Farmakoloji Araştırma İzole Doku Banyo-uygulamalarda Düz Kas Fonksiyon Ölçümü

Bu prosedürün genel amacı, düz kas tonusunu ölçmektir. Bu işlem, öncelikle dokuların diseke edilmesi ve hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise dokunun izole bir doku banyosuna yerleştirilmesidir.

Ardından dokunun canlılığı test edilir ve izometrik kasılma ölçümleri alınır. Nihayetinde, izole doku banyosu düzeneği; reseptör fonksiyonunu, reseptör sinyalizasyonunu ve düz kas reaktivitesini test etmek için kullanılır. Genel olarak, bu tekniğin temel avantajları sistemin esnekliği, sonuçlara hızlı ulaşılması ve dokunun bütünlüğünün korunmasıdır.

Bu yöntem, reseptör sinyalizasyonuna veya düz kas tonusuna müdahale etmek için ilaç kullanan her türlü alandaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Vurgulanması gereken birkaç hazırlık aşaması mevcuttur. Resirküle eden ısıtmalı su banyosunu açarak doku banyosu sistemini 37 °C'ye önceden ısıtmak hayati önem taşır. Suyun, her bileşenin en alttaki tırtıklı bağlantısından girmesi ve en üstteki tırtıklı bağlantıdan çıkması gerekir.

Her bir bileşen bağlanmalıdır. Kuvvet transducerları kalibre edilmeli ve sıcaklıklarının dengeye gelmesi için deneyden en az 15 dakika önce çalıştırılmalıdır. Ardından, gaz bağlantısını yaparken sızıntı kontrolü yapın ve sistemi basınçlandırın.

Sistemi solüsyonla doldurduktan sonra, sistemi hazırladığınızdan ve tüm hava kabarcıklarını giderdiğinizden emin olun. Doku banyosu havalandırmalarının test edilmesi de gereklidir. İyi bir havalandırma, ilaçların etkili bir şekilde dağılmasını sağlar ancak deneyden hemen önce dokunun stabilitesini bozmaz.

Dokuyu disseke edin. Sıçanı anestezi altına aldıktan sonra, makas kullanarak pnömotoraks oluşturun. Göğüs kafesinin altındaki diyafram boyunca kesin.

Ardından, göğüs kafesinin alt kısmından sternuma kadar kesin ve dokuyu ikiye bölün. Omurga boyunca yer alan aortayı bulmak için omurganın üzerindeki organları temizleyin. Şimdi aortaya olan tüm bağlantıları kesin ve aortayı diyafram seviyesinde, omurgaya dik olacak şekilde kesin.

Ardından, aortayı nazikçe tutun ve aortayı omurgadan ayırın. Omurgaya komşu olan alt diyafram bölgesinden başlayarak kalbe doğru ilerleyin. Aort dokusunu çekmemeye veya zorlamamaya dikkat edin, çünkü bu durum dokuya anında zarar verebilir.

Aortayı, PSS içeren bir diseksiyon kabına yerleştirin. Şimdi bir tel alın ve küçük bir 90 derecelik açı oluşturun. Telin açılı ucunu, diseksiyon kabının tabanına sabitleyin.

Ardından, kılavuz teli dikkatlice aort lümenine yerleştirin ve aortu tel boyunca kaydırın. Telin boşta kalan ucu görünür olduğunda, teli hafifçe bükün ve dokuyu stabilize etmek için temele doğru itin. Şimdi küçük Ven makası ve pens kullanarak, torasik aort beyaz ve kısmen fibröz görünene kadar perivasküler yağ dokusunu ve diğer yabancı dokuları temizleyin.

Fazla dokular temizlendikten sonra, temiz aortayı telden dikkatlice çıkarın. Aortayı üç ila beş milimetre genişliğinde halkalar şeklinde keserek bu bölümü tamamlayın. Bir adet aort halkası elde edin.

Banyo haznesine sabitlemek için sütürlü iki doku kancası hazırlayın. Kancalardan birinde, bir çubuğa tutturulması için küçük düğümlü bir halkaya sahip bir sütür bulunmalıdır. Diğer kanca için 10 ila 14 santimetre uzunluğunda bir sütür parçası gereklidir.

Düğüm atmak için, bu doku kancalarından bir çiftini her bir aort halkasına dikkatlice takın. Kancaların birbirine dolanmamasına özen gösterin. Ardından, her bir doku parçasını, bir halka standına sabitlenmiş doku tutucu bulunan, oda sıcaklığındaki PSS dolu bir kaba aktarın.

Ardından, düğümlü halkayı çubuğun pimine geçirin ve dokuyu yukarıda tutmak için dikiş ipinin uzun parçasını kullanın. Sonra çubuğu hazneye yerleştirin ve çubuğun sabitlendiğinden emin olun. Şimdi, kalan kancadaki dikiş ipini kuvvet transdüserine bağlayın.

Sütürde, kuvvet dönüştürücü ile doku arasındaki gerginliğin mikrometre ile ayarlanabilmesi için yeterli bolluk bırakın. Bu işlemi her haznedeki her bir halka için tekrarlayın. Şimdi, pasif gerginliği ayarlayın.

Mikrometreyi kullanarak gerilimi iki grama çıkarın ve dokudaki gerilimin artışının durmasını bekleyin. Ardından gerilimi iki gram daha artırın ve tekrar gerilimdeki değişimin durmasını bekleyin. İşlemi tamamlamak için.

Gerginlik şu anda yaklaşık 3.2 gram olmalıdır. Bu işlemi her haznedeki her halka için tekrarlayın. Tüm pasif gerginlikler ayarlandıktan sonra, dokuların bir saat boyunca dengelenmesine izin verin.

Bu süre zarfında, her 15 dakikada bir PSS'yi değiştirin ve dengeleme süresinin sonunda ilaçların hazırlanması gibi deney için diğer hazırlıkları yapın. Dokuyu son bir kez yıkayın, verileri kaydedin ve tüm girişleri sıfırlayın. Ardından, metin protokolündeki detayları takip ederek başlangıç uyaranını uygulayın.

Bu işlemleri yazılımda belgelediğinizden emin olun. İlk uyarımdan sonra, gerilim değişimi bir platoya ulaşacaktır. Ardından, doku tonusunun bazal seviyeye dönmesi için uyarıcı ilacı yıkayarak uzaklaştırın.

Dokunun yaklaşık 10 dakika boyunca bu bazal tonda dinlenmesini sağlayın; bu aşamada bir banyoya taşıyıcıya, bu durumda suya, diğerine ise ekleme yapın. Banyoda 5 nanomolar konsantrasyon sağlamak için yeterli miktarda prazocin ekleyin. Doku banyolarını, yıkama yapmadan bir saat boyunca inkübe edin.

Bu sırada, fenol rine'yi logaritmik bir eğri boyunca geniş bir konsantrasyon aralığında hazırlayın. Bir saat sonra, kümülatif bir konsantrasyon yanıtı oluşturmak için banyoya artan konsantrasyonlarda fenil rine agonisti ekleyin. Her eklemeden sonra, bir sonraki konsantrasyonu eklemeden önce doku yanıtının platoya ulaşmasını bekleyin.

Dokunun tonu artık değişmeyene veya tüm yanıt eğrisi platoya ulaşana kadar eklemeler yapmaya devam edin. Ayrıca, doku banyosuna alfa bir adrenerjik agonist fenilrin ekleyip kümülatif kontraksiyon yanıt eğrileri oluşturmadan önce, torasik aorta alfa bir adrenerjik reseptör antagonisti POZ sim ile bir saat boyunca inkübe edilmiştir; fenilrinin maksimum ve yarı maksimum kontraksiyonları belirlenmiştir. Yalnızca araç kullanılan kontrol dokuları yeşil ile işaretlenmiştir.

Yarım maksimum, ilaç için etkili konsantrasyonu belirler. Razin ile işlem görmüş doku için aynı ölçümler siyah renkte görülmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, izole bir doku banyosunda düz kas fonksiyonunun nasıl ölçüleceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.