Farmakoloji Araştırma İzole Doku Banyo-uygulamalarda Düz Kas Fonksiyon Ölçümü

Bu prosedürün genel amacı düz kas tonusunu ölçmektir. Bu, önce dokuların diseke edilmesi ve hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, dokuyu izole bir doku banyosuna monte etmektir.

Daha sonra dokunun canlılığı test edilir ve izometrik kasılma ölçümleri alınır. Sonuç olarak, izole edilmiş doku banyosu hazırlığı, reseptör fonksiyonunu, reseptör sinyalini ve düz kas reaktivitesini test etmek için kullanılır. Genel olarak, Bu tekniğin temel avantajları, sistemin esnekliği, sonuçlara ulaşma hızı ve tüm dokuyu sağlam tutmasıdır.

Bu yöntem, anahtar soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir: Reseptör sinyalizasyonuna veya düz kas ruhuna müdahale etmek için ilaçların kullanıldığı herhangi bir alanda, vurgulanması gereken birkaç hazırlık vardır. Devridaim ısıtmalı su banyosunu açarak doku banyosu sistemini 37 santigrat dereceye kadar önceden ısıtmak çok önemlidir. Su, en düşük dikenli bağlantıda her bir bileşene akmalı ve en yüksek dikenli bağlantıda dışarı akmalıdır.

Her bileşen bağlı olmalıdır. Kuvvet transdüserleri kalibre edilmeli ve ayrıca sıcaklıklarını dengeye getirmek için deneyden en az 15 dakika önce çalıştırılmalıdır. Ardından, gazı bağlarken sızıntı olup olmadığını kontrol edin, ardından sisteme basınç uygulayın.

Sistemi solüsyonla doldurduktan sonra, astarladığınızdan ve hava kabarcıklarını çıkardığınızdan emin olun. Doku banyosu havalandırıcılarının test edilmesi de garanti edilir. İyi havalandırma, ilaçları etkili bir şekilde dağıtır, ancak deneyden hemen önce dokuyu dengesizleştirmez.

Dokuyu inceleyin. Fareyi uyuşturduktan sonra, makas kullanarak bir pnömotoraks oluşturun. Göğüs kafesinin altındaki diyafram boyunca küfür edin.

Daha sonra göğüs kafesinin altından sternuma kadar kesin ve dokuyu ikiye bölün. Doğrudan omurga boyunca uzanan aortu bulmak için omurganın üzerindeki organları temizleyin. Şimdi aort ile olan tüm bağlantıları kesin ve aortu diyafram seviyesinde omurgaya dik olarak kesin.

Daha sonra, aortu nazikçe tutun ve aortu omurgadan çıkarın. Omurgaya bitişik alt diyafram bölgesinden başlayın ve kalbe doğru çalışın. Sadece aort dokusunu çekmemeye veya çekmemeye dikkat edin, çünkü bu hemen ona zarar verebilir.

Aortu PSS içeren bir diseksiyon kabına yerleştirin. Şimdi bir tel alın ve 90 derecelik küçük bir açı yapın. Bir ucunda, telin açılı ucunu diseksiyon çanağının temeline sabitleyin.

Daha sonra kılavuz teli dikkatlice aortun lümenine geçirin ve aortu telin üzerine kaydırın. Telin serbest ucu görünür hale geldiğinde, hafifçe bükün ve temele doğru itin, böylece dokuyu stabilize edin. Şimdi küçük Venüs makası ve forseps kullanarak, torasik aort beyaz ve biraz lifli görünene kadar perivasküler yağ dokusunu ve diğer yabancı dokuları çıkarın.

Fazla dokulardan arındırıldıktan sonra, temiz aortu telden dikkatlice çıkarın. Aortu üç ila beş milimetre genişliğinde halkalar halinde keserek bu bölümü bitirin. Ulaşılabilen bir aort halkası.

Banyo odasına sabitlemek için dikişli iki doku kancası hazırladınız. Bir kanca, bir çubuğa tutturmak için küçük düğümlü bir halkaya sahip bir dikişe sahip olmalıdır. Diğer kanca 10 ila 14 santimetre uzunluğunda bir dikiş parçasına ihtiyaç duyar.

Bir düğüm bağlamak için, her bir aort halkasına bu doku kancalarından bir çiftini dikkatlice takın. Kancaların dolaşmamasına dikkat edin. Daha sonra, her bir doku parçasını, bir halka standına sabitlenmiş bir doku tutucu ile oda sıcaklığında bir PSS kabına aktarın.

Ardından, düğümlü halkayı çubuğun mandalına kaydırın ve dokuyu yukarıda tutmak için uzun dikiş parçasını kullanın. Ardından çubuğu hazneye koyun ve çubuğun sağlam olduğundan emin olun. Şimdi, kalan kancadan gelen dikişi kuvvet dönüştürücüsüne bağlayın.

Dikişte yeterince boşluk bırakın, böylece kuvvet dönüştürücü ile doku arasındaki gerilim mikrometre ile ayarlanabilir. Her odadaki her halka için bu işlemi tekrarlayın. Şimdi, pasif gerilimi ayarlayın.

Gerginliği iki grama çıkarmak için mikrometreyi kullanın ve doku üzerindeki gerginliğin artmasının durmasını bekleyin. Sonra gerginliği iki gram daha artırın ve tekrar gerginliğin değişmesini bekleyin. Bitirmek.

Gerilim şimdi 3.2 gram civarında olmalıdır. Bu işlemi her odadaki her halkada tekrarlayın. Tüm pasif gerilimleri ayarladıktan sonra, dokuların bir saat boyunca dengelenmesine izin verin.

Bu süre zarfında, PSS'yi her 15 dakikada bir değiştirin ve dengeleme süresinin sonunda ilaçların hazırlanması gibi deney için başka hazırlıklar yapın. Mendili son bir kez yıkayın, verileri kaydedin ve tüm girişleri yeniden başlatın. Ardından, metin protokolündeki ayrıntıları takip ederek ilk sorgulamayı yapın.

Bu eylemleri yazılımda belgelediğinizden emin olun. İlk meydan okumadan sonra, gerginlik değişimi plato yapacaktır. Daha sonra meydan okuma ilacını yıkayın, böylece dokunun tonu bir taban çizgisine ulaşır.

Dokuyu bu başlangıç tonunda yaklaşık 10 dakika dinlendirin, bu durumda araçta bir banyoya alın, diğerine su. Banyoda beş nanomolar konsantrasyon için yeterli prazosin ekleyin. Doku banyolarının yıkanmadan bir saat inkübe kalmasına izin verin.

Bu arada, fenol rinini logaritmik bir eğri boyunca geniş bir konsantrasyon aralığında onarın. Bir saat sonra, kümülatif bir konsantrasyon yanıtı oluşturmak için banyoya artan konsantrasyonlarda fenil rin agonisti ekleyin. Her eklemeden sonra, bir sonraki konsantrasyonu eklemeden önce platoya doku tepkisini bekleyin.

Dokunun tonunu artık değiştirmeyene veya tüm yanıt eğrisi düzleşene kadar eklemeler yapmaya devam edin. Daha ziyade, torasik aort, alfa bir adrenerjik agonist fenil rini doku banyosuna eklemeden ve kümülatif kasılma yanıtı eğrileri oluşturmadan önce bir saat boyunca alfa bir adrenerjik reseptör antagonisti POZ sim içinde inkübe edildi ve fenil rinin maksimum ve yarı maksimum kasılmalarını oluşturdu. Sadece araçta kontrol dokusu yeşil renkle işaretlenmiştir.

Yarım maksimum, ilacın etkili konsantrasyonunu tanımlar. Razin ile muamele edilen doku için aynı ölçümler siyah renkte görülür. Bu videoyu izledikten sonra, izole bir doku banyosunda düz kas fonksiyonunun nasıl ölçüleceğini iyi anlamış olmalısınız.