Canlı Fareler Seri endoskopik Görüntüleme kullanma Bağırsak Patolojilerde Yeni Therapeutics Etkinliğinin Non-invaziv Değerlendirme

Aşağıdaki deneyin genel amacı, indüklenen patolojiyi inhibe eden tedavileri araştırmak için farelerde hastalığı indükleyerek kolit ve kanser modellerinde yeni terapötiklerin etkinliğini test etmektir. Terapötik profilaktik olarak uygulanır. Bu videoda, rekombinant insan interlökin 11 proteini daha sonra akut mukozal hasarı ve inflamatuar barsak hastalığı ile ilişkili histopatolojik özelliklerin çoğunu ortaya çıkarmak için içme suyunda dekstran sülfat sodyum veya DSS kullanılmaktadır.

Daha sonra, terapötik etkinliği belirlemek için hastalıktaki değişiklikler endoskopi ile izlenir. Sonuç olarak, sonuçlar, indüklenmiş hastalık patolojisi olan farelerin terapötik tedavisini takiben endoskopik izleme ve skorlamaya dayalı olarak hastalık yükünün azaldığını göstermektedir. Bu tekniğin ana avantajı, histolojik için standart tekniklere kıyasla deney boyunca tek bir fareyi izleyebilmemizdir.

Birden fazla hayvan kohortunun incelenmesi gereklidir. Bu metodoloji, kolon iltihabı ve kanseri açısından önemli soruları sormamıza ve yanıtlamamıza yardımcı olabilir ve özellikle sitokin sinyalinin daha iyi manipüle edilmesini sağlamaya çalışmak hastalığın ilerlemesini etkileyebilir. İlaçların ve bileşiklerin etkinliğini değerlendirmek için bu klinik öncesi modelleri kullanmak önemlidir ve bu, aynı fareyi birkaç kez test etmemizi ve bu bileşiklerin bir aktiviteye sahip olup olmadığını görmemizi sağlar.

Bu prosedürü enstitümüzden bir hayvan teknisyeni olan Giovanni CI Ciano ile göstereceğim Birinci gün, ilgilenilen terapötik ve uygun araç kontrollerini uygulayın. Bu gösteride, beş mikrogram rekombinant insan interlökin 11 proteini, 200 mikrolitre fosfat tamponlu salin içinde çözüldü ve intraperitoneal uygulandı, bu da test edilen terapötik reaktif için oluşturulan farmakokinetik profile bağlı olacak uygulamaların zamanlamasını ve sıklığını belirledi. Burada, deney süresince günde iki kez intraperitoneal enjeksiyonlar kullanılarak profilaktik tedavinin bir taslağı gösterilmektedir.

Dışkı kıvamını ve kan varlığını izleyin ve her fareyi günlük olarak tartın. Tedavi günlerinde, tekrarlanan kullanımın neden olduğu farelerdeki stresi en aza indirmek için tartı terapötik ilaçla aynı zamana denk gelmelidir. Üçüncü günde, hayvan tesisi tarafından farelere rutin olarak sağlanan içme suyunda% 2.5 dekstran sülfat sodyum veya DSS çözeltisi hazırlayın.

Deney için günde fare başına yaklaşık beş mililitre DSS çözeltisi gereklidir. Hayvan tesisinin ortam sıcaklığının dalgalanması durumunda DSS suyunun tüketimi değişebilir. Farelere taze DSS sağlayın.

Beşinci günün akşamı Liam'ı beş gün boyunca temiz su şişelerine ekleyin. Püre haline getirilmiş gıda peletlerine ve küçük Petri kaplarında sağlanan bir protein takviyesine ek olarak normal içme suyu sağlayın. Sekizinci günün sabahı.

Sonraki histolojik analiz için dokuları toplamak için metin protokolünde açıklandığı gibi fare ötenazisine devam edin. Uygun DSS dozajını belirlemek ve partiden partiye varyasyonu atlatmak için rutin parti testleri yapın. Uygun dozaj kilo kaybına ve doğrulanmış kolit histopatolojisine dayanmalıdır.

DSS dozunu hacim başına ağırlık% bir ile% 4 arasında ayarlayın. Hayvan tesisinin mikroflorasına ve DSS partisine bağlı olarak. Endoskopi ekipmanı standart prosedürlere göre monte edilmelidir.

Endoskop probunu %70 etanol veya antibakteriyel bir kayganlaştırıcı ile sterilize edin ve temizleyin. Videolar bir dizüstü veya masaüstü bilgisayar ve iMovie gibi standart medya yazılımı kullanılarak kaydedilebilir. Endoskopi işlemi sırasında kolonu görselleştirmek için tıbbi sınıf bir monitör yerine standart bir bilgisayar monitörü yeterlidir.

Beş ila altı fareden oluşan grupları, dakikada 0,2 ila 0,4 litre oranında% 100 oksijen içinde% 3 flor gözü olan bir odada aynı anda uyuşturun. Fareler uyuşturulduktan sonra, ayak parmağı çimdikleme ile onaylanan anestezi uygulandıktan sonra, flor seviyeleri% 0,5 ile% 2 arasında değiştirilmelidirBakım için, tek bir fareyi odadan çıkarın ve başı bir burun konisine sabitlenmiş olarak ventral tarafı yukarı gelecek şekilde yerleştirin, tam anestezi izlenmeli ve arka bacaklar farenin arkasına gerilecek şekilde ayarlanmalıdır. Yer. Kuruluğu önlemek için farelerin gözlerinde veto merhem.

Anüsü net bir şekilde ortaya çıkarmak için farenin kuyruğunu alt omurga ile buluştuğu yerde tutun. Hava akışı çok güçlüyse hava akışı kolonun şişmesine izin verecektir. Farenin midesine hava pompalanacaktır.

Sert endoskop kılıfını dikkatlice rektuma yerleştirin. Genel olarak, endoskop üç santimetreye kadar yerleştirilebilir, bu noktada farelerde kolon kıvrılır ve rijit endoskop tarafından erişilebilir değildir. Endoskopi prosedürleri sırasında sık karşılaşılan bir zorluk, dışkı maddesi nedeniyle kolonun lümenine erişimin engellenmesidir.

Dışkılamayı teşvik etmek için işlemden önce farelerin karnına hafifçe masaj yaparak bundan kaçının. Endoskopi işleminin herhangi bir aşamasında video kaydını başlatın. Hastalık skorlaması, işlem sırasında deneyimli bir asistan tarafından veya video dosyalarından daha sonraki bir zaman noktasında kaydedilebilir, bu işlemlerin deneyimli bir bilim insanı tarafından yapıldığından emin olun.

Her endoskopi işlemi, endoskopik muayeneyi takiben fare başına yaklaşık iki dakika sürecektir. Fareleri kafeslerine geri koyun ve anesteziden iyileşme sırasında onları izleyin. Hayvanlar genellikle Lorraine'den çıkarıldıktan sonra iki dakika içinde hareketli olarak uyandırılır ve burada gösterilen burun konisi uygulandığında, akut inflamatuar bağırsak hastalığını modellemek için DSS'ye maruz kalan farelerden elde edilen temsili sonuçlar vardır.

Protokolün sekizinci gününde tedavi edilmedi. Yabani tip farelerde beklenen kilo kaybı gibi kolit mevcut, kontrol fareleri ve rekombinant insan interlökin 11 proteini ile tedavi edilen farelerin endoskopi görüntüleri ve endoskopi kolit skorları gösterilmiştir. Kilo kaybı, azalmış endoskopi kolit skoru ile görselleştirildiği gibi farelerin genel sağlığını izlemek için rutin olarak kullanılan kolit ile ilişkili hastalığı izlemek için standart bir parametre olarak kullanılır.

İndüklenmiş hastalık patolojisi olan farelerin terapötik tedavisini takiben azalmış hastalık belirgindir. Yani bu tekniğe hakim olduktan sonra, fareyi yaklaşık iki dakika içinde değerlendirebilmelisiniz. Ve genel olarak, size gerçekten izin verdiği şey, bu tedavilerin ilgili bir klinik öncesi modelde iltihaplanma ve kanser üzerinde bir etkisi olup olmadığını çok etkili bir şekilde test etmektir.