Name: Zebra balığı Embriyolar Mekanik Gemi Sakatlık (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Öğrenin, Danio rerio embriyolarında kuyruk venini delerek mekanik damar yaralanması oluşturma yöntemini. Gerçek zamanlı mikroskopi ile hemostaz, enflamasyon ve yara iyileşmesini gözlemleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, yararlı tartışmalar için Dr. Stephen Wilson ve Lisa Wilsbacher'a teşekkür eder. Bu çalışma kısmen NIH HL054737 tarafından desteklenmiştir.

NOT: Zebra balığı kullanarak Prosedürleri UCSF Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Araçlar 1. Hazırlık <ol><li> Bir iğne tutucu içine minutia pimini takın ve pin kelepçe. </li><li> Ince uçlu forseps kullanarak, dikkatli bir hafif kanca oluşturmak için pimin ucunu bükün. </li><li> Manipülasyon ve yaralanma sırasında embriyonun stabilizasyonu için, iğne-burun pense kullanarak bir insülin şırınga üzerine monte edilmiş bir 28 guage ½ inç iğne ucunu bükün. </li></ol> Sakatlık için Zebra balığı Embriyolar 2. Hazırlık <ol><li> Zebra balığı yetiştiriciliği çiftleri kurmak ve daha önce 22 gösterildiği gibi yumurta su (60ug / ml akvaryum tuzları) yumurta toplamak. </li><li> Embriyolar yaklaşık melanization önlemek için 8 saat sonra döllenme (hpf) olduğunda yumurta suya% 0.003 N-feniltiyoüre (PTU) ekleyin. </li><li> Ince uçlu forseps kullanarak deney öncesinde dechorionate iki gün sonrası fertilizasyon (dpf) embriyolar. <br/&gt; Not: dolaşım başladıktan sonra Embriyolar her zaman yaralı olabilir. Burada sunulan veriler embriyolar dpf&#39;e 2 için, ama tekniği başarıyla 5 dpf&#39;e kadar embriyolarda uygulanmıştır. </li><li> % 0.02 tamponlanmış 3-aminobenzoik asit (Tricaine), önceki kontroller için yaklaşık 10 dakika ile embriyolar anestezisi. </li></ol> 3. Mekanik Gemi Embriyolar yaralanması <ol><li> Bir transfer pipeti kullanarak bir diseksiyon stereomikroskopta bir depresyon slayt anestezi embriyolar transfer. </li><li> Dominant elin ile embriyo işlemek için şırınga iğnesi kısa düz tarafını kullanarak, uzak iğne bakan ventral yüzeyi ile yan embriyo yerleştirin. </li><li> Ucu ile minutia pimi ürogenital açılış balık posterior ventral yüzeyine doğrudan işaret yerleştirin. Hafif bir açıyla minutia pimini yerleştirin böyle kavisli ucu kaudal ven (Şekil 1 &lt;doğrudan periderm delip mümkün olduğunu/ Strong&gt;). </li><li> Embriyo işlemek için şırınga iğnesi kullanarak, hafifçe damar içine iğne kanca pin içine embriyo dokunarak minutia iğne ile kaudal ven delmek. </li><li> Şırınga iğnesi kullanarak, kap içinde küçük bir gözyaşı oluşturmak için uzak minutia pin embriyo çekin. NOT: Başarılı bir yaralanma damarından derhal kanama neden olur. </li></ol> Hemostazın 4. Analizi <ol><li> Gözle görülür bu işlem için kan hücreleri dolaşımdaki sadece embriyolar seçin. </li><li> En kısa sürede minutia pimi kabından çekilir gibi zamanlayıcı başlamak için hazırlayın. </li><li> En kısa sürede kan kaybı yaradan görüntülenmiştir edilebilir Sayacı başlatmak. Yaradan kan kaybı kesildiğinde, Sayacı durdurmak ve Zaman Kanama gibi toplam süreyi kaydetmek. Pıhtılaşma engellenir ise, artık gözle görülür dolaşan kan hücreleri varken zaman kaydedin. </li></ol> Yara Şifa 5. Analizi <ol><li> Aktarım posmikroskopi için cam alt görüntüleme yemekleri üzerine t-yaralanma hayvanlar. </li><li> Yumurta suyun çoğunluğu çıkarın. </li><li> ºC 42 ila 45 kadar ısıtılır ve% 0.02 Tricaine ile takviye agaroz yumurta suda çözünmüş 0,3-1,2% düşük erime embriyolar, örtün. </li><li> Forseps kullanarak kendi yüzüne Pozisyon embriyolar. </li><li> Agaroz soğuduktan sonra, yumurta, su içinde% 0,02 Tricaine ile çanak doldurun. </li><li> Aydınlık, Epifloresans veya konfokal mikroskopi kullanılarak görüntü elde. </li><li> Forseps kullanarak agaroz embriyo çıkarın ve yumurta suya geri aktarın. </li></ol>

<ol><li>Gore, A. V., Monzo, K., Cha, Y. R., Pan, W., Weinstein, B. Vascular development in the zebrafish. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGore%2C+AV+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22">Cold Spring Harb Perspect Med</a>. 2 (5), a006684(2012).</li>
<li>Boatman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+hematopoiesis+using+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cells+Mol+Dis%22%5BJournal%5D)">Assaying hematopoiesis using zebrafish.</a> Blood Cells Mol Dis. 51 (4), 271-276 (2013).</li>
<li>Ellett, F., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+vertebrate+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for vertebrate hematopoiesis.</a> Curr Opin Pharmacol. 10 (5), 563-570 (2010).</li>
<li>Liu, J., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+in+the+study+of+early+cardiac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish in the study of early cardiac development.</a> Circ Res. 110 (6), 870-874 (2012).</li>
<li>Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+organism+to+study+development+of+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Immunol%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model organism to study development of the immune system.</a> Adv Immunol. 81, 253-330 (2003).</li>
<li>Lieschke, G. J., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fish+immunology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Fish immunology.</a> Curr Biol. 19 (16), R678-R682 (2009).</li>
<li>Lesley, R., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+early+mycobacterial+pathogenesis+from+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Insights into early mycobacterial pathogenesis from the zebrafish.</a> Curr Opin Microbiol. 11 (3), 277-283 (2008).</li>
<li>Oehlers, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+enterocolitis+model+in+zebrafish+larvae+that+is+dependent+on+microbiota+and+responsive+to+pharmacological+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A chemical enterocolitis model in zebrafish larvae that is dependent on microbiota and responsive to pharmacological agents.</a> Dev Dyn. 240 (1), 288-298 (2011).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends Genet. 29 (11), 611-620 (2013).</li>
<li>LeBert, D. C., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inflammation and wound repair.</a> Semin Immunol. , (2014).</li>
<li>Henry, K. M., Loynes, C. A., Whyte, M. K., Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+neutrophil+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for the study of neutrophil biology.</a> J Leukoc Biol. 94 (4), 633-642 (2013).</li>
<li>Niethammer, P., Grabher, C., Look, A. T., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tissue-scale+gradient+of+hydrogen+peroxide+mediates+rapid+wound+detection+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A tissue-scale gradient of hydrogen peroxide mediates rapid wound detection in zebrafish.</a> Nature. 459 (7249), 996-999 (2009).</li>
<li>Rosenberg, A. F., Wolman, M. A., Franzini-Armstrong, C., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+nerve-macrophage+interactions+following+peripheral+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo nerve-macrophage interactions following peripheral nerve injury.</a> J Neurosci. 32 (11), 3898-3909 (2012).</li>
<li>Otten, C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-inflicted+injury+of+zebrafish+embryonic+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Laser-inflicted injury of zebrafish embryonic skeletal muscle.</a> J Vis Exp. (71), e4351(2013).</li>
<li>Matrone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-targeted+ablation+of+the+zebrafish+embryonic+ventricle%3A+a+novel+model+of+cardiac+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Laser-targeted ablation of the zebrafish embryonic ventricle: a novel model of cardiac injury and repair.</a> Int J Cardiol. 168 (4), 3913-3919 (2013).</li>
<li>Jagadeeswaran, P., Carrillo, M., Radhakrishnan, U. P., Rajpurohit, S. K., Kim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+thrombosis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser-induced thrombosis in zebrafish.</a> Methods Cell Biol. 101, 197-203 (2011).</li>
<li>Vo, A. H., Swaroop, A., Liu, Y., Norris, Z. G., Shavit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+fibrinogen+in+zebrafish+results+in+symptoms+consistent+with+human+hypofibrinogenemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Loss of fibrinogen in zebrafish results in symptoms consistent with human hypofibrinogenemia.</a> PLoS One. 8 (9), e74682(2013).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+mutagenesis+of+zebrafish+antithrombin+III+triggers+disseminated+intravascular+coagulation+and+thrombosis%2C+revealing+insight+into+function%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Targeted mutagenesis of zebrafish antithrombin III triggers disseminated intravascular coagulation and thrombosis, revealing insight into function.</a> Blood. , (2014).</li>
<li>Jagadeeswaran, P., Liu, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hemophilia+model+in+zebrafish%3A+analysis+of+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cells+Mol+Dis%22%5BJournal%5D)">A hemophilia model in zebrafish: analysis of hemostasis.</a> Blood Cells Mol Dis. 23 (1), 52-57 (1997).</li>
<li>Jagadeeswaran, P., Gregory, M., Day, K., Cykowski, M., Thattaliyath, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+a+genetic+model+for+hemostasis+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: a genetic model for hemostasis and thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 3 (1), 46-53 (2005).</li>
<li>Lin, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+thrombocyte+development+in+CD41-GFP+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Analysis of thrombocyte development in CD41-GFP transgenic zebrafish.</a> Blood. 106 (12), 3803-3810 (2005).</li>
<li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> J Vis Exp. (25), (2009).</li>
<li>Benard, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+zebrafish+embryos+with+intracellular+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+blood+coagulation+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cells+Mol+Dis%22%5BJournal%5D)">Analysis of blood coagulation in the zebrafish.</a> Blood Cells Mol Dis. 25 (3-4), 3-4 (1999).</li>
<li>Jin, S. W., Beis, D., Mitchell, T., Chen, J. N., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+analyses+of+vascular+tube+and+lumen+formation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular analyses of vascular tube and lumen formation in zebrafish.</a> Development. 132 (23), 5199-5209 (2005).</li>
<li>Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nat Immunol. 4 (12), 1238-1246 (2003).</li>
<li>Lawson, N. D., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+embryonic+vascular+development+using+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of embryonic vascular development using transgenic zebrafish.</a> Dev Biol. 248 (2), 307-318 (2002).</li>
<li>Renshaw, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108 (13), 3976-3978 (2006).</li>
<li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Dev Biol. 7, 48(2007).</li>
<li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117 (4), e49-e56 (2011).</li>
<li>Gray, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+intravital+imaging+of+macrophage+and+neutrophil+behaviour+during+inflammation+using+a+novel+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Simultaneous intravital imaging of macrophage and neutrophil behaviour during inflammation using a novel transgenic zebrafish.</a> Thromb Haemost. 105 (5), 811-819 (2011).</li>
<li>Bellido-Martin, L., Chen, V., Jasuja, R., Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+fibrin+formation+and+platelet+and+endothelial+cell+activation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Imaging fibrin formation and platelet and endothelial cell activation in vivo.</a> Thromb Haemost. 105 (5), 776-782 (2011).</li>
<li>Bielczyk-Maczynska, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+loss+of+function+screen+of+identified+genome-wide+association+study+Loci+reveals+new+genes+controlling+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">A loss of function screen of identified genome-wide association study Loci reveals new genes controlling hematopoiesis.</a> PLoS Genet. 10 (7), e1004450(2014).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Balığı 10 yaralama lazer yaralanması 13-15, lazer kaynaklı tromboz 16 ve epiteliyal da dahil olmak üzere yaraların farklı türleri için bir model olarak başarılı bir şekilde kullanılmıştır. Bu çalıştırmak için basit ve gerçek zamanlı mikroskopi için son derece müsait olan bir in vivo modeli olarak kontrollü bir yaralanma üreten mekanik yaralama için bir yöntem sunulmaktadır. Hızlı ve ölçülebilir hemostatik tepki ve görüntü ve timelapse mikroskopi kullanılarak izlenebilir tekrarla...

Zebra balığı, vasküler gelişim, anjiyogenez ve hematopoietik gelişim ve patoloji1-3 dahil olmak üzere vasküler biyolojideki çeşitli konuları incelemek için yaygın olarak kullanılmıştır. Embriyolar, döllenmeden 1 gün sonra (dpf) 1,4,5 ile lökositler ve doğuştan gelen bağışıklık sisteminin diğer bileşenlerinin yanı sıra fonksiyonel bir dolaşım geliştirir. Yaralanmaya karşı enflamatuar ve lökosit yanıtının korunması, zebra balığı embriyosunu tüberküloz enfeksiyonu, enterokolit ve doku rejenerasyonu6-9 gibi çeşitli enflamatuar süreçler için bilgilendirici bir model haline getirmiştir. Zebra balığı embriyoları, özellikle epitel yaralanması ve nötrofil yanıtı bağlamında yaralanmaya bağlı iltihabı incelemek için kullanılmıştır10,11. Embriyonun yaralanması, yaralanma bölgesindeki hücrelerden ve yaralanmaya yanıt vermek ve kararını düzenlemek için işe alınan doğuştan gelen bağışıklık hücrelerinden yüksek oranda korunmuş bir hücresel yanıt ile sonuçlanır11,12. Diğer yaralanma modelleri, nöronlar, kas hücreleri ve kardiyomiyositler13-15 dahil olmak üzere belirli hücre tiplerine yönelik yaralanmayı uzamsal olarak lokalize etmek için odaklanmış lazer darbeleri kullanmıştır. 
Zebra balığı embriyoları, hem mekanik hem de lazerle indüklenen trombüs oluşumu16-19 kullanılarak, farmakolojik ve genetik manipülasyon koşullarında hemostaz ve trombozu incelemek için bir model olarak kullanılmıştır. Pıhtılaşma kaskadının bileşenleri iyi korunmuş gibi görünmektedir ve transgenikler, pıhtılaşma bölgesinde trombosit ve fibrin birikiminin ayrıntılı çalışmalarına izin vermiştir17,20,21. Bu yazıda sunulan prosedür, damar ihlali, trombüs oluşumu ve çözünürlüğü ve damar onarımı ile sonuçlanan mekanik damar yaralanmasını incelemek için bir sistem sağlayarak bu yöntemleri tamamlar.

<table><tbody><tr><td>Minutia Pimleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26002-10</td><td>Uç çapı 0,0125 mm, çubuk çapı 0,1 mm</td></tr><tr><td>Pim Tutucu</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 İnce Uçlu Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Cam Çöküntü Kaydırağı</td><td>Sucul Eko-Sistemler</td><td>M30</td><td></td></tr><tr><td>Düşük Erime Noktalı Agaroz</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>50081</td><td>42 °C'ye önceden ısıtılmış; C</td></tr><tr><td>N-Feniltiüre (PTU)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>P7629</td><td></td></tr><tr><td>3-aminobenzoik asit (Trikain)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>Hirudin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H7016</td><td></td></tr><tr><td>Cam alt görüntüleme plakaları</td><td>Mattek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>SZH10</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Axio Observer</td><td></td></tr><tr><td>Akvaryum tuzları</td><td>28,5</td> G iğneli Instant Ocean <td></td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırıngası</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td></td><td></td>329461</tr></tbody></table>

zebra balığı embriyolar mekanik gemi sakatlık

Mechanical Vessel Injury in Zebrafish Embryos

Zebra balığı (Danio rerio) embriyolarının, çeşitli gelişimsel ve hastalık süreçlerini incelemek için güçlü bir model olduğu kanıtlanmıştır. Dış gelişim ve optik şeffaflık, bu embriyoları özellikle mikroskopiye uygun hale getirir ve floresan proteinlerle belirli hücre tiplerini etiketleyen çok sayıda transgenik çizgi mevcuttur, bu da zebra balığı embriyosunu vasküler, hematopoetik ve diğer hücre tiplerinin etkileşimini görselleştirmek için ideal bir sistem haline getirir in vivo yaralanma ve onarım sırasında. Zebra balıklarında ileri ve geri genetik iyi gelişmiştir ve farmakolojik manipülasyon mümkündür. Hemostaz ve kan damarı onarımı dahil olmak üzere vasküler yaralanmaya verilen yanıtları incelemek için bu özelliklerin birçoğundan yararlanan mikromanipülasyon tekniklerini kullanan mekanik bir vasküler yaralanma modelini tanımladık. Video ve timelapse mikroskobunun bir kombinasyonunu kullanarak, bu vasküler yaralanma yönteminin hemostaz ve yara onarımı sırasında ölçülebilir ve tekrarlanabilir yanıtlarla sonuçlandığını gösterdik. Bu yöntem, bütün bir hayvan modelinde vasküler yaralanma ve onarımı ayrıntılı olarak incelemek için bir sistem sağlar.

Mekanik damar hasarı embriyolar (- C Şekil 2A) dpf, 2 gerçekleştirilmiştir. Hızlı ve güvenilir bir pıhtılaşma yanıt olarak yaralanma sonucu (Şekil 2D) kanamanın durdurulması zaman ile ölçülmüştür. Pıhtılaşma karşılık olarak fark ölçülebilir olup olmadığını belirlemek için, pıhtılaşma önleyici Hirudin (için hemen önce (5-10 nl su içinde çözülmüş hirudin ul başına 1 ünite) yaralama ile Cuvier&#39;in gösterilen kanal içine enjekte embriyolar uygulanmıştır Cuvier ve Duct içine enjeksiyonu g...

Bu makale, zebra balığı embriyolarında mekanik damar yaralanması oluşturmak için bir yöntemi açıklamaktadır. Bu yaralanma modeli, gerçek zamanlı mikroskopi için ideal olan bir organizmada hemostaz, yaralanmaya bağlı iltihaplanma ve yara iyileşmesini incelemek için bir platform sağlar.

Zebra balığı Embriyolar Mekanik Gemi Sakatlık

Zebrafish (Danio rerio) embryos have proven to be a powerful model for studying a variety of developmental and disease processes.  External development ...

Aşağıdaki prosedürün genel amacı, zebra balığı embriyolarında mekanik bir damar yaralanması oluşturmaktır. Bu işlem, zebra balığı embriyosunun koddle veninin minyatür bir iğne ile delinmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, kanın yaradan aktif olarak aktığı sürenin ölçülmesiyle hemostaz değerlendirilir.Ardından, damar onarımı gibi yara iyileşmesi süreçlerini görüntülemek için zaman ayarlı mikroskopi uygulanır. Sonuçlar, zebrafish embriyolarındaki mekanik damar yaralanmasının; kanama süreleri ve kan akışının yeniden kurulması için gereken süre gibi hemostaz ve yara onarımı süreçlerini tekrarlanabilir şekilde ölçmek için kullanılabileceğini göstermektedir. Bu tekniğin fare ve diğer standart yaralanma modellerine göre temel avantajı, zebrafish embriyosunda inflamasyon, hemostaz ve onarımın gerçek zamanlı mikroskopi kullanılarak kolayca görüntülenebilmesidir.Başlangıç olarak, bir tutucuya bir minutia pini yerleştirin ve pini ince pens yardımıyla sıkıştırın. Yaralama sırasında embriyoyu yönlendirmek ve sabitlemek için pinin ucunu dikkatlice bükerek hafif bir kanca oluşturun. Bir insülin şırıngasına takılmış 28 gauge, yarım inçlik bir iğnenin ucunu bükmek için kargaburun pense kullanın.Ardından, daha önce gösterildiği gibi çiftleşme çiftleri oluşturup yumurtaları yumurta suyuna toplayarak zebra balığı embriyolarını hazırlayın. Embriyolar döllemeden sonraki sekiz ila 24 saat (HPF) aşamasına ulaştığında, iki günlük dölleme sonrası (DPF) dönemde pigmentasyonu önlemek için yumurta suyuna PTU ekleyin. Embriyoların koriosini ince pensler kullanarak temizleyin; embriyonik kan damarlarına mekanik olarak zarar vermek için embriyoları %0,02'lik son konsantrasyonda Tamponlu trikain kullanarak anesteziye alın.Anestezize edilmiş embriyoları bir çukur lam üzerine yerleştirmek için transfer pipeti kullanın. Diseksiyon mikroskobu altında, baskın eldeki şırınga iğnesinin kısa ve düz tarafını destek olarak kullanarak, embriyoyu ventral yüzeyi iğneden uzağa bakacak şekilde yan tarafına konumlandırın. Ardından, minutia pininin ucunu balığın urogenital açıklığının posteriorunda kalan ventral yüzeyine doğrudan karşı gelecek şekilde yerleştirin.Kavisli ucun peridermi delip doğrudan koddl damarına ulaşabilmesi için cihazı hafif bir açıyla tutun. Ardından, embriyoyu yönlendirmek için şırınga iğnesini kullanın. Embriyoyu iğneye hafifçe vurarak iğnenin damara hafifçe takılmasını sağlamak suretiyle, koddl damarını delmek için minitür iğneyi kullanın.Damarda küçük bir yırtık oluşturmak için embriyoyu minutia pininden uzaklaştırın. Başarılı bir yaralama, venden anında kanama ile sonuçlanacaktır. Bu prosedür için yalnızca kan hücreleri görünür şekilde sirküle olan embriyoları seçin.Minutia iğnesi yerindeyken onu damardan çekin ve yaradan kan kaybı görünür görünmez bir zamanlayıcı başlatın. Yaradan kan kaybı durduğunda zamanlayıcıyı durdurun ve toplam süreyi kanama süresi olarak kaydedin; pıhtılaşma engellenmişse, görünür şekilde dolaşan hücre kalmadığı anki süreyi kaydedin. Yaralanma sonrası hayvanları mikroskopi için cam tabanlı görüntüleme kaplarına aktarın ve yumurta suyunun büyük kısmını uzaklaştırın, ardından 0,02% trica ile takviye edilmiş ve 42 ile 45 °C arasında ısıtılmış %0,3 ila %1,2'lik düşük erime noktalı aeros ile embriyoları örtün.Embriyoları yan taraflarına konumlandırmak için pens kullanın. Aro soğuduktan sonra, kabı yumurta suyunda 0.02% trica ile doldurun. Görüntüleme işleminden sonra görüntüleri elde etmek için aydınlık alan epi-floresans veya konfokal mikroskopi kullanın.Embriyoları yumurta suyuna geri transfer etmek için pens kullanın. Bu video, 2D PF embriyosuna uygulanan mekanik bir damar yaralanmasını göstermektedir. Aktif kan kaybı ve ardından kanamanın durması görülmektedir; kanamanın durma süresiyle ölçülen yaralanma, hızlı ve güvenilir bir koagülasyon yanıtı ile sonuçlanır ve koagülasyon yanıtındaki farklılıkların ölçülüp ölçülemeyeceği belirlenir.Antikoagülan odin, yaralama işleminden hemen önce QVA kanalına enjeksiyon yoluyla embriyolara uygulanmıştır. Burada gösterildiği gibi, ilaç kanama sürelerini taşıyıcı kontrole kıyasla önemli ölçüde artırmıştır. Bu videoda, endotelyal ve kırmızı kan hücresi belirteçleri için kullanılan transgenik hatlar aracılığıyla, yaralanma sonrası damar hasarı ve koagülasyona dair kanıtlar görülebilir.Yara onarımının farklı aşamalarını göstermek amacıyla 12 saatlik bir süre boyunca her beş dakikada bir görüntüler alınmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, zebra balığı embriyolarında mekanik yaralanmanın nasıl oluşturulacağı konusunda kapsamlı bir anlayışa sahip olmalısınız.

mechanical-vessel-injury-in-zebrafish-embryos

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Burada sunulan yöntem, yüksek enerjili lazer darbeleri ve zamanla bu yaralanmalar ve kurtarma ileri analizi ile canlı zebrafish embriyo kesin hasar oluşur. Ayrıca genetik olarak tek etiketli veya iskelet kas hücre gruplarının sırasında ve lazer ışık kaynaklı hasar sonrası takip edilebilir göstermek.

Zebra balığı Embriyonik İskelet Kası Lazer-yaralama

Larva Zebrafish serebrovasküler gelişme görüntüleme açıklanmıştır. 3D görüntüleme kolaylaştırmak ve kimyasal tedaviler kullanarak serebrovasküler gelişimini değiştirme teknikleri de verilmektedir.

Görüntüleme ve Embriyonik Zebra balığı Serebrovasküler Yapıların 3D İmar

Spinal Transeksiyon sonra, yetişkin zebrabalıkları altı hafta sonrası yaralanma ile fonksiyonel iyileşme var. Larva şeffaflık ve hızlı iyileşme yararlanmak için, larva omurilik transecting için bir yöntem mevcut. Transeksiyon sonra, 3 gün sonrası yaralanma ile 2 gün sonrası yaralanma başlayan duyusal iyileşme gözlemlemek, ve C-bend hareketi.

Larva Zebra balığı Omurilik Kesisi

Zebra balığı yetişkin nörogenezi ve rejenerasyonunun hücresel ve moleküler mekanizmalarına ışık tutmak için, zebra balığı yetişkin telensefalonunda mekanik yaralanmalara neden olan invaziv cerrahi ve ardından bıçaklanmış hemisferdeki değişikliklerin immünohistokimya veya in situ hibridizasyon ile izlenmesi için bir protokol geliştirdik.

Zebra balığı Yetişkin telencephalon stab Yara Yaralanma: Omurgalı Beyin nöron ve Rejenerasyon Soruşturma Bir Yöntem

Zebra balığı, genetik ve gelişimsel çalışmalar için mükemmel bir model sistemdir. Boncuk implantasyonu, lokal hücresel ortamlarda değişiklikler yaparak gelişimsel mekanizmaları sorgulamak için kullanılabilecek değerli bir doku manipülasyon tekniğidir. Bu protokol, zebra balığı embriyosunda mikroboncuk implantasyonunun nasıl gerçekleştirileceğini açıklar.

Zebra balığı Embriyo microbead İmplantasyonu

Bu protokolün amacı, embriyonik zebrabalıklarında segmental kardiyak fonksiyonun hem fizyolojik hem de patolojik koşullarda değerlendirilmesi için yeni bir yöntemin ayrıntılarını vermektir.

Miyokardiyal Mekanik Deformasyonun Yer Değiştirme Analizi (DIAMOND) Embriyonik Zebrabalığında Kardiyak Fonksiyonun Segmental Heterojenliğini Ortaya Çıkarır

Yetişkin zebra balığı için Marmarou ağırlık düşürme modelini, künt travmatik beyin hasarı (TBI) ve sonraki nöronal yenilenmenin altında kalan mekanizmaların ardından çok çeşitli patolojileri incelemek üzere değiştirdik. Bu künt kuvvetli TBI modeli ölçeklenebilir, hafif, orta veya şiddetli bir TBI'ya neden oluyor ve insan TBI'sında gözlenen yaralanma heterojenliğini yeniden özetler.

Yetişkin Zebra Balıklarında Künt Kuvvet Yaralanmasının Etkilerini Incelemek İçin Ölçeklenebilir Bir Model

Yetişkin zebra balıklarında yeni bir intraperitoneal (IP) enjeksiyon yöntemi tanımlanmıştır. Doksorubisin gibi toksik bileşiklerle çalışırken, bu prosedür daha önce bildirilen iki IP yönteminden daha etkilidir. Teknik, zebra balığı modelinde sınırlı deneyime sahip araştırmacılar tarafından kolayca benimsenecek şekilde tasarlanmıştır.

Yetişkin Zebra Balıklarında Vücut Hasarını ve İlişkili Mortaliteyi En Aza İndiren Bir İntraperitoneal Enjeksiyon Tekniği

Bu protokol, mikrocerrahi yoluyla gelişmekte olan zebra balığı kalbine manyetik bir boncuk aşılamak, mekanik kuvvetlerin in vivo olarak manipüle edilmesini sağlamak ve endokardiyal hücrelerde mekanik uyarana bağlı kalsiyum akışını tetiklemek için bir yöntemi ana hatlarıyla belirtir.

Gelişmekte Olan Zebra Balığı Kalbindeki Mekanik Kuvvetlerin Manyetik Boncuklar Kullanılarak Manipüle Edilmesi

Bu protokol, zebra balığı embriyolarında kardiyak morfolojiyi ve işlevi değerlendirmek için düşük maliyetli bir ışık mikroskobu yöntemini açıklar ve gelişmiş görüntüleme sistemlerine ihtiyaç duymadan gelişimsel kardiyotoksisitenin tekrarlanabilir değerlendirmesini sağlar.

Zebra Balığı Embriyolarında Standart Mikroskopi ve Video Analizi Kullanılarak Fonksiyonel Kardiyak Görüntüleme: Çevresel ve Biyomedikal Araştırmalarda Uygulamalar

Öğrenin, Danio rerio embriyolarında kuyruk venini delerek mekanik damar yaralanması oluşturma yöntemini. Gerçek zamanlı mikroskopi ile hemostaz, enflamasyon ve yara iyileşmesini gözlemleyin.

Zebra balığı Embriyolar Mekanik Gemi Sakatlık

Daha fazla video keşfet