Name: Lokalize Histopatolojik Analiz için bir Retina Protez ile implant İşleme Teknikleri Gözler için: Bölüm Retina Tacks ile 2 Epiretinal İmplantlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Öğrenin, epiretinal implantlar için göz dokusunun sağlığını değerlendirmek üzere epoksi reçine gömme ve taşlama tekniklerini kullanarak histolojik analiz yöntemlerini. Bu yaklaşım, implant-doku arayüzünü görselleştirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nicole Vella (Macquarie Üniversitesi) reaktifleri sağlamak için; Alexia Saunder (Biyonik Enstitüsü; BI), deneysel destek için Michelle McPhedran (BI), Chris Williams (BI); Kraliyet Victoria Göz ve Kulak Hastanesi (RVEEH) Biyolojik Araştırma Merkezi hayvan bakımı personeli; Veteriner tavsiyesi için Sue Pierce (RVEEH); Anthony Burkitt (Biyonik Vizyon Avustralya; BVA), Tamara Brawn (BVA) ve idari destek için BVA personeli. 
Bu araştırma, Avustralya Araştırma Konseyi (ARC) tarafından Biyonik Görme Bilimi ve Teknolojisinde Özel Araştırma Girişimi (SRI) aracılığıyla Bionic Vision Australia'ya (BVA) hibe edilerek desteklenmiştir. Biyonik Enstitüsü, Victoria Hükümeti'nden Operasyonel Altyapı Desteği alır ve ayrıca Bertalli Family Trust ve JT Reid Charitable Trust'tan destek alır. Fon sağlayıcıların çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayınlama kararı veya makalenin hazırlanmasında hiçbir rolü yoktu.
Bu makalenin Biyonik Vizyon Avustralya Konsorsiyumu yazarları (a-z): 
Penelope J. Allen, Owen Burns, Kate E. Fox, Kumaravelu Ganesan, David J. Garret, Hamish Meffin, Joel Villalobos ve Jonathan Yeoh.

NOT: Tüm işlemler Royal Victorian Göz ve Kulak Hastanesi Hayvancılık Araştırma ve Etik Kurulu tarafından onaylandı (RVEEH AEC; # 10-199AB). konular Ulusal Sağlık ve (2013) ve &quot;Hayvanları Önleme Yasası&quot; Tıbbi Araştırma Konseyi &quot;Bakım ve Bilimsel Amaçlı Hayvan Kullanım Uygulama Avustralya Kanunu&quot; na göre tedavi edildi (ve değişiklikler 1986). Tüm cerrahi, klinik değerlendirme ve elektrofizyolojik işlemler anestezi altında gerçekleştirildi ve tüm çabaları acı en aza indirmek için yapılmıştır. 1. Enükleasyon ve Fiksasyon NOT: Varsa, cihaz kabloları veya vitrektomi liman çevresinde ekstra özen, arkadaşı yazının 16 ayrıntılı olarak açıklanmıştır enükleasyon ve tespit prosedürü uygulayın. Kısaca, bu içerir: <ol><li> Transcardially soğuk nötr Buffe ardından ılık tuzlu su ile konuyu serpmekKırmızı formalin. </li><li> Görülecek şekilde hizmet etmek için göz küresi dikişlerle bağlayın. </li><li> Cihaz kabloları ve herhangi bir ek yamaları / sekmeler muhafaza, göz 16 enükleasyonu. </li><li> 36 saat - 18 Davidson&#39;un çözeltide göz Post-düzeltmek. </li><li> 8 saat - 6 için% 50 etanol transfer. </li><li> Diseksiyon kadar% 70 etanol ve buzdolabında (4 ° C) aktarın. </li></ol> 2. Elektrot Kaldırma ve Diseksiyon. NOT: Tüm epiretina implantları aynı form faktörüne sahip olacak, ama genel olarak bir elektrot dizisi ve esnek ve uyumlu taşıyıcı malzeme çeşit olacaktır. Retina kopçalanmaktadır cihazlar, metal çakmak bunları bir arada tutan, dizi ve gözün arka nüfuz yapışma delik bulunmaktadır. <ol><li> Implant ve retina tutturulur noktayı tahayyül edin. <ol><li> 15 derecelik bıçak kullanarak çevresel trans-kornea kesi yapmak ve exp kornea kapağı çıkarınaltta yatan iris ve lens ose. </li><li> 15 derecelik bıçak kullanarak, epiretinal implant ve yerinde metal tack ile arka odasını açığa lensin zonüler lifleri disinsert ve toto lensi çıkarın. </li></ol></li><li> İmplant ve çalışma yapılmaktadır bağlı olarak, daha önce diseksiyonu yabancı bileşenlerini kaldırmak. NOT: Bu örnekte, değerlendirilmekte olan Epiretinal dizi bir konformal silikon taşıyıcı içine yerleştirilmiş bir prototip hermetik elmas elektrot ve elektronik paketin oluşuyordu (evde üretilen, 20 bakınız). <ol><li> Burada, dikkatli bir neşter ile ince diseksiyon ile elmas elektrot paketi ayıklayın. Retina yapışma ve platin kablo kalıntıları (Şekil 2) ile birlikte implantın silikon gövdesini bırakın. Gömülü bir dizi / konut soruşturma kapsamında cihaz tasarımının bir parçası değilse, o zaman bu adımı (2.2) ihmal. </li></ol></li><li> Dikkatliceİstenilen yönde yapışma ve çevresindeki doku içeren bir örnek teşrih. Sklera, koroid ve retina olmak üzere gözün arka, tam kalınlıkta şeritler kesmek için ince diseksiyon makas kullanın. Yapışma bitişik tüm retina tabakaları gösteren, bir yapışkanlık uzunlamasına kesitini verir, bir örneği ele alalım (Şekil 2) NOT: numune için istenen oryantasyon istenen belirli sonuç bağlı olarak değişebilir. Örneğin, eğer bir sonra optik diski numune dahil edilmelidir optik diske çakmak hasar yakınlığı incelemek istemektedir. </li></ol> 3. Dehidrasyon, Gömme, Montaj, Taşlama, Boyama ve Görüntüleme <ol><li> Ilerleyen etanol aşamalarında üç gün boyunca örnek kurutmak: <ol><li> Iki kez 2 saat boyunca% 70 etanol içinde örnek dihidrat. </li><li> O / N sonra iki kez 2 saat boyunca% 80 etanol içinde örnek kurutmak ve. </li><li> 2 saat TWIC için% 90 etanol içinde örnek kurutmakör. </li><li> O / N sonra iki kez 2 saat süre ile% 100 etanol içinde örnek kurutmak ve. </li></ol></li><li> Iki kez 2 saat süre ile% 100 aseton içinde örnek dihidrat. <ol><li> Aseton numuneyi çıkarın ve oda sıcaklığında hava-kurudukça bir ışık mikroskobu altında gözlemlemek. Epoksi örnek aktarın o / çöküşü kıvırmak başlar hemen önce (3.4 adıma bakın). NOT: çökmüş hücreleri ve büzülme yumuşak dokular sonuçlarından sıvı çıkarılması. Doku kıvırma / çöküşü oluştuğunda bir takdir tecrübesi ile geliştirilmiştir. </li></ol></li><li> Üreticinin talimatlarına göre bir tıbbi dereceli epoksi reçine hazırlanması. Reçinenin sertleştirilmesi için, 1 saat ya da oda sıcaklığında 24 saat boyunca ya da 55 ° C kullanın. Hava kabarcıklarının bertaraf edilmesi için 50 mbar&#39;da ° &#39;de ~ 5 dakika boyunca bir vakum odasına koyun. Kaynatın epoksi karışımı neden olur aşırı vakum gibi manuel vakum düzenler ve gaz alma etkili bir meydana gelmeyeceği NOT: Adım 3.2 ile eş zamanlı olarak adım 3.3 gerçekleştirin. </li><li> Samp gömnet epoksi reçine le. Uygun bir yapışmalı kapta gazı alınmış epoksi göz dokusunu daldırın ve O bırakın / N RT&#39;de tedavi. </li><li> Yeniden boyutlandırma ve terbiyeli epoksi blok yeniden gömerek istenen yönde (Şekil 2) numune embed özen gösterin. (- Şekil 3A sarı fincan) tiramolanın uzun eksen kalıp altına paralel odaklı olacak şekilde göz dokusunu içeren resized blok-embed yeniden. </li><li> Bir taşlama numune tutucu reçine monte ve öğütülmesine - silisyum karbür kağıdı kullanarak (230 manuel taşlama, su ile 250 rpm) (800 ızgara ile başlayan, Şekil 3C ve 3E). </li><li> Boyama için, 3 toluidin mavisi boyası zemin yüzeyi daldırma - 5 dakika, ya da leke gelişene kadar (Şekil 3F). </li><li> Musluk suyu (Şekil 3G) ile durulayın. </li><li> Görüntü bir yüksek güç diseksiyon kapsamında numune zemin yüzeyi hücresel katmanları görselleştirmek içinRetina (Şekil 3H). Hava-epoksi arayüzünde kırınım pürüzsüz numune üzerinde epoksi üst yüzeyi üzerinde damıtılmış bir damla su uygulanır. Örnek aydınlatmak için bir optik fiber &#39;boyun&#39; ışık kaynağı kullanın. </li><li> Bir numunenin önceden ayarlanmış kalınlığı uzak taşlama her zaman (numune tutucu minimum hassas ve tekrarlanabilir taşlama artış 20 mikron), 3.9 - 3.6 tekrarlayın adımları. </li></ol>

<ol><li>Shepherd, R. K., Shivdasani, M. N., Nayagam, D. A., Williams, C. E., Blamey, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+prostheses+for+the+blind%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Visual prostheses for the blind.</a> Trends Biotechnol. 31, 562-571 (2013).</li>
<li>Santos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+the+inner+retina+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Preservation of the inner retina in retinitis pigmentosa.</a> Arch Ophthalmol. 115, 511-515 (1997).</li>
<li>Humayun, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+perception+in+a+blind+subject+with+a+chronic+microelectronic+retinal+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Visual perception in a blind subject with a chronic microelectronic retinal prosthesis.</a> Vision Res. 43, 2573-2581 (2003).</li>
<li>Roessler, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiographic+findings+folowing+tack+fixation+of+a+wireless+epiretinal+retina+implant+device+in+blind+RP+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Angiographic findings folowing tack fixation of a wireless epiretinal retina implant device in blind RP patients.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 249, 1281-1286 (2011).</li>
<li>Chow, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+artificial+silicon+retina+microchip+for+the+treatment+of+vision+loss+from+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The artificial silicon retina microchip for the treatment of vision loss from retinitis pigmentosa.</a> Arch Ophthalmol. 122, 460-469 (2004).</li>
<li>Zrenner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+electronic+chips+allow+blind+patients+to+read+letters+and+combine+them+to+words%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Subretinal electronic chips allow blind patients to read letters and combine them to words.</a> Proc Biol Sci. 278, 1489-1497 (2011).</li>
<li>Fujikado, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+of+semichronically+implanted+retinal+prosthesis+by+suprachoroidal-transretinal+stimulation+in+patients+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Testing of semichronically implanted retinal prosthesis by suprachoroidal-transretinal stimulation in patients with retinitis pigmentosa.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52, 4726-4733 (2011).</li>
<li>Saunders, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+surgical+procedure+for+implantation+of+a+prototype+suprachoroidal+retinal+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Experiment+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Development of a surgical procedure for implantation of a prototype suprachoroidal retinal prosthesis.</a> Clin Experiment Ophthalmol. , (2013).</li>
<li>Lee, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+microelectrode+arrays+for+artificial+retinal+implants+using+liquid+crystal+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of microelectrode arrays for artificial retinal implants using liquid crystal polymers.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 5859-5866 (2009).</li>
<li>Sakaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transretinal+electrical+stimulation+with+a+suprachoroidal+multichannel+electrode+in+rabbit+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Transretinal electrical stimulation with a suprachoroidal multichannel electrode in rabbit eyes.</a> Jpn J Ophthalmol. 48, 256-261 (2004).</li>
<li>Majji, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+histological+and+electrophysiological+results+of+an+inactive+epiretinal+electrode+array+implantation+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Long-term histological and electrophysiological results of an inactive epiretinal electrode array implantation in dogs.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 40, 2073-2081 (1999).</li>
<li>Walter, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+long-term+implantation+of+electrically+inactive+epiretinal+microelectrode+arrays+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Successful long-term implantation of electrically inactive epiretinal microelectrode arrays in rabbits.</a> Retina. 19, 546-552 (1999).</li>
<li>Ray, A., Chan, L., Thomas, B., Weiland, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prolonged+stimulation+at+the+electrode-retina+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Conf+Proc+IEEE+Eng+Med+Biol+Soc%22%5BJournal%5D)">Effects of prolonged stimulation at the electrode-retina interface.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 1, 1285-1287 (2006).</li>
<li>Colodetti, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+damaging+electrical+stimulation+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Pathology of damaging electrical stimulation in the retina.</a> Experimental eye research. 85, 23-33 (2007).</li>
<li>Nayagam, D. A. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Electrical+Stimulation+with+a+Suprachoroidal+Retinal+Prosthesis%3A+A+Preclinical+Safety+and+Efficacy+Study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chronic Electrical Stimulation with a Suprachoroidal Retinal Prosthesis: A Preclinical Safety and Efficacy Study.</a> PLoS One. 9, e97182(2014).</li>
<li>Nayagam, D. A. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+Processing+Eyes+Implanted+With+a+Retinal+Prosthesis+for+Localized+Histopathological+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50411(2013).</li>
<li>Laube, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+surgical+techniques+for+implantation+of+a+wireless+intraocular+epiretinal+retina+implant+in+Gottingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+Archive+For+Clinical+And+Experimental+Ophthalmology+%3D+Albrecht+von+Graefes+Archiv+fur+klinische+und+experimentelle+Ophthalmologie%22%5BJournal%5D)">Development of surgical techniques for implantation of a wireless intraocular epiretinal retina implant in Gottingen minipigs.</a> Graefe's Archive For Clinical And Experimental Ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 250, 51-59 (2012).</li>
<li>Gerding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+long-term+evaluation+of+intraocular+titanium+tacks+for+the+mechanical+stabilization+of+posterior+segment+ocular+implants%5BTitle%5D)+AND+%22Mat.-wiss.+u.+Werkstofftech%22%5BJournal%5D)">Successful long-term evaluation of intraocular titanium tacks for the mechanical stabilization of posterior segment ocular implants.</a> Mat.-wiss. u. Werkstofftech. 32, 903-912 (2001).</li>
<li>Seo, J. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicon+retinal+tack+for+the+epiretinal+%EF%AC%81xation+of+the+polyimide+electrode+array%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Applied+Physics%22%5BJournal%5D)">Silicon retinal tack for the epiretinal ﬁxation of the polyimide electrode array.</a> Current Applied Physics. 6, 649-653 (2006).</li>
<li>Hadjinicolaou, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+stimulation+of+retinal+ganglion+cells+with+diamond+and+the+development+of+an+all+diamond+retinal+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Electrical stimulation of retinal ganglion cells with diamond and the development of an all diamond retinal prosthesis.</a> Biomaterials. 33, 5812-5820 (2012).</li>
<li>Briggs, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+round+window+and+cochleostomy+approaches+with+a+prototype+hearing+preservation+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Audiol+Neurootol%22%5BJournal%5D)">Comparison of round window and cochleostomy approaches with a prototype hearing preservation electrode.</a> Audiol Neurootol. 11, Suppl 1. 42-48 (2006).</li>
<li>Shepherd, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+cochlear+implant+electrode+array+for+use+in+experimental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">An improved cochlear implant electrode array for use in experimental studies.</a> Hear Res. 277, 20-27 (2011).</li>
<li>Tykocinski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+electrode+position+in+the+human+cochlea+using+various+perimodiolar+electrode+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Otol%22%5BJournal%5D)">Comparison of electrode position in the human cochlea using various perimodiolar electrode arrays.</a> Am J Otol. 21, 205-211 (2000).</li>
<li>Hardie, N. A., MacDonald, G., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+imaging+and+3D+reconstruction+of+mammalian+cochlea+by+fluorescent+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A new method for imaging and 3D reconstruction of mammalian cochlea by fluorescent confocal microscopy.</a> Brain Res. 1000, 200-210 (2004).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur. İrfan Durmo, Cochlear Ltd.'nin bir çalışanıdır.

Standart histolojik teknikler nedeniyle, metal, cam ya da elmas bıçakları ile bu nesneleri kesme sınırlamalara yerinde sert metal implantları işleme koyamıyoruz. Bizim arkadaşı kağıdı 16, biz bir modifiye bütün göz tespit tekniği kullanılması artefakt retina Delaminasyonu azaltabileceğini gösterdi. Mevcut yazıda, bir taşlama kurdu ve yerinde 21-23 retina protezler için modifiye edilmiş koklear implant görselleştirmek için teknik parlatma. Retinaya bir elektrot dizisi sabitlemek için kullanılan bir titanyum çakmak, epiretinally, çevredeki göz dokusu ile birlikte epoksi gömülü edildi. Bu reçine bloğu daha sonra metal tack hemen bitişiğinde doku morfolojisi ortaya çıkarmak için uygun odaklı ve giderek zemin / cilalı oldu. Çeşitli derinliklerde bloğun cilalanmış yüzeyinin görüntüleri güçlü bir diseksiyon mikroskobu ile alınmıştır. Görselleştirilmesi ve değerlendirme,: Bu teknik için kullanışlıdırEpiretinal implanta komşu doku yanıtı ing; İmplant implantasyonu ile ilişkili cerrahi travmayı değerlendirmek için; Sert metal bileşenleri biyolojik reaksiyonu belirlemek için; ve implantın ve retina yüzeyi arasındaki mesafeyi ölçmek için. Bu teknik gözünde retina yapışma veya diğer sert (örneğin, metalik) nesnelerin bitişik bölgenin yerinde görselleştirme için gelecekte güvenlik çalışmalarında yararlı olacaktır. Bu epiretinally retinaya tutturdu protezlerin klinik öncesi güvenliğini değerlendirmek doğrudan uygulama vardır. Aynı zamanda, alt retina konumda implantlar ile temas içinde retina bölgelerinde doku hasarını değerlendirmek için yararlı olabilir. Tekniği doğru yapılmış olduğunu doğrulamak için çeşitli yollar vardır. Her aşamada, retina gözün dış katmanlara bağlı kalmalıdır. Brüt artefakt retina dekolmanı varsa, bu Hindu olabilirtespitle ilgili bir sorun yedik. Örnek gömülü olduğu ve bloğun taşlama-yüzü ile ortogonal yakın olmalıdır retina engellemek son reçine içinde odaklı yeniden zaman; Bu eğik kesme minimize edecektir. Bu (örneğin bir retina yapışma gibi) bir nesneyi hareket için gerekli (bilinen adım boyutu) artan öğütme adım sayısı nesnesinin boyutları ile buna bağıntılı olduğunu kontrol etmek yararlıdır. Teknik, birkaç şekilde optimize edilebilir. Öğütme işlemi ile bağlantılı epoksi bloğun yüzeyinde çizikler tedricen daha ince dereceli parlatma ile azaltılabilir. Bu çalışma için, biz 800, 1000, 1200, 2400, ve 4000 grade silikon karbür kağıdı kullanıldı. Elmas macun ayrıca, yüzey geliştirmek için kullanılabilir. Bir ince yüzey yüksek kaliteli görüntü verir ama ek parlatma zaman pahasına. Bu tekniğin sonuçlarını iyileştirmek için bir başka kritik husus opti seçim ve kalitesics ve aydınlatma görüntü yakalama için kullanılan. Diğer temel histolojik lekeleri - özellikle Nissl lekeleri, toluidin mavisi yerine kullanılabilir, ancak daha da optimizasyon ihtiyacı olabilir. Bazı lekeler reçine yanı sıra doku (örneğin, Eosin), bu nedenle sığ bir lehçe arka plan renk değişimi kaldırmak için boyama sonrası gerekebilir leke olacaktır. Uzman lekeler, flüoresan boyalar ve immünohistokimyasal teşebbüs değildi, ama çok özel bir sonuç arzu edildiği takdirde, her bir taşlama seviyesinde bu lekeleri gerçekleştirmek için gereken zaman engelleyici olması muhtemeldir. Bununla birlikte, yerleştirme basamak (adım 3.4) 24 önce, bir bütün olarak doku leke mümkün olabilir. Bu tekniğin ana sınırlama bu nedenle taşlama ve parlatma her aşamasında büyütme çeşitli birçok (muhtemelen gereksiz) görüntüleri yakalamak için ihtiyatlı olduğunu, ilgi bölgesi uzak zemin edildikten sonra, bu alınamaz olmasıdır. ÖyleAyrıca önemli her taşlama derinlik ayarı için küçük artışlarla kullanmak için. Bu tekniğin bir başka sınırlama olduğu dokuya cam slayt üzerine monte edilmiş ve bir standart (iletim) ışık mikroskobu ile inceledi ile karşılaştırıldığında optik büyütme ve çözünürlük. Prototip ve yeni bir implant cihazının güvenliğini değerlendirmek amacıyla, brüt patolojik değerlendirme birincil ilgi olduğunu. Bu teknik, bir retina yapışma ile ilişkili klinik olarak önemli hasar gözlemlemek için etkili bir yöntem sağlar. Uygulamada, eziyet, cila toplamak ve (bir zamanlar gömülü) verilen örnek fotoğraflamak için gerekli genel Zamanla bu bölümüne bir parafin blok veya dondurulmuş bölümü alacağını zaman karşılaştırılabilir. Retina implantların kapsamı dışında uygulamalara uzatılabilir mevcut tekniklerin potansiyeli de vardır. Bu teknik, implant ekstre feasib olmayan bir sabit implant bitişik doku değerlendirmek için uygundurle veya arayüz zarar olacaktır. Örneğin, bu yöntem, ilaç iletimi için derin beyin ya da periferal sinir elektrot kanüller gibi geleneksel histolojik teknikler ile kesilemezler metal (örneğin, platin, nitinol, vs.) yapılmış implantlar değerlendirmek için genişletilebilir, vasküler stentler veya ortopedik protezler.

Retinitis pigmentosa (RP) nöral aktivitenin içine, fotonların şeklinde, ışık transdüklenmesinden sorumlu retinanın en dış tabakasındaki hücreler olan fotoreseptör, yaygın kaybına neden olur kalıtsal bir hastalıktır. Önemlisi, RP hastalar genellikle hala işlevsel onların retinanın diğer katmanları artık nöronlar var. Retina protezleri görsel yolu 1,2 etkinleştirmek için elektrik stimülasyonu ile bu hayatta nöronlar hedefleyerek bu hastalara bazı sınırlı vizyon geri yeteneğine sahiptir. Klinik çalışmalarda Algısal sonuçları erken dönem sonuçları umut verici gösterilmiştir ve son zamanlarda bazı cihazlar ticari kullanım için onaylanmıştır. Subretinally 5,6 ve 7,8 suprachoroidally epiretinally 3,4,: Şu anda, üç ana anatomik klinik retina protezleri yerleştirilmiş edildiği yerleri vardır. Farklı cihazlar farklı malzemeler kullanmak ve onların formu özelleştirilmişOnlar implante edildiği yere. Ancak, tüm elektrik darbeleri ile retinanın kalan nöronlar aktive ederek görsel gözlemleri oluşturun. Herhangi bir tıbbi protez nedeniyle ilk yerleştirme mekanik etkilere veya sonradan devam eden kuvvetler çevre dokulara zarar için potansiyeli vardır. Retinal protezler gibi implante uyarıcıları, durumunda, elektriksel parametre güvenli sınırlar içinde olması gereken ek bir düşünce de bulunmaktadır. Hasta güvenliği her şeyden önemlidir, bu nedenle cihazların titizlikle klinik 9-15 ayar geçmeden önce preklinik çalışmalarda test edilmelidir. Bizim tamamlayıcı madde olarak, suprakoroidal boşluk 16 içinde yer alan bir implant çevreleyen göz lokalize histopatolojik değerlendirilmesi için bir yöntem açıklamıştır. Bu yazıda, (fe bir klinik öncesi de epiretinally retinaya tutturdu bir elektrot dizisi, çevredeki göz dokusunu görselleştirmek için bir teknik tarifçizgi) modeli (Şekil 1). Epiretinal konumu görsel protez bulmak için en sık kullanılan konumdur. Burada yer alan elektrot diziler genellikle göz 17-20 tüm katmanları nüfuz metal tack ile retina yapıştırılmıştır. Önce bu yazıda anlatılan teknikleri, doğru bir retinal ve hemen bir yapışmaya çevreleyen diğer dokulara değerlendirmek zor oldu. Nötr tamponlu formalin kullanarak standart göz fiksasyon nedeniyle tack sabit noktaya karşı retina ve sklera diferansiyel hareketine artefakt retina hasarına neden olmuştur. Bu nedenle tack ve Epiretinal dizi kaynaklanan herhangi bir gerçek hasar doğru tespit edilemedi. Metal nesneler kolayca geleneksel histolojik aparatı ile kesilmiş olamaz Buna ek olarak, göz dokusu kesit yerinde retina yapışma ile yapılabilir olamazdı; histolojik işlem de önce yapışma çıkarmadanBu da suni retina hasara yol açtı gibi istenmeyen. Bu çalışmanın iki amacı vardı: yapışma ve Epiretinal implant dizi kaynaklanan herhangi bir hasar güvenilir değerlendirilebilir böylece 1) retina dekolmanı eseri azaltmak için; ve 2) çıkarmadan tack bitişik retina mimari görselleştirmek için. Suni retina delaminasyona azaltır, (yardımcı madde 16 de tarif edildiği gibi) amaca 1 elde etmek için, yeni bir tespit tekniği kullanılmıştır. Amaca 2 elde etmek amacıyla, taşlama ve başlangıçta koklear implant elektrotlar 21-23 in situ gözlenmesi için geliştirilen tekniği, parlatma, bir gömme modifiye. artefakt retina hasarı en aza indirmek ve bu nedenle yapışma ve Epiretinal dizi neden olası hasar doğru değerlendirilmesini izin verirken, bu yazıda anlatılan yöntemler yerinde bir çivinin çevreleyen retina görselleştirme ve bitişik sağlar.

<table><tbody><tr><td>Aseton</td><td>Kimyasal Tedarik</td><td>AA008</td><td>Propanone BHD Tıbbi sınıf</td></tr><tr><td>Epo-Tek 301 Epoksi Epoksi</td><td>Teknolojisi</td><td>Bölüm A 1675-54-3 Bölüm B 9046-10-0</td><td></td></tr><tr><td>Etanol %70-75 v/v</td><td>Merck PTY LTD</td><td>4.10261</td><td>Alkol</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck PTY LTD</td><td>90143</td><td>Alkol</td></tr><tr><td>Toluidin mavisi O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3260</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiamin Tetraasetik Asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TegraPol taşlama/parlatma makinesi</td><td>Struers</td><td>TegraPol-25</td><td></td></tr><tr><td>AccuStop numune tutucu</td><td>Struers</td><td>Accustop</td><td></td></tr><tr><td>Işık mikroskobu</td><td>Leica</td><td>MZ16</td><td></td></tr><tr><td>Objektif lens</td><td>Leica</td><td>2.0x Planapo Objektif</td><td></td></tr><tr><td>Dijital Mikroskop Kamera</td><td>Leica</td><td>DFC-420C</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Yazılımı</td><td>Leica&nbsp;</td><td>Uygulama Paketi v4.1.0</td><td></td></tr></tbody></table>

lokalize histopatolojik analiz için bir retina protez ile implant İşleme teknikleri gözler için: bölüm retina tacks ile 2 epiretinal İmplantlar

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Belirli körlük biçimlerinin tedavisi için retinal protezler, şu anda pazara giren ticari cihazlarla dünya çapında klinik deneylerde ilgi görmektedir. Bu cihazların güvenliğini değerlendirmek için preklinik çalışmalarda güvenilir tekniklere ihtiyaç duyulmaktadır. Bununla birlikte, bazı retinal implantlarda kullanılan sert metal bileşenler, özellikle çevre dokunun hassas doğası göz önüne alındığında, geleneksel histolojik süreçlerle uyumlu değildir. Burada, epiretinal olarak metal bir çivi ile sabitlenmiş bir retina implantının hemen bitişiğindeki gözün sağlığını değerlendirmek için teknikleri açıklıyoruz.
Retinal protezlerde göz dokusu ile temas halinde olan elektrot dizileri bulunur. İmplantasyon için en sık kullanılan yer, implantın gözün tüm katmanlarına nüfuz eden metal bir çivi ile retinaya sabitlendiği epiretinal konumdur (gözün arka odası). Önceki yöntemler, geleneksel histolojik tekniklerin metal nesneleri kesememesi nedeniyle proksimal oküler dokuyu yerinde yapışma ile değerlendirememiştir. Sonuç olarak, eğer varsa, raptiye yerleştirmenin neden olduğu lokalize hasarı değerlendirmek zor olmuştur.
Bu nedenle, retinal bir yapışma ve implant etrafındaki dokuyu görselleştirmek için bir teknik geliştirdik. Gözün yumuşak hassas dokuları için koklear implant etrafındaki sert kemik dokusunu işlemek ve görselleştirmek için kullanılan yerleşik bir tekniği değiştirdik. Numunenin yapısını stabilize etmek ve korumak için implant ve retina yapışması da dahil olmak üzere sabit göz dokusunu epoksi reçineye yönlendirdik ve gömdük. Gömülü numuneler daha sonra öğütüldü, cilalandı, boyandı ve numune boyunca artan derinliklerde çeşitli büyütmeler altında görüntülendi. Bu teknik, metal yapışmaya bitişik göz dokusu bütünlüğünün ve sitomimarisinin güvenilir bir şekilde değerlendirilmesine izin verdi.

tespit protokolü esas artefakt dekolmanı ve retina 16 delaminasyonuna azalır. Epoksi bloğu içinde numunenin Yönlendirme tarif edilen iki adımlı gömme işlemi kullanılarak sürekli olarak elde edildi. artan öğütme işlemi en iyi sonuçları elde etmek için el becerisi orta düzeyde gerekli ama artım çözünürlüğü üzerinde ince kontrol sağlamıştır ayarlanabilir numune tutucu tarafından destekli. Tüm durumlarda (n = 5) çakmak bulunan ve oldu toprak / arzu ve tutarlı sonuçlar ile parlatılır. çiviler bitişik retinae çözülebilir ve uygun bir şekilde boyanmıştır. Bir notu P # 800 silisyum karbür kağıdı ile epoksi reçine bloğun yüzeyi parlatılması gömülü doku hücresel makro görüntü yeterli oldu. Daha yüksek dereceli kağıt, veya elmas harç madde de eğer istenirse, herhangi bir derinlikte parlatmak için kullanılabilir. Bir diseksiyon mikroskobu ve fiber optik &#39;boyun&#39; aydınlatabilirizt kaynak plan bloğu ve gömülü doku numunesinin yüzeyi görüntülenmesi için uygun olduğu bulunmuştur. ışık kaynağının konumu mikroskop ile en iyi aydınlatma ve kontrast verdi konum ve açı bulmak için deneme yanılma yoluyla değiştirilmiştir. Bloğun yüzeyine damıtılmış bir damla su ekleyerek, örnek olarak öncelikle epoksi- hava ara-yüzü en açık yolu difraksiyonu ve / veya düz bozuklukları azaltmak için yararlı olmuştur. Şekil 4, bir titanyum retina hemen bitişik görsel retina dokusunun, örneğin görüntüler gösterir Bu tekniği kullanarak çakmak. Sigara suni retina dekolmanı ve katlanır silikon (Şekil 4A) her iki tarafında görülebilir. çakmak mili silikon gömülü görünür; tack baş retina ve sklera nüfuz etmiştir. Silikon (Şekil 4C) lekelenmemiş retina iki tarafında olmayan suni retina dekolmanı bulunmaktadır. teknik Ther, bu durumda, bu göstermiştirE nedeniyle eğik bir ekleme açısına bir tarafında retina yapışma ve sıkıştırma bitişik retina düzensizlik olduğunu. Sunulan görüntüler, sadece tekniği değil, genel olarak çakmak-zarar histopatolojik temsilcisi başarı çizimler olduğunu unutmayın. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52348/52348fig1highres.jpg" /> Epiretinal elektrot dizisinin Şekil 1. Yerleştirme. (A) posterior sklera, koroid ve retina dejenere (fotoreseptörleri eksik) büyütülmüş kesitini gösteren gözün şematik. Bir elektrot dizisi. Epiretinally yapıştırılmış, mavi tasvir Epiretinal elektrot dizisinin (B) Bilgisayar destekli çizim-almaktadır. Bir entegre devre (&#39;çip&#39;) ve elektrot paketi; b titanyum retina yapışma; c tıbbi silikon konut; d kurşun çıkış noktası. Panel A, bir orijinal illustrati modifiyeBiyonik Vizyon Avustralya, telif hakkı Beth Croce verilen nezaket üzerinde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52348/52348fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52348/52348fig2highres.jpg" /> Şekil 2. Elektrot kaldırma ve göz diseksiyonu. Yerinde Epiretinal yapışma ile enüklee kedi göz Yüksek dinamik aralık makro fotoğraflar. (A) Davidson&#39;un fiksatif ile Mesaj tespit retina mimari 16 korumak için, çıkarılan göz disseke edildi. elektrot dizisi paketi silikon taşıyıcı çıkarıldı geri kalan implantın yapışma (ok) ve silikon gövdeli (kesikli kare dış hatlıdır elektrot dizisinin orijinal konumunu gösterir). (B), göz bitişik uzunlamasına bir kesite sahip kesitlere ayrılmıştır çakmak(Kesikli çizgi). çakmak Göz yuvası (ok) posterior duvarında gömülü kalır, sklera ile ağırlıklı olarak stabilize. Kaldırılan elektrot dizi altındaki retina içeren bölüm standart histolojik işlemler 16 (sol segment) için hazırlanan ise yapışma içeren doku bölümünde, reçine gömme ve taşlama (sağ kesimi) için hazırlanmıştır. 0.5 mm&#39;lik artışlarla birlikte bir cetvel her panelin alt kenarında gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52348/52348fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52348/52348fig3highres.jpg" /> Şekil 3. Epoksi gömülmesi ve yapışma ve retina dokusunun taşlama. Gömülü epoksi fotoğrafları ve hizalanmış doku örneği, taşlama, boyama ve yapışma ve retina dokusunun görüntüleme. (A) tac<html> k örnek bir epoksi reçine blok gömülü edildi. Kalıp kullanarak, numune uzunlamasına düzlem kalıbın dibine paralel olacak şekilde yönlenmiştir. Öğütme (B) yapışma numunesini ihtiva eden vulkanize epoksi bloğu. (C), epoksi blok bir öğütme numune tutucuya monte edilmiştir, hazır . (D) örnek zemin dokusunun yani görüntülü bölümleri retina hücresel katmanları ve yapışma boyuna ekseni ihtiva odaklı edildi. (E) örnek bir döner taşlama silisyum karbür kağıt kullanarak zemin oldu. (F) zemin yüzeyi Blok retina katmanları tespit etmek toluidin mavisi ile lekelenmiştir. (G) blok Boya fazlasını uzaklaştırmak için musluk suyu ile durulandı. (H), mavi lekeli retina tabakalar ve yapışmayan bir yüksek güçlü diseksiyon kapsamı kullanılarak görüntülenmiştir toluidin. reklam / 52.348 / 52348fig4highres.jpg &quot;/&gt; Yapışma ve retinanın Şekil 4. yüksek ve düşük güç görüntüler. Çeşitli noktalarda taşlama işlemi sırasında görüntü çakmak (yıldız işareti) uzunlamasına bölümleri (&#39;S&#39; sklera göz nüfuz ve çıkarken gösteren bir diseksiyon kapsamı ile alınmıştır ), silikon (hash) ve lekeli toluidin mavisi ve lekesiz retina (&#39;R&#39;) bitişik. Bu örnek görüntüler sadece mevcut görselleştirme tekniği göstermek için vardır, ve tüm Epiretinal implant veya çakmak ekleme histoloji sonuçları temsilcisi değildir unutmayın. Platin kablolama zemin kalıntıları panelleri AD (&#39;W&#39;) görebilir. (A) Düşük güç, retina ve sklera nüfuz tiramolanın lekesiz görüntüsü. (B) retina dekolmanı Yüksek enerjili görüntü ve lekesiz retina bitişik katlanır çakmak şaftının merkezinde görüntü A. (C) Düşük güç görüntüde silikon taşıyıcı. <strong&gt; (D) Ayrı bir örnekte görüntü C (E) tack merkezinin Yüksek güç görüntüsü, hiçbir silikon taşıyıcı ile, çakmak kabzası altında toluidin mavisi lekeli retina yüksek enerjili görüntü hemen önce, gösterilir . yapışmayan milini (F) Normal toluidin blue ile boyanan retina mimari taşlama (GCL: retina ganglion hücre tabakası, INL: iç nükleer tabaka; onl: Dış nükleer tabaka; PR: fotoreseptör T: kedi Tapetum lucidum) aynı taşlama tekniği kullanılarak görüntülendi . Her paneldeki Ölçek çubukları: A ve C = 2 mm; B ve D = 500 mm; E = 200 mikron; F 100 mikron =.

Burada, metal bir epiretinal yapışma ve retinal protezin hemen bitişiğindeki oküler dokuyu görselleştirmek için histolojik teknikleri açıklıyoruz.

Lokalize Histopatolojik Analiz için bir Retina Protez ile implant İşleme Teknikleri Gözler için: Bölüm Retina Tacks ile 2 Epiretinal İmplantlar

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Sert metal bileşenlere sahip retinal protezler, geleneksel histolojik süreçlerle uyumlu değildir. Burada, metal bir T ile epiretinal olarak sabitlenmiş bir retinal implantın hemen bitişiğindeki göz sağlığını değerlendirme tekniklerini açıklıyoruz. Bu işlem, öncelikle yardımcı bir videoda açıklanan protokole göre gözün nükleasyonu ve fiksasyonunun yapılması ve ardından implant ile retinal T'yi içeren bir doku örneğinin diseke edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, doku örneğinin kademeli olarak dehidrate edilmesi ve ardından iki aşamalı bir gömme işlemi kullanılarak istenen yönelimde bir epoksi reçineye gömülmesidir. Sonrasında, nihai reçine bloğu özel bir tutucuya yerleştirilir ve implant ile çevredeki oküler doku boyunca bir kesit istenen seviyede açığa çıkana kadar kademeli olarak aşındırılır.Son adım, açığa çıkarılan dokunun yüzey boyamasının yapılması ve ardından implante edilen protezin bitişiğindeki hücresel mimariyi görselleştirmek için yüksek güçlü bir diseksiyon mikroskobu ile görüntülenmesi ve fotoğraflanmasıdır. Bu adımlar, gerektiği şekilde birkaç kez tekrarlanır. Nihayetinde, yerindeki implantı da içeren doku örneği boyunca bir dizi kesit görüntüsü toplanır; bu görüntüler cihazın veya cerrahinin tasarımını geliştirmek için kullanılabileceği gibi, söz konusu protezin güvenliğinin değerlendirilmesine de yardımcı olabilir.Bu tekniğin geleneksel bıçak tabanlı kesim histolojisi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, metalik bileşenler dahil olmak üzere kalbe implante edilmiş nesnelerin prosedür sırasında in situ kalabilmesi ve böylece implant-doku ara yüzeyinin görüntülenmesine olanak sağlamasıdır. Bu yöntem, implante edilmiş bir retinal protezin bitişiğindeki hassas oküler dokunun yapısal bütünlüğünün değerlendirilmesi gibi, retinal protez alanındaki temel sorulara yanıt verebilir. Gözün enükleasyonunun ve eşlik eden bir JoVE videosunda açıklandığı şekilde fiksasyonunun ardından, implandı ve gözün dış kısmına sabitlendiği noktayı görüntüleyin.15 derecelik bir bıçak kullanarak çevresel bir transkorneal insizyon yapın ve göz küresinin iç kısmını açığa çıkarmak için kornea kapağını kaldırın. Bu epiretinal implantın cerrahi prosedürünün bir parçası olan lenzektomi vitrektomi sırasında lensin daha önce çıkarıldığını unutmayın.Ardından diseksiyon yaparak irisi ve lensin kalan Z liflerini kenara çekerek, epiretinal implantın ve metal T'nin yerinde olduğu arka kamara ortaya çıkarın. Kullanılan implanta ve yürütülen çalışmaya bağlı olarak, daha fazla diseksiyona geçmeden önce gereksiz bileşenleri çıkarın. Mevcut örnekte, değerlendirilen epiretinal dizi, konformal bir silikon taşıyıcı içine yerleştirilmiş prototip hermetik, elmas elektrot ve elektronik paketinden oluşmaktadır.Raptiyeyi ve çevre dokuyu içeren bir örneği istenen yönelimde dikkatlice diseke edin. Sklera, koroid ve retinayı içerecek şekilde gözün arka kısmından tam kalınlıkta şeritler kesmek için ince diseksiyon makası kullanın. Burada, skalpel ile ince diseksiyon yaparak elmas elektrot paketini dikkatlice çıkarın.İmplantın silikon gövdesini, retinal raptiye ve platin kablo kalıntılarıyla birlikte bırakın. Tüm retinal tabakaların raptiyeye komşu olduğu alanı gösteren, raptiyenin boylamasına bir kesitini içeren bir örnek alın. Ardından örneği %70 Ethanol içine geri koyun.Numuneyi üç gün boyunca kademeli etanol aşamalarıyla dehidre edin. İlk olarak, numuneyi %70 etanol içinde iki saat boyunca iki kez dehidre edin. Ardından, numuneyi %80 etanol içinde iki saat boyunca iki kez dehidre edin ve ertesi gün boyunca numuneyi %90 etanol içinde iki saat boyunca iki kez dehidre edin; ardından numuneyi %100 etanol içinde iki saat boyunca iki kez ve sonrasında gece boyunca dehidre etmeye devam edin.Son olarak, örneği iki kez ikişer saat boyunca %100 asetonda dehidrate edin. Örneği asetondan çıkarın ve oda sıcaklığında hava ile kururken bir ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Yumuşak dokulardan sıvının uzaklaştırılması, hücrelerin çökmesine ve büzülmeye neden olur.Örnek, kıvrılmaya ve çökmeye başlamadan hemen önce epoksiye aktarılacaktır. Dokunun ne zaman kıvrılıp çökeceğine dair bir anlayış, deneyimle gelişir. Örneği şeffaf epoksi reçine içine gömmek için, göz dokusunu uygun, sızdırmaz bir kap içerisindeki sıvılaştırılmış epoksiye daldırın.Epoksiyi bir vakum odasında nazikçe gazdan arındırın ve kürlenmesi için oda sıcaklığında gece boyunca bekletin. Kürlenmiş epoksiyi ve örneği bir şerit testere ve zımpara ile yeniden boyutlandırarak, örneği istenen yönde gömmeye dikkat edin. Göz dokusunu içeren yeniden boyutlandırılmış bloğu, raptiyenin uzun ekseni kalıbın tabanına paralel olacak şekilde taze sıvılaştırılmış epoksiye yerleştirin. Yeniden boyutlandırılan örneği örnek tutucunun tabanına sabitlemek için bir miktar hızlı yapıştırıcı kullanın.Numune tutucuyu sıvılaştırılmış epoksi ile doldurun ve daha önce yapıldığı gibi gazını aldıktan sonra gece boyunca kürlenmeye bırakın. Ardından reçineyi bir taşlama numune tutucusuna yerleştirin ve su açıkken silikon karbür kağıdı kullanarak numuneyi manuel olarak 230 ila 250 RPM hızında taşlayın. Boyama işlemi için, taşlanmış yüzeyi üç ila beş dakika veya boya gelişene kadar toine mavisi boyasına batırın.Numuneyi musluk suyu ile duruladıktan sonra, örneğin aşındırılmış yüzeyini daha yüksek büyütmeli bir diseksiyon mikroskopu ile görüntüleyin. Retinanın hücresel katmanlarını görselleştirmek için, örneğin hemen üzerindeki epoksinin üst yüzeyine bir damla distile su uygulayın. Bu işlem, hava-epoksi ara yüzeyindeki kırılmayı giderecektir.Numuneyi aydınlatmak için optik fiber kuğu boynu ışık kaynağı kullanın. Her seferinde numuneden önceden belirlenmiş bir kalınlıkta aşındırma yaparak taşlama ve görüntüleme adımlarını tekrarlayın. Numune tutucunun minimum hassas ve tekrarlanabilir taşlama artışı 20 mikron'dur.Bu işlem, implant ve çevresindeki oküler doku boyunca bir kesit istenen seviyede açığa çıkana kadar kademeli olarak tekrarlanır. Burada, taşlama sürecinin çeşitli aşamalarında bir titanyum retinal T'nin hemen bitişiğinde görselleştirilen retinal dokunun örnek görüntüleri yer almaktadır. Görüntüler, gözden geçip sklera üzerinden çıkan raptiyenin boyuna kesitlerini; silikon ve toluidin mavisi ile boyanmış ve boyanmamış retina ile bitişik halde göstermektedir.Hem düşük hem de yüksek büyütmede, silikonun her iki yanında artefakt kaynaklı olmayan retinaye ayrılma ve katlanmalar görülebilir. Sabitleme iğnesi (tack) şaftının silikona gömülü olduğu görülmekte ve iğne başı retina ile sklerayı penetre etmiştir. Burada, hem düşük hem de yüksek büyütmede görüntülenen silikonun her iki tarafındaki boyanmamış retinada, artefakt kaynaklı olmayan retinaye ayrılmanın olduğu belirgindir.Örnekte, tack'e komşu retinada organizasyon bozukluğu ve eğik yerleştirme açısı nedeniyle retinanın bir tarafında bası olduğu görülmüştür. Bu prosedür uygulanırken, sonuçta elde edilen taşlanmış yüzeylerin istenen düzlemle hizalanması için örneğin dikkatle gömülmesi, yönlendirilmesi ve yerleştirilmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir. Ayrıca, taşlanmış örnekler daha sonra geri kazanılamayacağı için her taşlama aşamasında birden fazla fotoğraf çekilmelidir.Bu yöntem, retinal protez histolojisi hakkında bilgi sağlayabilir. Ayrıca, derin beyin implantları, vasküler stentler veya ortopedik protezler gibi sert implant bileşenleri kullanan diğer sistemlerdeki cihaz-doku arayüzünü görselleştirmek için de uygulanabilir.

techniques-for-processing-eyes-implanted-with-retinal-prosthesis-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kağıt kadavra donör oküler Dünya'dan retina dokuları içini temizlemek için basitleştirilmiş bir tüketim kornea tekniği ve açıklar. Tekniği oküler dünyanın diğer dokulara zarar vermeden nakli, cerrahi veya araştırma amaçlı kullanılmak üzere özel tüketim kaliteli dokular için yardımcı olacaktır Burada anlatılan.

Için Basitleştirilmiş Tekniği<em&gt; Yerinde</emİnsan Oküler Globe gelen Kornea ve Retina Doku Eviserasyon of&gt; eksizyonu

Bir retina uyarıcı içinde tek tek elektrotlar doğrudan bitişik retina hücre mimarisini görselleştirmek teknikleri.

Lokalize histopatolojik analizi için bir Retina Protez ile implant İşleme Gözler Teknikleri

Burada açıklanan protokol, tam montajlı bir retinal preparatın yapısal değerlendirmesi içindir. Bu, doku diseksiyonunun tanımlarını, hidrofilize politetrafloroetilen (PTFE) membran ekine montajı, floresan işaretleyicilerle bolus yüklemesini ve hücresel ve sinaptik bileşenlerin immünohistokimyasal analizi için karbodiimid ve paraformaldehit ile fiksasyonun karşılaştırılmasını içerir.

Görüntüleme ve İmmünhistokimyanın için Retina Wholemount Hazırlık için optimize edilmiş Protokolü

Burada, sıçanlarda ve farelerde bir RPE hücresi bolusunu subretinal olarak enjekte etmek için multimedya formatında topluluk tarafından kabul edilen bir protokol sunuyoruz. Bu yaklaşım, retinal dejenerasyonun hayvan modellerinde implantasyon üzerine aşılanmış RPE hücrelerinin kurtarma potansiyellerini, güvenlik profillerini ve hayatta kalma kapasitelerini belirlemek için kullanılabilir.

Süspansiyon Retina pigment epiteli Hücreleri sunun Kemirgenler Subretinal Enjeksiyonları Sahne

Retina pigment epiteli (RPE) yedek stratejileri ve gen temelli tedavi birkaç retinal dejeneratif koşulları için kabul edilir. Klinik çeviri için, büyük göz hayvan modelleri hastalarda uygulanabilir cerrahi teknikleri incelemek gerekmektedir. Burada çok yönlü ve maliyet-etkin bir RPE transplantasyon, yönelikse subretinal cerrahi için bir tavşan modeli sunuyoruz.

Tavşanlarda Subretinal Cerrahi Adım Protokolle Bir Adım

Retina pigment epitel hücreleri hücre-replasman tedavisi için Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu gelişmiş form olarak hizmet verebilir. Bu iletişim kuralı coğrafi Atrofi büyük gözlü modeli ve hastalık bu modeline insan embriyonik kök hücre kaynaklı retina pigment epitel hücrelerinin nakli subretinal nesil açıklar.

Büyük gözlü manken coğrafi Atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina Pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli

Bu çalışma, eksplant kullanımı sırasında retina bütünlüğünü tehlikeye atmayı önleyen yeni bir insan organotipik retina kültürü (HORC) modeli geliştirmeyi amaçlamaktadır. Bu, retinanın aşırı vitreus ve alttaki retina pigment epitel-koroid (RPE-choroid) ve sklera ile kültleşmesi ile elde edilir.

Yeni bir İnsan Organotipik Retina Kültürü Tekniğinin Karakterizasyonu

İnsan olmayan primat (NHP), anatomik ve genetik benzerlikler nedeniyle insan retina hücresel terapötiklerini incelemek için ideal bir modeldir. Bu makalede, NHP gözündeki retina pigment epitel hücrelerinin submaküler nakli için bir yöntem ve makula manipülasyonu ile ilişkili intraoperatif komplikasyonları önleme stratejileri açıklanmaktadır.

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Mevcut multielektrot dizisinin veya yama kelepçesi ekipmanının modifikasyonu, ex vivo elektroretinogramı daha yaygın olarak erişilebilir hale getirir. Exvivo ışık yanıtlarını kaydetmek ve sürdürmek için geliştirilmiş yöntemler, sağlıklı retinada, göz hastalıklarının hayvan modellerinde ve insan donör retinalarında fotoreseptör ve ON-bipolar hücre fonksiyonunun incelenmesini kolaylaştırır.

Ex Vivo Elektroretinogramın Küçük ve Büyük Gözlerde Retina Fonksiyonunu İncelemesi için Kurulum ve Koşulların Optimize Edilmesi

Retina, laminer yapısı boyunca karmaşık uzamsal organizasyon sergiler. Modern mekansal transkriptomik ve dizileme teknikleri, 20 μm kalınlığında doku kesitleri &lt; gerektirir ve bu da retinal araştırma uygulanabilirliklerini sınırlar. Bu taze dondurulmuş kriyoseksiyon yöntemi, düzlemsel uzamsal ilişkileri korurken fare retinasının ince yüz kesitlerini üretir ve laminalar arasında kapsamlı moleküler haritalama sağlar.

En yüz Yüksek Boyutlu Mekansal Moleküler Analiz için Fare Retinasının Kriyoseksiyonu

Öğrenin, epiretinal implantlar için göz dokusunun sağlığını değerlendirmek üzere epoksi reçine gömme ve taşlama tekniklerini kullanarak histolojik analiz yöntemlerini. Bu yaklaşım, implant-doku arayüzünü görselleştirmeyi sağlar.

Lokalize Histopatolojik Analiz için bir Retina Protez ile implant İşleme Teknikleri Gözler için: Bölüm Retina Tacks ile 2 Epiretinal İmplantlar (Video) | JoVE Journal

Lokalize Histopatolojik Analiz için bir Retina Protez ile implant İşleme Teknikleri Gözler için: Bölüm Retina Tacks ile 2 Epiretinal İmplantlar

Daha fazla video keşfet