Deneysel Glokom Manyetik Mikrokürelerin Göz Enjeksiyon Bağlı

Bu prosedürün amacı, gözün ön kamarasına paramanyetik mikroküreciklerin enjeksiyonu kullanılarak sıçanlarda yüksek göz içi basıncını indüklemektir. İlk önce anestezi uygulanmış bir hayvanın gözünün etrafına manyetik bir halka yerleştirin, manyetik mikro küreleri yıkayın, çözelti içinde tekrar süspanse edin ve ardından bir şırıngaya yükleyin. Ardından, manyetik mikro küreleri gözün ön odasına enjekte edin.

Kurtarma sırasında manyetik halkayı çıkarın. Tünel boyaması veya optik sinir boyaması gibi histolojik analizlerden elde edilen proses verileri, göz içi basıncının artmasından kaynaklanan retinal ganglion hücrelerinin ölümünü ölçebilir. Sterilize edilmiş sekiz mikron manyetik mikroküre boncukları, bir mililitrelik hank'in tamponlu tuzlu su çözeltisinde üç kez yıkayın, reus ile yıkayın, beş dakika boyunca 10.000 kez G'de askıya alın ve santrifüjleyin.

Daha sonra reus, mililitre başına 30 miligramlık bir çözelti için 0.5 mililitre HBSS'de askıya alınır. Şimdi, sıçan gözünde kullanılmak üzere kalibre edilmiş bir geri tepme sonometresi kullanarak, uyanık hayvanlarda beş temel GİB ölçümü yapın. Anestezi uygulandıktan sonra, sıçanlar nemli tutmak için derecelendirilmemiş kontralateral göze oküler merhem uygularlar.

Anestezi sırasında ameliyat gözüne% 0.5 propan hidroklorür, lokal anestezik uygulayın. Daha sonra, bu gözü suda% 5 povidon iyot ile yıkayın. Beş dakika sonra, povidon iyottan çıkın ve gözü% 0.9 steril tuzlu su çözeltisi ile yıkayın.

Düzenli steril salin uygulaması ile anestezi sırasında gözü nemli tutun. Şimdi iris travması riskini en aza indirmek ve boncuk kaybını en aza indirmek için gözün etrafına steroidal bir mıknatıs yerleştirin. İğneyi kornea yüzeyine teğet olarak irise mümkün olduğunca paralel olarak yönlendirin.

Mililitre başına 25 mikrolitre 30 miligram, gama ışınlanmış manyetik mikroküreleri ön odaya enjekte etmeye devam edin. Trabeküler ağdan sulu drenajı engellemek için boncukların IOC kornea açısına yerleşmesini sağlamak için iğneyi enjeksiyondan sonra bir dakika yerinde bırakın. Boncuklar başlangıçta yerleştikten birkaç saniye sonra iğneyi hafifçe açılı olarak çalışın, böylece bir miktar su sızıntısına izin verin ve göz içi basıncındaki geçici artışları en aza indirin.

İğnenin ayrı prosedürlerde sürekli kullanılmasını sağlamak için, iğneyi PBS ile yıkayın. Daha sonra% 70 etanol, ardından bu aşamada damıtılmış su. Gerekirse, mıknatısı çıkarın ve eksik kapsama alanlarına boncuk çekmek için kullanın.

Enjeksiyondan sonra mıknatısı 10 dakika daha göz çevresinde bırakın. Boncukların irid kornea açısına iyi yerleşmesini sağlamak için. Kilogram ESOL hidroklorür başına 0.25 miligram kullanarak ters anestezi.

Enfeksiyonu önlemek için analjezi ve kloramfenikol merhem için 0.5 propan hidroklorür uygulayın. Hayvanları, hareketlerini yeniden kazanana kadar bir ısı matı üzerinde toparlanmaya bırakın. Ardından ılık bir kutuya aktarın.

Kontralateral gözü derecelendirilmemiş bir kontrol olarak kullanın. Boncuk uygulamasını takiben her iki ila üç günde bir ve daha sonra her iki ila üç günde bir GİB ölçümlerini tekrarlayın, GİB'nin kontralateral kontrol basıncının üzerine beş milimetre cıva ile yükseltilmesi ve GİB'nin 60 milimetreyi aşmaması dahil olmak üzere çalışmalara gözleri dahil edin Enjeksiyondan bir hafta sonra basıncın taban çizgisine döndüğü gözler çalışmalara dahil edilmemelidir. Ancak istenildiği takdirde yüksek GİB gelişemeyen gözlere tekrar boncuk enjekte etmek mümkündür.

Kesilen gözleri ve optik siniri% 4 paraldehitte sabitleyin, tünel boyama ile retina nöron hasarını ve ayak mavisi ile optik sinir hasarını değerlendirin. Boy -ama. Bu deneyde, manyetik boncukların irid kornea açısına enjeksiyonu, basınçta sürekli olarak uzun süreli ve sağlam bir artışa neden oldu. Ayrıca, deney süresi boyunca basınçtaki artış korunmuştur.

Boncuk enjekte edilmeyen gözlerin kontrolü için deneyin tüm uzunluğu boyunca ortalama GİB, boncuk enjekte edilen gözler için 19.7 artı eksi 0.3 milimetre cıva ve 40.5 artı eksi 2.8 milimetre cıva idi. Ek olarak, GİB'deki yükselmenin retinal ganglion hücrelerinin ölümüne yol açıp açmadığını belirlemek için tepe GİB 22.8 artı eksi 0.3 milimetre cıvadan 49.9 artı eksi 2.3 milimetre cıvaya yükseldi. Retinalarda tünel boyama, retinada transvers optik sinir kesitlerinde histoloji yapıldı.

GİB yüksekliği ile boncuk enjekte edilen gözlerde tünel lekelenmesinde artış gözlemledik. Apoptotik çekirdek sayısı, manyetik boncukların basınçsız enjekte edildiği gözlerde beklendiği gibi kontralateral kontrol hipertansif retinalarından yaklaşık 15 kat arttı, tünel pozitif hücrelerin sayısı enjekte edilmeyen kontrollerinkinden önemli ölçüde farklı değildi. Glokom modelindeki optik sinir patolojisinin daha fazla araştırılması, bu hücresel süreçlerin dejenerasyonunu gösteren aksonların çoğunda odin mavisi birikimini gösterdi.