki sitotoksik etkiler nedeniyle büyük ölçüde sınırlanabilir. Floroforların lipozomlardaki film hidrasyonu ve ekstrüzyon ile kapsüllenmesi, floresan söndürme ve korumaya yol açar, bu da yüksek algılama hassasiyeti ile in vivo görüntülemeyi mümkün kılar.

Aracı Olarak bir lipozomal-kapsüllü Yakın-Kızılötesi floroforun Floresan-söndürme İn Vivo Optik Görüntüleme

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous ...

Bu prosedürün genel amacı, inflamasyonun yüksek hassasiyetle in vivo olarak görüntülenmesini sağlayan bir aktivat lipozom hazırlamaktır. Bu, ilk olarak ikinci aşamada fosfolipidlerden oluşan bir lipit filmi hazırlanarak gerçekleştirilir. Spontan veziküller, fosfolipid filmin yakın kızılötesi floresan boyanın söndürülmüş bir konsantrasyon çözeltisi ile hidratlanmasıyla oluşturulur.Kendiliğinden oluşan veziküller veya SFV, lipozomal veziküllerin homojenliğini sağlamak için ekstrüde edilir ve daha sonra lipozomlar, kalıntı kapsüllenmemiş boya moleküllerinden saflaştırılır. Sonuç olarak, absorbans ve floresan emisyonunun spektrometrik ölçümleri, in vivo iken kapsüllenmiş boyanın sönme durumunu göstermek için kullanılır. Yakın kızılötesi floresan görüntüleme, enflamatuar süreçleri görüntülemek için lipozomların potansiyelini göstermek için kullanılır.Bu teknolojinin mevcut olanlara göre en büyük avantajı, kontrast maddenin hücrelere içselleştirilmesinden hemen sonra sinyali belirleyebilmemizdir. Bu, hücrede aktive oldukları anlamına gelir, böylece algılanan sinyal yalnızca hücrelerden gelir. Bu tekniğin anlamı, kanserin tanı ve tedavisine kadar uzanır.Tümörle ilişkili makrofajlar gibi fagositler, lipozomları alıp bozabildiğinden, tümörler içinde terapötik ilaçlar veya görüntüleme probları salgılar. Genel olarak, bu yönteme yeni olan bireyler mücadele edecektir, çünkü kapsülleme verimliliği DAI kullanımının özelliklerinden ve hidrasyon işleminin etkinliğinden etkilenir Kendiliğinden oluşan vezikal dispersiyonu başlatmak için, yuvarlak tabanlı bir şişeye yaklaşık üç mililitre kloroform ekleyerek başlayın, ardından lipozomların çift floresan etiketlemesi için 6.5 ila üç ila 0.5 molar oranında uygun hacimde taze hazırlanmış fosfolipid sap çözeltileri gelir. Daha sonra, lipit çözeltisine yüzde 0.3 molar yüzde NBD-d-o-p-e ekleyin.Ardından, 300 milibar ve 55 santigrat derecede düşük basınç altında organik fosfolipid çözeltisinden kloroformu buharlaştırmak için döner bir buharlaştırıcı kullanın. Homojen bir fosfolipid film oluşturulduktan sonra, kloroform buharlaşırken kalan kloroform birikintilerini gidermek için basıncı bir ila iki saat boyunca 10 milibar'a düşürün. Floresan boya karboksilik asit faiz tamponunu çözün ve bir doer kabını sıvı nitrojen ile doldurun.Ardından 50 santigrat dereceye ayarlanmış bir ultrasonik banyoyu açın. Şimdi, kuru fosfolipid filmi hidratlatmak için uygun bir hacimde boya karboksilik asidi yuvarlak tabanlı şişeye aktarın ve kendiliğinden oluşan bir vezikül dispersiyonu oluşana kadar kuvvetli bir şekilde şişelemek için girdap yapın, lipid kaybını önlemek için tüm fosfolipidlerin dağıldığından emin olun. Ardından, SFV dispersiyonunu içeren yuvarlak tabanlı şişeyi sıvı nitrojen içinde dikkatlice dondurun.Ve üç ila beş dakika sonra, dispersiyonu çözmek için şişeyi ultrasonik banyoya yerleştirin ve şişeyi bir ila iki dakika daha kuvvetlice girdaplayın. Daha sonra, homojen veziküllerin oluşumunu kolaylaştırmak için, SFV dispersiyonunu bir mililitrelik bir şırıngaya aspire edin ve daha sonra 100 nanometrelik bir polikarbonat membrandan ikinci bir mililitrelik şırıngaya geçirmek için bir lipo sofas temel ekstrüderi kullanın. Dispersiyonu ilk şırıngaya geri sıkın, aktarımı 10 kez tekrarlayın.Çözelti puslu bir görünümden berrak bir dağılıma dönmelidir. 10. ekstrüzyon döngüsünden sonra, ikinci şırıngayı çıkarın ve dispersiyonu son kez doğrudan 1.5 mililitrelik steril bir reaksiyon tüpüne ekstrüde edin. Şimdi ekstrüde edilmiş vezikül dispersiyonunun 0,5 mililitresini, tris tamponuna batırılmış G 25 boncukları ile yüklenmiş 28 santimetrelik bir jel kromatografi kolonunun jel yatağına aktarın ve numunenin jel matrisine akmasına izin verin.Lipozomları tris tamponu ile elute edin ve lipozom tamamen boşalana kadar lipozom fraksiyonunu toplayın. Daha sonra, kaçan lipozomları ultrasantrifüjleme ile konsantre edin ve bunları yeterli miktarda steril tris tampon elektron mikrografı içinde dağıtın, lipozomların floresan söndürme ve aktivasyon yeteneklerini analiz etmek için lipozomal veziküllerin çoğunlukla unal morfolojisini ortaya çıkarmalıdır. Daha sonra, uygun lipitlerin toplamının 100 nanomolar kısmını iki adet 1.5 mililitrelik mikro santrifüj tüpüne aktarın.Daha sonra, dudak Q'nun boya içeriğine eşdeğer bir serbest di karboksilik asidi başka bir 1.5 mililitrelik tüpe aktarın ve her probun bir tüpünü dört santigrat derecede ve ikincisini negatif 80 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi sabah, ısıtma bloğunu 30 santigrat dereceye ayarlayın. Bir soğutma kutusunu kırılmış buzla doldurun ve bir miktar tris tamponunu oda sıcaklığına dengeleyin.Daha sonra, probları dört santigrat dereceden oda sıcaklığına beş dakika dengelerken, probları negatif 80 santigrat derece depolamadan 30 santigrat derece depodan beş dakika boyunca hızlı bir şekilde çözün. Ardından, tüm probları tekrar oda sıcaklığına aktarmadan önce bir dakika buz üzerinde soğutun. Şimdi probların her birine 100 mikrolitrelik bir son hacme tris tamponu ekleyin.Daha sonra oda sıcaklığında 10 dakikalık bir inkübasyondan sonra, her probun 80 mikrolitresini düşük hacimli bir cam veterinere pipetleyin ve bir spektrometre üzerinde 400 ila 900 nanometre arasındaki emilimi ölçün. Probları karşılık gelen tüplerine geri koyun ve ardından her birinden 80 mikrolitreyi uygun cam küvetlere aktarın. 674 nanometrede probları uyararak ve floresanı 694 ila 800 nanometre arasında ölçerek spektral bir florimetredeki floresan emisyonlarını ölçmek için.Lipozomların iltihaplanma tespit özelliklerini değerlendirmek için, bir şırıngayı 50 mikrolitre xin solüsyonu, bir şırıngayı 50 mikrolitre izotonik salin solüsyonu ve bir tanesi deneysel prob solüsyonu ile doldurun, hepsi bir HBSS'yi son 150 mikrolitre hacme seyreltti. Ayak parmağınızı kıstırarak sedasyonu onayladıktan sonra, deney hayvanına göz kremi uygulayın ve ardından fareyi ılık bir matın üzerine yerleştirin. Xon a solüsyonunu hayvanın sağ arka bacağına deri altına ve salin solüsyonunu sol arka bacağına enjekte edin.Daha sonra probu hemen intravenöz olarak enjekte edin ve daha sonra hayvanı görüntüleyin. Son olarak, elde edilen görüntüleri görüntü küpleri olarak kaydedin. Hayvanların enjeksiyondan sonraki 10 saat boyunca her iki saatte bir görüntülenmesi ve daha sonra 24 saat sonra tekrar görüntülenmesi.Lipozomal problar, yüksek fagositik aynalama mikrofaj hücre hatları ve mo fagositik insan glioblastoma hücre hatları ile dudak Q'nun alımı yoluyla görülebileceği gibi, enerji tükenmesi ile inhibe edilen baskın bir fagositik alımı ortaya koymaktadır. Kültürlenmiş hücre hatlarında gözlenen fagositik alım ile tutarlı olarak, LIP Q'nun intravenöz enjeksiyonu, çok düşük arka plan floresansına sahip fare modellerinde ve enjeksiyondan sekiz ila 10 saat sonra tespit edilen maksimum floresan yoğunluğu ile ödemin floresan yoğunluğunda zamana bağlı bir artışa yol açar. Buna karşılık, serbest karboksilik asidin veya her zaman açık lipozom dudak DQ'sunun uygulanmasından sonra tüm hayvanın nispeten güçlü bir yakın kızılötesi floresansı görülür, dudağa kıyasla Q.Hızlı perfüzyon ve serbest karboksilik asidin enjeksiyondan sıfır ila dört saat sonra görüldüğü gibi temizlenmesi, ödemin güvenilir bir şekilde tespit edilmesini mümkün kılmaz.Ayrıca, söndürülmemiş lipozom dudak DQ, enjeksiyondan sonraki iki ila dört saat içinde, sekiz saate kadar neredeyse sabit kalan ve daha sonra söndürülmüş dudağa benzer şekilde kademeli olarak azalan maksimum bir ödem floresansı ortaya çıkarır. Prob uygulamasından 24 saat sonra ötenazi yapılan farelerin organlarının Q bazlı ödem floresan görüntülemesi, karaciğer, safra kesesi ve böbreklerin hafif bir ex vivo floresansını ve dalak, akciğerler ve kalbin çok düşük veya hiç floresansını ortaya çıkarmaz. Bu prosedüre katılırken, yüksek konsantrasyonda grip hissi giderici boya kullanmayı ve fosfolipitleri uygun şekilde dağıtmayı unutmamak önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, inflamasyonun yüksek hassasiyetle in vivo görüntülenmesi için aktivat lipozomların nasıl hazırlanacağını iyi anlamış olmalısınız. Tamam? Hayvanların araştırmalarda kullanılması için uluslararası yönergelere uymanız gerektiğini unutmayın ve bu da hayvanların deneylerde kullanılması için başvurmanız gerektiği anlamına gelir. Yerel etik kuruldan onay almanız gerekir.

fluorescence-quenching-liposomal-encapsulated-near-infrared

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz, çok açılı bir dönme optik görüntüleme saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles tarafından sağlanan bir floresan marker in vivo nicelendirilmesi için (Maroi) sistemi tarif eder. Kanser ve artrit fare modelleri istihdam biz Maroi sinyal eğrisi analizi kesin haritalama ve hastalık süreçlerinin biyolojik karakterizasyonu için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Floresan SapC-DOPS Nanovesicles kullanma Beyin Tümörleri ve Artrit Vivo Optik Görüntüleme

Ilgili ilkeleri ölçme ve floroforlar ve antikor hedefli koşulları çok sayıda uyumluluğunu göstererek Lüminesans (YAKIT) dan Sınırsız Uyarma tarafından Floresans temel ve uygulanabilirliğini genişletilmesi.

BRET Ötesinde Bir Adım: Sınırsız Uyarma tarafından Flüoresan Lüminesans dan (YAKIT)

Biyomoleküllerin in vivo çalışmaları, biyolojik bağlamda moleküler işlevi anlamak için çok önemlidir. Burada, DNA veya proteinler gibi floresan biyomoleküllerin canlı mikroorganizmalara içselleştirilmesine izin veren yeni bir yöntemi açıklıyoruz. Floresan mikroskobu ile kaydedilen in vivo verilerin analizi de sunulmakta ve tartışılmaktadır.

Elektroporasyon yoluyla Yaşam Mikroorganizmalar içinde içselleştirilmesi ve Floresan biyomoleküllerin Gözlem

pH'ya duyarlı bir florofor ile bir membran proteinin hücre dışı alanını Etiketleme, superecliptic pHluorin (SEP), hücre içi lokalizasyonu, sentezleme ve trafik saptanmasına olanak sağlamaktadır. Görüntüleme toplam iç yansıma floresan mikroskobu (TIRFM) proteinleri Eylül-etiketli periferal ER ve plazma membranı protein seviyelerinin ölçümü sağlar.

pHluorin etiketli Reseptör kullanarak Subselüler Yerelleşme ve Ticareti Monitör

Düşük yoğunluklu Geniş puls ultrason stimülasyon (LIPUS) yüksek uzamsal ve zamansal çözünürlük ile endojen veya mühendislik hücrelerinin non-invaziv mekanik uyarılması için bir yöntemi var. Bu makalede nasıl bir epi-floresan mikroskop LIPUS uygulanacağı ve akustik empedans uyuşmazlığı istenmeyen mekanik eserler önlemek için ultrason yol boyunca en aza indirmek nasıl açıklanır.

Çoğullama ultrason stimülasyon floresans mikroskobu ile odaklı

Bu protokolün amacı, floresan olarak etiketlenmiş lipozomları sentezlemek ve lipozomların hücresel düzeyde in vivo lokalizasyonunu tanımlamak için akış sitometrisini kullanmaktır.

Floresan Boya Etiketli Lipozomların İn Vivo Dokuya Özgü Hücresel Alımının Hazırlanması, Uygulanması ve Değerlendirilmesi

Subkonjonktival enjeksiyondan sonra gözdeki lipozomların mekansal-zamansal dağılımını invaziv olmayan bir şekilde incelemek için fiberoptik konfokal lazer miksanoskopi (CLM) kullanımı için bir protokol sunuyoruz.

Fiberoptik Konfokal Lazer Mikroendoskopi Kullanılarak Oküler İlaç Dağıtım Sistemlerinin Spatio-Temporal In Vivo Görüntülemesi

Bu yazıda, uzun bozunma yayan numunelerin makroskopik fotolüminesans ömür boyu görüntülenmesi için yeni, hızlı bir optik görüntüleyicinin kullanımı açıklanmaktadır. Entegrasyon, görüntü toplama ve analiz prosedürleri, görüntüleme için sensör malzemelerinin hazırlanması ve karakterizasyonu ve görüntüleyicinin biyolojik numunelerin incelenmesinde uygulanması ile birlikte açıklanmaktadır.

Biyomedikal Uygulamalar için Floresan Ömür Boyu Makro Görüntüleyici

Mevcut protokol, bir NIR-II optik görüntüleme cihazı kullanan bir farenin ayrıntılı, gerçek zamanlı NIR-II floresan görüntüleme işlemini tanımlamaktadır.

Vasküler ve Tümör Görüntüleme için Parlak Bir NIR-II Floresan Probu

Bu makale, uzun RNA'ların terminal konumlarında çift renkli etiketlenmesini ve tek moleküllü FRET TIRF mikroskobu uygulamaları için fosfolipid veziküllerde kapsülleme yoluyla yüzey immobilizasyonunu açıklamaktadır. Bu tekniklerin birleştirilmesi, RNA dinamiklerinin tek molekül düzeyinde hassas bir şekilde görselleştirilmesini ve analiz edilmesini sağlar.

Tek Moleküllü FRET-TIRF Mikroskobu için Uzun RNA'ların Floresan Uç Etiketlemesi ve Kapsüllenmesi

Keşfedin lipozomal kapsüllü yakın-kızılötesi florofor kullanarak yüksek duyarlılıklı in vivo inflamasyon görüntüleme yöntemini. Bu teknik biyolojik süreçleri görselleştirmede araştırmacılara önemli avantajlar sağlar.

Aracı Olarak bir lipozomal-kapsüllü Yakın-Kızılötesi floroforun Floresan-söndürme İn Vivo Optik Görüntüleme

Daha fazla video keşfet