21 Ocak 2015
Bu prosedürün genel amacı, bir farenin kaburgasından alınan kemiğin bir kısmını başarılı bir şekilde rezeke etmektir. Prosedür, büyük ölçekli uzun kemik onarımını incelemek için bir model olarak geliştirilmiştir.
Bu prosedürün amacı, iskelet onarımı için bir model olarak bir kaburganın kemikli kısmında büyük ölçekli bir rezeksiyon oluşturmaktır. Bu, önce hayvanın yan tarafındaki deriden bir kesi oluşturularak ve açılarak gerçekleştirilir. İkinci adım, çıkarılacak olan kaburga kemiğini ortaya çıkarmaktır.
Daha sonra, kaburga kemiğinin bir kısmı ya çevredeki bağ dokusu kılıfı ya da periost ile birlikte çıkarılır ya da periost geride bırakılır. Son adım, kesileri kapatmak ve hayvanın iyileşmesine izin vermektir. Sonuç olarak, kemik onarımı için bu model, büyük ölçekli iskelet onarımı sırasında meydana gelen hücresel ve moleküler olayları göstermek için kullanılabilir.
Bir memelide, bu yöntemin görsel gösterimi kritiktir, çünkü cerrahi aletlerin manipüle edilmesi hassasiyet gerektirir ve başarılı cerrahi, farklı dokuların nerede bulunduğunu bilmeyi içerir. Prosedürü göstermek Marissa Roar ve Nikita Tripper ve laboratuvarımdaki her iki yüksek lisans öğrencisi olacak. Cerrahi alanı ve gerekli steril alet ve malzemeleri hazırladıktan sonra, bir tür fareyi %4 buzlu flor içeren bir indüksiyon odasına yerleştirerek anesteziyi indükleyin.
Fare uyuşturulduktan sonra, farenin gözlerine merhem sürün ve anestezi derinliğini onaylayın. Ayak parmağını çimdikleme yaparak, ayak parmağını çimdiklemeye herhangi bir reaksiyon olmamalıdır. Fareyi, anestezi bakım hortumunun burun konisi farenin burnunun üzerine yerleştirilmiş olacak şekilde bir diseksiyon mikroskobu üzerindeki bir ısı yastığının üzerine veya yanına yerleştirin.
Farenin yan konumda olduğundan emin olun. Bakım için flor izini %iki ila 3'e ayarlayın ve solunum hızını izleyin. Daha sonra buprenorfini 25 gauge bir iğne ile deri altına enjekte edin.
Ameliyat sonrası önleyici ağrı için bacak seğirebilir, bu normal bir tepkidir. İlk olarak, bir numara olarak sayılan en rostral kaburgadan palpe ederek istenen kaburgayı seçin. Bu videoda 10 numaralı kaburganın bir kısmı çıkarılacaktır.
Kaburga üzerindeki alanı tıraş edin ve ardından povidon iyot ile temizleyin, ardından üç kez izopropanol uygulayın Eksize edilecek kaburganın üzerindeki deri, kas ve yağ tabakalarından iki santimetrelik bir kesi oluşturduktan sonra, insizyonun boyutunu en aza indirirken cerrahi alanı ortaya çıkarmak için üç katmanı da bir ekartöre yerleştirin. Daha sonra, kaburganın çok kavisli olmadığı çikolata eklemine beş milimetre proksimal, bir yerde kaburganın üzerindeki interkostal kasları kesmek için beş milimetrelik bir neşter kullanın. Daha sonra ince uçlu forseps ile kası kemikten dikkatlice ayırın.
Hayvanda periosteuumu korurken bir rezeksiyon oluşturmak için, kaburga uzunluğu boyunca periosteuumu kesin. Daha sonra, hassas periosteuumu alttaki kemikten lateral olarak çok dikkatli bir şekilde ayırmak için ince uçlu forseps kullanın. Gerekirse, rezeksiyonu mikroskopta bir alay veya cetvel tipi bir gösterge ile ölçün.
Daha sonra kemikten bir kesit yapmak için ince mikro makas kullanın. Bir ucunda, kemiği periosteumdan dikkatlice kaldırın ve diğer ucunu hemen kesin. Çıkarılan kaburgayı ileride analiz etmek için %4 paraldehit içine yerleştirin.
Kemiğin kesilmesi sonucu kanama meydana gelirse, kanamayı durdurmak için pamuk uçlu bir çubukla kesilen uca dört ila beş saniye boyunca baskı uygulayın. İnsizyonu kapatmak için, interkostal kasları kalan periosteal manşonun üstüne üç veya 4 9 0 kesintili sütürle dikin. Ameliyat yeri için gösterge görevi görmesi için dikişleri doğrudan kaburganın kesik uçlarının üzerine yerleştirin.
Ekartörü çıkarın ve ardından üstteki kas ve yağı dokuz sıfır kesintili sütürle dikin. Özellikle kalın kas veya yağ tabakaları olan farelerde her tabakanın ayrı ayrı dikilmesi. Cildi dört ila 5 7 0 dikişle kapatın ve ardından kesiyi doku yapıştırıcısı ile sabitleyin.
Kenarları büyük forsepslerle birlikte sıkıştırmak. Konsantrasyonu birkaç dakika boyunca %1'e ayarlayarak fareyi flordan yavaşça ayırın ve ardından flor izini kapatın. Fareyi bir ısı lambasının altına yerleştirin ve bilinç geri kazanılana kadar bırakın.
Bilinç yeniden kazanıldıktan sonra ve iyileşme süresi boyunca, fare normal şekilde hareket etmeli ve yürümeli ve hiçbir sıkıntı belirtisi göstermemelidir. Kesi kuruduktan sonra, fareyi yiyecek ve suya ücretsiz erişimi olan temiz bir kafese koyun. Dişiler birlikte barındırılabilir, ancak erkekler kavgayı önlemek, 48 saat boyunca her 12 saatte bir kilogram başına 0.5 miligram oral genin formunda buprenorfin uygulaması da dahil olmak üzere ameliyat sonrası ağrı yönetimi sağlamak için tek başına barındırılmalıdır.
Oral uygulama, hayvanın kısıtlanmasını gerektirmez, bu da torasik bölgede ağrıya neden olabilir. Bu görüntü, ameliyattan hemen sonra toplanan 4,5 milimetrelik bir kaburga rezeksiyonunu göstermektedir. Geride hiçbir kemik parçası kalmaz.
Numune bir zarin kırmızısı ile boyandı ve% 80 gliserol içinde temizlendi. Ok ucu, kesilen uçların yerini gösterir. Bu, önceki görüntüde göğüs kafesinden periost takılmadan çıkarılan kaburga kısmıdır.
Burada gösterilen hematin ve eoin ile boyanmış histolojik kesit, solda sarı ok ucu ile gösterildiği gibi kemiğe bağlı minimal periost olduğunu ve sağda periost olmadığını göstermektedir. Sarı yıldız işareti, kemik iliği boşluğunu gösterir. Bu görüntü, periost hala bağlı iken çıkarılmış bir kaburga kısmını göstermektedir ve bu histolojik bölüm, sarı braket ile gösterildiği gibi kemiğin üzerinde yer alan sağlam periosteumu göstermektedir.
Sarı yıldız işareti yine kemik iliği boşluğunu gösterir. Bu görüntü, farenin içindeki sağlam periost ile rezeksiyonu takiben iki aylık iyileşmeden sonra bir iskelet hazırlığını göstermektedir, bölgenin tam onarımı gözlemlenebilir. Az önce gösterilen iskelet preparatının bu histolojik bölümü, lamel kemik duvarlarının ve kemik iliği boşluğunun restorasyonunu göstermektedir.
Bu görüntü, üç aylık iyileşmeyi takiben bir iskelet hazırlığını göstermektedir. Hem kaburga kısmını hem de çevresindeki periosteuumu çıkardıktan sonra, panelin solunda gösterilen kesik uçta sadece minimum onarım yapıldı. Sarı ok ucu, chocos eklemini gösterir.
Daha önce gösterilen iskelet preparatının bu histolojik kesiti, rezeksiyon bölgesinde granülasyon, doku yağı ve kas hücrelerinin dolmasını gösterir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu prosedür izlendikten sonra uygun şekilde yapılırsa bu teknik bir saatin altında gerçekleştirilebilir. Kaburganın kıkırdak kısmında rezeksiyon oluşturmak gibi diğer yöntemler, kıkırdağın büyük ölçekli onarımı nasıl gerçekleşir gibi ek soruları yanıtlamak için uygulanabilir.
Bu videoyu izledikten sonra, iskelet onarımını incelemek için kaburganın kemik kısmında nasıl bir rezeksiyon oluşturulacağını iyi anlamış olmalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu prosedür, iskelet onarımını incelemek için bir model görevi gören, bir farenin kaburgasında geniş ölçekli bir rezeksiyon oluşturmayı amaçlamaktadır. Yöntem; insizyon, kaburganın açığa çıkarılması ve kemik çıkarılmasının ardından insizyonun kapatılmasını içerir.
Büyük ölçekli kemik onarımı, sağlam iyileşme dinamiklerini yeniden canlandıran preklinik modellerin sınırlı olması nedeniyle translasyonel kas-iskelet sistemi araştırmalarında kritik bir zorluk olmaya devam etmektedir. Fare kaburga rezeksiyon modeli, uzun kemik rejenerasyonunun altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaların incelenmesi için tekrarlanabilir ve erişilebilir bir sistem sunar. Bu model, biyofarma ekiplerinin onarım süreçlerini ve periostal katkıları değerlendirmesine olanak tanıyarak hedef doğrulamasına bilgi sağlar ve erken aşamadaki kemik onarım programlarının risklerini azaltır.
Bu model, erken dönem mekanistik çalışmalar ile translasyonel aday değerlendirmeleri arasında köprü kurarak, kas-iskelet sistemi onarımına yönelik keşiften preklinik aşamaya uzanan sürekliliğe entegre olmaktadır.