Name: Yetiştirme Heligmosomoides Polygyrus: Bir immunsupresif Nematodu Parazit ve Salgılanmış Ürünleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: Öğrenin Heligmosomoides polygyrus'u yetiştirme ve salgılanmış ürünlerini izole etme yöntemini. Bu protokol immünoloji ve parazitoloji araştırmalarında bağışıklık yanıtlarını baskılayan molekülleri incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, Wellcome Trust tarafından Edinburgh Clinical Academic Track (C.J.C.J.) ve Program Hibesi (YH ve RMM) ve Burs (JRG) finansmanı, BBSRC (G.C.), Amerikan Astım Vakfı (E.R., H.J.McS. ve RMM), Asthma UK (H.J.McS.) ve Rainin Vakfı (D.J.S. ve RMM) aracılığıyla finanse edilmektedir.

NOT: Bu protokol tüm işlemler Birleşik Krallık Home Office ve Edinburgh Veteriner Hizmetleri Üniversitesi tarafından belirlenen esaslara uygun olarak yapılır. Gavaj yoluyla 1. Farelerin enfeksiyonu <ol><li> Altı aya kadar 4 ° C için damıtılmış su içinde mağazası Heligmosomoides polygyrus L3 larva. </li><li> Kullanmadan önce, damıtılmış su içinde L3 larva üç kez yıkayın: santrifüj (fren) 10 dakika boyunca 300 x g&#39;de, tüm su ancak 500 ul çıkarın (rahatsız edici pelet L3 larva önlemek için) ve pelet, her zaman yeniden süspanse edin. </li><li> Üçüncü yıkama için, kendi deliği genişletmek için 200 ul ucu kesilmiş tam bir hacimde (tipik olarak 40 mi) ve aspirasyon 20 ul su ilave edilir. (Mobil, ve en iyi bir mikroskop ile 50X büyütme altında inceledi genellikle) 60 mm kültür çanak yüzeyinde iki 20 ul örnekleri yerleştirin ve L3 larva sayısı. Bir concentratio için damıtılmış su içinde nihai pelet yeniden süspanseml başına 2,000 L3 larvaları n. </li><li> Yaşam döngüsü üretimi için, 400 H. 8 haftalık F1 (C57BL / 6xCBA) fareleri enfekte oral gavaj yoluyla damıtılmış su, 200 ul polygyrus L3 larvalarına (Boynun ense göre dik olarak fareler sınırlayacağı ve yavaşça mideye ağızdan ve yemek borusundan küt gavaj iğnesi). Çalkalayın, her enfeksiyon (larvalar suda hızlı yerleşmek) ve aspirat 1 ml şırınga 200 ul önce iyice; yuvarlak uçlu özel bir sonda iğne kullanın. Genç farelerde deneysel enfeksiyon (6-8 hafta) veya diğer doğal suşları (örneğin, C57BL / 6 veya Balbc) için, 200 L3 larva ile enfekte fareler. </li></ol> 2. Yayılım ve H. Bakım polygyrus <ol><li> Büyük bir plastik küvet merkezinde kömür yerleştirin ve soğuk musluk suyu 30 dakika en az üzerinde çalışmasına izin (yıkanmamış aktif kömür L3 larvalarına karşı toksiktir). Küvet suyu boşaltın ve t kömür yerleştirinTamamen kuruyana kadar oda havaya maruz kalacak şekilde, emici kağıt tabakaları, wo. </li><li> Yumurta gerekiyorsa (gerekirse ve makas), ilk forseps ile kolonun dışına dışkı kazımak. L3 larva sayıda gerekli ise, bir tel ızgara üzerinde fareler yerleştirin ve bir kaç gün içinde fekal pelet toplar. </li><li> Sadece kağıt filtre yapışmak için yeterince nemli bir kıvam elde etmek için, 1: en az bir 1 oranında granüle edilmiş mangal kömürü ile dışkı karıştırın. Bir petri bazı nemli filtre kağıdının ortasına ince bir tabaka smear ve nemli kutuda bu koyun 12-14 gün süreyle karanlıkta (bazı nemli kağıt havlu ve su bir tabak eklemek). </li><li> Itibaren günde 7 den L3 larvaları çıkarın ve kağıt atılır önce en az iki vesilelerle onları toplamak. Larvalar filtre kağıdı kenarı etrafında bir halka oluştururlar; petri üzerinden filtre kağıdı kaldırarak ve 50 ml&#39;lik bir tüp içine (bir pipet ve plaka başına steril su 5 ml kullanılarak) levhanın kalan larva yıkayın. </li><li> Asansörve filtre kağıdı kapalı kalan larvalar 50 ml tüp içine damıtılmış su ile tabağın sol hasat. 10 dakika için 300 xg&#39;de atık çözüm santrifüjleyin. Damıtılmış su ile larva üç kez yıkayın ve gerekli olana değin daha sonra damıtılmış su içinde 50 ml 4 ° C&#39;de saklayın. NOT: Larva canlı kalır ve en az 6 ay süreyle enfektif. </li></ol> Yetişkin H. 3. Koleksiyonu polygyrus Worms <ol><li> Şekil 1&#39;de gösterildiği gibi önceden değiştirilmiş Baermann Aparatı hazırlayın. </li><li> On dört gün sonra enfeksiyon itlaf fareler. </li><li> % 70 etanol ile karın yıkayın. Karın üzerindeki deriyi kesin ve karın ön duvarı ortaya çıkarmak için geri çekin. Periton boşluğuna girmek için orta hat kesi olun. </li><li> (Distal rektum proksimal duodenum itibaren) tüm küçük ve büyük bağırsak çıkarın. Kuru Petri kabı içine yerleştirin. </li><li> Onun bütün uzunluğu boyunca gut Düzelt; dışkı içeren kolon tüketim; Daha sonra yumurta hazırlıkları için ayrı bir çanak içine bu yerleştirin. </li><li> Nedeniyle içi lümen solucanlar duodenum ve genellikle kırmızı görünüm nispeten kalın bir duvar ile -identified erişkin solucanlar içeren ince bağırsağın proksimal 20 cm eksize edin. Hanks çözeltisi, 5 ml ile (100 mm&#39;lik çap) Petri kabı içine yerleştirin, 37 ° C (tabak başına iki örnek) ısıtıldı. </li><li> Makas (yuvarlak uçlu makas bunun için en iyi) ile uzunlamasına solucan dolu proksimal bağırsak bölümünü açın ve solucanları kaldırmak için iki cam slaytlar ile astar bağırsak içinde aşağı kazımak. Sonra temiz bağırsak duvarını atın. </li><li> Küçük müsli çanta içine ucu solucanlar, zımba kapalı ve cam huni (Şekil 1) kenarında Ataç ile sabitleyin. </li><li> Hanks &#39;Çözüm ile huni doldurun ve her huni içine solucanlar yaklaşık 4 Petri kapları ekleyin. </li><li> 1-2 saat boyunca 37 ° C inkübatör içinde bir yer cihaz, hafifçe yarı yoldan ajite çıkarmak içinmuslin filtresi occlude bağırsak hazırlık enkaz. Muslin çanta dışında enkaz dökülmesini önlemek için özen - bu son HES hazırlık kontaminasyona neden olur. Yetişkin solucanlar yavaş yavaş muslin kumaş ile göç ve cam test tüpünün dibinde yerleşmiş olmalıdır. Dikkatle (bu noktada solucanlar kaybetmemek için dikkat) lavabonun üzerinde bağlantı kauçuk hortum test tüpü ayırın. </li><li> Bir plastik pipet kullanarak, bir 50 ml tüp içine solucanlar aktarmak ve yıkama altı kez Hanks ile &#39;Çözüm (solucanlar bir stripette ile medya, yerçekimi ile yerleşmek kaldırmak için izin eklemek Hanks 40 ml&#39; Çözüm ve beş kez tekrarlayın). Not: solucan kültürü Bu noktadan itibaren, steril tutulmalıdır. <ol><li> Bir laminar akış çeker taşı ve 100 U / ml penisilin ve 100 ug / ml streptomisin, in vitro kültür için hazır ile takviye edilmiş steril Hanks çözeltisi içinde altı defa yıkanır. </li></ol></li><li> Saymakonun açıklığı genişletmek için sarı ucu kesilmiş alınmış 20 ul iki numune alarak kurtarıldı erişkin solucanlar; aşılanmış larva miktarı yaklaşık% 50 bekliyoruz. </li></ol> Orta Hazırlanması, Yetişkin Worms Yıkama: 4. HES için Kültürleri Kurma <ol><li> RPMI yaklaşık 10 ml 3.11 solucanlar emmek solucanlar tamamen kapalı sağlamak için bir açıyla boru dinlenme bırakarak, 20 dakika boyunca% 10 Gentamisin ile takviye edilmiştir. </li><li> Bir laminar akış başlığı içinde bu yapın: Hanks çözeltisi ile altı kez yıkama (5 U ile takviye / ml penisilin ve 5 ug / ml streptomisin). </li><li> H. hazırlayın polygrus ortam. </li><li> , 11.1 mi,% 45 glükoz (nihai konsantrasyon RPMI-1640,% 0.2 glukoz içeren 1.2%), 100 x Peniclllin-Streptomisin (nihai konsantrasyon, 5 U / ml penisilin, 5 ml ilave edin, 500 RPMI1640 ml, bir laminar akış başlığı içinde steriliteyi korumaya 5 ug / ml streptomisin), L-glutamin, 5 ml (nihai konsantrasyon 2 nM), veGentamisin 5 ml (nihai konsantrasyon% 1). FCS katmayın. </li><li> Bacalı T25 şişeler içine kısım solucanlar, yakl. 15 mi H. 1000 solucanlar polygyrus şişe başına ortam, ve 37 ° C inkübatör (% 5 CO2) 3 hafta boyunca dik bir yer. </li></ol> HES 5. hazırlanması <ol><li> Kültür 24 saat sonra ilk koleksiyonunu bir kenara bırakarak, haftada iki kez daha daha uzun aralıklarla kültürlerinden kültür ortamı HES içeren toplayın (LPS nedeniyle kirlenme ve ev sahibi proteinlerin yüksek düzeyde - ayrı ayrı işlenir veya atılabilir). Ayrı ve açıkça tarih ve seri numarası ile etiketlenmiş her koleksiyonu tutun. H. eşit hacimde yerine Her vesileyle polygyrus medya. </li><li> Santrifüj 5 dakika boyunca 400 x g &#39;daki ortamı HES-ihtiva etmektedir. Daha sonra 50 ml tüpler içinde 0.2 mikron düşük-protein bağlayıcı filtre ile sterilize filtre edin. -20 ° C derin dondurucuda saklayın açıkça HES c solucan hasat tarihi ve tarih ile etiketlenmişollection. </li><li> Kültürden HES toplama 21 gün sonra, solucanlar atın. </li><li> (Genellikle dondurulmuş stoktan ve ilk 24 saat toplama dahil olmak üzere) ve azot basıncı altında, ultrafiltrasyon cihazında 3000 MWCO filtre üzerinde konsantre HES yüzer Havuz 500-1000 mi. NOT: Filtre çalışma kuruması için çok dikkatli olun. <ol><li> Filtre cihazı kurmak ilk karıştırma iken 3 x 20 dakika boyunca distile su ile 1 litrelik beher aşağı 3 kDa membran parlak tarafı yıkamak için. Filtre membran parlak tarafı yukarı üreticinin talimatlarına göre ultrafiltrasyon cihazı monte edin. 4 ° C &#39;de kabin içinde yeri ve bir araya toplanmış HES konsantre başlamadan önce damıtılmış su, 50 ml geçmektedir. </li><li> Hacmi 2-5 ml&#39;ye kadar konsantre edildi kadar (gün başına 100-140 mL) gerektiği gibi süzme cihazına HES her tüp ekleyin. </li></ol></li><li> PYR 50 ml HES-ihtiva eden kültür ortamından kirleri çıkarmak eklemek içinve PBS filtrasyon cihazına ve ogen-özgür sonra yaklaşık 2 ml kadar konsantre. İki kez bu adımı (toplam PBS 150 mi) tekrar edin. Bir laminar akış başlığı içinde bir 15 ml tüp (0.2 um filtre ile) filtre ile steril olarak HES aktarın ve bir spektrofotometre (= 10 e 280) ya da Bradford tahlili ile kullanılarak protein konsantrasyonları ölçülür. </li><li> Kısım, -80 ° C&#39;de parti numarası ve tarih, ve dondurma ile etiket. </li><li> Kullanımdan önce HES her parti üzerine, üreticinin protokollerine uygun olarak, bir kromojenik olan LAL değerlendirmesinin kullanılması yapın. LPS seviyelerinin 1 ug protein başına 1 u, LPS daha büyük ise, in vivo deneyler için ya da in vitro kültürlerde bu serisi ile düşünün. </li><li> Ayrı ayrı, aynı şekilde 24 saat sonra toplanan HES Proses; uygun olmayan fonksiyonel deneyler için, bu monoklonal antikor, afinite temizliği yolu ile izole edilebilir tek tek moleküllerin bir yararlı bir kaynak olduğunu da bunun, LPS ve bir ev sahibi proteinleri ihtiva edecektir. </li></ol&gt;

Yazarların herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

H. yaşam döngüsü güvenilir bir şekilde tutarlı bir şekilde polygyrus ilerler. Doğal sindirim ya da günde 0 L3 larva oral gavaj sonra, kist 10. günden bağırsak lümenine solucanların ortaya çıkan daha sonra larva moults kadar ilerleyen ve 5. günde, duodenal zarı altına oluşmaya başlar, yumurta dışkıların görülebilir 14. günde ve 21. günde granülomlar, yukarıda tarif edilen (ve Şekil 6&#39;da özetlenmektedir) protokolü duodenumunda serozasında görebilir H., yüksek verimli üretimi için izin verir Gelecekteki deneysel ve yaşam döngüsü enfeksiyonları için canlı L3 larva güvenilir kurtarma ek polygyrus boşaltım-salgı ürünleri (HES),. H. polygyrus enfeksiyonu OVA veya Der p 1 (Ev tozu akarı alerjen) 14 bağlıdır, astım modellerinde koruyucu olduğu gösterilmiştir. Ayrıca, hava yolu inflamasyonu baskılama CD4 + CD25 + ile transfer edilebilir </sup&gt; düzenleyici T hücreleri 14 veya CD19 + CD23 hi düzenleyici B hücreleri 24, H., sigara duyarlı polygyrus fareler ile enfekte. Otoimmünite, H. modellerinde polygyrus enfeksiyonu multipl skleroz 9 deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modeli baskılayıcı olduğu gösterilmiştir, ve bastırma enfekte olmuş fareler, 24 CD4 + T hücreleri veya CD19 + B hücreleri ya ile aktarılabilir. Stimülasyondan 25 dendritik hücre tepkisinin) inhibisyonu CD4 b) indüksiyonu: Heligmosomoides polygyrus boşaltım salgılama ürünleri (HES), dahil olmak üzere, bağışıklık tepkisini modüle eden ve (Şekil 7 &#39;de tarif edilmektedir) bir dizi mekanizma ile Th2 aracılı inflamasyonun baskılanması + Foxp3 + düzenleyici T hücreleri 18. c) IL-33 üretiminin 20 engellenebilir. Bir tatbik edildiğinde HES koruyucu olduğu gösterilmiştirt hassaslaşması ya da meydan astım 19 OVA-şap modelinde ve ayrıca erken IL-33 salınımının baskılanması yoluyla, Alternaria özü alerjen 20 ile burundan verildiğinde. HES LPS kirlenmesinin önlenmesi genellikle gelecekteki immünolojik deneyler başarısı için çok önemlidir. Burada özetlenen protokolde, bu ulaşmada kritik adımlar (2.10) ve kültürünün ilk 24 saat kenara ES çözümü ayarlamak için nihai HES hazırlık girmiyor Baermann Aparatı müsli çanta içinde bulunan o enkaz sağlamak için vardır (5.1 bakınız). Son yıllarda, HES iyice 26,27 belirlenen 370 üzerinde farklı proteinler ile proteomik düzeyde karakterize edilmiştir. Buna ek olarak, 4 larva ES proteomik analizi 28 tabi tutulmuştur. Yürütülen çalışma 3 güçlü bir immünojenik olduğu bilinen HES ana glıkan bileşenleri karakterize içerir ve mikro-RN salgılananBu 50-100 nm veziküller veya eksozom (Buck ve diğ., Yayımlanmak üzere gönderilen) olarak kapsüllü gibidir. Bu son derece bağışıklık parazitten ve HES moleküler bileşenleri tanımlayan geniş proteomik verileri ile ES toplanması için tekrarlanabilir protokollerin kurulması ile, sahne artık kimlik ve H. bireysel moleküllerin tedavi test için ayarlanır konukçu bağışıklık sistemi üzerinde önemli etkilere aracılık edebilen polygyrus.

Heligmosomoides polygyrus yakın yüksek yaygın insan nematod parazit 1 ile ilişkili olan doğal faregiller mide-bağırsak kurtları olup. Örneğin Nippostrongylus brasiliensis, H. gibi diğer nematod modellerinin tersine polygyrus sürekli o ana bağışıklık yanıtı 2 bastırmak için kullandığı çok güçlü bir bağışıklık mekanizmalarının doğrudan bir sonucu olarak farelerde kronik enfeksiyon oluşturur. H polygyrus doğrudan ömrü vardır: enfeksiyon L3 larva FECO ağız iletimi ile alınan (veya laboratuvar ortamında oral gavaj yoluyla uygulanmıştır) vardır, bunlar bağırsak lümenine geri dönmeden önce duodenum ve kese içine almak ve subserozal katmana göç bunun Yaklaşık sekiz gün ilk enfeksiyondan sonra erişkin solucanlar. Çiftleşme ve yumurta üretimi günde 10 ile gerçekleşir ve dekara gelen boşaltım-salgı ürünlerinin kültür ve toplama için erişkin solucanlar hasat etmek mümkündüry 14 itibaren 3. H. polygyrus da enfekte duyarlı farelerde 4-6, ve H seviyeleri, artmış Laktobasillerin ile ortakçı mikroflora ile, bu etkileşim Lactobacilli 6 farelerin maruz kaldıktan sonra polygyrus enfeksiyonu. H. Aktif enfeksiyonu polygyrus otoimmünite 7-10 birçok hayvan modellerinde immunopatolojilerinde karşı korumak için gösterilmiştir, 11,12 ve alerji 13-16 kolit. Dolayısıyla bu parazitten Boşaltım-Salgı moleküllerin potansiyel büyük ilgi olmuştur (&quot;HES&quot;) in vivo 17,18 patoloji aşağı-modüle. Nitekim, koruyucu etkileri artık 18,20 tespit ediliyor yollar aracılığıyla HES ürünleri 19 ile farelerin tedavisi sonrasında görülür. İşte biz onun salgılanan ürünlerin güvenilir Heligmosomoides polygyrus üretimi ve kurtarma için bir protokol açıklarBu başka fonksiyonel biyokimyasal ve immünolojik araştırmaların bir dizi için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Amicon yoğunlaştırıcı</td><td>Millipore</td><td>5112</td><td>Model 8050 50 ml http://www.emdmillipore.com/INTL/en/product/Stirred-Cell-Model-8050,-50%C2%A0mL,MM _NF-5122</td></tr><tr><td>Hanks'in tamponlu tuz çözeltisi</td><td>Sigma</td><td>H9394</td><td>500 ml http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/h9394?lang=en&region=GB</td></tr><tr><td>Penisilin streptomisin</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td>100 ml http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15070063</td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Invitrogen</td><td>25030-081</td><td>200 MM 100ml https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081?ICID=search-25030081</td></tr><tr><td>Aktif kömür</td><td>Merck</td><td>1.09624.0500</td><td>18-35 mesh http://www.merckmillipore.com/GB/en/product/Charcoal-activated,MDA_CHEM-109624</td></tr><tr><td>Glikoz çözeltisi</td><td>Sigma</td><td>G8769</td><td>100 ml %45 çözelti http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g8769?lang=en&region=GB</td></tr><tr><td>Falcon tüpleri</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td>50 ml http://www.scribd.com/doc/124320105/Sarstedt-Falcon</td></tr><tr><td>T25 Şişeleri</td><td>Sigma</td><td>CLS430639&nbsp;</td><td>25cm Havalandırmalı Şişe http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/cls430639?lang=en&region=GB</td></tr><tr><td>Kromojenik LAL testi</td><td>Lonza</td><td>50-647U</td><td>QCL-1000 testi http://www.lonza.com/products-services/pharma-biotech/endotoxin-detection/endotoxin-detection-assays/endpoint-chromogenic-lal-assay.aspx</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco</td><td>15710-049</td><td>100 ml http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15710072</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Enstitüsü (RPMI) 1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>500 ml; L-glutamin http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11875093 içermez</td></tr></tbody></table>

yetiştirme<em&gt; heligmosomoides polygyrus:</em&gt; bir immunsupresif nematodu parazit ve salgılanmış Ürünleri

Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

Heligmosomoides polygyrus (eski Nematospiroides dubius olarak bilinen ve H. bakeri gibi bazı olarak adlandırılır) yakın farelerde kronik enfeksiyona neden birçok bağışıklık düzenleyici mekanizmalar kullandığı ve bir mide-bağırsak helmint yaygın insan helmint enfeksiyonları karışabilirler. H. polygyrus helmint türevli bağışıklık düzenleme alanında yaygın olarak incelenmiş ve potansiyel olarak (aktif enfeksiyon ve izole salgılanan ürünler ile her ikisi de), alerji ve otoimmün deneysel modeller bastırmak için tespit edilmiştir. Bu yazıda anlatılan protokol H. yönetimini özetliyor kendi boşaltım-salgı ürünleri (HES) tutarlı L3 larva üretimi, yetişkin parazitler kurtarma ve toplama için polygyrus yaşam döngüsü.

H. ile enfeksiyona Duyarlılık polygyrus fare türüne (Tablo 1) &#39;deki genetik arka tarafından daha büyük bir dereceye kadar kontrol edilir; C57BL / 6 ve FMA fareler 21,22 derece hassastır. Parazitin yaşam döngüsünün bakımı için, bu iki suşları arasındaki F1 hibrit ya ebeveyn zorlanma göre morbidite (aşırı bağırsak epitel hasar olmadan) çok daha yüksek solucan yükünü dayanma kabiliyeti için seçilmiştir. 400 L3 larva oral gavaj genellikle homozigot kendilenmiş suşları deneyler (örneğin, C57BL / 6 için kullanılan 200 L3 larva bir doz iken, (Şekil 2&#39;de gösterilen, yetişkin kurt yükü ile sonuçlanan) F1 farelerde ömrünü korumak için kullanılır veya Balbc). Ancak, bu dozaj, bağırsak florasında varyasyonları gibi hayvan olanakları arasında farklılık çevresel ko-faktörlere bağlı olarak azaltılabilir gerekebilir. HES Partiler tekrarlanabilir effi kanıtlanmıştırfonksiyonel deneylerde ve protein bileşimi içinde etkinlik gösterir; Kültür her bir ardışık hafta süpernatanlar 4 haftalık toplam kadar, analiz edildiğinde, ayrıca, söz konusu protein profilleri (Şekil 3) Hes konsantrasyonu Bradford tahlili ile ölçüldüğünde. (5.5) çok benzer olduğu tespit edildi, toplam Protein, genellikle yaklaşık olarak 1 mg / ml idi (Şekil 4). HES konsantre alternatif bir yöntem, numunelerin, tampon tuzlar ve düşük molekül ağırlıklı bileşenlerin çıkarılması, dışarı salınan bir rotor santrifüj içinde 4000 g hızında döndürüldü edildiği bir santrifüjlü yoğunlaştırıcı (örneğin, Vivaspin 3 kDa kesme zarı), ile. Santrifüj konsantrasyonu en küçük işlem hacimleri (1-10 mi) için uygun olan ve yaklaşık 30x maksimum konsantrasyon faktörü ile sınırlıdır. HES toplarken, kirlenmesinin önlenmesi önemlidir. Ev sahibi molekülleri ile kirlenmesini önlemek için, biz HES-cont atmakFare bağırsak yetişkin solucan hasattan sonra ilk 24 saat kültür ortamı, geri kalan. Ayrıca, bir Kromojenik LAL deneyi (5.7) ile HES her parti LPS kirlenme seviyesini ölçmek. LPS 1 U ~ 100 pg LPS eşittir ve bu aşağıda seviyeleri 23 önemsiz kabul edilir. Bizim ellerde, HES çoğu toplu bu sınırın altına önemli ölçüde, 0.23 U / mg olarak HES LPS ortalama konsantrasyonu (Şekil 5) vardır. patoloji in vivo modellerde LPS etkileri (örneğin, astım yanıtların baskılanması) LPS 23, en az 10 ng gerektirir. Bu nedenle 100 ug LPS / ug Hes bir partiden 5 ug HES vivo uygulama içinde 500 ug LPS, çok altında LPS bir sorun haline gelir etkili konsantrasyonu içerir. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52412/52412fig1highres.jpg" /> Şekil 1: Baermann Aparatı BaerYetişkin H. toplanması için mann Aparatı kurulum polygyrus (bölüm 2&#39;de tarif edildiği gibi). <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52412/52412fig2highres.jpg" /> Şekil 2: 14 Gün 400 L3 Larva Ortalama solucanı Enfeksiyon sonra ortalama Worm Yükü 14 gün 400 L3 larvaları ile enfeksiyondan sonra attırır. Gösterilen veri noktaları C57BL / 6xCBA farelerin enfeksiyon 19 ayrı mermi vardır. ± SEM gösterilir idi. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52412/52412fig3highres.jpg" /> Şekil 3: kültürün birbirini hafta toplanan HES proteinlerinin Kültür SDS-PAGE profilinde Ardışık Hafta itibaren HES Protein Profilleri. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52412/52412fig4highres.jpg" /> Şekil 4: </strong&gt; 500 ml ES-İçeren kültür yüzer yaklaşık 500 ml türetilen 11 farklı partilerden HES proteinin Medya Verim gelen HES Final Miktarı. ± SEM gösterilir idi. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/52412/52412fig5highres.jpg" /> Şekil 5: Limulus ameobocyte deneyi ile ölçülen HES 41 toplu LPS kirlenme HES Düzeylerinin LPS kirlenmesi. Medyan LPS konsantrasyonu = HES 86 U başına mg. <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/52412/52412fig6highres.jpg" /> Şekil 6: H. Hareketli şematik HES izolasyonuna larva ve erişkin solucanlar kurtarma yoluyla L3 larva oral sonda, anahtar yaşam döngüsü aşamaları polygyrus Yaşam Döngüsü Özeti. Şekil 7: HES ve İşlevleri HES içinde bulunan çözünebilir aracıların ve eksozom Anahtar bağışıklık etkileri Animasyon şematik. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" fo:keep-together.within-page="always"><tbody><tr><td> Genotip (ve arka plan suşu) </td><td> Birincil Enfeksiyon Fenotip </td><td> Referans </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Doğuştan suşlar </td><td></td><td></td></tr><tr><td> A / J, FMA, C3H </td><td> Son derece duyarlı </td><td> 22,29 </td></tr><tr><td> C57BL / 6 ve C57BL / 10 </td><td> Duyarlı </td><td> 22,30 </td></tr><tr><td> BALB / c, DBA / 2, 129 / J </td><td> Orta </td><td> 22,31 </td></tr><tr><td> NIH, SJL, SWR </td&gt; <td> Düşük duyarlılık </td><td> 22,32 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> Sitokinler veya sitokin reseptörleri için transgenik </td><td></td></tr><tr><td> IL-1β - / - </td><td> Daha duyarlı </td><td> 33 </td></tr><tr><td rowspan="2"> İL-1 R - / - </td><td rowspan="2"> Daha az duyarlı (a) &#39;; Hiçbir duyarlılıkta bir değişiklik ancak artan granülomlar (b) </td><td> (A) 33 </td></tr><tr><td> (B) 34 </td></tr><tr><td> IL-2Rβ transjenik (C57BL / 6) </td><td> Dayanıklı </td><td> 35 </td></tr><tr><td> IL-4, - / - </td><td> Yüksek doğurganlık </td><td> 36 </td></tr><tr><td> IL-4R - / - (C57BL / 6 ya da Balb / c) </td><td> Son derece duyarlı </td><td> 22 </td></tr><tr><td> IL-6, - / - (BALB / c ya da C57BL / 6) </td><td> Son derece dayanıklı </td><td> 37 </td></tr><tr><td> , IL-9 Transjenik(FVB) </td><td> Dayanıklı </td><td> 38 </td></tr><tr><td> IL-21R - / - (C57BL / 6) </td><td> Eksik Th2 granülom gormation azalma </td><td> 39,40 </td></tr><tr><td> IL-25 - / - (BALB / c) </td><td> Daha duyarlı </td><td> 33 </td></tr><tr><td> IL-33R (T1 / ST2) - / - (BALB / c) </td><td> Duyarlılıkta değişiklik yok </td><td> 33 </td></tr><tr><td> TGFβRIIdn (C57BL / 6) </td><td> Yüksek Th1, artan hassasiyet </td><td> 41,42 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> T hücre markörleri için transgenik </td><td></td></tr><tr><td> CD28 - / - (BALB / c) </td><td> Marjinal yüksek doğurganlık </td><td> 43 </td></tr><tr><td> CD86 (B7-2) - / - (BALB / c) </td><td> Yüksek doğurganlık </td><td> 44 </td></tr><tr><td> OX40L - / - (BALB / c) </td><td> Yüksek doğurganlık &amp;# 160; </td><td> 45 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> Doğuştan gelen bağışıklık lokusların transgenik </td><td></td></tr><tr><td> Tip 1 interferon reseptörü (IFNAR), - / - (C57BL / 6) </td><td> Yüksek doğurganlık, daha fazla granülomlar </td><td> 34 </td></tr><tr><td> MyD88 - / - (C57BL / 6) </td><td> Daha dayanıklı, daha granülomlar </td><td> 34 </td></tr><tr><td> Cı-KitW / WV (WBB6) </td><td> Daha duyarlı </td><td> 46,47 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: H. primer enfeksiyonlar genetik olarak farklı ve gen hedeflenen fare soylarında polygyrus.

Heligmosomoides polygyrus yakından yüksek yaygın insan helmint enfeksiyonu benzeyen güçlü bağışıklık yetenekleri ile bir kemirgen nematod olduğunu. Burada H. uzun vadeli bakım için bir protokol tarif polygyrus yaşam döngüsü.

Yetiştirme<em&gt; Heligmosomoides Polygyrus:</em&gt; Bir immunsupresif Nematodu Parazit ve Salgılanmış Ürünleri

Heligmosomoides polygyrus (formerly known as Nematospiroides dubius, and also referred to by some as H. bakeri) is a gastrointestinal helminth that ...

Bu prosedürün genel amacı, konakçının bağışıklık yanıtlarını baskılayarak parazitlerin hayatta kalmasını sağlayan, uzun ömürlü helmint parazitleri tarafından salgılanan molekülleri toplamak ve analiz etmektir. Bu işlem, öncelikle parazitlerin doğal yaşam alanları olan farelerin bağırsak kanalında büyütülmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise, ötanazi sonrası olgun parazitlerin farelerden izole edilmesidir.Ardından, helmint parazitleri doku kültürü ortamında üç haftaya kadar kültüre edilir ve bu süre zarfında bol miktarda ekskresyon, sekresyon veya ES molekülleri salgılarlar. Son adım, salınan moleküllerin biyolojik ve biyokimyasal testler için ES grupları halinde kültür süpernatanlarından geri kazanılması ve konsantre edilmesidir. Nihayetinde, konsantre süpernatanlar, bağışıklık hücresi fonksiyonundaki değişiklikleri incelemek amacıyla in vitro olarak spesifik hücre tipleri üzerinde doğrudan test edilebilir veya alerji ve diğer bozuklukları baskılama yeteneklerini test etmek için farelere uygulanabilir.Bu yöntemle ilgili ilk fikri, immünosüpresyonun canlı parazit enfeksiyonuyla bağlantılı olduğunu ve bunun canlı parazitlerden immünosüpresif moleküllerin aktif ve sürekli salındığını gösterdiğini fark ettiğimizde geliştirdik. Bu yöntem parazit enfeksiyonlarına dair içgörü sağlayabilse de, bağışıklığı baskıladığını keşfettiğimiz moleküllerin; alerji, otoimmünite ve inflamatuar bağırsak hastalığı gibi Batı dünyasının temel hastalıklarının tedavisinde oldukça etkili olması muhtemeldir. Helmint parazitlerin geri kazanılması ve işlenmesine yönelik adımlar oldukça spesifik olduğundan ve aseptik kültür tekniğine özel dikkat gerektirdiğinden, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik önem taşımaktadır.H. polygyrus yaşam döngüsü üretimi için sekiz haftalık F1 fareleri, oral gavage yoluyla H. polygyrus larvaları ile enfekte edilecektir. Eşlik eden protokolde açıklandığı üzere, distile su içerisinde mililitrede 2000 adet olacak şekilde H. polygyrus L3 larvaları hazırlayın. Her enfeksiyondan önce fare başına 200 mikrolitre hacimde 400 L3 verin.Bir mililitrelik şırınga ve ucu yuvarlatılmış özel bir gavage iğnesi kullanarak, larva süspansiyonunu beş kez altüst ederek homojenize edin ve 200 µL larva süspansiyonu aspire edin. Oral gavage işlemini gerçekleştirmek için, fareyi ensesinden tutarak dik pozisyonda sabitleyin ve küt uçlu gavage iğnesini ağız ve özofagus üzerinden nazikçe mideye doğru ilerletin. Fareden erişkin solkanlar ve parazit yumurtaları geri kazanılacaktır.Enfeksiyondan 14 gün sonra, enfeksiyondan 14 gün sonra. Yetişkin h polyus solkançukları, burada gösterildiği gibi hazırlanan modifiye bir bayamon aparatı kullanılarak farelerden toplanır. Bu prosedüre başlamak için, ötanize edilmiş hayvanın karnını %70 ethanol ile yıkayın.Karın üzerindeki deriyi kesin ve anterior abdominal duvarı açığa çıkarmak için geri çekin. Peritoneal kaviteye girmek için orta hat boyunca bir insizyon yapın. Proksimal duodenumdan distal rektuma kadar tüm ince ve kalın bağırsağı çıkarın.Kuru bir petri kabına yerleştirin. Dışkı içeren kolonun çıkarıldığı bağırsak boyunca düzleştirin ve yumurtaları daha sonra geri kazanmak için bunu ayrı bir kaba yerleştirin. Ardından, yetişkin solucanların bulunduğu ince bağırsağın proksimal 20 santimetresini belirleyin.Duodenumun nispeten kalın duvarı ile karakterizedir ve intralüminal solucanlar nedeniyle genellikle kırmızı bir görünüme sahiptir. İnce bağırsağın bu kısmını eksize edin ve beş mililitre Hank çözeltisi içeren bir petri kabına yerleştirin. Yuvarlak uçlu makas kullanarak 37 °C'ye ısıtın.Solucanla dolu proksimal bağırsak kısmını boyuna olarak açın ve bağırsak astarının iç kısmını iki cam lam ile sıyırın. Solucanları ayırmak için temiz bağırsak duvarını atın. Hank çözeltisi ile huniyi hazırlayın.Küçük bir müslin torbayı zımbalayarak kapatın ve iki Petri kabındaki solucanları torbanın içine aktarın. Her bir cam huniye ikişer müslin torba yerleştirin ve torbaları huninin kenarlarından ataçlarla sabitleyin. Düzeneneği bir ila iki saat boyunca 37 degrees Celsius inkübatörde bekletin.İnkübasyonun ortasında, muslin filtreyi tıkayabilecek olan bağırsak preparatındaki kalıntıları uzaklaştırmak için düzeneği nazikçe çalkalayın. Kalıntıların muslin torbasının dışına dökülmemesine dikkat edin, çünkü bu durum nihai HES preparasyonunda kontaminasyona neden olacaktır. İnkübasyonun sonunda, toplama test tüpünü bir lavabonun üzerinde plastik pipet kullanarak bağlantı kauçuk hortumundan dikkatlice ayırın, solucanları 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve solucanların yerçekimi ile çökelmesini bekleyin.Besiyerini bir stripette ile uzaklaştırın. 40 mililitre Hank çözeltisi ekleyin ve solucanların çökmesine izin verin. Toplam altı yıkama için bu işlemi beş kez tekrarlayın. Haze kültürünün kontaminasyonundan kaçınmak, bu protokolün başarısı için kritik öneme sahiptir.Solucan kültürü bundan sonra steril tutulmalıdır. Laminar akışlı kabine geçiniz ve solucan kültürünü, antibiyotiklerle desteklenmiş steril Hank çözeltisi kullanarak bir pipet yardımıyla altı kez daha yıkayınız ve geri kazanılan yetişkin solucanları saymak için 20 µL'lik iki örnek toplayınız. Enfeksiyonun 14. gününde, daha önce eksize edilmiş kolonun içindeki dışkıyı pensle sıyırmak için, inoküle edilen larva miktarının yaklaşık %50'sinin yumurta toplamasının beklenmektedir.Ardından, dışkıyı granül aktif karbon ile en az bir bir oranında karıştırın. Kağıdı doldurmaya yetecek kadar yapışkan bir kıvam elde edin. Bir Petri kabı içindeki nemlendirilmiş filtre kağıdının merkezine ince bir tabaka halinde sürün ve karanlıkta tutmak için bunu 12 ila 14 gün boyunca nemli, ışık geçirmez bir kutuya yerleştirin.Yedinci günden itibaren, L3 larvaları toplamaya başlayın. Filtre kağıdının kenarı boyunca bir halka oluşturun. Filtre kağıdını Petri kabından kaldırın ve plakada kalan larvaları durulamak için bir pipet yardımıyla plaka başına 5 mL steril su kullanın.Larvaları 50 mililitrelik bir tüpe aktarın. Filtre kağıdını kaba geri koyun ve karanlıkta muhafaza edin; larvaların toplanmasını bir aya kadar haftalık olarak tekrarlayın. Toplanan larvalar daha sonra protokol metninde açıklandığı gibi yıkanır ve dört derece Celsius'ta distile su içinde saklanır.Bu prosedüre başlamak için, solucanları %10 gentasisin ile desteklenmiş yaklaşık 10 mililitre Hank çözeltisi içinde 20 dakika boyunca bekletin; solucanların 20 dakika sonra tamamen kaplandığından emin olmak için tüpü eğik bir konumda bırakın. Solucanları antibiyotikli Hank çözeltileri ile altı kez yıkayın, solucanları havalandırmalı T 25 balonlarına aktarın. Balonları üç hafta boyunca 37 °C'lik bir inkübatörde dik konumda tutarak solucanlardan ekresyonel sekretuvar ürünlerin (ESP) veya HES preparasyonunu hazırlayın.HES içeren kültür. Besiyeri, kültürlerden haftada en fazla iki kez olacak aralıklarla toplanır ve her seferinde eşit hacimde h polyus Besiyeri ile değiştirilir. LPS ve konak proteinleri ile kontaminasyon potansiyeli daha yüksek olduğundan, her toplama işlemi ayrı tutulmalı ve tarih ile parti numarasıyla net bir şekilde etiketlenmelidir.Kültürün 24 saatinden sonraki ilk toplama işlemi kenara ayrılmalı ve ya ayrı ayrı işlenmeli ya da atılmalıdır; HES içeren ortam 400 ×g'de beş dakika boyunca santrifüjlenmelidir. Ardından, ortam 50 ml'lik bir şırınga ile aspire edilmeli ve 0,2 µm'lik düşük protein bağlamalı bir filtreden geçirilerek 50 ml'lik tüplere aktarılmalıdır. Sonrasında, havuzlanmış HES üst fazı, azot basıncı altındaki bir ultrafiltrasyon cihazında 3000 moleküler ağırlık kesim filtre ile konsantre edilir; filtreleme cihazını kurmak için öncelikle 3 kDa'lık membran, bir litrelik beherde distile su ile karıştırılırken parlak yüzeyi aşağı gelecek şekilde yıkanmalıdır.Ultrafiltrasyon cihazını üretici talimatlarına göre, filtre membranının parlak yüzeyi yukarı gelecek şekilde monte edin, dört °C'lik bir dolaba yerleştirin ve dökülmüş HES'i konsantre etmeye başlamadan önce içinden 50 mL distile su geçirin. Filtrenin kurumasını önlemek için çok dikkatli olun. Amino asitleri ve doku kültürü ortamının diğer bileşenlerini uzaklaştırmak amacıyla, hacim 2-5 mL'ye düşene kadar her bir HES tüpünü gerektiği şekilde filtrasyon cihazına ekleyin.HES hazırlığından, filtrasyon cihazına 50 mililitre pirojensiz PBS ekleyin ve ardından yaklaşık iki mililitreye kadar konsantre edin. Bu adımı iki kez tekrarlayın. Toplam 150 mililitre PBS kullanarak, ES'yi bir şırıngaya aktarın ve 0,2 mikronluk bir filtre ile steril filtrelemeden geçirin.Protein konsantrasyonu ölçüldükten sonra, alikotları parti numarası ve tarihle etiketleyin ve -80 °C'de dondurun. F1 farelerde H. polygyrus yaşam döngüsünü sürdürmek için 400 µL üç larva içeren oral gavaj kullanılır. Ortaya çıkan yetişkin solucan yükleri burada gösterilmiştir.HES partilerinin fonksiyonel analizlerde ve protein bileşiminde tekrarlanabilir etkinlik gösterdiği kanıtlanmıştır. Ayrıca, kültürün birbirini izleyen her haftasından alınan süpernatanlar analiz edildiğinde, protein profillerinin toplam dört haftaya kadar çok benzer olduğu görülmüştür. TS konsantrasyonu Bradford analizi ile ölçüldüğünde, toplam protein genellikle yaklaşık bir miligram/mililitre civarındadır.Yaklaşık 500 mililitre kültür süpernatantından elde edilen 11 farklı partiden HES protein verimi gösterilmektedir. HES toplarken kontaminasyondan kaçınmak kritik öneme sahiptir; 41 HES partisindeki LPS kontaminasyon seviyeleri limbus AAMI CYTE analizi ile ölçülmüştür. HES partilerinin çoğunun, önerilen kontaminasyon eşiğinin önemli ölçüde altında olduğu belirlenmiştir.Bu prosedür uygulanırken, kültürlerin hazırlanması sırasında dikkatli bir steril teknik sürdürmenin önemli olduğunu unutmamak gerekir. Bu prosedür düzgün bir şekilde takip edildiğinde, teknik üzerinde uzmanlaşıldıktan sonra işlem üç ila dört saat içinde tamamlanabilir. Bu parazitlerden salınan moleküler ürün yelpazesini tam olarak anlamak için proteomik, protein fraksiyonasyonu ile glikanların, lipidlerin ve mikroRNA'ların analizi gibi diğer yöntemler de uygulanabilir.Bu videoyu izledikten sonra, poly limus'un nasıl çoğaltılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Moid polyus ve bağışıklık sistemi üzerindeki etkilerini test etmek amacıyla kültürlenmiş yetişkin solucanlardan DS ürünlerini toplama işlemlerini gerçekleştireceksiniz. Bu parazit insanlar için etkili olmasa da, güvenlik önlemlerine uymak ve partiler arasında tekrarlanabilirliği sağlamak için belirtilen protokole sadık kalmak önemlidir.

cultivation-heligmosomoides-polygyrus-an-immunomodulatory-nematode

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Trichuris muris enfeksiyon dayanıklı farelerde koruyucu bir Th2 yanıtı oluşturmak ve duyarlı fareler patolojik bir Th1 yanıtı Th2 dokunulmazlık bağırsak modelidir.

Trichuris muris Enfeksiyon: Gut Tip 2 Bağışıklık ve İnflamasyon Bir Model

Bu sunumun amacı in vivo ve entomopatojen nematodların yetiştirmesi için in vitro teknikleri göstermektir., In vitro yöntemler zengin ağar medya kullanmak ise in vivo yöntemler, bir böceğin bu nematodların yetiştirme düşünün.

In vivo ve in vitro Entomopatojenik Nematodlar Yetiştiriciliğinin olarak (Steinernematidae ve Heterohabditidae)

Yabani Caenorhabditis nematodları, genellikle bağırsak lümeninde veya bağırsağı enfekte eden birçok mikropla ilişkilidir. Bu protokol, dauer lütikülün direncinden yararlanarak bağırsağı kolonlaştıran kültürsüz mikropları zenginleştirmek için bir yöntemi detaylandırıyor.

Bağırsak Mikrobiyom Bakterileri İçin Zenginleştirmek için Yabani Caenorhabditis Nematodlarının Seçici Temizliği

Caenorhabditis elegans'ın mikrosporidian parazit Nematocida parisii tarafından enfeksiyonu, solucanların aynı patojene karşı oldukça dirençli yavrular üretmesini sağlar. Bu, kötü anlaşılmış bir epigenetik fenomen olan kalıtsal bağışıklığın bir örneğidir. Mevcut protokol, genetik olarak izlenebilir bir solucan modelinde kalıtsal bağışıklığın incelenmesini açıklamaktadır.

Caenorhabditis elegans Mikrosporidia Enfeksiyonu Modelinde Kalıtsal Bağışıklığın İncelenmesi

Entomopatojenik nematodlar bakterilerle simbiyoz içinde yaşarlar ve birlikte doğuştan gelen bağışıklık sistemlerini zayıflatarak böcekleri başarılı bir şekilde enfekte ederler. Nematod enfeksiyonunun genetik temeli üzerine araştırmaları teşvik etmek için, entomopatojenik nematodları korumak ve genetik olarak manipüle etmek için yöntemler açıklanmaktadır.

Entomopatojenik Nematodların Kültürlenmesi ve Genetik Olarak Manipüle Edilmesi

IL-9 eksprese eden T ve ILC2 hücreleri, N. brasiliensis enfeksiyonu sırasında indüklenir, ancak düşük frekansları ve diferansiyel kinetik olmaları nedeniyle enfekte bağırsakta karakterizasyonları büyük ölçüde göz ardı edilmiştir. Bu protokol, bu hücrelerin farklı hedef organlardan izole edilmesini ve farklı enfeksiyon aşamalarında akış sitometrisi yoluyla kimliklerinin doğrulanmasını açıklar.

Nippostrongylus brasiliensis Enfeksiyon Modelinde IL-9 Üreten Lenfoid Hücrelerin İncelenmesi İçin Bir Strateji

Caenorhabditis elegans , biyolojideki ana model türlerden biridir, ancak neredeyse tüm araştırmalar doğal olarak ilişkili mikroplarının yokluğunda gerçekleştirilir. Burada açıklanan yöntemler, gelecekteki fonksiyonel C. elegans araştırmalarının temeli olarak ilişkili mikropların çeşitliliği hakkındaki anlayışımızı geliştirmeye yardımcı olacaktır.

Model Nematod Caenorhabditis elegans'ın Doğal Mikrobiyotasının İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Strongyloides ratti , laboratuvar farelerinde geçici enfeksiyonlara neden olan, doku göçü ve bağırsak yaşam evrelerini gösteren parazitik bir nematoddur. Burada, sıçanlarda parazit döngüsünün sürdürülmesi ve kafa, akciğer ve bağırsakta parazit miktar tayini dahil olmak üzere farelerin deneysel enfeksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

Farelerin Parazitik Nematod Strongyloides ratti ile Deneysel Enfeksiyonu

Burada, Echinococcus granulosus'tan in vitro kültür koşullarını, izolasyonu ve hücre dışı veziküllerin (EV'ler) artan oluşumunu açıklıyoruz. Küçük EV'ler, dinamik ışık saçılımı ve transmisyon elektron mikroskobu ile karakterize edildi. Kemik iliği kaynaklı dendritik hücrelerin tutulumu ve fenotipik modülasyonları, konfokal mikroskopi ve akış sitometrisi kullanılarak incelendi.

Echinococcus granulosus'tan Küçük Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu ve Dendritik Hücre Alımı

Çiftçilere entomopatogenik nematodları biyo-böcek ilaçları olarak toplu olarak yaymaları için iki yöntem sunuyoruz. İlk yöntem, nematod kültürleme alt tabakası olarak poliakrilamid jel kullanırken, ikinci yöntem kültür substratı olarak polimer kaplı pamuk yünü kullanır. Her iki yöntem de böcek kadavralarında nematodların in vivo yayılmasına dayanır.

Yetiştirici Temelli Entomopatotik Nematodların In Vivo Yayılması

Öğrenin Heligmosomoides polygyrus'u yetiştirme ve salgılanmış ürünlerini izole etme yöntemini. Bu protokol immünoloji ve parazitoloji araştırmalarında bağışıklık yanıtlarını baskılayan molekülleri incelemek için kullanılır.

Yetiştirme

Daha fazla video keşfet