Name: Farelerde Hipokampal Bölgesi Dentate Gyrus dendritik arborization Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Öğrenin fare hipokampusunda dentritik arborizasyonu değerlendirmek için gerçek zamanlı izleme ve geniş alan derinliği görüntüleme yöntemlerini. Bu teknikler nöronal bağlantı ve sinirbilim araştırmalarında kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma LuMind Vakfı, Research Down Syndrome ve Alzheimer Derneği (AS) tarafından sağlanan hibelerle desteklenmiştir. CP, kısmen Arkansas Eyalet Üniversitesi Hemşirelik ve Sağlık Meslekleri Koleji'nden bir fakülte geliştirme hibesi ile desteklenmiştir.

NOT: Deneyler Gazi İşleri Palo Alto Sağlık Sisteminde Hayvan Araştırmaları Komitesi tarafından onaylanan etik standartlara uygun olarak yapılmıştır. 1. Golgi Cox Boyama <ol><li> Beyin çıkarma ve boyama <ol><li> 1. gününde, derin eksanginasyonunun yoluyla euthanizing önce 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg xylazin ile fareler uyutmak. </li><li> Dikkatle kalvaryumda kaldırmak ve beyin teşrih. <ol><li> İlk beyincik üstünde kavisli makas yerleştirerek, kafatasının üst deri kaldırmak ve yavaşça koku ampul doğru yönde hareket, dışa sivri makas ucu ile merkezi sulkus kalvaryumun paralel kesti. Her iki tarafta bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Koku ampuller doğru döndürerek kalvaryumda kaldırın ve bunu koparmaya bir cerrahi pincet kullanın. Ardından, baş aşağı çevirmek kafatası ve optik yoluyla kesmek için bir seçim kullanınsinirler ve beyin gevşetin. Son olarak, foramen magnum seviyesinde omurilikten beyin ayırmak için seçim kullanın. </li></ol></li><li> Hemen ticari olarak temin edilebilen, seyreltilmemiş Golgi Cox çözeltisi 15 ml beyin bırakın. Karanlıkta, oda sıcaklığında bir başlıklı, 20 ml&#39;lik bir cam şişe Golgi çözeltisi beyin saklayın. </li><li> 2. gün, yavaş yavaş çözüm dökün ve 15 ml taze Golgi-Cox çözüm ile değiştirin. Beyinleri içeren şişe tekrarlamak ve karanlıkta başka 9 gün rahatsız bırakın. </li></ol></li><li> Kesit ve gömme <ol><li> 11. günde, dehidratasyon için GKD 2 O hazırlanan% 30 sukroz çözeltisi içerisinde beyinleri yerleştirin. 12 saat sonra, taze hazırlanmış% 30 sakaroz ile çözelti değiştirin. 4 ° C &#39;de 3 gün süre ile% 30 sukroz çözeltisi içinde beyinleri inkübe edin. </li><li> Bıçak kaplanana kadar 14 gün,% 30 sukroz çözeltisi ile vibratome doldurun. 1 m hızını ayarlamam / 0.95 mm genliği ile. </li><li> Aşırı nem kaldırmak ve koronal kesmek için bir jilet kullanarak beyincik kaldırmak için bir Kimwipe beyinleri kurulayın. </li><li> Sıkıca superglue kullanarak vibratome platformu üzerine bütün beyin monte ve 2-4 dakika ayarlamak için izin verir. Rezervuar içine yapışık beyin platformu yerleştirin ve beynin üstüne bıçak ayarlayın. </li><li> Vibratome kullanarak, her 3 beynin sonra bıçağı değiştirmek için hatırlayarak, oda sıcaklığında 150 mikron kalınlığında bölüme beyin dilim. </li><li> Küçük uçlu bir fırça kullanarak rezervuar bölümleri Pick up ve GKD 2 O. yapılan% 0.3 jelatin içeren bir petri içine batırmak Bölümler petri kalırken, her slaytta 0.5 ml% 0.3 jelatin ilave ve yaymak ve kat SuperFrost + slaytlar için bir fırça kullanın. </li><li> Yavaşça petri dalmış bölümleri pick up ve jelatinize slaytlar üzerine koyun. Beyin bölümleri OrientSadece onların yüzüne değil, üstleri onları dokunmadan. </li><li> Yaklaşık on dakika sonra, kat doku tamamen kurur% 30 sakaroz ile bölümler önce. Sonra hava 3 gün boyunca bir slayt rafa karanlık bir yerde hazırlanmış slaytlar kurulayın. </li><li> GKD 2 kullanarak O. 1x piyasada bulunan 10x geliştirilmesi çözümü sulandırmak 7-10 dakika için çözüm geliştirme slaytlar daldırın. GKD 2 O. içinde slaytlar 3 kez durulayın </li></ol></li><li> Kurutma <ol><li> Damıtılmış GKD 2 O. ile% 20,% 30,% 40,% 50,% 60,% 70,% 80,% 90 ve% 95 etanol solüsyonları hazırlayın </li><li> 10 dakika her biri için giderek daha yüksek etanol çözümleri slaytlar bekletin. </li><li> 10 dakika her zaman için% 100 etanol çözeltisi içinde 3 kez slaytlar bekletin. </li><li> Onlar kapak astarlı kadar nihai çözüm bölümleri tutarak, 5 dakika her biri için% 100 ksilen 3 kez arka arkaya slaytlar bekletin. </li><li> DPX (ksilen içinde di-n-bütil ftalat) orta montaj (ab bol miktarda yerleştirinplastik bir transfer pipeti kullanarak her slayt üzerinde 1-1.5 ml). Dikkatle kabarcıkları önlemek için lamelleri yerleştirin. </li><li> Hava kuru kapak astarlı-beyin bölümleri yatay 3 gün boyunca. </li></ol></li></ol> 2. doublekortin Boyama <ol><li> Derinden (adım 1.1.1 bakınız) hayvanları uyutmak. </li><li> Fosfat tamponu 12 içinde taze olarak hazırlanmış% 4 paraformaldehit ile kardiyak perfüzyon yapın. </li><li> Sallanan bir çalkalayıcı üzerinde gece boyunca 4 ° C &#39;de% 4 paraformaldehit içinde 45 ml beyin (1.1.2) ve mağaza ekstrakte edin. </li><li> % 30 sukroz çözeltisi beyinleri aktarın ve 4 ° C&#39;de 48 saat süre ile tam bir dehidrasyon bekleyin. Sakaroz gelen beyinleri çıkarın ve kuru buz üzerinde yerleştirilen bakır bloklar doğrudan koyun. </li><li> Optimum kesme sıcaklığı (Ekim) bileşik ile blok doldurun ve bir dönüm noktası olarak koku ampul kullanarak beynin yönünü işaretleyin. </li><li> Bir Kriyostat kullanarak, -20 ° C&#39;de 70 mikron kalınlığında kesitler kesmek ve koyundondurarak saklama çözeltisi (0.05 M sodyum fosfat tamponu içinde% 25 etilen glikol,% 25 gliserol, pH 7,4) ve -20 ° C&#39;de kullanıma kadar devam edin. </li><li> % 50 krio-koruyucu ve% 50 metanol ihtiva eden bir çözelti yapmak. Bu çözeltiye,% 0.5 hidrojen peroksit (hacim / hacim) ilave edin. Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca değişken bölümleri inkübe edin. </li><li> Histolojik fırında yerleştirerek 30-40 dakika TBS içinde 37 ° C (Tris-tamponlu tuzlu su) içinde sıcak bölümleri. </li><li> Önce immunosteyn oda sıcaklığında 45 dakika boyunca% 0.3 triton% 3, normal at serumu bölümleri inkübe edin. % 0.3 triton ve% 1 normal at serumu ile TBS içinde 500: gece boyunca 1 seyreltilmiş DCX antikor 3 ml çözelti içinde 4 ° C&#39;de bölümleri inkübe edin. </li><li> Ertesi gün TBS bölümleri (10 dakika her) 3 kez art arda yıkayın. </li><li> Oda sıcaklığında iki saat boyunca (TBS, 200 1) bir biyotinile at anti-keçi bölümleri inkübe edin. TBS bölümleri (10 dakika her) 3 kez art arda yıkayın. </li><li> T inkübeoda sıcaklığında 1.5 saat süre ile ABC Lite (1.000 1) ile kenar. </li><li> 2 O 2 DAB 10 mg, 1 M Tris-HCl (pH 7.6), 15 ml içinde çözülmüş (3,3 &quot;-Diaminobenzidine) çözeltisi, bir tablet% 30, H 5 ul ekle. 5 dakika boyunca bu çözelti içinde hemen bölümleri inkübe edin. </li><li> Buz soğukluğunda TBS ile oda sıcaklığında TBS içinde bir yıkama ve ardından üç kez yıkamadan reaksiyonu bitirin. </li><li> Ksilen açık etanol çözeltileri, bir dizi (50,% 60,% 70,% 80,% 90,% 95,% 100,% 5 dk) kullanılarak bölümlere kurutmak ve daha sonra adım 1.3 olarak DPX ile kayma kapsamaktadır. </li></ol> 3. Görselleştirme <ol><li> Bölümlerin tam kurutmanın ardından, keskin bir bıçak ile slaytlar üzerine aşırı DPX kaldırmak ve mikroskop tarama aşamasında üzerine yerleştirin. Sistem tarama aşamasında, joystick ve renkli 12-bit kamera ile donatılmış bir mikroskop oluşur. </li><li> Programını başlatın. Yeni bir veri dosyasını açın. </li><li> Yerherhangi bir yerde fare imleci ile tıklayarak ekranda bir referans noktası. Bu program penceresinin araç panelinden tüm simgeleri aktive edecektir. </li><li> Araç çubuğunda &quot;Joystick Free&quot; ikonuna tıklayın ve daha sonra ilk bölümde hipokampusun dentat girus bulmak için joystick&#39;i kullanın. </li><li> Program penceresinin &quot;Araçlar&quot; sekmesinden &quot;Seri Bölüm Yöneticisi&quot; seçeneğini seçin. Pencerenin sol alt köşesinde &quot;Yeni Bölüm&quot; simgesine tıklayın. Bu &quot;Seri Bölüm Setup&quot; penceresi açılacaktır. </li><li> Seri Bölüm Kurulum penceresini seçin ve ardından hipokampal bölümlerini ihtiva bölümlerin toplam sayısını girin. Değerlendirme aralığını seçin. Bölüm kesme kalınlığı (DCX için 70 um ve Golgi-lekeli bölümler için 150 mikron) girin. </li><li> Araç çubuğunda &quot;Serbest Kontur Çizim&quot; ikonuna tıklayarak dentat girus bölgesini izleme başlayın. Dentat granül hücre tabakası Anahat. &lt;/ Li&gt; <li> &quot;Büyütme&quot; menüsünden &quot;100X&quot; seçiniz. Bölümünde daldırma petrol bir damla ekleyin ve 100X için objektif geçiş. Bu hedef kapsamında dentat granül hücre gövdeleri ve dendrit bulun. </li><li> Seçilen nöron odaklanın ve araç çubuğundaki &quot;Nöron İzleme&quot; ikonuna tıklayın. Dentat granül hücre gövdesinin çevresi Trace. Izleme bittiğinde, doğru &quot;Finish Hücre Gövde&quot; seçmek için tıklayın. </li><li> X, y ve z yönlerinde el dendritler izleme başlayın ve joystick ve z motor düğmesini kullanarak her dalını izleyin. Bir çatallanma ya da trifurkasyon düğümünde, sağ tıklama üzerine açılan menüden ilgili seçeneği seçin. Bu düğümler kaynaklanan şube her Trace. Her dalın sonunda sağ tıklayın ve açılan menüden &quot;Bitiş&quot; seçeneğini seçin. </li><li> Yazılım penceresinde ok tuşu simgeleri kullanarak rastgele başka dentat granül hücre seçin ve descr&#39;in gibi aynı prosedürü takipAşama 3,9-3,10 anlatılagelmiştir. Tüm izlemeyi kaydedin. </li><li> Nöronal izleme yazılımını başlatın. </li><li> Deney grubunda ilk fare ilk NRX veri dosyasını açın. Deney grubunda ikinci fare NRX dosyasını ekleyin. Bu gruptaki tüm NRX dosya eklenmiş kadar devam edin. </li><li> Analiz sekmesi altında, &quot;Fan In-diyagramı&quot; seçeneğini seçin. Bu Fan In-analiz penceresi açılır. Işareti &quot;dendrit&quot; Kontrol ve fareler, bu grup (Şekil 1) için dendritlerin uzunlukları ve dallanma kalıplarını gösteriyor Ekran tıklatın. </li></ol> 4. EDFI NOT: Bu yöntem hızla her alanın z-ekseni boyunca görüntüleri çok sayıda kayıt ve z ekseni boyunca tüm odaklı piksel içeren bir 2D görüntü oluşturmak için olanak sağlar. Sonuç toplanan görüntülerden tüm odaklanmış piksel içeren bir kompozit görüntü olacaktır. <ol><li> Dijital kam mikroskop bağlayındönemi. Mikroskop bağlı tarama sahnede ilk bölümleri yerleştirin ve daha sonra bir 10X objektif geçmek. Ilgi alanına sahne taşıyın. </li><li> Bir video yakalama programını başlatın. </li><li> Kayıt düğmesine basın. En kısa sürede kayıt düğmesine basıldığında gibi, 4 sn toplam bölümün yukarıdan aşağıya taşımak için makro-odak topuzu kullanın. Ortaya çıkan video dosyasını kaydedin. </li><li> Dosyasını açarak ve sıkıştırılmamış dosya formatında kaydederek sıkıştırılmamış biçime AVI video dosyalarını dönüştürmek için ImageJ freeware kullanın. </li><li> Bir görüntü analiz programı başlatın ve AVI dosyasını açın. &quot;Süreç&quot; menüsüne gidin ve &quot;Alan Genişletilmiş Derinlik&quot; üzerine tıklayın. Ilgili video dosyasını seçin. &quot;Çıktı&quot; seçeneklerinde, &quot;Kompozit İyi-Odak Image oluştur&quot; seçeneğini seçin. </li><li> &quot;Odak Analizi&quot; seçeneklerinde, &quot;Normalize Aydınlatma&quot; ve &quot;Max Yerel Kontrast&quot; seçeneklerini belirleyin. Ardından, &quot;Cre seçin&quot;yedik. Ortaya çıkan görüntü, z ekseni boyunca her odaklanmış piksel (Şekil 2) karşılık gelmektedir. </li><li> Ortaya çıkan görüntü kaydetme. </li></ol> 5. Son derece yüksek Çözünürlük Görüntüler oluşturuluyor NOT: Bu yöntem kullanıcı otomatik olarak otomatize bir şekilde düşük büyütme ve yüksek büyütme-yüksek çözünürlüklü görüntüler son derece yüksek çözünürlüklü görüntüler oluşturmak için olanak sağlar. <ol><li> Mikroskop bağlı tarama sahnede ilk bölümleri yerleştirin. Mikroskop bir dijital kamera bağlı. Ilgi alanına sahne taşıyın. </li><li> Bir görüntü elde etme programını başlatın. </li><li> 10X objektif kullanın ve kazanmak ve en az% 10 örtüşme var emin ilgi bölgeden yüksek çözünürlüklü (x 3116 4076) görüntüleri kaydetmek. </li><li> Run Image Composite Editor görüntüleri dikiş. </li><li> Menüden Dosya gidin ve &quot;Yeni Panorama&quot; üzerine tıklayın. Görüntüleri st olduğu klasörü seçinORed. Aynı bölgede ve basın &quot;Tamam&quot; ait görüntüleri seçin. </li><li> Basın &quot;İhracat Disk&quot; düğmesine basın ve görüntüyü kaydedin. Bu görüntü analizi ve / veya gösteri (Şekil 3) için kullanılan olabilir ilgi alanı son derece yüksek çözünürlüklü resim temsil eder. </li></ol>

<ol><li>Bosch, M., Hayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+plasticity+of+dendritic+spines%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Structural plasticity of dendritic spines.</a> Curr Opin Neurobiol. 22 (3), 383-388 (2012).</li>
<li>Isaac, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+synapse%3A+center+stage+for+many+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The synapse: center stage for many brain diseases.</a> The Journal of Physiology. 587 (4), 727-729 (2009).</li>
<li>Sheng, M., Sabatini, B. L., Südhof, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapses+and+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">Synapses and Alzheimer’s disease.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. , a005777(2012).</li>
<li>Alvarez, V. A., Sabatini, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+and+physiological+plasticity+of+dendritic+spines%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anatomical and physiological plasticity of dendritic spines.</a> Annu Rev Neurosci. 30, 79-97 (2007).</li>
<li>Huttenlocher, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+development+in+neocortex+of+children+with+mental+defect+and+infantile+spasms%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Dendritic development in neocortex of children with mental defect and infantile spasms.</a> Neurology. 24 (3), 203-210 (1974).</li>
<li>Marin-Padilla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double+origin+of+the+pericellular+baskets+of+the+pyramidal+cells+of+the+human+motor+cortex%3A+a+Golgi+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Double origin of the pericellular baskets of the pyramidal cells of the human motor cortex: a Golgi study.</a> Brain Res. 38 (1), 1-12 (1972).</li>
<li>Dang, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formoterol%2C+a+long-acting+%CE%B22+adrenergic+agonist%2C+improves+cognitive+function+and+promotes+dendritic+complexity+in+a+mouse+model+of+Down+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Formoterol, a long-acting β2 adrenergic agonist, improves cognitive function and promotes dendritic complexity in a mouse model of Down syndrome.</a> Biol Psychiatry. 75 (3), 179-188 (2014).</li>
<li>Dobrović, B., Curić, G., Petanjek, Z., Heffer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+morphology+and+spine+density+is+not+altered+in+motor+cortex+and+dentate+granular+cells+in+mice+lacking+the+ganglioside+biosynthetic+gene+B4galnt1+A+quantitative+Golgi+cox+study%5BTitle%5D)+AND+%22Coll+Antropol%22%5BJournal%5D)">Dendritic morphology and spine density is not altered in motor cortex and dentate granular cells in mice lacking the ganglioside biosynthetic gene B4galnt1 A quantitative Golgi cox study.</a> Coll Antropol. 35 (Suppl 1), 25-30 (2011).</li>
<li>Dijkmans, T. F., van Hooijdonk, L. W., Fitzsimons, C. P., Vreugdenhil, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+doublecortin+gene+family+and+disorders+of+neuronal+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Cent+Nerv+Syst+Agents+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">The doublecortin gene family and disorders of neuronal structure.</a> Cent Nerv Syst Agents Med Chem. 10 (1), 32-46 (2010).</li>
<li>Guerra, E., Pignatelli, J., Nieto-Estévez, V., Vicario-Abejón, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+regulation+of+olfactory+bulb+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Transcriptional regulation of olfactory bulb neurogenesis.</a> Anat Rec. 296 (9), 1364-1382 (2013).</li>
<li>Imayoshi, I., Shimojo, H., Sakamoto, M., Ohtsuka, T., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+visualization+of+notch+signaling+in+mammalian+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Genetic visualization of notch signaling in mammalian neurogenesis.</a> Cell Mol Life Sci. 70 (12), 2045-2057 (2013).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. (65), 3564-3510 (2012).</li>
<li>Das, G., Reuhl, K., Zhou, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Golgi-Cox+method%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The Golgi-Cox method.</a> Methods Mol Biol. 1018, 313-321 (2013).</li>
<li>Juraska, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+developmental+plasticity+in+the+visual+cortex+and+hippocampal+dentate+gyrus%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Sex differences in developmental plasticity in the visual cortex and hippocampal dentate gyrus.</a> Prog Brain Res. 61, 205-214 (1984).</li>
<li>Gao, X., Deng, P., Zao, C. X., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+traumatic+brain+injury+causes+acute+dendritic+and+synaptic+degeneration+in+the+hippocampal+dentate+gyrus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Moderate traumatic brain injury causes acute dendritic and synaptic degeneration in the hippocampal dentate gyrus.</a> PLoS One. 6 (9), e24566(2011).</li>
<li>Zhang, L., Hernández, V. S., Estrada, F. S., Luján, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+CA+field+neurogenesis+after+pilocarpine+insult%3A+The+hippocampal+fissure+as+a+neurogenic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Hippocampal CA field neurogenesis after pilocarpine insult: The hippocampal fissure as a neurogenic niche.</a> J Chem Neuroanat. 56, 45-57 (2014).</li>
<li>Merz, K., Lie, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+Doublecortin+is+dispensable+for+the+development+of+adult+born+neurons+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evidence that Doublecortin is dispensable for the development of adult born neurons in mice.</a> PLoS One. 8 (5), e62693(2013).</li>
<li>Hussaini, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat-induced+antigen+retrieval%3A+an+effective+method+to+detect+and+identify+progenitor+cell+types+during+adult+hippocampal+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heat-induced antigen retrieval: an effective method to detect and identify progenitor cell types during adult hippocampal neurogenesis.</a> J Vis Exp. (78), (2013).</li>
</ol>

Bu yazı için yayın ücretleri MBF Bioscience tarafından sponsor.

Burada, iki yöntem RTI ve EDFI ile birlikte geleneksel bir boyama yöntemleri kullanılarak, olgun ve yeni doğmuş nöronlar dendritik arborization derecesini ölçmek için tanımlanmıştır. nöronların yüksek çözünürlüklü görüntülerin elde edilmesi da hipokampal nöronlar hedef terapötik stratejiler değerlendirmek için bir araç sağlar, nörodejeneratif hastalıkların zararlı etkilerini test etmek için son derece kullanışlı bir yöntem sağlar ve. RTI yöntemi derinlemesine veri arborization ve topografya ...

Sinaps sayısı ve yapısı, dinamik değişiklikler gelişme, yaşlanma işaretlerinden, ve çok sayıda nörodejeneratif hastalıklar 1-3 vardır. sinaptik bilgi almak ve entegre nöronların yeteneği dendritik morfoloji ve sinaptik bağlantıları dinamik değişikliklere bağlıdır. Nitekim, pozitif bir korelasyon bilişsel fonksiyonu 4 darbe hem dendritik omurga ve sinaps sayısı arasında var. Bu nedenle, bu dendritik omurga sayısında bir azalır dendritik omurga miktarının büyük ilgi isteyen, nörolojik hastalıklar, 5-7 arasında bir dizi bilişsel işlev bozukluğu ile bağlantılı olması şaşırtıcı değildir. Bununla birlikte, omurga yoğunluğu ölçümü dendritik ağacın üzerinde sinaps topografya ve dağıtımı ile ilgili faydalı bilgiler üretmek için başarısız bir zaman alıcı ve sıkıcı bir görev olarak durmaktadır. Neyse ki, boyama yöntemleri (örneğin, Golgi-Cox ve doublekortin (DCX)) birliktegelişmiş görüntüleme teknikleri ile mevcut engelleri aşmak ve güvenilir ve süratli bir şekilde dendritik arborization yüksek çözünürlüklü görüntüler üretmek için kullanılabilir. Golgi-Cox boyama yöntemi tüm nöronların 8 dendritik arborization durumunu değerlendirmek için dağıtılabilir olsa, DCX nöron hem de meydana geldiği göz önüne alındığında özellikle dentat girus ve subventriküler bölge 9, önemli bir dikkate yeni doğmuş nöronlar etiket dağıtılabilir ömrü boyunca bu bölgeler 10,11. Boyama ardından, iki görüntüleme yöntemleri dendritik özelliklerini değerlendirmek için konuşlandırıldı: i) gerçek zamanlı görüntüleme (RTI) ve saha görüntüleme (EDFI) ii) genişletilmiş derinliği. RTI tekniği takip ve bireysel dendritik segment ve dallar boyunca arborization uzunluğunu ve düzeni ölçmek için bir araç sunmaktadır. Böylece toplam alanı ve her dendritik ağacın tarafından işgal hacmini tahmin etmek birini sağlar. Daha specifically, RTI yönteminde kullanıcı sürekli kesimleri tanımlar ve yazılım izleme nöron dendritik yapının x, y, ve z koordinatlarını toplar gibi iteratif yeniden odaklanan ve 3D dendritik yapının yörüngesini yeniden yapılandırır. Nispeten, EDFI yöntemi, bir kompozit görüntü üreten tüm z-ekseninde bilgi vererek oldukça kalın doku örneklerinde dendritik yoğunluğunu değerlendirmek için oldukça basit ve hızlandırılmış bir araç sağlar. Bunu yapmak için, kullanıcı bölümünün kalınlığı boyunca yüksek çözünürlüklü video dosyalarını kaydeder ve daha sonra bir piksel odak tamamen burada noktaları belirlemek için video kareleri aramak için yazılım kullanır. Daha sonra, odaklanmış piksel birleştirilmiş ve bir yüksek çözünürlüklü, kompozit 2D görüntü entegre edilmiştir. Bu birleşik görüntü ne olursa olsun z ekseninde kendi pozisyonu içinde odak olan tüm pikselleri içerir. Bu 2D görüntülerin kalitatif ve kantitatif analiz yoğunluğunu belirlemek için sonradan kullanılabilirdendritik Her alan dallanmanın. Son olarak, biz bir ilgi tüm bölgede analiz ve dendritler değerlendirilmesi için son derece yüksek çözünürlüklü görüntüler üretmek için bir panoramik yöntem mevcut. Bu teknik çok yüksek çözünürlüklü ve pahalı dijital kameralar erişimin eksikliği aşmak için dağıtılabilir. Bu yöntemi kullanarak, bir x- ve y-eksenleri boyunca farklı yerlerde seri görüntüleri yakalar ve daha sonra otomatik olarak bunları birlikte ücretsiz kullanarak dikişleri (örneğin, Image Composite Editor). Özellikle, bu yöntem, oldukça geniş bir alanda dendritik arborization kalitatif ve kantitatif bir değerlendirme için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Modifiye Golgi-cox boyama solüsyonu&nbsp;</td><td>Weill Cornell Medical College</td><td>NA</td><td>mağazası 4&deg; C</td></tr><tr><td>1x Gelişen Çözüm (Stok 10x)</td> <td>Weill Cornell Medical College</td><td>NA</td><td>mağazası 4 derece; %</td></tr><tr><td>30 Sükroz</td> kullanana kadar C, <td>Sigma</td><td>CAS # 57-50-1</td><td>taze yapın &nbsp; ddH2O %</td></tr><tr><td>0.3 Jelatin</td><td>Sigma</td><td>CAS # 9000-70-8</td><td>NA</td></tr><tr><td>Dereceli Etanol Çözeltileri (%20, %30, %40, %50, %80) %90, %95. 100%)</td><td>Sigma</td><td>CAS 603-003-00-5</td><td>NA</td></tr><tr><td>Ksilen</td><td>Sigma</td><td>CAS # 1330-20-7</td><td>NA</td></tr><tr><td>DPX Orta</td><td>EMS&nbsp;</td><td>#13510</td><td>NA</td></tr><tr><td>Superfrost (+) beyaz</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>71869-10</td><td>NA</td></tr><tr><td>Lamel 22x50mm (VWR #48393-059)</td><td>VWR&nbsp;</td><td># 4811-703</td><td>NA</td></tr><tr><td>DCX Antikoru</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>sc-8066</td><td>4 C</td></tr><tr><td>DAB</td><td>Sigma CAS</td><td>Numarası 91-95-2 & nbsp;</td><td>-20</td></tr><tr><td>OCT</td><td>Tissue-tek</td><td>4583</td><td>NA</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Sigma</td><td>CAS Numarası 77-86-1 &nbsp;</td><td>Na</td></tr><tr><td>ABC Lite</td><td>Vector</td><td>PK4000</td><td>NA</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse 80i</td><td></td></tr><tr><td>Dijital Fotoğraf Makinesi</td><td>Nikon</td><td>DS-Ri1</td><td></td></tr><tr><td>12 bit Kamera&nbsp;</td><td>Büyütme&nbsp;</td><td>01 MBF2000RF-CLR-12</td><td></td></tr><tr><td>Neurolucida Sistemi</td><td>MBF Bioscience</td><td>V.10</td><td></td></tr><tr><td>Görüntü Kompozit Düzenleyici</td><td>Microsoft</td><td>1.4.4.0</td><td></td></tr><tr><td>NIS Öğeleri</td><td>Nikon</td><td>F 3.0</td><td></td></tr><tr><td>Görüntü Pro Plus</td><td>Mediacy</td><td>Versin 7.00</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde hipokampal bölgesi dentate gyrus dendritik arborization değerlendirilmesi

Assessment of Dendritic Arborization in the Dentate Gyrus of the Hippocampal Region in Mice

Dendritik arborizasyonun, nöronların yapısal ve fonksiyonel bütünlüğünün incelenmesi için güvenilir bir belirteç olduğu gösterilmiştir. Gerçekten de, dendritik arborizasyonun karmaşıklığı ve kapsamı, bu hücrelerdeki sinaptik plastisite ile iyi bir şekilde ilişkilidir. Nörolojik bozuklukların bu yapılar üzerindeki zararlı etkilerini karakterize etmek ve terapötik girişimlerin etkilerini belirlemek için dendritik arborizasyonun değerlendirilmesi için güvenilir bir yönteme ihtiyaç vardır. Bununla birlikte, bu yapıların nicelleştirilmesinin, karmaşık ve dinamik yapıları göz önüne alındığında zorlu bir görev olduğu kanıtlanmıştır. Neyse ki, gelişmiş görüntüleme teknikleri, dendritik arborizasyonun durumunu değerlendirmek için geleneksel boyama yöntemleriyle eşleştirilebilir ve bu da daha güvenilir ve hızlı bir değerlendirme aracı sağlar. Aşağıda, vahşi tip farelerde dendritik arborizasyonu karakterize etmek için bu görüntüleme tekniklerinin boyama yöntemleriyle nasıl eşleştirildiğine dair bir örnek verilmiştir. Bu tamamlayıcı görüntüleme yöntemleri, hipokampal bölge içinde oldukça geniş bir alana yayılan dendritik arborizasyonu kalitatif ve kantitatif olarak değerlendirmek için kullanılabilir.

günümüze kadar gelen ve yeni doğan dişli granül hücrelerden kaynaklanan arborization ölçüde Golgi Cox DCX boyama (Şekil 1) kullanılarak doğal tip farelerde incelenmiştir. DCX-pozitif hücrelerin dendritik bölümleri 13-36 mikron uzunluğunda olduğu bulunmuştur. Dendritik uzunlukta normal dağılım Kolmogorov-Smirnov testi kullanılarak test edildi (D = 0,1217, p &lt;0.01, Liliefors p &lt;0.001; Şekil 4 ve 5). Arborization sırasına göre parçalarını...

Fare modellerinin hipokampusunda dendritik arborizasyonun görselleştirilmesi ve ölçülmesi için iki yöntem açıklıyoruz: gerçek zamanlı ve genişletilmiş alan derinliği görüntüleme. İlk yöntem, karmaşık topografik izlemeye ve dallanma derecesinin ölçülmesine izin verirken, ikincisi dendritik ağacın hızlı bir şekilde görselleştirilmesine izin verir.

Farelerde Hipokampal Bölgesi Dentate Gyrus dendritik arborization Değerlendirilmesi

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, bir fare modelinin hipokampusundaki dendritik arborizasyonun derecesini incelemektir. Bu, iki farklı yöntemle gerçekleştirilir. İlk yöntemde, her bir kesitin tüm kalınlığı boyunca dendritler gerçek zamanlı olarak manuel olarak izlenir.İzleme işleminin ardından, tüm dendritik ağ yeniden oluşturulabilir ve analiz edilebilir. Farklı farelerden elde edilen çeşitli yelpaze diyagramlarının yelpaze diyagram analizi, objektif bir karşılaştırma yöntemi olarak kullanılabilir. İkinci yöntem ise, genişletilmiş alan derinliği görüntüleme ile dendritik arborizasyonun görselleştirilmesidir.Son olarak, ilgi duyulan tüm bölgedeki dendritlerin kalitatif ve kantitatif değerlendirmesi için birden fazla yüksek büyütmeli görüntüyü birleştirerek tek bir yüksek çözünürlüklü kompozit görüntü elde etmek amacıyla panoramik bir yöntem kullanılır ve bu prosedür, laboratuvarımdan çıkan GI mobi. AMI araştırma akışlarıyla gösterilecektir. Bu tekniklerin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, kullanım kolaylığı ile görüntüleme ve veri toplama hızının yüksek olmasıdır.Bu yöntem, etkilenen beyin bölgelerindeki dendritik organizasyonun değerlendirilmesi ve farklı tedavilerin dendritler üzerindeki etkilerinin incelenmesi gibi nörobiyoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu prosedürde, fare beyni %4 Paraformaldehit ile fikse edildikten bir gün sonra,y ४ °C'de 48 saat boyunca dehidrasyon için sükroz çözeltisine yerleştirin. Beyinleri sükrozdan çıkarın ve doğrudan kuru buz üzerine yerleştirilmiş bakır blokların üzerine koyun.Bloğu OCT ile doldurun ve koku soğanını (olfactory bulb) referans noktası olarak kullanarak beynin oryantasyonunu işaretleyin. Bir kriyostat kullanarak -20 °C'de 70 mikron kalınlığında kesitler alın; bu kesitleri Kriyoprotektan çözeltisine yerleştirin ve kullanıma kadar -20 °C'de muhafaza edin. Kesitleri oda sıcaklığında, metanol içindeki hidrojen peroksitte 30 dakika boyunca inkübe edin, ardından TBS içinde 37 °C'de yarım saat boyunca ısıtın.Kesitleri, ertesi gün DCX antikoru ile boyama yapmadan önce %0.3 Triton ve normal at serumu ile oda sıcaklığında 45 dakika inkübe edin. Kesitleri üç kez üst üste TBS ile yıkayın ve biotinize at antigonu ile oda sıcaklığında iki saat boyunca inkübe edin. Kesitleri her biri 10 dakika sürecek şekilde üç kez üst üste TBS ile yıkayın ve 1.5 saat boyunca B, C light ile inkübe edin.Oda sıcaklığında, DAB çözeltisine hidrojen peroksit ekleyin ve kesitleri derhal bu çözeltide beş dakika inkübe edin; ardından kesitleri üç kez buz gibi soğuk TBS ile yıkayarak reaksiyonu sonlandırın. Ardından oda sıcaklığındaki TT BS ile bir kez yıkayın. Kesitleri bir dizi etanol çözeltisi kullanarakyelehydrate edin.Sırasıyla beşer dakika berraklaştırıcı ve ksilen uygulamasının ardından DPX kullanılarak lameller kapatılır. Kesitler tamamen kuruduktan sonra, lam üzerindeki fazla DPX keskin bir bıçakla temizlenir ve lamlar mikroskobun tarama tablasına tek tek yerleştirilir. Görüntüleme sistemi, tarama tablası joystick'i ve 12 bit renkli kamera ile donatılmış bir mikroskoptan oluşmaktadır.Ardından, Neuro Lucita programını başlatın ve yeni bir veri dosyası açın. Program penceresinin araç panelindeki tüm simgeleri etkinleştirmek için fare imleciyle ekranda herhangi bir yere tıklayarak bir referans noktası belirleyin. Daha sonra araç çubuğundaki joystick free simgesine tıklayın ve hipokampusun dentat gyrus bölgesini bulmak için joystick'i kullanın.Program penceresinin araçlar sekmesindeki ilk bölümde, seri kesit yöneticisini seçin. Seri kesit kurulum penceresini açmak için pencerenin sol alt köşesindeki yeni kesit simgesine tıklayın. Ardından, seri kesit kurulum penceresini seçin ve hipokampal bölgeleri içeren toplam kesit sayısını girin.Ardından değerlendirme aralığını seçin ve kesit kalınlığını girin. Araç çubuğundaki serbest el kontur çizim simgesine tıklayarak dentat girus bölgesini çizmeye başlayın. Sonrasında dentat granüler hücre tabakasının etrafını çizin.Büyütme menüsünden 100 x seçeneğini seçin. Ardından kesitin üzerine bir damla immersiyon yağı ekleyin ve objektifi 100 x'e getirin. Bu objektif altında dentat granül hücre gövdelerini ve dendritleri bulun.Ardından, seçili bir nörona odaklanın ve nöron izleme simgesine tıklayın. Araç çubuğunu kullanarak dentat granül hücre gövdesinin çevresini izleyin. İzleme işlemi bittiğinde, hücre gövdesini tamamlamak için sağ tıklayın.Şimdi dendritleri manuel olarak X, Y ve Z yönlerinde izlemeye başlayın ve joystick ile Z motor düğmesini kullanarak her bir dalı takip edin. Bir bifurkasyon (ikiye ayrılma) veya trifurkasyon (üçe ayrılma) düğümünde, ilgili seçeneği belirleyin. Açılır menüden, bu düğümlerden çıkan dalların her birini izleyin. Her bir dalın sonunda sağ tıklayın ve açılır menüden "ending" (sonlandırma) seçeneğini seçin.Yazılım penceresindeki ok tuşu simgelerini kullanarak, rastgele başka bir dentat granül hücresi seçin ve az önce gösterilen izleme prosedürünü tekrarlayın. Tüm izlemeyi kaydedin.Şimdi nöron analizi için neuro lucita explorer'ı başlatın. Deney grubundaki birinci fareye ait ilk NRX veri dosyasını açın. Deney grubundaki ikinci farenin NRX dosyasını ekleyin ve bu gruptaki tüm NRX dosyaları eklenene kadar işleme devam edin.Analiz sekmesi altında, fan analiz penceresini açmak için diyagramdaki fanı seçin, dendritleri işaretleyin ve bu fare grubuna ait dendritlerin bağlantılarını ve dallanma modellerini görmek için görüntüle'ye tıklayın. Bu işlemde, mikroskobu bir dijital kameraya bağlayın. Mikroskoba bağlı olan tarama tablasına bir kesit yerleştirin ve 10 x objektife geçiş yapın.Ardından, sahneyi ilgilenilen alana taşıyın. Bir video kayıt programını başlatın ve kayıt düğmesine basın. Kayıt düğmesine basar basmaz, makro odak düğmesini kullanarak kesitin üst kısmından alt kısmına toplam dört saniye boyunca ilerleyin. Ortaya çıkan video dosyasını kaydetmeden önce, AVI video dosyalarını sıkıştırılmamış bir formata dönüştürmek için Image J ücretsiz yazılımını kullanın.Bir görüntü analiz programını başlatın ve VI dosyasını açın. İşlem menüsüne gidin ve genişletilmiş alan derinliği (extended depth of field) seçeneğine tıklayın. Çıktı seçeneklerinden ilgili video dosyasını seçin.Odak analizi seçeneklerinden "generate composite best focus image" seçeneğini belirleyin. "normalized illumination" ve "max local contrast" seçeneklerini seçin. Ardından, Z ekseni boyunca odaklanmış tüm pikselleri temsil eden sonuç görüntüsünü oluşturmak için "create" butonuna tıklayın.Ardından, elde edilen görüntüyü kaydedin. Bu adımda, kesiti mikroskoba bağlı tarama tablasına yerleştirin. Tablayı ilgilenilen bölgeye hareket ettirin.Ardından, 10 x objektif kullanarak görüntüleme programını başlatın; ilgi bölgesinden yüksek çözünürlüklü görüntüler elde edin ve kaydedin, görüntülerin arasında en az %10 örtüşme olduğundan emin olun. Daha sonra, görüntüleri birleştirmek için görüntü kompozit düzenleyiciyi (image composite editor) çalıştırın. Dosya menüsüne gidin ve yeni panorama seçeneğine tıklayın.Görüntülerin saklandığı klasörü seçin. Ardından, aynı bölgeye ait görüntüleri seçin ve Tamam'a basın. Diske aktar düğmesine basın ve görüntüyü kaydedin.Bu görüntü, analiz için kullanılabilecek ilgi alanının son derece yüksek çözünürlüklü bir resmini temsil etmektedir. Bu şekil, EDFI yöntemleri ile ve bu yöntemler olmadan dendritik arborizasyonun görselleştirilmesini göstermektedir. En iyi odak düzlemini bulmaya yönelik geleneksel yöntem EDFI ile karşılaştırılmış ve dendritik alan için önemli ölçüde daha yüksek değerler elde edilmiştir.EDFI yöntemi kullanılarak sonuçlar elde edildi. Farklı dallanma derecelerindeki dendritlerin kapladığı uzunluk ve hacmin kantifikasyonu burada gösterilmiştir. Maksimum uzunluk ve hacme birinci derecede ulaşılmıştır.Burada, dentat granül hücrelerin dendritik uzunluklarının bir histogramı yer almaktadır. DCX boyamalı DDR'lerin dendritik segmentlerinin çoğunun uzunluğu 13 ile 26 arasındaydı. Bu kırmızı noktalı çizgi, bu prosedürün ardından sunulan verilerin normal dağılımını göstermektedir.Dendritlerin kapladığı hacim ve alanla ilgili ek soruları yanıtlamak için NeuroLucid gibi diğer klasik yöntemler kullanılabilir. Burada size gösterdiğimiz bu teknik, nörobiyoloji alanındaki araştırmacıların yalnızca nöronal yapıların konumunu değerlendirmelerine değil, aynı zamanda kalın beyin kesitlerindeki mikroglia gibi nöronal olmayan küçük yapıları değerlendirmelerine de büyük ölçüde yardımcı olacaktır. Bu videoyu izledikten sonra, nöronal projeksiyonların kapsamının nispeten kısa bir sürede nasıl değerlendirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

assessment-dendritic-arborization-dentate-gyrus-hippocampal-region

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu videoya kaydedilmiş protokol stereomicroscope altında erişkin fareden dentat girus kaldırılması için diseksiyon tekniği gösterildi.

Yetişkin Mouse Hipokampal dentat girus diseksiyonu

Biz nörogelişimsel kökenli bilişsel bozuklukların ile karakterize bir fare modelinde bir mekansal öğrenme göreve maruz kaldıktan sonra hipokampal nöron aktivasyonu profilini incelemek için bir immünohistokimya protokol açıklar. Bu protokol bilişsel karakterize hem genetik ya da farmakolojik fare modellerine uygulanabilir.

Nörogelişimsel Bozukluklar Fare Modeli Mekansal Öğrenme ardından Hipokampal Nöron Faaliyet immünohistokimyasal Görselleştirme

Burada ayrıntılı bir Golgi-Cox protokolünü sunuyoruz. Bu güvenilir doku lekesi metodu, minimal sorun giderme ile hipokampustaki ve tüm beyindeki sitolojik mimarinin yüksek kaliteli bir değerlendirmesini sağlar.

Yaşlı Bir Farede Hipokampal Dendritik Karmaşıklığın Golgi-Cox Yöntemi ile Değerlendirilmesi

Doğru bir şekilde belirlenmesi ve Hipokampal dilimleri ayirt kullanarak sinapslarda analiz için bir protokol bu makalesinde ana hatlarıyla.

Hipokampal kemirgen beyin dilimleri dansitesi Synapse değerlendirilmesi

Bu iletişim kuralı, farelerde güvenilir bir HFS yöntemi ayarlamak gösterilmiştir. Hipokampal dentat gyrus boyunca nöronların elektriksel olarak HFS doğrudan ve dolaylı olarak içinde vivotarafından uyarılır. Nöronal aktivite ve moleküler sinyal c-fos ve Notch1 immünfloresan boyama, sırasıyla incelenir; neurogenesis tarafından bromodeoxyuridine tahlil etiketleme sayılabilir.

Yüksek frekanslı stimülasyon tarafından fare dentat Gyrus aktivasyonu için invaziv bir yöntem

Bu yöntem, yaşayan farelerin Hippocampus optik erişim sağlayan kronik bir hazırlık açıklar. Bu hazırlık, birkaç hafta boyunca nöronal yapısal plastisite ve aktivite-uyarılmış hücresel plastisite uzunlamasına optik görüntüleme gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Canlı fareler içinde dorsal hipokampal CA1 uzunlamasına Iki foton görüntüleme

Bu doku hipoksik hasarı azaltmak için buz gibi NMDG-aCSF ile transkardiyal perfüzyon ve dilim kesme yararlanır yetişkin ve yaşlanma fare hipokampi akut dilim hazırlanması için bir protokoldür. Elde edilen dilimler saatlerce sağlıklı kalır ve uzun süreli yama kıskaçları ve alan kayıtları için uygundur.

Yetişkin ve Yaşlanan Farelerden Hipokampal Dilimlerde Hipoksinin En Aza Indirilmesi

Farelerin dorsal-ara hipokampusundan akut dilimler hazırlamak için bir protokol sunuyoruz. Bu transversal preparatı, kayıtların kalitesi ve kaydedilen nöronların morfolojik özelliklerinin korunması açısından koronal dilimleme ile karşılaştırıyoruz.

Yetişkin Farelerin Dentat Girusunda Tüm Hücre Kaydı ve Nöronal Rekonstrüksiyon için Dorsal Hipokampustan Akut Dilimlerin Hazırlanması

Protokol, hipokampustaki nöronları ve sıçanın medial prefrontal korteksi boyamak için sinir sisteminin herhangi bir bölümüne uyarlanabilen hızlı Golgi yönteminin bir modifikasyonunu açıklar.

Hipokampus ve Prefrontal Kortekste Dendritik Omurga Görselleştirme için Hızlı Golgi Lekesi

Hipokampusun dentat girusu, öğrenme ve hafızada temel ve farklı işlevleri yerine getirir. Bu protokol, serbestçe hareket eden farelerde dentat girustaki granül hücrelerinin in vivo kalsiyum görüntülemesi için bir dizi sağlam ve verimli prosedürü tanımlar.

Farelerde Hipokampusun Dentat Girusundaki Granül Hücrelerin İn Vivo Kalsiyum Görüntülenmesi 

Öğrenin fare hipokampusunda dentritik arborizasyonu değerlendirmek için gerçek zamanlı izleme ve geniş alan derinliği görüntüleme yöntemlerini. Bu teknikler nöronal bağlantı ve sinirbilim araştırmalarında kullanılır.

Farelerde Hipokampal Bölgesi Dentate Gyrus dendritik arborization Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet