Name: Deneysel Glokom Manyetik Mikrokürelerin Göz Enjeksiyon Bağlı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Keşfedin manyetik mikroküre enjeksiyonu ile sıçanlarda deneysel glokom modeli oluşturma yöntemini. Göz içi basıncını artırarak retinal ganglion hücre ölümünü ve optik sinir dejenerasyonunu inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Optik sinir kesiti konusundaki yardımları için Dr. Peter Munro'ya teşekkür etmek istiyoruz. Bu çalışma Tıbbi Araştırma Konseyi (G0901303) tarafından ve kısmen Dorothy Hodgkin Lisansüstü Ödülü / Tıbbi Araştırma Konseyi, Helen Hamlyn Vakfı, Görme Savaşı ve Moorfields özel mütevelli heyeti tarafından desteklenmiştir.

Etik deyimi: Tüm hayvan deneyleri Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) uyarınca yapılmıştır, ve Birleşik Krallık Ev Ofis kurallarına anlaşma (onaylandı <a href="http://goo.gl/FLkirW" target="_blank">http://goo.gl/FLkirW</a> , son 10 th Haziran erişilen , 2014) ve Oftalmik ve Vizyon Araştırma (Hayvanların Kullanım ARVO Bildirimi <a href="http://goo.gl/4LFOjD" target="_blank">http://goo.gl/4LFOjD</a> , son 10 th Haziran, 2014) erişilen. 1. Oküler Hipertansiyon İndüksiyon <ol><li> SAMSEL ve arkadaşlarının metoduna göre, Kahverengi Norveç sıçanlarının ön kamaraya para-manyetik mikro-enjeksiyon ile tek taraflı göz içi basıncı (IOP) yükseltmek yoluyla deneysel glokom yol açar. Bu doğrulanması gerekir, ancak 3 diğer pigmentli sıçanları uygun olabilir Kullanıcı tarafından ilk. </li><li> Ev 250-300 g kadınsabit düşük ışık ortamında (40-60 lux) ex-damızlık Brown Norveç sıçanları yiyecek ve su ad libitum erişim, GİB 7 günlük dalgalanmaları en aza indirmek için. </li><li> Sıçan göz 9 kullanılmak üzere kalibre bir toparlanma tonometresi kullanılarak, önceden anestezi ve boncuk enjeksiyon uyanık hayvanlarda 8 bazal GİB ölçümleri alın. IOP beş okumanın ortalaması olarak alınmıştır. </li><li> Intraperitoneal 37.5 mg / kg ketamin, ve 0.25 mg / kg medetomidin hidroklorür ile sıçanları anestezi uygulayın. Hayvanın arka ayak refleksleri test ederek anestezi derinliği onaylayın, iyot uygulaması (adım 1.5 bakınız), ve boncuk enjeksiyon Povidon önce (adım 1.8 bakınız). Analjezi için% 0.5 proparakain hidroklorür yönetme. NOT: Herhangi bir aşamada öğrenciye dilate etmeyin. Bu boncuklar iridokorneal açı içine daha iyi yerleşmek için yardımcı ve lens bağlayıcı önleyecektir. Un çalışan kontralateral göz kornea kurumasını önlemek için göz merhemi sürün. </li><li> Wsu enjeksiyon öncesinde 10 5 dk% 5 povidon iyot ile ameliyat göz kül. </li><li> 5 dakika sonra, steril gazlı bez kullanılarak kapalı povidon iyot fitil, ve% 0.9 steril tuzlu su çözeltisi ile göz yıkayın. Steril serum fizyolojik düzenli uygulama ile anestezi sırasında nemli gözünüz. </li><li> Gözün etrafında bir toroidal mıknatıs yerleştirin. </li><li> Bir 33 G eğimli iğne kullanılarak 30 mg / ön kamaraya Hank Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) içinde 8 mikron manyetik mikro-sterilize gama radyasyonun ml ihtiva eden bir çözelti, 25 ul enjekte edilir. <ol><li> Taneler hazırlamak için, daha sonra nihai 30 mg / ml solüsyon yapmadan önce, 1 ml HBSS ile 5 dakika boyunca 10,000 x g&#39;de 3 kez santrifüje tabi tutarak, yeniden süspansiyon haline getirilerek yıkayın. Boyunca steril koşullar koruyun. </li><li> Enjeksiyon için, iris travma riskini en aza indirmek için, iris iğne takmadan önlemek için dikkatli olun. Buna paralel olarak, kornea sathına teğet bir şekilde bir iğne yönlendirici önlenebilirmümkün olduğunca iris. Bu aynı zamanda enjeksiyon yerinde boncuk kaybını en aza indirmek için yardımcı olacaktır. NOT: IOP yükseltilmesi için kritiktir iridokorneal açısı çevresinde eşit bir dağılımını sağlamak için bir hızla boncuk enjekte edilir. Ayrıca, mağaza boncuk, iğne ve manyetik halkalar ayrı ayrı boncuk şırınga yüklemek ve enjekte etmek zorlaştırır, kümeler oluştururlar kalmamak ve iğne manyetize olmaz. </li></ol></li><li> Boncuklar trabeküler ağ sulu drenaj engellemek için iridokorneal açı içine yerleşmek sağlamak için 1 dakika sonrası enjeksiyon yerinde iğne bırakın. Biraz açı boncuk sonra iğne başlangıçta GİB geçici artışlar en aza indirmek için, sulu bazı sızıntı izin yerleşmiş. Operasyonun sonunda ilk fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile iğne ile yıkayın, sonra damıtılmış su, ardından% 70 etanol, ayrı işlemler iğnenin sürekli kullanımını sağlamak için. Seçenek olarak ise, bir kullanabilirDoğru göstergesi ve şırınga kombinasyonu varsa tek iğne. İsteğe bağlı: iğneler kullanımını uzatmak için bir beveller kullanılarak bilenmiş olabilir. </li><li> Bu aşamada gerekirse anda, mıknatıs kaldırmak ve eksik kapsama alanları içine boncuk çekmek için kullanabilirsiniz. </li><li> Boncuklar iridokorneal açı içine iyice yerleşmek sağlamak için daha 10 dakika sonrası enjeksiyon için göz çevresinde mıknatısı yerinde bırakın. </li><li> 0.25 mg / kg atipemezole hidroklorür Ters anestezi. </li><li> Enfeksiyonu önlemek için topikal, örneğin gentamisin veya Terramisin için kloramfenikol, ya da diğer antibiyotik merhem, yönetme ve analjezi için% 0.5 proparakain hidroklorür. Onlar hareketi yeniden kadar, ısı mat kurtarmak için hayvanların bırakın kurtarma tamamlanana kadar sonra böyle bir gıda takviyesi ya da nemlendirilmiş düzenli diyet gibi ek beslenme, sıcak bir kutu ve arz transfer. Sistemik ya da lokal analjezi ameliyat sonrası ağrı, 24 saat sergileyen hayvanlara verilmelidir. Thes EğerE belirtiler tedaviye rağmen devam ediyorsa, hayvanlar insanca itlaf edilmelidir. </li><li> Bir işlem görmemiş kontrol olarak kontralateral göz kullanın. </li><li> Boncuk verilmesini takiben 2-3 günde GİB ölçümleri alın ve her 2-3 gün sonra sıçan göz 9 kullanılmak üzere kalibre bir rebound tonometresi kullanarak. </li><li> 1) GİB 5 mmHg karşı kontrol basıncı üzerinde yükselir ve eğer 2) 60 mmHg geçmemesi: çalışmalarda gözler dahil olmak üzere kriterler olabilir. </li><li> (Genellikle 1 hafta sonrası enjeksiyon) başlangıca basınç döner çalışmalara dahil edilmemelidir Gözler, ancak istenirse yüksek GİB geliştirmek için başarısız gözünde yeniden enjekte boncuk mümkündür. </li><li> Deneyin sonunda CO 2 boğularak hayvanları Euthanize. </li><li> Gözleri ve optik sinirleri incelemek ve bir gecede ileri histolojik analiz için% 4 paraformaldehid (PFA) düzeltmek. </li></ol> 2. TÜNEL S Kullanma Retina Nöron Hasar Değerlendirmeronyum <ol><li> Üreticinin talimatlarına uygun olarak, terminal deoksinükleotidil transferaz aracılı dUTP çentik etiketleme (TÜNEL) deneyi retinasuse bütün montaj apoptotik hücrelerin miktarının ölçülmesi amacıyla. </li><li> Fosfat içinde% 0.3 Triton X-100 3 x 5 dakika boyunca tamponlu tuzlu su (T-PBS) ile akıtılarak, göz fincan retina ayır. </li><li> 2 saat süre ile% 3, T-PBS içinde doku geçirgenliği. </li><li> 37 ° C&#39;de 1 saat boyunca TÜNEL tepkime çözeltisi içinde inkübe edilmeden önce, 10 dakika süre ile, dengeleme tamponunda retina önceden dengeye getirin. </li><li> % 0.3 T-PBS 5 mcM DAPI içeren durulayın,% 0.3 T-PBS içinde 3 x 5 dakika doku yıkayın ve montaj medya düz monte. </li><li> TUNEL pozitif çekirdekler 20X büyütmede ganglion hücre tabakası ile 10 mikron z-yığınları almak için bir konfokal mikroskop kullanmak ölçmek için. Bütün Moun başına 12 görüntü toplam veren, retinanın uzak çevresinde orta periferdeki, optik sinire yakın bölgelerde, 4 yaprakları her birinde 3 fotoğraf çekin vet, yaklaşık 7.000 hücreleri örnekleme. Morfolojik kriterler nöronal hücrelerin nöronal olmayan (endotelyal ve glial) hücreleri ayırt. </li><li> Tedavi gruplarına sadece DAPI kanalı ve maske müfettişler kullanarak görüntüleme için alanları seçin. </li></ol> 3. Toluidin Mavi Boyama kullanma Optik Sinir Hasar Değerlendirme <ol><li> Gece boyunca 4 ° C &#39;de Karnovsky çözeltisi optik sinirleri düzeltildi. </li><li> % 1 (ağ / hac) ozmiyum tetroksit içinde 2 saat için numune tedavi ve daha sonra% 100 etanol içinde dehidre olmaktadır. </li><li> 30 dakika boyunca, propilen oksit optik sinirleri inkübe ve propilen oksidin bir 50:50 karışımda yer: Araldit gece boyunca karıştırılmıştır. </li><li> Gece boyunca 60 ° C&#39;de kuluçkalandı ve ardından% 100 Araldit için bu çözüm, değiştirin. </li><li> Kesme yarı ince kesitler (0.75 mm kalınlığında) ve ışık mikroskobu ile incelenmesi önce% 50 etanol içinde% 1 toluidin mavisi / boraks (TB) ile leke. </li></ol> 4. İstatistiksel Analiz <ol><li> İstatistiksel Adana&#39;&#39;konulu yürütmekUygun bir istatistik yazılım paketi kullanarak lyses. Newman-Keul post-hoc testi ile bir iki-yönlü ANOVA IOP zamanla değişen istatistiksel açıdan anlamlı hesaplamak için kullanılabilir. </li><li> Az 0.05 p değeri anlamlı kabul edilebilir. </li></ol>

<ol><li>Quigley, H. A., Broman, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+number+of+people+with+glaucoma+worldwide+in+2010+and+2020%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020.</a> Br J Ophthalmol. 90 (3), 262-267 (2006).</li>
<li>Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+and+treatment+of+glaucoma%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology and treatment of glaucoma: a review.</a> JAMA. 311 (18), 1901-1911 (2014).</li>
<li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (3), 1671-1675 (2011).</li>
<li>Libby, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inherited+glaucoma+in+DBA%2F2J+mice%3A+pertinent+disease+features+for+studying+the+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Vis+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Inherited glaucoma in DBA/2J mice: pertinent disease features for studying the neurodegeneration.</a> Vis Neurosci. 22 (5), 637-648 (1017).</li>
<li>Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+intraocular+pressure+and+optic+nerve+injury+models+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Elevated intraocular pressure and optic nerve injury models in the rat.</a> J Glaucoma. 14 (4), 315-317 (2005).</li>
<li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 43 (2), 402-410 (2002).</li>
<li>Moore, C. G., Johnson, E. C., Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+rhythm+of+intraocular+pressure+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Circadian rhythm of intraocular pressure in the rat.</a> Curr Eye Res. 15 (2), 185-191 (1996).</li>
<li>Morrison, J. C., Jia, L., Cepurna, W., Guo, Y., Johnson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+sensitivity+of+the+TonoLab+rebound+tonometer+in+awake+Brown+Norway+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Reliability and sensitivity of the TonoLab rebound tonometer in awake Brown Norway rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (6), 2802-2808 (2009).</li>
<li>Wang, W. H., Millar, J. C., Pang, I. H., Wax, M. B., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+measurement+of+rodent+intraocular+pressure+with+a+rebound+tonometer%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Noninvasive measurement of rodent intraocular pressure with a rebound tonometer.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (12), 4617-4621 (2005).</li>
<li>Isenberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+application+of+povidone-iodine%5BTitle%5D)+AND+%22Community+Eye+Health%22%5BJournal%5D)">The ocular application of povidone-iodine.</a> Community Eye Health. 16 (46), 30-31 (2003).</li>
<li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Exp Eye Res. 64 (1), 85-96 (1997).</li>
<li>Foxton, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-A+is+necessary+and+sufficient+for+retinal+neuroprotection+in+models+of+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">VEGF-A is necessary and sufficient for retinal neuroprotection in models of experimental glaucoma.</a> Am J Pathol. 182 (4), 1379-1390 (2013).</li>
</ol>

David T. Shima, Hofmann-La Roche, İsviçre'nin bir çalışanıdır. Geri kalan yazarlar, rekabet eden mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Burada gözün ön odasına manyetik mikro-enjekte edilerek sıçan yüksek göz içi basıncı sağlamak için bir yöntem ortaya koymaktadır. Bu yöntem yürütmek için basit ve küçük cerrahi uzmanlık gerektiren, ya da uygulama ve arıtma saat. Ayrıca, işlemde etkilidir; nadiren basınç güçlü ve kuvvetli bir artış (yaklaşık% 10 yeniden enjeksiyon oranı) ikna etmek için tanelerin tek bir enjeksiyon daha gerektirir. Bu GİB kaldırdı saklamalıdır için birden fazla prosedürleri gerektirebilir 11 modeli, ya da lazer fotokoagülasyon protokolü 6, skleroz gibi teknik açıdan zor episceral ven gibi mevcut uyarılabilir yöntemler üzerinde bir avantaj sağlayabilir. Ancak başarılı olmak için yöntemde için, alınması gereken bazı küçük kritik adımlar vardır. İlk olarak iridokorneal açıyla boncuklar çekmek için bir toroid şeklinde mıknatıs kullanmak yararlıdır. Bu adım Orijinal protokol, nereye bir değişiklikE boncuklar, anteryor odacık içine enjekte edilir ve daha sonra göz 3 çevresinde serbestçe bir taşınmıştır. Toroidal mıknatıs kullanarak mikroküreler az manuel yeniden dağıtıma gerektiren, açı etrafında eşit yerleşmek gerektiği anlamına gelir. Çok yavaş ve boncuk ağırlıklı eksik içerisinde, ve potansiyel olarak herhangi bir baskı artışa yol açan, açının bir tarafında birikir - İkinci olarak, püskürtme oranı, hızlı olmalıdır. Genellikle olsa konuşma, yöntem kullanıcı kolayca belki GİB yüksekliği derecesini değiştirmek girişimi için, Mikroküre parçacıkların boyutu veya hacmi değişen olarak protokole değişiklikler yapabiliriz yeterince basittir. Ancak, yöntemin bir potansiyel dezavantajı bir gözlediğimiz vakaların yaklaşık% 5-10&#39;unda 60 mmHg üzerinde yükseldi hipertansiyon, ölçüde üzerinde çok az kontrole sahip olmasıdır. GİB aşırı artışların retina dokusuna çok yıkıcı olabilir, mekanizmaları ve biyo eğitim yapabilirhücre ölümü logy zorlu. Bununla birlikte, yöntem, farmasötik olarak 12 manipüle edilebilir retina ve optik sinir, hem de tutarlı nöronal patoloji üretir. Bu glokom tedavisi için yeni terapötik maddelerin geliştirilmesi için model, çekici hale getirmektedir. Boncuklar iridokorneal açı içine yönlendirilir, çünkü Ayrıca, bu retina veya optik disk canlı görüntüleme için ücretsiz bir görsel ekseni bırakır. Bu model, uyarlanmış ve fare de dahil olmak üzere diğer türlerdeki gelecek uygulamalar için kullanılacak tahmin ediyoruz.

Birincil glokom hayat değiştiren görme kaybı ve körlük 2 yol açabilir dünya genelinde yaklaşık 1 60.500.000 kişiyi etkileyen yıkıcı bir göz hastalığıdır. Hastalık mekanizmalarına Araştırma ve glokom için yeni tedavilerin geliştirilmesi, patoloji işaretlerinden bazıları recapitulate hastalığın iyi modelleri bağlıdır. Biz SAMSEL ark yöntemine göre burada bir sıçan glokom modeli sunuyoruz. 3 Bu tekniğin genel amacı, doğrudan ön kamaraya manyetik mikroküreler enjekte ve manyetik halka kullanılarak göz içi basıncı (GİB) artırmak için Onları iridokorneal açı içine. Bu nöronal hasar ve hücre kaybına yol açan, göz içi basıncını artırır sulu çıkış, engeller. protokol glokom basit, uyarılabilir modeli sağlamak girişimi için geliştirilmiştir. Bu protokol, bazı avantajlara sahip olabilirMevcut teknikler üzerinde. Böyle DBA / 2J gibi genetik fare modelleri başlatmak için prosedürleri gerekmez, hangi mevcuttur; Ancak bu hastalığın ilerlemesi 4 bir öngörülemeyen başlangıcı olabilir. Bunun aksine, cerrahi kemirgenlerde göz içi basıncını yükseltme kullanan çoğu uyarımlı modelleri, başlatma kullanıcı tarafından kontrol edilebilir avantajına sahiptir. Bu yöntemlerden bazıları da dahil olmak üzere 5 teknik açıdan zorlayıcı olmak, ancak kendi sakıncaları olabilir ve yüksek GİB 6 korumak için birden fazla prosedürleri gerektirebilir. Bunun aksine, bu yazıda ayrıntılı olarak uyarılabilir bir yöntem tekrar enjeksiyon için en az ihtiyacı olan basınç sabit ve sağlam bir artış meydana getiren bir basit, etkili ve yeniden üretilebilir bir tekniktir. Ayrıca, pahalı ekipman anlamına gelmez, sadece gerçekleştirmek için temel cerrahi beceri gerektirir. Bu protokol, daha az teknik zorlu uyarılabilir kurmak isteyen okuyucular için uygun olabilironların laboratuvarda glokom modeli.

<table><tbody><tr><td>250 - 300g dişi Kahverengi Norveç eski damızlık sıçanlar</td><td>Harlan UK</td><td>203</td><td></td></tr><tr><td>Tonolab Ribaund Tonometre</td><td>Tiolat</td><td>TV02</td><td></td></tr><tr><td>Ketaset (ketamin)</td><td>Fort Dodge Hayvan sağlığı</td><td>BN1000118</td><td>37.5 mg/kg</td></tr><tr><td>Domitor (medetomidin hidroklorür)</td><td>Orion Pharma</td><td>140-999</td><td>0.25 mg/kg</td></tr><tr><td>Povidone iyot</td><td>Ecolab</td><td>BN4369LE10</td><td>H2O</td></tr><tr><td>Minim'in Tuzlu Solüsyonunda</td> %5 <td>Bausch ve Lomb</td><td>PL00033/5017</td><td></td></tr><tr><td>Toroidal mıknatıs</td><td>Süpermagnet</td><td>R-10-07-03-N</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik Mikro Küreler</td><td>Bangs Laboratuvarları</td><td>UMC4N/9692</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Invitrogen</td><td>14025</td><td></td></tr><tr><td>33 G eğimli iğne</td><td>Hamilton</td><td>7747-01</td><td>Özel iğne</td></tr><tr><td>Luer uçlu şırınga</td><td>Hamilton</td><td>80601</td><td></td></tr><tr><td>Antisedan (atipemezol hidroklorür)</td> <td>Orion Pharma</td><td>141-003</td><td>0.25 mg / kg</td></tr><tr><td>Kloramfenikol merhem</td><td>Medicom</td><td>18956-0005</td><td></td></tr><tr><td>TUNEL boyama kiti</td><td>Promega</td><td>G3250</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield montaj ortamı</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

deneysel glokom manyetik mikrokürelerin göz enjeksiyon bağlı

Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Glokomun patofizyolojisini anlamadaki ve yeni tedaviler sağlamadaki ilerleme, hastalığın iyi hayvan modellerine bağlıdır. Burada, gözün ön kamarasına manyetik mikroküreler enjekte ederek sıçanlarda göz içi basıncını (GİB) yükseltmek için bir protokol sunuyoruz. Manyetik parçacıkların kullanılması, kullanıcının boncukları iridokorneal açıya manipüle etmesine izin verir, böylece trabeküler ağdan sıvı çıkışının çok etkili bir şekilde bloke edilmesini sağlar. Bu, hastalığı olan hastalarda görüldüğü gibi, uzun süreli GİB artışlarına ve nihayetinde ganglion hücre tabakasında (GCL) nöronal ölüme ve ayrıca optik sinir patolojisine yol açar. Bu yöntemin uygulanması kolaydır, çünkü mükemmelleştirmek için makine, uzman cerrahi beceriler veya saatlerce pratik gerektirmez. Ayrıca, basınç yükselmeleri çok sağlamdır ve plastik boncukların kullanıldığı diğer bazı modellerin aksine, manyetik mikro kürelerin yeniden enjeksiyonu genellikle gerekli değildir. Ek olarak, bu yöntemin fare gözü için adaptasyon için uygun olduğuna inanıyoruz.

Iridokorneal açıyla manyetik boncuk enjeksiyon sürekli birinci zaman noktasında, 3 gün sonra enjeksiyon de, hali hazırda gözlenebilir olduğu basınç olarak uzun süreli ve güçlü bir artış (Şekil 1), neden oldu. Ayrıca, basınç artışı Deney süresi boyunca muhafaza edilmiştir, ve zaman süreci 18 gün sonrası enjeksiyon bitmiş olsa da, diğerleri basınç uzun vadeli 3 devam ettiğini bildirmişlerdir. ortalama GİB kontrolü için deney tam uzunluğu boyunca ortalama olmayan boncuk boncuk gözleri enjekte enjekte gözler için 40.5 ± 2.8 mmHg (p &lt;0.001) ile karşılaştırıldığında, 19.7 ± 0.3 mmHg idi. Ayrıca, zirve GİB 49.9 ± 2.3 mmHg 22.8 ± 0.3 mmHg yükselmiştir. GİB yüksekliği retina ganglion hücrelerinin ölümüne yol açar belirlemek için, biz (Şekil 2) enine optik sinir kesitleri üzerinde TÜNEL retina üzerine boyama ve histoloji gerçekleştirdi. Retinasında<html> Biz yüksek GİB ile boncuk enjekte gözlerde TÜNEL boyama (Şekil 2A) bir artış gözlendi. (p &lt;0.05 Şekil 2B) apoptotik çekirdeklerin hipertansif retinalarında 24.5 ± 0.5 hücrelere, karşı taraftaki kontrollere 1.6 ± 0.5 hücrelerinden yaklaşık 15 katlık bir artış göstermiştir. Ayrıca, gözlerde olan manyetik boncuk enjekte edildi, ancak basınç (nedeniyle iridokorneal açı eksik tıkanma olasılığı) artmadı, TUNEL-pozitif hücrelerin sayısı uninjected kontroller (p&gt; 0.05) anlamlı olarak farklı değildi. Bu hücre ölümü manyetik mikroküreler doğrudan toksisitesi nedeniyle değil basınç artar, ilişkili olduğunu göstermektedir. Son olarak, glokom modelinde optik sinir patoloji inceledik ve bu hücresel süreçlerin (Şekil 2C) dejenerasyon gösteren, aksonların birçok toluidin mavisi birikimi gördü. ure 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 52.400 / 52400fig1highres.jpg &quot;/&gt; Ön kamaraya manyetik mikroküreler Şekil 1. manyetik mikroküreler kullanılarak göz içi basıncının yükselmesi. Enjeksiyon karşı kontrolü, sigara enjekte gözlere kıyasla göz içi basıncı (GİB) sağlam bir önemli artış kaynaklı. Y-ekseni birimleri = milimetre cıva (mmHg). Veriler = ortalama ± SEM. * = P &lt;0.001;., N = 12 Bu rakam Foxton ve arkadaşları, Am modifiye edilmiştir. J. Pathol 182 (4):. 1379-1390. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52400/52400fig2highres.jpg" /> Ganglion hücre tabakası (GCL) nöronal ölüm kaynaklı iridokorneal açı içine manyetik mikroküreler enjeksiyonu ile GİB 2. Yükselmesi Şekil. (A) kontrol (solda) ve glokom TUNEL (yeşil ile apoptotik çekirdeklerin için lekeli (sağ) gözlerden retina Temsilcisi görüntüleri;GİB gül gibi apoptotik çekirdeklerin sayısı arttı belirten beyaz oklar) ve DAPI (mavi),. (B) GCL TUNEL pozitif hücrelerin miktarının belirlenmesi, yüksek GİB (orta) ile gözler, kıyasla önemli ölçüde daha fazla apoptotik hücreler olduğunu gösteren Kontrol (solda). Bunun aksine, boncuk enjekte gözlerde basıncı, TÜNEL lekelemesi olarak önemli bir artış gözlenmiştir (sağ) yükselmedi burada. Veriler = ortalama ± SEM. * = P &lt;0.05; N = 7 - 8 (C) Temsilcisi optik sinir boyama görüntüleri, glokom (sağda) zarar görmüş akson toluidin mavisi birikimi bir artış (siyah oklar) gösteren, ancak kontrol edemez gözler (solda).. Ölçek çubukları 50 mikron =. Bu rakam, Foxton diğerleri modifiye edilmiştir., Am. J. Pathol 182 (4):. 1379-1390.

Glokomu modellemek için sıçan gözüne manyetik mikroküreler enjekte ederek yüksek göz içi basıncını (GİB) indüklemek için bir yöntem sunuyoruz. Bu, güçlü basınç artışlarına ve geniş nöronal ölüme yol açar. Bu protokolün uygulanması kolaydır, tekrar enjeksiyonları gerektirmez ve stabil uzun süreli GİB artışları üretir.

Deneysel Glokom Manyetik Mikrokürelerin Göz Enjeksiyon Bağlı

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

Bu prosedürün amacı, gözün ön kamarasına paramanyetik mikrokürelerin enjekte edilmesi yoluyla sıçanlarda yüksek intraoküler basınlık oluşturmaktır. Öncelikle, anestezi uygulanmış hayvanın gözünün etrafına manyetik bir halka yerleştirin, manyetik mikroküreleri yıkayın, solüsyon içinde yeniden süspande edin ve ardından bunları bir şırıngaya doldurun. Sonrasında, manyetik mikroküreleri gözün ön kamarasına enjekte edin.Geri kazanım sırasında manyetik halkayı çıkarın. Tünel boyama veya optik sinir boyama gibi histolojik analizlerden elde edilen işlem verileri, artan intraoküler basınçtan kaynaklanan retinal ganglion hücrelerinin ölümünü ölçebilir. Sterilize edilmiş sekiz mikronluk manyetik mikroküre boncuklarını, yeniden askıya alma ve 10,000 ×g'de beş dakika santrifüjleme yoluyla bir mililitre Hank's dengeli tuz çözeltisinde üç kez yıkayın.Ardından, 30 mg/mL konsantrasyonda bir çözelti elde etmek için örneği 0.5 mL HBSS içinde yeniden süspande edin. Şimdi, sıçan gözünde kullanım için kalibre edilmiş bir rebound tonometre kullanarak, uyanık hayvanlarda beş bazal IOP ölçümü yapın. Anestezi sonrası, sıçanların ölçüm yapılmayan karşı taraf gözünü nemli tutmak için oküler pomad uygulayın.Anestezi sırasında, operasyon yapılacak göze lokal anestezik olarak %0,5 propan hidroklorür uygulayın. Ardından, bu gözü suda %5 povidon iyot ile yıkayın. Beş dakika sonra povidon iyodu silin ve gözü %0,9 steril salin solüsyonu ile yıkayın.Anestezi sırasında steril salin düzenli olarak uygulanarak göz nemli tutulmalıdır. Şimdi, iris travması riskini ve boncuk kaybını en aza indirmek için gözün çevresine steroidal bir mıknatıs yerleştirin. İğneyi kornea yüzeyine teğet ve iris ile mümkün olduğunca paralel olacak şekilde yönlendirin.Ön kamaraya 25 µL, 30 mg/mL gamma ışınlanmış manyetik mikroküre enjekte edin. Boncukların, trabeküler ağdan sulu hümör drenajını engellemek amacıyla IOC kornea açısına yerleşmesini sağlamak için iğneyi enjeksiyon sonrası bir dakika boyunca yerinde bırakın. Boncuklar başlangıçta yerleştikten birkaç saniye sonra, bir miktar sulu hümör sızıntısına izin vermek ve göz içi basıncındaki geçici artışları minimize etmek için iğneyi hafifçe eğik konuma getirin.İğnenin farklı prosedürlerde kullanılmaya devam edilmesini sağlamak için iğneyi PBS ile yıkayın. Ardından %70 etanol ve bu aşamadan sonra distile su ile durulayın. Gerekirse mıknatısı çıkarın ve kapsamanın yetersiz olduğu bölgelere boncukları çekmek için kullanın.Enjeksiyondan sonra, boncukların iridokorneal açıya iyice yerleşmesini sağlamak için mıknatısı göz çevresinde 10 dakika daha tutun. Kilogram başına 0,25 mg ESOL hidroklorür kullanarak anesteziyi geri çevirin.Analjezi için 0.5 propan hidroklorür ve enfeksiyonu önlemek için topikal olarak kloramfenikol pomad uygulayın. Hayvanları, hareket kabiliyetlerini geri kazanana kadar bir ısıtıcı mat üzerinde iyileşmeye bırakın. Ardından sıcak bir kutuya aktarın.Kontralateral gözü derecelendirilmemiş bir kontrol olarak kullanın. Boncuk uygulaması sonrası ve ardından her iki ila üç günde bir GÖB ölçümlerini tekrarlayın; GÖB'nin kontralateral kontrol basıncının 5 mmHg üzerinde olduğu ve GÖB'nin 60 mmHg'yi aşmadığı gözler dahil olmak üzere çalışmalara dahil edilecek gözlerin kriterlerini belirleyin; enjeksiyondan bir hafta sonra basıncı başlangıç seviyesine dönen gözler çalışmalara dahil edilmemelidir. Bununla birlikte, arzu edilirse yüksek GÖB geliştiremeyen gözlere tekrar boncuk enjekte edilmesi mümkündür.Diseke edilmiş gözleri ve optik siniri %4 paraformaldehitte sabitleyin, retinal nöron hasarını TUNEL boyamasıyla ve optik sinir hasarını Toluidine Blue boyamasıyla değerlendirin. Bu deneyde, iridokorneal açıya manyetik boncukların enjekte edilmesi, basınçta tutarlı, uzun süreli ve güçlü bir artışa neden olmuştur. Ayrıca, basınçtaki bu artış deney süresi boyunca korunmuştur.Kontrol grubu olan boncuk enjekte edilmemiş gözler için deney süresince ortalama IOP 19,7 ± 0,3 mmHg iken, boncuk enjekte edilen gözler için bu değer 40,5 ± 2,8 mmHg olarak gerçekleşmiştir. Ek olarak, IOP'deki yükselmenin retinal ganglion hücrelerinin ölümüne yol açıp açmadığını belirlemek amacıyla, pik IOP 22,8 ± 0,3 mmHg'den 49,9 ± 2,3 mmHg'ye yükselmiştir. Retinalarda TUNEL boyaması, retinadaki transvers optik sinir kesitlerinde ise histolojik inceleme yapılmıştır.Yükselmiş IOP'ye sahip boncuk enjekte edilmiş gözlerde tünel boyanmasında bir artış gözlemledik. Kontralateral kontrol hipertansif retinalara kıyasla apoptotik çekirdeklerin sayısı yaklaşık 15 kat arttı; basınç uygulanmadan manyetik boncukların enjekte edildiği gözlerde ise tünel pozitif hücrelerin sayısı enjeksiyon yapılmamış kontrollere göre anlamlı bir farklılık göstermedi. Glokom modelindeki optik sinir patolojisinin daha ileri araştırmaları, birçok aksonda odine mavisi birikimi olduğunu göstermiş ve bu durum söz konusu hücresel uzantıların dejenerasyonuna işaret etmiştir.

experimental-glaucoma-induced-ocular-injection-magnetic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, anestezi uygulanmış bir sıçanda episkleral ven içine hipertonik salin enjekte edilerek glokom indüksiyonunu göstermektedir. Salin, Schlemm kanalı yoluyla trabeküler ağa girer ve sulu hümör çıkışını engelleyen ve göz içi basıncını artıran doku skarlaşmasına neden olur. Yüksek basınç retinal ganglion hücrelerine zarar vererek glokoma yol açar.

Sıçanlarda Glokomu İndüklemek için Hipertonik Salin Enjeksiyon Tekniği

Bu videoda, anestezi uygulanmış bir sıçan, iridokorneal açıyı bloke etmek için manyetik bir alan altında manyetik boncukların ön kamaraya enjekte edildiği oküler bir prosedüre tabi tutulur. Bu tıkanıklık trabeküler ağı tıkar, sulu hümör drenajını engeller ve göz içi basıncının artmasına neden olarak retina ganglion hücrelerine ve optik sinire zarar verir. Bu, glokom benzeri bir durum geliştirir.

Bir Fare Modelinde İridokorneal Açı Obstrüksiyonu ile Deneysel Glokom İndüksiyonu

Kaynak: Bosco, A.,  et al.  Nörodejenerasyon Sırasında Retinal Mikroglial Aktivasyonun İn Vivo Dinamiği: Fare Glokomunda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre Morfometrisi. J. Vis. Uzm. (2015) Bu video, bir fare glokom modelinde retinal mikroglianın in vivo görüntülemesini göstermektedir. Floresan protein eksprese eden retinal mikrogliaya sahip transgenik bir fare, bir oftalmoskop altına yerleştirilir. Kızılötesi aydınlatma, optik sinir başını (ONH) bulmak için kullanılır ve odak düzlemi,...

Glokomun Fare Modelinde Retinal Mikroglia'nın İn vivo Görüntülenmesi

Kronik oküler hipertansiyon fare gözünde Trabeküler ağın laser kullanılarak meydana gelir. Göz içi basıncı (GİB) lazer tedavi sonrası birkaç ay boyunca yükselir. Görme keskinliği ve Deney hayvanlarının kontrast duyarlılık azalması optomotor testi kullanılarak izlenir.

Görme Kusurları karakterize Kronik Oküler Hipertansiyon bir Lazer-kaynaklı Fare Modeli

Bu video naif fare görsel projeksiyon kontrastlı MR görüntüleme ve akut optik sinir ezilme yaralanma ve kronik optik sinir dejenerasyonu ile ilişkili optik sinir dejenerasyonu tekrarlayan ve uzunlamasına in vivo çalışmalar için, bir klinik 3 T tarayıcı kullanarak, bir yöntemi göstermektedir knock-out fareler (p50 KO).

Farelerde kontrastlı MR ile optik sinir lifi Dürüstlük İn vivo

Burada, glokom görüldüğü gibi, retinal ganglion hücre kaybına neden murin göz oküler hipertansiyon uyarılması için bir protokol mevcut. Manyetik mikroboncuklarının ön kamaraya enjekte ve sulu mizah çıkışı engellemek için bir mıknatıs kullanarak iridokorneal açı çekti.

Bir Manyetik microbead Oklüzyon Modeli Farelerde Glokom Oküler Hipertansiyon Bağımlı tetikleyebilecek

Glokom, retinal ganglion hücrelerinin hasar görmesi ile karakterizedir. Hayvan modellerinde glokomu indüklemek, bu hastalığın incelenmesi hakkında fikir verebilir. Burada, bir in vivo sıçan modelinde RGC kaybını indükleyen ve analiz için tam montajlı retinaların hazırlanmasını gösteren bir prosedürü özetliyoruz.

Glokom uyaran bir de Prosedürü<em&gt; İn Vivo</em&gt; Rat Modeli ve Tüm montaj Retina Hazırlık

Kronik oküler hipertansiyon circumlimbal dikiş sıçanlar ve fareler, Retina ganglion hücrelerinin glokom ile tutarlı fonksiyonel ve yapısal bozulma yol uygulayarak indüklenen.

Manken Circumlimbal dikiş sıçanlar ve fareler tarafından indüklenen glokom

Burada, silikon yağı intrakalik enjeksiyonu ve ön hazneden silikon yağı kaldırma prosedürü ile fare gözlerinde oküler hipertansiyon ve glokom nörodejenerasyon indüklemek için bir protokol sunmak yüksek göz içi basıncı dönmek için Normal.

Farelerde Geri Dönüşümlü Silikon YağA Bağlı Oküler Hipertansiyon Modeli

Bu protokol, farelerde Astarlı Mikobakteriyel Üveit'i (PMU) indükleme adımlarını özetlemektedir. Bu yöntem, fare modeli sisteminde güvenilir ve sağlam oküler inflamasyon üretmeye yardımcı olacak adımları özetlemektedir. Bu protokolü kullanarak, immünolojik, transkriptomik ve proteomik tahlillerle daha ileri değerlendirme için tek hayvanlardan uveitik gözler ve iltihapsız diğer gözler ürettik.

Post-Enfeksiyöz Üveit için Bir Model Olarak Astarlanmış Mikobakteriyel Üveit (PMU)

Bu protokolün amacı, subakut oküler hipertansiyonu indükleyen limbal vasküler pleksusun 360° termik koterizasyonuna dayanan yeni bir glokomatöz nörodejenerasyon modelini karakterize etmektir.

Kemirgenlerde Cerrahi Olarak İndüklenen Glokom için Limbal Vasküler Pleksusun Tam Daire Koterizasyonu

Keşfedin manyetik mikroküre enjeksiyonu ile sıçanlarda deneysel glokom modeli oluşturma yöntemini. Göz içi basıncını artırarak retinal ganglion hücre ölümünü ve optik sinir dejenerasyonunu inceleyin.

Deneysel Glokom Manyetik Mikrokürelerin Göz Enjeksiyon Bağlı

Daha fazla video keşfet