Lokalize Histopatolojik Analiz için bir Retina Protez ile implant İşleme Teknikleri Gözler için: Bölüm Retina Tacks ile 2 Epiretinal İmplantlar

Sert metal bileşenli retina protezleri geleneksel histolojik süreçlerle uyumlu değildir. Burada, metal bir T ile sabitlenmiş bir retinal implantın hemen bitişiğindeki gözün sağlığını değerlendirmek için teknikleri açıklıyoruz.Bu, önce gözün eşlik eden bir videoda açıklanan protokole göre çekirdeklendirilmesi ve sabitlenmesi ve ardından implant ve retinal T'yi içeren bir doku örneğinin diseke edilmesiyle gerçekleştirilir.İkinci adım, doku örneğini aşamalı olarak kurutmak ve daha sonra bir epoksi reçineye gömmektir. iki adımlı bir gömme işlemi kullanarak istenen yönlendirme. Daha sonra, son reçine bloğu özel bir tutucuya monte edilir ve implant ve çevresindeki oküler dokudan geçen bir kesit istenen seviyede açığa çıkana kadar kademeli olarak topraklanır.

Son adım, maruz kalan dokuyu yüzeyde boyamak ve ardından implante edilen proteze bitişik hücresel mimariyi görselleştirmek için yüksek güçlü bir diseksiyon mikroskobu ile görüntü ve fotoğraf çekmektir. Bu adımlar daha sonra gerektiği kadar birkaç kez tekrarlanır. Sonuç olarak, yerinde implant da dahil olmak üzere doku numunesi boyunca bir dizi kesitsel görüntü toplanır ve cihazın veya cerrahinin tasarımını iyileştirmenin yanı sıra belirli protezin güvenliğini değerlendirmeye yardımcı olmak için kullanılabilir.

Bu tekniğin geleneksel bıçak tabanlı kesme histolojisi gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, metalik bileşenler de dahil olmak üzere kalbe implante edilen nesnelerin işlem sırasında yerinde kalarak implant dokusu arayüzünün görüntülenmesine izin vermesidir. Bu yöntem, implante edilmiş bir retina protezine bitişik hassas oküler dokunun yapısal bütünlüğünün değerlendirilmesi gibi retina protezi alanındaki temel soruları yanıtlayabilir. Eşlik eden bir JoVE videosunda anlatıldığı gibi gözün enükleasyonunu ve fiksasyonunu takiben, implantı ve gözün dışına sabitlendiği noktayı görselleştirin.

15 derecelik bir bıçak kullanarak. Çevresel bir trans kornea kesisi yapın ve göz küresinin içini ortaya çıkarmak için kornea kapağını çıkarın. Bu epiretinal implant için cerrahi prosedürün bir parçası olan lensektomi vitrektomi sırasında lensin daha önce çıkarıldığını unutmayın.

Daha sonra disin, epiretinal implant ve metal T in situ ile arka kamarayı ortaya çıkarmak için irisi ve lensin kalan Z liflerini yerleştirin. İmplanta ve yapılan çalışmaya bağlı olarak, daha fazla diseksiyondan önce yabancı bileşenleri çıkarın. Mevcut örnekte, değerlendirilen epiretinal dizi, uyumlu bir silikon taşıyıcı içine yerleştirilmiş bir prototip hermetik, elmas elektrot ve elektronik paketten oluşmaktadır.

İstenilen yönde yapışmayı ve çevresindeki dokuyu içeren bir numuneyi dikkatlice inceleyin. Sklera, koroid ve retina dahil olmak üzere gözün arkasından tam kalınlıkta şeritler kesmek için ince diseksiyon makası kullanın. Burada elmas elektrot paketini neşter ile ince diseksiyon ile dikkatlice çıkarın.

İmplantın silikon gövdesini, retina yapışması ve platin kabloların kalıntıları ile birlikte bırakın. Raptiyenin uzunlamasına bir kesitini veren ve raptiyeye bitişik tüm retina katmanlarını gösteren bir numune alın. Ardından numuneyi %70 Etanol'e geri koyun.

Numuneyi ilerleyici etanol aşamalarında üç gün boyunca kurutun. İlk olarak, numuneyi iki saat, iki kez% 70 etanol içinde kurutun. Daha sonra, numuneyi iki kez iki saat% 80 etanol içinde kurutun ve ertesi gün gece boyunca numuneyi% 90 Etanol içinde iki kez kurutun, numuneyi iki saat% 100 etanol içinde iki kez ve daha sonra gece boyunca kurutmaya devam edin.

Son olarak, numuneyi iki kez iki saat boyunca %100 asetonda kurutun. Numuneyi asetondan çıkarın ve oda sıcaklığında hava kururken ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Sıvının yumuşak dokulardan uzaklaştırılması, hücrelerin çökmesine ve büzülmeye neden olur.

Numune, kıvrılmaya ve çökmeye başlamadan hemen önce epoksiye aktarılacaktır. Doku kıvrılması ve çökmesinin ne zaman meydana geldiğine dair bir değerlendirme deneyimle geliştirilir. Numuneyi şeffaf epoksi reçinesine gömmek için, göz dokusunu uygun bir sızdırmaz kapta sıvılaştırılmış epoksiye daldırın.

Epoksiyi bir vakum odasında nazikçe gazdan arındırın ve kuruması için gece boyunca oda sıcaklığında bırakın. Kürlenmiş epoksiyi ve numuneyi bir şerit testere ve kamış ile yeniden boyutlandırarak numuneyi istenen yönde gömmeye özen gösterin: Göz dokusunu içeren yeniden boyutlandırılmış blok, raptiyenin uzun ekseni kalıbın tabanına paralel olacak şekilde taze sıvılaştırılmış epokside yer alır. Yeniden boyutlandırma örneğini örnek tutucunun altına sabitlemek için bir parça süper yapıştırıcı kullanın.

Numune tutucuyu sıvılaştırılmış epoksi ile doldurun ve daha önce olduğu gibi gazdan arındırın, gece boyunca kürlenmeye bırakın. Daha sonra reçineyi bir öğütme numunesi tutucusuna monte edin ve numuneyi silisyum karbür kağıt kullanarak su ile 230 ila 250 RPM'de manuel olarak öğütün. Boyama için, zemin yüzeyini üç ila beş dakika veya leke oluşana kadar toin mavisi lekeye batırın.

Numuneyi musluk suyu ile duruladıktan sonra, numunenin zemin yüzeyini daha yüksek bir güç diseksiyonu ile görüntüleyin. Kapsam. Retinanın hücresel katmanlarını görselleştirmek için, numunenin hemen üzerindeki epoksinin üst yüzeyine bir damla damıtılmış su uygulayın. Hava epoksi arayüzündeki kırınımı yumuşatmak için.

Numuneyi aydınlatmak için bir fiber optik deveboynu ışık kaynağı kullanın. Önceden ayarlanmış bir numune kalınlığını her öğütme seferinde öğütme ve görüntüleme adımlarını tekrarlayın. Numune tutucunun minimum hassas ve tekrarlanabilir öğütme artışı 20 mikrondur.

Bu işlem, implant ve çevresindeki oküler dokudan geçen bir kesit istenen seviyede açığa çıkana kadar aşamalı olarak tekrarlanır. Gösterilen. Burada, öğütme işlemi sırasında çeşitli noktalarda bir titanyum retinal T'nin hemen yanında görüntülenen retina dokusunun örnek görüntüleri verilmiştir. Görüntüler, göze nüfuz eden ve skleradan çıkan, silikon ve toluidin mavisi lekeli ve lekelenmemiş retinanın bitişiğindeki raptiyenin uzunlamasına bölümlerini göstermektedir.

Artefaktal olmayan retina dekolmanı ve katlanması silikonun her iki tarafında hem düşük hem de yüksek güçte görülebilir. Raptiye mili silikona gömülü olarak görülebilir ve raptiyenin başı retina ve skleraya nüfuz etmiştir. Burada, hem düşük hem de yüksek güçte görüntülenen silikonun her iki tarafındaki boyanmamış retinada artefakt olmayan retina dekolmanı olduğu açıktır.

Örnek, eğik bir yerleştirme açısı nedeniyle retinanın bir tarafta sıkışması ve yapışmaya bitişik retina düzensizliği olduğunu göstermiştir. Bu prosedürü denerken, numuneyi, elde edilen zemin yüzeyleri istenen plana hizalanacak şekilde dikkatli bir şekilde gömmeyi, yönlendirmeyi ve kamışlamayı unutmamak önemlidir. Ayrıca, öğütülmüş numuneler bugün geri kazanılamayacağı için her öğütme aşamasında birden fazla fotoğraf toplanmalıdır.

Bu yöntem retinal protez histolojisi hakkında bilgi sağlayabilir. Derin beyin implantları, vasküler stentler veya ortopedik protezler gibi sert implante edilmiş bileşenler kullanan diğer sistemlerde cihaz doku arayüzünü görselleştirmek için de uygulanabilir.