Name: Tüm Sigara Dumanına Organotipik 3D Bronşiyal ve Burun Doku Kültürü Modelleri Tekrarlanan Pozlama Etki Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Keşfedin, organotipik 3D bronşiyal ve burun doku kültürü modellerini kullanarak sigara dumanının tekrarlanan maruziyet etkilerini değerlendirme yöntemlerini. Bu protokol, silyal vuruş frekansı ve doku bütünlüğü ölçümleriyle solunum toksikolojisi araştırmalarında hayvan testlerine alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar yazının kendi gözden Maurice Smith ve Marja Talikka teşekkür etmek istiyorum.

<ol><li>Pezzulo, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+air-liquid+interface+and+use+of+primary+cell+cultures+are+important+to+recapitulate+the+transcriptional+profile+of+in+vivo+airway+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiolog%22%5BJournal%5D)">The air-liquid interface and use of primary cell cultures are important to recapitulate the transcriptional profile of in vivo airway epithelia.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiolog. 300, L25-L31 (2011).</li>
<li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews+Molecular+cell+biolog%22%5BJournal%5D)">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nature reviews Molecular cell biolog. 8, 839-845 (2007).</li>
<li>Dvorak, A., Tilley, A. E., Shaykhiev, R., Wang, R., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+airway+epithelium+air%E2%80%93liquid+cultures+represent+the+in+vivo+airway+epithelium+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+cell+and+molecular+biolog%22%5BJournal%5D)">Do airway epithelium air–liquid cultures represent the in vivo airway epithelium transcriptome.</a> American journal of respiratory cell and molecular biolog. 44, 465(2011).</li>
<li>Wiszniewski, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+cultures+of+polarized+airway+epithelial+cells+from+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biolog%22%5BJournal%5D)">Long-term cultures of polarized airway epithelial cells from patients with cystic fibrosis.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biolog. 34, 39-48 (2006).</li>
<li>Balharry, D., Sexton, K., BéruBé, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+approach+to+assess+the+toxicity+of+inhaled+tobacco+smoke+components%3A+nicotine%2C+cadmium%2C+formaldehyde+and+urethane%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicolog%22%5BJournal%5D)">An in vitro approach to assess the toxicity of inhaled tobacco smoke components: nicotine, cadmium, formaldehyde and urethane.</a> Toxicolog. 244, 66-76 (2008).</li>
<li>Mathis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bronchial+epithelial+cells+exposed+in+vitro+to+cigarette+smoke+at+the+air-liquid+interface+resemble+bronchial+epithelium+from+human+smokers%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physio%22%5BJournal%5D)">Human bronchial epithelial cells exposed in vitro to cigarette smoke at the air-liquid interface resemble bronchial epithelium from human smokers.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physio. 304, L489-L503 (2013).</li>
<li>Cho, M. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bioluminescent+cytotoxicity+assay+for+assessment+of+membrane+integrity+using+a+proteolytic+biomarker%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+in+Vitr%22%5BJournal%5D)">A bioluminescent cytotoxicity assay for assessment of membrane integrity using a proteolytic biomarker.</a> Toxicology in Vitr. 22, 1099-1106 (2008).</li>
<li>Stewart, C. E., Torr, E. E., Mohd Jamili, N. H., Bosquillon, C., Sayers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Differentiated+Human+Bronchial+Epithelial+Cell+Culture+Systems+for+Asthma+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allerg%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Differentiated Human Bronchial Epithelial Cell Culture Systems for Asthma Research.</a> Journal of Allerg. 2012, 11(2012).</li>
<li>Blume, L. F., Denker, M., Gieseler, F., Kunze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+corrected+transepithelial+electrical+resistance+%28TEER%29+measurement+to+quantify+rapid+changes+in+paracellular+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmazi%22%5BJournal%5D)">Temperature corrected transepithelial electrical resistance (TEER) measurement to quantify rapid changes in paracellular permeability.</a> Pharmazi. , 19-24 (2010).</li>
<li>Chhin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliary+beating+recovery+in+deficient+human+airway+epithelial+cells+after+lentivirus+ex+vivo+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+genetic%22%5BJournal%5D)">Ciliary beating recovery in deficient human airway epithelial cells after lentivirus ex vivo gene therapy.</a> PLoS genetic. 5, e1000422(2009).</li>
<li>Jiao, J., Meng, N., Wang, H., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+human+nasal+epithelial+cells+grown+as+explant+outgrowth+cultures+or+dissociated+tissue+cultures+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Me%22%5BJournal%5D)">Comparison of human nasal epithelial cells grown as explant outgrowth cultures or dissociated tissue cultures in vitro.</a> Front Me. 7, 486-491 (2013).</li>
<li>Talbot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+assessment+of+reproductive+toxicity+of+tobacco+smoke+and+its+constituents%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+defects+research.+Part+C%2C+Embryo+today+%3A+review%22%5BJournal%5D)">In vitro assessment of reproductive toxicity of tobacco smoke and its constituents.</a> Birth defects research. Part C, Embryo today : review. 84, 61-72 (2008).</li>
<li>Port, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tobacco+smoke+induces+CYP1B1+in+the+aerodigestive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesi%22%5BJournal%5D)">Tobacco smoke induces CYP1B1 in the aerodigestive tract.</a> Carcinogenesi. 25, 2275-2281 (2004).</li>
<li>Hoeng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+network-based+approach+to+quantifying+the+impact+of+biologically+active+substances%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discov+Toda%22%5BJournal%5D)">A network-based approach to quantifying the impact of biologically active substances.</a> Drug Discov Toda. 17, 413-418 (2012).</li>
<li>Iskandar, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+approaches+evaluating+the+perturbation+of+xenobiotic+metabolism+in+response+to+cigarette+smoke+exposure+in+nasal+and+bronchial+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+In%22%5BJournal%5D)">Systems approaches evaluating the perturbation of xenobiotic metabolism in response to cigarette smoke exposure in nasal and bronchial tissues.</a> Biomed Res In. 2013, 512086(2013).</li>
<li>Karp, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+differentiated+human+airway+epithelia.+Methods+for+establishing+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biolog%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of differentiated human airway epithelia. Methods for establishing primary cultures.</a> Methods in molecular biolog. 188, 115-137 (2002).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22ISO+3402%3A+Tobacco+and+tobacco+products+--+Atmosphere+for+conditioning+and+testing%22">ISO 3402: Tobacco and tobacco products -- Atmosphere for conditioning and testing</a>. , International Organization for Standardization. (1999).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22R%3A+A+Language+and+Environment+for+Statistical+Computing%22">R: A Language and Environment for Statistical Computing</a>. , The R Core Team. (2011).</li>
<li>Gautier, L., Moller, M., Friis-Hansen, L., Knudsen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+mapping+of+probes+to+genes+for+Affymetrix+chips%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatic%22%5BJournal%5D)">Alternative mapping of probes to genes for Affymetrix chips.</a> BMC Bioinformatic. 5, 111(2004).</li>
<li>Hermida, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confero%3A+an+integrated+contrast+data+and+gene+set+platform+for+computational+analysis+and+biological+interpretation+of+omics+data%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+genomic%22%5BJournal%5D)">Confero: an integrated contrast data and gene set platform for computational analysis and biological interpretation of omics data.</a> BMC genomic. 14, 514(2013).</li>
<li>Thomson, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+biological+impact+using+transcriptomic+data+and+mechanistic+network+models%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+and+applied+pharmacolog%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of biological impact using transcriptomic data and mechanistic network models.</a> Toxicology and applied pharmacolog. 272, 863-878 (2013).</li>
<li>Teff, Z., Priel, Z., Gheber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+forces+applied+by+cilia+depend+linearly+on+their+frequency+due+to+constant+geometry+of+the+effective+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+journa%22%5BJournal%5D)">The forces applied by cilia depend linearly on their frequency due to constant geometry of the effective stroke.</a> Biophysical journa. 94, 298-305 (2008).</li>
<li>Hilgendorf, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caco-2+versus+Caco-2%2FHT29-MTX+co-cultured+cell+lines%3A+permeabilities+via+diffusion%2C+inside-+and+outside-directed+carrier-mediated+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sc%22%5BJournal%5D)">Caco-2 versus Caco-2/HT29-MTX co-cultured cell lines: permeabilities via diffusion, inside- and outside-directed carrier-mediated transport.</a> J Pharm Sc. 89, 63-75 (2000).</li>
<li>Sutto, Z., Conner, G. E., Salathe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+airway+ciliary+beat+frequency+by+intracellular+pH%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+physiolog%22%5BJournal%5D)">Regulation of human airway ciliary beat frequency by intracellular pH.</a> The Journal of physiolog. 560, 519-532 (2004).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similarities+and+differences+between+smoking-related+gene+expression+in+nasal+and+bronchial+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+genomic%22%5BJournal%5D)">Similarities and differences between smoking-related gene expression in nasal and bronchial epithelium.</a> Physiological genomic. 41, 1-8 (2010).</li>
</ol>

Bu çalışma, Philip Morris International tarafından finanse edildi.

Burada, biz tekrarlanan CS maruz etkisini değerlendirmek için insan organotipik bronşiyal ve burun doku modellerinin uygulanabilirliğini göstermiştir. Hayvanlar üzerinde yapılan testlere bir alternatif olarak, tatbik sistemlerinde bir dizi (örneğin., Vitrocell, Cultex ALICE, vs.), in vitro olarak, aerosol maruz toksikolojik değerlendirmeler için geliştirilmiştir. Bu maruziyet modülleri de bu çalışmada vb havadaki kirleticilerin, havadaki partikülleri, nanopartiküllerin, bir toksikolojik değerlendirme için kullanılabilir, biz büyük ölçekli deneyler arasında düşük değişkenlik sağlayan, aynı anda 48 farklı numunelerin kadar kalabileceği Vitrocell sistemi kullanılan tedaviler. Vitro her aerosol maruz kalma, doku kültürü kirlenme riski olan azaltma deneyler boyunca doku kültürleri dikkatli kullanım gerektirir önemli bir risk olmaya devam etmektedir. Veya sırasında, mikro gerçek zamanlı olarak parçacık birikimi ölçümüXposure deney maruz sisteminden üretilen CS dozlar beklentilerine uygun olduğunu izlemenize olanak sağlar. Ayarı-up çevrimiçi ölçüm doğru pozlama önce, örneğin, critial çünkü mikro (cm 2) alanları arasındaki farkın, Ayrıca 0&#39;a ölçek kurma ve ölçülen partikül birikimi doğruluğunu sağlamak için doku kültürü eki (0.33 cm2), kültürlere ekin alanına nihai hesaplama arındırılmış mikro üzerinde depolanma sadece% 33 kültür eklemek gerçek birikimi göstermektedir. Sıkı birleşim bariyer işlevini belirlemek için ve epitel tabakasının bozulmasını değerlendirmek için TEER ölçümü burada bildirilen uygulanması nispeten kolay bir işlemdir. Bronş ve burun doku modelleri mukus üreten serpiştirilmiş kadeh hücreleri içeren Ancak, apikal yıkama TEER ÇÇA önce yapılması gerekiyorkullanan akan. apikal yıkama kritik çünkü mukus tabakasının varlığı ve CS maruz kalma etkisi ile interferring kalınlığı kutu önyargı TEER ölçümü değişkenliği,. Bu kavram HILGENDORF ve Caco-2 hücrelerinin geçirgenliği mukus üreten goblet hücre hattı HT29 23 ile birlikte culturing etkilenen edildiği meslektaşları tarafından bildirilen ne ile uyum içindedir. Sağ maruz önce apikal yıkama CS doku yanıtları engel olabilir çünkü mukus önce TEER ölçümü için yıkanır gerekmektedir. Bu nedenle, ölçüm üç gün maruz önce yapılır ve maruz kalmadan önce doğru değildir. Biz aktivite sadece mütevazı CS artarak rağmen CYP1A1 / CYP1B1 etkinliği CS maruz aşağıdaki organotipik kültür modelleri ölçülen olabileceğini gösterdi. Bu zayıf sinyal CYP1A1 / 1B1 alt-tabaka daha uzun bir kuluçka ile amplifiye edilebilir (örn., Lusiferin-CEE), örneğin çalıştırma için24 saat (veriler gösterilmemiştir). Bu çalışmada CYP etkinliği ölçümünün sınırlamalardan biri enzim aktivitesi üzerindeki değişiklik etkilenmeyen sağlamak için CYP protein düzeyi ya da gelecekteki çalışmalar için dikkate alınması gereken hücre sayısı, normalizasyon yokluğudur Protein seviyesi veya hücre sayımı ya değiştirilmesi. Biz CS pozlama nazal ve bronş doku modelleri hem de yenerek Silier engellediğini bildirdi. Benzer gözlemler, çeşitli memeli ve memeli olmayan model 12 yapılmıştır. Kirpiksi, ölçme dayak dokular benzer bir şekilde ele alınır ve muamele edilmesini sağlayabilecekleri için orta değişiklik uygulanması halinde, tüm numuneler için uygulanması gereken örneğin önemlidir. Sutto ve arkadaşları pH frekansı 24 yenerek memeli Silier etkilediğini bildirdi. Bu nedenle, farklı bileşimlerdir / karışımları pH ile muamele edilmiş hücreler arasındaki frekanslar dayak karşılaştırırkenAyar siliyer Dayak ölçüm değişkenliği en aza indirmek için düşünülmelidir. Siliyer dayak frekansı, sıcaklığı azaldıkça düşer Üstelik, ölçüm yapılan sıcaklık, da önemlidir. Bu çalışmada kullanılan sıcaklık, CO2 ve nem kontrolü ile donatılmış, bu değişiklikler, bir sahne üstü kuluçka, bağlı değişkenliği en aza indirmek için. Buna rağmen, biz CS maruz kaldıktan sonra bronşiyal dokularda frekansları yenerek siliyer siliyer dayak maruz kaldıktan sonra son derece rahatsız hakkı olduğunu düşündüren, son derece değişken (yani., Bir ekleme artış ve diğer insert azalma) olduğunu gözlemledik. Bunun aksine, nazal doku tepkisi daha hassas ve tutarlı olduğuna işaret CS maruz kaldıktan sonra burun dokularında ölçülebilir siliyer dayak frekanslarının olmadığını gözlemledik. Bu burun dokusu gibi detoks için daha düşük bir kapasiteye sahip olduğunu gösteren bir önceki yayın ile uyum içinde olanbronş 25 ile karşılaştırıldığında. Son olarak, biz dumanına maruz bırakılan organotipik bronşiyal ve nazal doku modelleri profil gen ifadesi ksenobiyotik metabolizması üzerine CS etkisi göstermek göstermiştir. Bir önceki yayın 15 daha ayrıntılı olarak ele alındığı gibi İlginç bir şekilde, CS maruz nitro modellerinde gözlenen Organotipik bronş ksenobiyotik metabolizma değişiklik ve burun sigara içenlerde, in vivo durumu benzeyebilir. Gen ekspresyon analizi için, robot cihaz kullanılarak yüksek verimli bir analizi mümkün kılar. Ayrıca, otomatik robotlu taşıma daha gen ifadesi sonuçlarının tutarlılığını ve doğruluğunu artırır. Bununla birlikte, doku örneklerinin hızlı toplama RNA ekstraksiyonu sırasında RNA bozulmasını önlemek için önemlidir. RNA işleme ve burada tarif edilen transkriptomik yaklaşımlar da, in vivo doku örnekleri uygulanabilir.

Akciğerler, kirleticiler ve sigara dumanı (CS) bileşenleri gibi çeşitli toksik maddeler içerebilen solunan havaya doğrudan ve sürekli olarak maruz kalır. Bu toksik maddelere maruz kalmanın solunum dokuları üzerindeki etkisini incelemek, in vivo maruziyete benzer bir şekilde yapıldığında en bilgilendiricidir. Klasik 2D daldırılmış hücre kültürleri (örneğin, normal insan bronşiyal epitel hücreleri (NHBE)) ile karşılaştırıldığında, 3D organotipik doku modelleri, insan hava yolu epitelinin in vivo1,2 morfolojik, fizyolojik ve moleküler yönlerini daha iyi özetler: 3D doku modelleri, in vivo olarak gözlemlenen hücre tiplerinin çeşitliliğini içerir, farklılaşmış epitel hücreleri, kirpikli ve kirpikli olmayan hücreler, goblet hücreleri ve bazal hücreler dahil. Fonksiyonel sıkı bağlantılara sahiptirler ve mukosiliyer fenotip 1-3 sergilerler. Ayrıca, kültürler geçirgen gözenekli bir zar üzerinde, hava-sıvı bir arayüzde büyütülebilir, bu da apikal tarafta aerosole doğrudan maruz kalmaya izin verir (bazolateral taraf kültür ortamına daldırılırken) 3-5. Dvorak ve meslektaşları, bronş dokusu modellerinin gen ekspresyon profillerinin insan bronşiyal fırçalamalarından elde edilenlere benzer olduğunu bildirmişlerdir 3. Ek olarak, Mathis ve meslektaşları, bu doku modellerinin CS'ye verdiği yanıtların, sigara içenlerden elde edilen bronşiyal epitel hücreleri ile sigara içmeyenlerden elde edilen hücreler arasında gözlenen farklılıklara benzer olduğunu göstermiştir 6. Son olarak, bronş dokusu modelleri birkaç aya kadar kültürlenebildiğinden, 4,5, test öğelerinin uzun süreli maruz kalmasının etkilerini incelemek için potansiyel olarak kullanılabilirler. 
Sitotoksisite değerlendirmeleri, kimyasal hakaretlerin ardından veya belirli bileşiklerin veya karışımların toksisitesini değerlendirmek için ölçülen yaygın parametrelerdir. Örneğin, zar bütünlüğü, ışıldayan bir tahlil ile ölçülebilir ve hücre kültürü 7 üzerinde doza bağlı bir sitotoksik etkinin ölçülmesine izin verir. Bununla birlikte, bileşiklerin subtoksik konsantrasyonlarda patofizyolojik etkilerini değerlendirmek için diğer parametreler ölçülmelidir. Örneğin, transepitelyal elektrik direnci (TEER) testi kullanılarak belirlenen doku bütünlüğü, sıkı bağlantıların işlevselliğini sağlar ve epitel tabakasının bozulmasını izler 8,9. Siliyer atım frekansı, solunum dokuları üzerindeki CS ile ilişkili etkilerin ölçülmesine de olanak sağlar. Üst ve alt solunum yollarını sınırlayan kirpikler için normal bir atım sıklığı, hava yolu enfeksiyonlarına karşı korunmak için önemlidir 10. Solunum epitelinin siliyer kolumnar epitel hücrelerinin her biri, serpiştirilmiş goblet hücreleri 11 tarafından salınan mukus içinde sıkışan enfeksiyöz ajanları veya solunan partikül maddeyi ortadan kaldırmak için belirli bir frekansta 200-300 kirpik atışına sahiptir. CS, siliyer atım 12'yi inhibe edebilen kimyasallar içerir ve bu da solunum yollarının korunmasının azalmasına neden olur. Bu çalışma, organotipik doku modellerinde siliyer atımın ölçülebileceğini göstermektedir. Bu yaklaşım, organotipik doku kültüründe epitel hücrelerinin normal fonksiyonlarını gösterip göstermediğinin değerlendirilmesine olanak sağlar. CS ayrıca tütün dumanı bileşenlerini metabolize etmek için solunum yollarındaki ksenobiyotik metabolizma yanıtlarını aktive eder 13. Doku modellerinin faz I ksenobiyotik metabolizma enzimleri olan CYP1A1 ve CYP1B1'in aktivitesi ölçülebilir. Ek olarak, daha önce bildirildiği gibi, global gen ekspresyonu organotipik bronşiyal doku modellerinde ölçülebilir 6,14,15. CS'nin ksenobiyotik metabolizma üzerindeki etkisini değerlendirmek için transkriptomik veri ve ağ tabanlı sistem biyolojisi yaklaşımından yararlanılır 15. 
Organotipik 3D bronşiyal ve nazal doku modellerini bir in vitro maruziyet sistemi kullanarak ana akım CS'ye maruz bırakmak ve bu maruziyete karşı doku tepkilerini temiz hava maruziyetine (kontrol) kıyasla ölçmek için kullanılan metodolojiler burada detaylandırılmıştır.

<table><tbody><tr><td>MucilAir-insan fibroblastları-bronşlar</td><td>Epithelix S&aacute; rl, Cenevre, İsviçre</td><td>http://www.epithelix.com/content/view/122/19/lang,en/</td><td></td></tr> <tr><td>MucilAir Kültür Besiyeri</td><td>Epithelix S&aacute; rl, Cenevre, İsviçre</td><td>http://www.epithelix.com/content/view/84/16/lang,en/</td><td></td></tr> <tr><td>VITROCELL</td><td>VITROCELL systems GmbH, Waldkirch, Almanya</td><td>http://www.vitrocell.com/index.php?Nav_Nummer=2&R=</td><td></td></tr><tr><td>3R4F referans sigara</td><td>Kentucky Üniversitesi</td><td>http://www2.ca.uky.edu/refcig/</td><td></td></tr> <tr><td>30 portlu atlıkarınca sigara makinesi SM2000</td><td>Philip Morris, Int.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CiliaMetrix kamera ve yazılımı</td><td>La Haute &Eacute; cole de Gestion (HESGE), Cenevre, İsviçre</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica DMIL mikroskobu&nbsp;</td><td>Leica, Heerbrugg, İsviçre</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LED ışık kaynağı</td><td>Titan Alet Malzemeleri, Buffalo, NY</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Çubuk Elektrot STX-2</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>http://www.wpiinc.com/products/physiology/stx2-chopstick-electrode-set-for-evom2/</td><td></td></tr> <tr><td>EVOMXTM Epitelyal Voltohmmetre&nbsp;</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>http://www.wpiinc.com/products/physiology/evom2-evom2-epithelial-voltohmmeter-for-teer/</td><td></td></tr> <tr><td>Luciferin Tespit Reaktifi&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MagNA Lyser Enstrümanı&nbsp;</td><td>Roche</td><td>http://www.roche.com/products/product-details.htm?region=us&type=product&id=66</td><td></td></tr><tr><td>kloroform&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/288306?lang=en&region=</td><td></td></tr><tr><td>QIAcube&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>9001882</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>http://www.nanodrop.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Agilent 2100 Biyoanalizör&nbsp;</td><td>Agilent</td><td>http://www.genomics.agilent.com/en/Bioanalyzer-System/2100-Bioanalyzer-Instruments/?cid=AG-PT-106</td><td></td></tr><tr><td>Affymetrix GeneChip Yüksek verim 3' IVT Ekspres Kiti</td><td>Affymetrix</td><td>http://www.affymetrix.com/catalog/prod370001/AFFY/High-Throughput-(HT)-Whole-Transcript-(WT)-Kit</td><td></td></tr><tr><td>Tarayıcı 3000 7G&nbsp;</td><td>Affymetrix</td><td>http://www.affymetrix.com/catalog/131503/AFFY/Scanner-3000-7G</td><td></td></tr></tbody></table>

tüm sigara dumanına organotipik 3d bronşiyal ve burun doku kültürü modelleri tekrarlanan pozlama etki değerlendirmesi

Impact Assessment of Repeated Exposure of Organotypic 3D Bronchial and Nasal Tissue Culture Models to Whole Cigarette Smoke

Sigara dumanı (CS) akciğer biyolojisi üzerinde büyük bir etkiye sahiptir ve kronik obstrüktif akciğer hastalığı veya akciğer kanseri gibi akciğer hastalıklarının gelişmesine neden olabilir. Hastalık gelişiminin altında yatan mekanizmaları anlamak için, CS maruziyetinin doğrudan akciğer dokuları üzerindeki etkisini incelemek önemli olacaktır. Bununla birlikte, bu yaklaşımın epidemiyolojik çalışmalarda uygulanması zordur, çünkü akciğer dokusu örneklemesi karmaşık ve invazivdir. Alternatif olarak, doku kültürü modelleri, akciğer dokusu üzerindeki maruziyet etkilerinin değerlendirilmesini kolaylaştırabilir. Normal insan bronşiyal epitel (NHBE) hücre kültürleri gibi batık 2D hücre kültürleri geleneksel olarak bu amaç için kullanılmıştır. Bununla birlikte, in vivo maruz kalma durumuna benzer şekilde doğrudan dumana maruz bırakılamazlar. Yakın zamanda geliştirilen 3D doku kültürü modelleri, hava-sıvı arayüzünde (ALI) kültürlenebildikleri için in vivo durumu daha iyi yansıtmaktadır. Bazal tarafları kültür ortamına daldırılır; apikal tarafları ise havaya maruz kalır. Ayrıca, farklı hücre tiplerini içeren organotipik doku kültürleri, in vivo olarak dokunun fizyolojisini daha iyi temsil eder. Bu çalışmada, insan organotipik bronşiyal ve nazal doku modellerini ana akım CS'ye maruz bırakmak için in vitro maruziyet sisteminin kullanımı gösterilmiştir. CS'nin dokular üzerindeki fonksiyonel etkilerini değerlendirmek için siliyer atım sıklığı ve sitokrom P450s (CYP) 1A1/1B1'in aktivitesi ölçüldü. Ayrıca, CS'nin neden olduğu değişiklikleri moleküler düzeyde incelemek için, maruziyeti takiben dokulardan gen ekspresyon profilleri oluşturuldu. CS'ye maruz kalan dokularda havaya maruz kalan dokulara kıyasla CYP1A1 / 1B1 aktivitesinde hafif bir artış gözlenmiştir. Ağ ve transkriptomik tabanlı bir sistem biyolojisi yaklaşımı, sigara içenlerden elde edilen bronş ve nazal epitel hücrelerinde gözlenenlere benzer CS kaynaklı ksenobiyotik metabolizma değişikliklerini göstermek için yeterince sağlamdı.

Aşağıda tarif edilen sonuçlarda Organotipik dokular, sağlıklı, sigara içmeyen den izole edilen primer insan epitel hücreleri, Kafkas vericiler ve fibroblastlar 15 kullanılarak yeniden-teşekkül ettirilmiştir. 3D bronş ve burun doku modelleri In vitro bronşiyal ve burun organotipik modellerde hücresel düzeyde insan solunum yolu epitel (Şekil 2) benzer. CS maruz Organotipik bronş ve burun doku modelleri tekrar tekrar, hava-sıvı arayüzünde ana CS maruz kalabilir. Burada gösterilen sonucu elde etmek için kullanılan dumanına maruz deney prosedürü, Şekil 1 &#39;de tasvir edilmiştir. Siliyer dayak Kayıt Silyum dayak videoları &#39;de gösterildiği gibi, hava maruz kalan dokularda kaydedildi. CS pozlama siliyer çırpma frekansı bir azalma ile ilişkili bulunmuştur: etrafında gözlenen güçlü tepeMaruz maruz sham ve önce 4 Hz CS maruz (Şekil 3) sonra artık görülmez. Bu azalma frekans mukus ve enfeksiyöz ajanlar 22 kaldırmak için daha az verimli dayak kirpikler yapacak. TEER ve CYP1A1 / 1B1 aktivitesi ölçümü TEER dokusu hala işlevsel olmasını sağlamak için en son maruz kaldıktan sonra 48 saat ölçüldü. Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, CYP1A1 / 1B1 aktivitesi, maruz kalma sona erdikten sonra 48 saat ölçülmüştür. CS maruz kalan dokularda TEER değerleri arasında anlamlı bir fark yoktu duman önemli bir sitotoksik etki olduğunu teyit hava maruz dokulara kıyasla Bu konsantrasyonda. 48 saat sonrası maruz kalındığında, dokularda CYP1A1 / 1B1 aktivitesi biraz maruz (Şekil 4) Aşağıdaki doku savunma mekanizması ılımlı bir artış gösteren, arttı. Gen ekspresyon profilleri ve ağ tabanlı sistemler biology yaklaşımı ksenobiyotik metabolizması değiştirilmesi CS maruz etkisini incelemek için Dokular, 48 saat sonra maruz zaman noktalarında toplanmıştır. Daha sonra, mikro-dizi analizi, gen ekspresyonu CS- profillerini ve hava maruz kalan dokular üretmek için gerçekleştirilmiştir. Ksenobiyotik metabolizması üzerine CS maruz Etkisi gen ifadesi profillerinden kaldıraçlı bir ağ-tabanlı sistemler biyolojisi yaklaşımı kullanılarak araştırılmıştır ve daha önceki 15 bildirdiler. Bir ağ tabanlı sistemler biyolojisi yaklaşımı kullanarak Zenobiyotik Metabolizma ağ modelinde omurga düğüm seviyesinde CS maruz kalma etkileri güzel (Şekil 5), in vitro ve in vivo veri kümelerinde korelasyon olduğunu göstermektedir. Bunun aksine, her bir gen ekspresyon değişiklikleri düzeyde zayıf korelasyon, in vitro (sigara içmeyenler genel sigara içenler) ve in vivo (hava maruz genel CS-açık) arasında gözlenmiştir. Organotipik bronşiyal doku modelleri CS tekrarlanan maruz kalma Şekil 1. şematik prosedür Kısaltmalar:. CYP, sitokrom P450; CS, sigara dumanı; TEER, transepitelyal elektrik direnç. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52325/52325fig2.jpg" /> Şekil 2. Organotipik bronş ve nazal epitel doku kültürü modelleri. Karikatür, hava-sıvı arayüzünde bronş (A) ve nazal (B) doku kültürü elemanını gösteren. Daha önce 15 bildirildiği gibi in vitro modeller Hematoksilen &amp; Eosin boyanan hücrelerin apikal tabakasında gösterilen kirpikli hücreler (bronşiyal C, nazal D) içeriyordu. Modeller önemli fibroblastlar ile birlikte kültürlenmiştir<html> büyüme ve epitel hücre farklılaşması için (oklarla gösterilmiştir). Havayolu soy belirteçleri Boyama: Daha önce 15 bildirildiği gibi p63 (nasal bronşiyal E, F) ve MUC5AC (bronşiyal G, nazal H) gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52325/52325fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52325/52325fig3.jpg" /> Şekil 3. Silyum Dayak sıklığı. Silyum dayak frekansı (BKA) önce ve maruz kaldıktan sonra havayla maruz kalan ve kültür ölçülmüştür. CBF CS maruz kaldıktan sonra görüldü azaldığı (iki ekleme temsilcisi sonuçları çoğaltmak 1 (R1 olarak gösterilen) ve çoğaltmak olan 2 (R2)). reklam / 52.325 / 52325fig4.jpg &quot;/&gt; Şekil 4. CYP1A1 / CYP1B1 aktivitesi ve TEER ölçümü. Sol pannels bronş (A) ve nazal (B), doku modellerinde CYP1A1 / CYP1B1 etkinliğini gösterir. Sağ paneller bronş (C) ve nazal (D) doku modellerinde TEER ölçüm göstermektedir. SD ± araçlar gösterilir. Kısaltmalar: CS, sigara dumanı; CYP, sitokrom P450; TEER, transepitelyal elektriksel direnç; RLU, bağıl luminescense birimi. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/52325/52325fig5.jpg" /> Ksenobiyotik metabolizması bağlamında CS maruz kalma etki değerlendirmesi için Şekil 5. Ağ-tabanlı sistemler biyolojisi yaklaşımı. Gen ifadeleri düzeylerinin değişiklikler Zenobiyotik metabolizması ağ modelinin omurgası düğümün aktivasyonunu (A) hesaplamak için kullanıldı </<html> strong&gt; önceki yayın 15 bildirildiği gibi. Sağdaki figür NPA yaklaşımını kullanarak &quot;, diferansiyel ağ omurgası değeri&quot; olarak da bilinen omurga düğümlerinin, miktarının kavramını göstermektedir. mavi oval omurga düğüm aktivitesini temsil (yani., fonksiyonel tabakası) ve yeşil topları genlerin ifadesini temsil (yani., transkripsiyon tabakası). Organotipik bronşiyal dokularda CS maruz Etkileri GSE16008 (temas sonrası 48 saatte alt konka burshing ile bronkoskopi ve burun epitel tarafından toplanan insan bronş epitel üzerinde sigara olanlar karşılaştırıldı (in vitro, hava maruz vs CS-açık) ) (in vivo, sigara içenlerde vs sigara içmeyen) (B). Konumlar, gen ekspresyonu arasındaki ilişki de in vitro ve in vivo veri setleri değişir. Kısaltmalar: CS, sigara dumanı; NPA, ağ pertürbasyon genlik.ove.com/files/ftp_upload/52325/52325fig5large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için burayı tıklayınız.

Bu protokolün amacı, insan organotipik 3D bronşiyal ve burun dokusu modellerini hava-sıvı arayüzünde ana akım sigara dumanına (CS) maruz bırakmaktır. CS'nin dokular üzerindeki etkisi daha sonra bir sitokrom P450 aktivite testi, bir kirpik atma ölçümü ve bir sistem biyolojisi yaklaşımı kullanılarak araştırılmaktadır.

Tüm Sigara Dumanına Organotipik 3D Bronşiyal ve Burun Doku Kültürü Modelleri Tekrarlanan Pozlama Etki Değerlendirmesi

Cigarette smoke (CS) has a major impact on lung biology and may result in the development of lung diseases such as chronic obstructive pulmonary disease ...

Bu prosedürün genel amacı, Organotipik 3D bronşiyal ve nazal doku kültürü modellerinin tekrar tekrar maruz kalmasının tüm sigara dumanına etkisini değerlendirmektir. Bu, ilk olarak organotipik, bronşiyal ve nazal doku kültürü modellerinin hava sıvı arayüzünde kültürlenmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, bir sigara makinesi ile aerosol üretmek ve doku kültürlerini deneysel tasarıma göre bir maruz bırakma sisteminde maruz bırakmaktır.Daha sonra, maruz kalma etkisi, kültürün siliyer atım sıklığı ve doku bütünlüğü ölçülerek değerlendirilir. Son adım, mikroarray teknolojisi kullanılarak aerosol tarafından indüklenen transkriptom değişimlerini ölçmektir. Sonuç olarak, tüm sigara dumanının doku kültürü üzerindeki etkisini göstermek için ağ tabanlı bir sistem biyolojisi yaklaşımı kullanılmıştır.Solunum toksikolojisindeki mevcut yöntemlerin bu tekniklerinin temel avantajı, yaklaşımların hayvan testlerine alternatifler bulmak için düzenleyici kurum gereklilikleriyle uyumlu olması, kısa süreli sigara dumanına maruz kalmanın likit olmayan arayüzde yetiştirilen hücreler üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesine olanak sağlamasıdır, insan solunum yollarında meydana gelen koşulları taklit eder. Deneye başlamak için, steril 24 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 0.7 mililitre ön ısıtma kültür ortamı ekleyin. Daha sonra, doku ambalajını çıkarın ve doku kültürü eklerini taze hazırlanmış 24 oyuklu plakaya aktarın.Doku kültürünü bir inkübatörde tutun ve ortam değişimi sırasında ortamı iki günde bir değiştirin. Kontaminasyon içermediklerinden ve ortam sızıntısı olmadığından emin olmak için dokuları ışık mikroskobu altında inceleyin. Maruz kalma deneylerinden üç gün önce, doku kültürünün apikal tarafını 200 mikrolitre kültür ortamı ile yıkayın.Ardından, in vitro sistemin iklim odasını ve yetiştirme tabanı modülünü 37 santigrat dereceye kadar önceden ısıtın. Isındıktan sonra, yetiştirme üssü modülünü sıra başına 17,5 mililitre ortam ile doldurun. Dokuları inkübatörden çıkarın ve doku kültürü eklerini kültür plakasından in vitro maruz kalma sisteminin kültivasyon temel modülüne aktarın.Ardından yetiştirme üssü modülünü bir cam kapakla örtün. Ana akım sigara dumanına veya cs'ye maruz kalmak için dokuları iklim odasına aktarın. Kalibre edilmiş 30 portlu bir atlıkarınca sigara makinesi kullanarak sigara dumanı üretin.Sigaraları standart bir uzunlukta, ancak 55 mililitrede yaklaşık 35 milimetre uzunluğunda için. İki saniyeden fazla, dakikada iki kez ve sekiz saniyelik pompa egzoz süresini şişirin. Üretilen ana sigara dumanı biriktirilir ve in vitro maruziyet sistemine salınır.Dokuları altı ila yedi dakika maruz bırakın. Dokuları bir kültür plakasına geri aktardıktan sonra, bir saat boyunca inkübatöre geri koyun. Doku kültürü plakalarını inkübatörden çıkarın ve CLIA atışını stabilize etmek için oda sıcaklığında 30 dakika boyunca kaputun altında bırakın.Stabilizasyondan sonra, dokuları kliometri yazılımına bağlı bir ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Daha sonra, siliyer atmanın frekansını kaydedin, frekansı bir dakika, 48 saat boyunca her üç saniyede bir ölçün. Maruz kaldıktan sonra, insan bronşiyal epitel dokularının apikal tarafına 200 mikrolitre kültür ortamı ekleyin ve dokuya dokunmadan bazal ortama ve doku kültürünün apikal tarafında yeni eklenen ortama bir çubuk elektrot yerleştirerek doku direncini ölçün.Ölçümlerden sonra, bir vakum pompasına bağlı bir macun pipeti kullanarak ortamı doku kültürlerinin apikal tarafından nazikçe çıkarın ve dokuları inkübatöre geri koyun. Sitokrom P four 50 enzimatik aktivitesini ölçmek için, önceden hazırlanmış Lucifer ve CEE substratı ile yeni bir plaka hazırlayın ve ekleri bu plaka kapağına aktarın ve doku eklerini gece boyunca inkübe edin. İnkübasyondan sonra, her doku ekinden 50 mikrolitre kültür ortamını oda sıcaklığında 96 iyi opak beyaz bir luminometre plakasına aktarın.Daha sonra her bir oyuğa 50 mikrolitre Lucifer tespit reaktifi ekleyin ve plakayı oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edin. İnkübasyon bittiğinde, luminometre ile lüminesansı ölçün. 3D organotipik doku eklerinin plakasını inkübatörden toplayın ve plaka üzerindeki her bir eki soğuk PBS ile üç kez yıkayın ve PBS'yi yıkamalar arasında geçmiş bir pipetle aspire edin.Son yıkamadan sonra, PBS'yi aspire edin ve ek parçanın kurumasını önlemek için plakayı örtün. Ardından, zar bıçağın üzerinde düz bir şekilde durana kadar plakadan her bir kesici uç için kesici uç zarını kesin. Dokuyu bıçaktan homojenizasyon tüpüne aktarın ve tüpün kapağını vidalayın.Sonra çalkalayın, girdap yapın ve kuru buzun üzerine yerleştirin. Numuneleri homojenizasyon cihazı ile 6.000 RPM'de 45 saniye boyunca çözdürün ve öğütün. Oda sıcaklığında beş dakika bekletin ve ardından numuneye 140 mikrolitre kloroform ekleyin ve tekrar 15 saniye girdap yapın.Tüm numuneyi homojenizasyon tüpünden bir faz kilitleme tüpüne aktarın. Bir termo çalkalayıcı üzerine yerleştirin ve oda sıcaklığında 1400 RPM'de iki dakika çalkalayın. Sonra oda sıcaklığında iki dakika bekletin.Çalkalama tamamlandıktan sonra, tüpü 12.000 G'de dört santigrat derecede 15 dakika döndürün. RNA çökeltme yıkama, süspansiyon ve saflaştırma ile takip edin. Ekstrakte edildikten sonra, RNA'lar kalite kontrolünden geçirilir.Miktarı ve bütünlüğü değerlendirmek için sıvı işleme sistemini ve hedef sentezi hazırlayın. Çıkarılan RNA'yı yerleştirin. Plakalar ve gerekli tüm reaktifler ve laboratuvar robotta aşınır.İlk olarak, RNA konsantrasyonları normalize edilecektir. Ardından, amplifikasyondan etiketlemeye, saflaştırmaya ve parçalanmaya kadar sonraki adımlar için güverte değiştirilecektir. Daha sonra, hibridizasyon karışımı, parçalanmış ve etiketlenmiş A RNA'sının 33 mikrolitresine eklenir, numuneler denatüre edilir ve diziyi 200 mikrolitre ön hibridizasyon ile önceden ıslatılır.Hibridizasyon yıkama ve leke kitinden karıştırın. Ardından çipi 10 dakika boyunca 45 santigrat derece ve 60 RPM'ye ayarlanmış hibridizasyon fırınına yerleştirin. Ön hibridizasyon tamponunu çıkarın ve 200 mikrolitre numune yükleyin.Diziyi fırında 45 santigrat derece ve 60 RPM'de 16 saat inkübe edin. Kokteyli çipten aspire edin ve mikrodiziyi 250 mikrolitre yıkama tamponu a ile doldurun. Yazılımı açın ve yazılım menü çubuğundan fluidics'i çalıştırın.İlgilendiğiniz modülü ve her modül için asal dört 50 programını seçin. Çipin barkodunu tarayarak her modüle doğru çipi atayın ve çipleri akışkan sisteme yerleştirin. Son olarak, tarayıcının sıcak olduğundan emin olun.Ardından çipi tarayıcının otomatik yükleyicisine yükleyin ve mikrodiziyi tarayın. Burun dokusunun CELIA atma frekansı veya CBF'si, havaya veya sigara dumanına veya cs'ye maruz kalmadan önce ve sonra ölçüldü. CBF ve burun dokusu cs'ye maruz kaldıktan sonra daha yavaştı.CLIA'nın daha düşük bir atım frekansı, mukus ve enfeksiyöz ajanları uzaklaştırma verimliliğini azaltır. Organotipik, bronşiyal ve nazal doku modellerinde CS maruziyetinin etkilerini incelemek için mikroarray analizleri yapıldı. Maruziyetten 48 saat sonra.Bu CS in vitro etkisi, sigaranın sırasıyla bronkoskopi ve nazal epitel fırçalama ile toplanan insan bronşiyal epitel dokusu üzerindeki etkisi ile karşılaştırıldı. Ağ tabanlı sistem biyolojisi, in vivo ve in vitro veri kümelerinin omurga düğümleri arasında pozitif bir korelasyon olduğunu gösterir. Bu prosedürü denerken, bunun yeni gelişmekte olan bir araştırma alanı olduğunu unutmamak önemlidir.Bir tarafta iki temel bileşen vardır, iyi karakterize edilmiş bir ücretli aerosol maruz kalma platformu ve diğer tarafta, spesifik mimariyi, biyokimyasal ve mekanik ipuçlarını ve doku veya hedef organla ilgili mikro çevrenin hücre hücresi etkileşimini en iyi taklit eden üç boyutlu bir doku kültürü modelinden oluşabilen ilgili bir deneysel sistem vardır. Soruşturma altında.

impact-assessment-repeated-exposure-organotypic-3d-bronchial-nasal

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Pulmoner farelerin solunum yolu epitel hücreleri izole ve farklılaşmış bir solunum yolu epitel bir model olarak hava-sıvı arayüzü kültüre olabilir. Bu çevresel toksin moleküler yanıtların incelemek üzere bir protokol, tecrit, kültür ve bu hücreler ana sigara dumanına maruz için tarif edilir.

Hava Sıvı Arabirimi Fare Solunum Epitel Hücreleri ve Deneysel sigara dumanına maruz kalma izolasyonu

Insan gönüllülerin yüzeysel sıyrık biyopsi yoluyla elde edilen nazal epitel hücreleri, doku kültürü ekler üzerine genişletilmiş ve aktarılır. Ortak akışkanlığa eriştikten sonra hücreler, kirpikli olmayan silli hücre kültürleri, sonuçta hava sıvı arayüzü yetiştirilir. Farklılaşmış nazal epitel hücre kültürleri solunum mukozasını eğitim için uygun deneysel modeller sunar.

Hava Sıvı Arayüz İnsan Burun Epitel Hücrelerinin ekimi

Bu protokolün amacı, KOAH'ın bir fare modelinde kronik akciğer patolojilerini ölçmek için otomatik yöntemler sağlamaktır. Protokol, fareleri sigara dumanına (CS) maruz bırakmayı, pulmoner fonksiyonu ölçmeyi, akciğerleri şişirmeyi ve farelerde amfizem ve küçük hava yolu yeniden şekillenmesini ölçmek için morfometri yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Elektronik Sigara (e-cig) kullanıcılar dünya çapında artıyor. Az, ancak, inhale e-cig aerosoller tarafından indüklenen sağlık etkileri hakkında bilinir. Bu makalede, bir e-cig aerosol üretimi tekniği hayvan Etkilenmeler ve sonraki toksikolojik çalışmalar için uygun. Böyle protokolleri deneysel olarak tekrarlanabilir ve standart e-cig pozlama sistemleri kurmak için gereklidir.

Elektronik Sigara Aerosol üçüncü nesil makine-Vaping aygıt tarafından nesil: toksikolojik çalışmalar uygulamaya

Hava-sıvı arabiriminde (ALI) ekili insan akciğer hücrelerini teşhir ederek, akut pulmoner sitotoksisite ile ilgili havapartiküllerinin taranması ve izlenmesi için sağlam, aktarılabilir ve tahmine dayalı bir in vitro maruziyet sistemi salıyoruz.

Hava-Sıvı Arabiriminde Ekili İnsan Akciğer Hücrelerinin Açığa Çıkarılması yla Havadaki Partiküllerin Akut İnhalasyon Toksisitesinin Değerlendirilmesi

Burada açıklanan sigara dumanı ekstresi akciğer epitel hücrelerinde bakteri kolonizasyonu nasıl etkilediğini incelemek için bir protokoldür.

Akciğer Epitel Hücrelerinde Sigara Dumanının Pseudomonas Enfeksiyonu Üzerine Etkilerinin İncelanması

Tanımlanan, toksisite testi için parçacıklara gerçekçi, tekrarlanan inhalasyon maruziyeti için bir in vitro bronş modelinin hücre kültürü ve maruz kalma yöntemidir.

Toksisite Testi için Havadaki Parçacıklara Gerçekçi, Tekrarlanan Soluma Maruziyeti için Hava Sıvısı Arayüzü Bronşiyal Epitel Modeli

Bu protokol, sigara dumanının (CS) patofizyolojik etkilerinin, şirket içinde inşa edilmiş bir tüm vücut soluma (WBI) maruz kalma sistemi (WBIS) ile incelenmesini göstermektedir. Bu sistem, akciğer amfizem ve hematopoez üzerindeki CS aracılı etkilerin araştırılması için kontrollü tekrarlanabilir koşullar altında hayvanları CS'ye maruz bırakabilir.

Tüm Vücut Soluma Sistemi Kullanan Farelerde Sigara Dumanına Maruz Kalma

Burada, uzun süreli biyobankacılık için primer bronşiyal epitel hücrelerinin izolasyonu ve genişletilmesi ve hava-sıvı arayüzünde kültür yoluyla farklılaşmış epitel hücrelerinin üretilmesi için tekrarlanabilir, uygun fiyatlı ve sağlam bir yöntem sunulmaktadır.

Bronşiyal Epitel Hücrelerinin Biyobankacılık için Rezeke Akciğer Dokusundan İzole Edilmesi ve İyi Diferansiye Hava-Sıvı Arayüz Kültürlerinin Oluşturulması

Burada, murin hava yolu epitel hücrelerini izole etmek ve farklılaştırmak için, kronik sigara dumanı ekstraktına (CSE) alışmalarına odaklanan bir in vitro model açıklıyoruz. Model, CSE'nin multi-omik etkisini kapsamlı bir şekilde karakterize etmek için kullanılabilir, bu da muhtemelen kronik duman maruziyeti altındaki hücresel tepkiler hakkında bilgi sağlar.

Sigara Dumanı Ekstraktı ile Uyarılan Murin Hava Yolu Epitel Hücrelerinde Multi-Omiklerin Farklılaşması ve Değişikliklerinin İncelenmesi için İn Vitro Model

Keşfedin, organotipik 3D bronşiyal ve burun doku kültürü modellerini kullanarak sigara dumanının tekrarlanan maruziyet etkilerini değerlendirme yöntemlerini. Bu protokol, silyal vuruş frekansı ve doku bütünlüğü ölçümleriyle solunum toksikolojisi araştırmalarında hayvan testlerine alternatif sunar.

Tüm Sigara Dumanına Organotipik 3D Bronşiyal ve Burun Doku Kültürü Modelleri Tekrarlanan Pozlama Etki Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet