Name: Farelerde Kararlı Yüksek seviyeli Kemik İliği Kimerizm Yaratma için miyelosupresif Ajan olarak Busulfan (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: Öğrenin farelerde busulfan ile kemik iliği transplantasyonu yöntemini; GFP işaretli hücreleri kullanarak santral sinir sisteminde hücre birikimini inceleyin. Bu teknik radyasyonsuz yüksek kimerizm sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, ALS Araştırmalarında Ronald Peter Griggs Memorial Bursu (KP'ye) ve CIHR, Kanada ALS Derneği ve Kanada Musküler Distrofi'den (JNM-69682) CK ve FMR'ye bir Nöromüsküler Araştırma Ortaklığı Programı hibesi tarafından desteklenmiştir. Amerika ALS Derneği (57969) tarafından da ek destek sağlandı. Terry Fox Laboratuvarı / Patoloji Bölümü, BC Kanser Ajansı, Vancouver, Kanada'dan Dr. R. Keith Humphries'e ve Simon Fraser Üniversitesi Hayvan Bakım Birimi personeline teşekkür ederiz.

NOT: Etik Beyanı: Bu protokol gözden ve Simon Fraser Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylandı (UACC; izin numaraları 1037K-1060K-12 ve 03) ve Hayvan Bakımı, NIH Kılavuzu için Kanada Konseyi ile uyumlu olduğunu Bakım ve Laboratuvar Hayvanları Kullanım ve AET Konsey Direktifi. 1. Özel Hususlar NOT: Busulfan sitotoksik olduğunu. Kulp ve malzeme güvenlik bilgi formunda ve kurumsal kurallarına göre imha ediniz. <ol><li> Bir laminar akış başlığı içinde aseptik tüm teknikleri yapın. </li><li> Bu tür bir çekme paketi, ve bunun otoklavlama gibi uygun bir ambalaj malzemesi içinde sararak kullanımdan önce aletleri sterilize edin. </li><li> Enfeksiyon için risk ışınlama göre busülfan klima ile düşük olsa da, sadece nakli sonrası ilk 2 hafta boyunca bir laminer akış kaputu hayvanları anlaştım. </li></ol> 2. KlimaAlıcı Fareler <ol><li> Steril fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile bir çözelti, 3 mg / busulfan seyreltin. NOT: Bu enjeksiyon her gün kullanımdan hemen önce busulfan taze seyreltme yapmak önemlidir. </li><li> Günlük olarak IP enjeksiyon yoluyla alıcı farelere seyreltildi busulfan, 20 mg / kg uygulayın. </li><li> 60-100 mg toplam doz kadar 20 mg / kg busulfan günlük olarak IP enjeksiyonları tekrar / kg (örneğin, bir 80 mg / kg toplam doz, birbirini takip eden 4 gün boyunca busulfan, 20 mg / kg, tatbik) teslim edilmiştir. </li></ol> Donör Kemik İliği Hücrelerinin İzolasyonu 3. NOT: Bu protokol, başarılı bir şekilde 5 donör farelerden yukarıdan BM hücrelerinin izole edilmesi ve hazırlanması için kullanılmıştır. Tipik fare başına hücre verimi 12-16 alıcı fareler nakli için yeterli yaklaşık 30-40.000.000 BMDCs vardır. Da daha fazla verici farenin gerekli ise protokol buna göre ayarlanması gerekebilir. <ol><li> Busülfan klima euth son gününde ardındanCO 2 kullanılarak (1-6 aylık) bir GFP donör fare anize (ya da kurumda kabul edilen diğer ötenazi prosedürü ile). Greft komplikasyonlar alıcı olarak aynı cinsiyetten olan singenik bağışçılara kullanmak önlemek için. </li><li> % 70 etanol ile fare püskürtün. Karın ve kullanma cerrahi makas lift cilt yukarı karın boşluğuna ayak bileği doğru bacak deri yoluyla bir kesi yapmak. Ayak Holding, sıkıca bacak dokusu açığa kalça doğru ayak bileği cildi çekin. </li><li> Kalça eklemi maruz femur kas ve yağ dokusu uzak Trim. </li><li> Yavaşça bacak uzatmak için yürüyerek çekerken, kalça eklemi karşı makas basın. Sadece femur kendisi kesmek için değil femur alma bakım başının üstünde kesin. </li><li> , Sterilite korumak yürüyerek bacak tutun ve otoklava dokuları ile kemik yüzeyi ovularak kemikleri kalan doku temizlemek yardımcı olmak için. </li><li> Diz eklemi ile keserek femur ve tibia ayırın vesteril PBS içeren bir kültür çanak femur yerleştirin. Buz üzerinde inkübe edin. </li><li> Çıkarın ve fibula, tibia bağlanır noktalarda keserek fibula atın. Femur ile kültür çanak tibia yerleştirin ve buz üzerinde kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> Dier bacak için 3,2-3,7 adımları, ve gerekirse, ek donör fareler. Kemiklerin çıkarılmasının ardından, sıcak bir boncuk sterilizatör ile cerrahi aletleri sterilize veya sonraki adımlar için steril araçlar yeni bir dizi kullanın. </li><li> Femur için, forseps ile femur tutun ve dikkatli bir şekilde &#39;tıraş&#39; cerrahi makas kullanarak uzak kemik kapalı biter. BM boşluğu ortaya çıkarmak için gerekli kemik az çıkarın. </li><li> Steril PBS 3 ml olan bir şırınga doldurun ve bir 23 G iğne takılır. Dikkatle BM boşluğuna iğne deliği ve steril bir kültür kabına BM yıkayın. İstenen tüm hücrelerin çıkarılmasını sağlamak için iğne noktası ile medüller kavite kazımak için emin olun. Ekstraksiyon sonrasında,Kırmızı BM artık görünür ve kemik artık beyaz görünür emin olun. </li><li> Tekrar aynı kültür çanak BM tüm havuzu, sonraki femur için 3,9-3,10 adımları. </li><li> Tibia&#39;daki için, dikkatle forseps ile kaval ve &#39;tıraş&#39; tibia BM boşluğu açığa diz bağlı olduğu uç tutun. Görünür kırmızı BM biter kemik boyunca ikinci bir kesim olun. </li><li> Steril PBS 3 ml olan bir şırınga doldurun ve bir 25 G iğne takılır. Yavaşça (diz bağlı olan ucundan) BM boşluğuna iğne takın ve femur gelen BM içeren kültür çanak içine BM yıkayın. Tüm hücreleri çıkarmak için iğne ile BM boşluğun duvarları kazıyın. Çıkarma ardından, kırmızı BM artık görünür ve kemik artık beyaz görünür emin olun. </li><li> Tekrar aynı kültür çanak BM tüm havuzu, sonraki tibia&#39;daki için 3,12-3,13 adımları. </li><li> Yavaşça c ayırmak için 1 ml pipet ile BM çiğnemekarşın. </li><li> Steril bir 50 ml lik santrifüj tüpüne 40 uM sepete filtre içinden hücre süspansiyonu geçirin. Kalan hücreleri almak ve santrifüj tüpüne filtresi aracılığıyla bu aktarmak için PBS ile çanak durulayın. </li><li> 4 ° C&#39;de 450 x g&#39;de 5 dakika boyunca santrifüje. Süpernatantı çıkarın ve atın. </li><li> Eritrosit yokedici tamponda 3 ml pelet yeniden askıya. 8.5 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edilir. </li><li> Yokedici tampon sönmesi için steril PBS ile 30 ml ilave edilir. </li><li> 4 ° C&#39;de 450 x g&#39;de 5 dakika boyunca santrifüje. Süpernatantı çıkarın ve atın. </li><li> Steril PBS içinde 1 ml pelet yeniden askıya. Buz üzerinde tutun. </li><li> Hücre homojenatının küçük bir kısım almak ve PBS ile seyreltilmiş (1: 100 1 fare, 1: 200 2 fareler için, vs.), bir hemositometre kullanılarak, hücre sayısını belirlemek için. </li><li> 8 x 10 6 hücre / ml hücre süspansiyonu seyreltin ve enjeksiyona kadar buz üzerinde inkübe edilir. </li></ol> 4. Kemik İliği Transplantasyonu <ol><li> FiLl her bir fare için seyreltilmiş hücre süspansiyonu 300 ul (28 G, insülin iğne ile) bir 0.5 mi şırınga enjekte edilecek. Şırınga mevcut herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarmak için emin olun. </li><li> Bir ısıtma yastığı şartına alıcı fareler içeren fare kafes yerleştirin ve kuyruk damarları genişletmek için izin verir. </li><li> Frenleyici cihazda bir alıcı fare ve yerinizi alın. % 70 etanol ile ıslatılmış cerrahi gazlı bez ile silin kuyruk. </li><li> Sıkıca kuyruk tutun ve konik yukarı, nazikçe yanal kuyruk damarlarından birinin içine iğne takın ve hücre süspansiyonu enjekte. </li><li> Kanama, yeni bir temiz bir kafesin içine fare tanıtan önce durana kadar enjeksiyon yerinde cerrahi gazlı bez tutun. </li></ol> 5. BM Kimerizm Kapsamının tahmin NOT: Kimerizm seviyeleri 1 hafta sonrası BMT de periferik kanda tipik değişken, ve bu kimerizmi düzeyleri normal en az 2 hafta sonrası BMT tahmin gibidir. Chim Düzeylerierism sonrası BMT 3-4 hafta içinde periferik kan&gt;% 80 GFP + hücreler ulaşması gerekir. <ol><li> FACS tampon (PBS içinde 2 mM EDTA +% 2 fetal sığır serumu) hazırlayın. Not: FACS tamponda birkaç hafta boyunca 4 ° C&#39;de saklanabilir. </li><li> Bir yasaklama tüp fareyi yerleştirin ve yanal safen ven maruz arka bacak kürk tıraş. </li><li> Ince kat vazelin ve delme 25 G iğne ile safen ven ile bacak. </li><li> Bir heparin kaplı kılcal tüp ile kanın yaklaşık 50 ul toplayın. FACS tampon 1 ml ihtiva eden bir mikro santrifüj tüpüne kan ekleyin. Çevirerek tüp karıştırın ve buz üzerinde saklayın. </li><li> Geri kafesine fareyi dönmeden önce kanama durana kadar enjeksiyon yerinde cerrahi gazlı bez tutun. </li><li> X g&#39;de 900 ° C&#39;de 5 dakika için kan santrifüjleyin. Süpernatantı çıkarın ve atın. </li><li> Eritrosit yokedici tampon 500 ul pelet yeniden askıya. 8.5 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edilir. </li><li> Yokedici tampon sönmesi için FACS tampon 1 ml ilave edilir. </li><li> X g 900 ° C&#39;da 5 dakika boyunca numune santrifüjleyin. Süpernatantı çıkarın ve atın. </li><li> Eritrosit yokedici tamponda 500 ul ikinci parçalama adımı gerçekleştirir. 8.5 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edilir. </li><li> Yokedici tampon sönmesi için FACS tampon 1 ml ilave edilir. </li><li> X g 900 ° C&#39;da 5 dakika boyunca numune santrifüjleyin. Süpernatantı çıkarın ve atın. Pelet artık beyaz olup olmadığını kontrol edin. NOT: Pelet hala kırmızı görünüyorsa, ek bir parçalama aşaması bir sonraki adıma geçmeden önce gerekli olabilir. </li><li> FACS tampon 1 ml pelet yeniden askıya. X g 900 ° C&#39;da 5 dakika boyunca numune santrifüjleyin. Süpernatantı çıkarın ve atın. </li><li> FACS tampon 300 ul pelet yeniden askıya ve akış sitometri kullanılarak GFP + hücreleri ölçmek (NOT: Bu noktada hücrelerin istenilen immun standart teknikler kullanılarak, yapılabilir, önceki sitometri analizi akış). </li></ol>

<ol><li>Ginhoux, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+Mapping+Analysis+Reveals+That+Adult+Microglia+Derive+from+Primitive+Macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fate Mapping Analysis Reveals That Adult Microglia Derive from Primitive Macrophages.</a> Science. 330 (6005), 841-845 (2010).</li>
<li>Hickey, W. F., Kimura, H. Perivascular microglial cells of the CNS are bone marrow-derived and present antigen in vivo. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHickey%2C+WF+%22Science+%28New+York%2C+N.+Y.%29%22">Science (New York, N. Y.)</a>. 239 (4837), 290-292 (1988).</li>
<li>Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+bone+marrow+transplantation+%28BMT%29%3A+providing+optimal+veterinary+and+husbandry+care+to+irradiated+mice+in+BMT+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%3A+JAALAS%22%5BJournal%5D)">Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 48 (1), 11-22 (2009).</li>
<li>Jimenez, M., Ercilla, G., Martinez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+reconstitution+after+allogeneic+stem+cell+transplantation+with+reduced-intensity+conditioning+regimens%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Immune reconstitution after allogeneic stem cell transplantation with reduced-intensity conditioning regimens.</a> Leukemia. 21 (8), 1628-1637 (2007).</li>
<li>Ellen Nath, C., John Shaw, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Busulphan+in+blood+and+marrow+transplantation%3A+dose%2C+route%2C+frequency+and+role+of+therapeutic+drug+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Current+clinical+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Busulphan in blood and marrow transplantation: dose, route, frequency and role of therapeutic drug monitoring.</a> Current clinical pharmacology. 2 (1), 75-91 (2007).</li>
<li>Galaup, A., Paci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacology+of+dimethanesulfonate+alkylating+agents%3A+busulfan+and+treosulfan%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Metabolism+%26+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Pharmacology of dimethanesulfonate alkylating agents: busulfan and treosulfan.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 9 (3), 333-347 (2013).</li>
<li>Lewis, C. -A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelosuppressive+Conditioning+Using+Busulfan+Enables+Bone+Marrow+Cell+Accumulation+in+the+Spinal+Cord+of+a+Mouse+Model+of+Amyotrophic+Lateral+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Myelosuppressive Conditioning Using Busulfan Enables Bone Marrow Cell Accumulation in the Spinal Cord of a Mouse Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis.</a> PLoS ONE. 8 (4), e60661(2013).</li>
<li>Capotondo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+conditioning+is+instrumental+for+successful+microglia+reconstitution+following+hematopoietic+stem+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Brain conditioning is instrumental for successful microglia reconstitution following hematopoietic stem cell transplantation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (37), 15018-15023 (2012).</li>
<li>Wilkinson, F. L., Sergijenko, A., Langford-Smith, K. J., Malinowska, M., Wynn, R. F., Bigger, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Busulfan+Conditioning+Enhances+Engraftment+of+Hematopoietic+Donor-derived+Cells+in+the+Brain+Compared+With+Irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Busulfan Conditioning Enhances Engraftment of Hematopoietic Donor-derived Cells in the Brain Compared With Irradiation.</a> Molecular Therapy. 21 (4), 868-876 (2013).</li>
<li>Lampron, A., Pimentel-Coelho, P. M., Rivest, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+of+bone+marrow-derived+cells+into+the+CNS+in+models+of+neurodegeneration%3A+Naturally+Occurring+Migration+of+BMDC+into+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Migration of bone marrow-derived cells into the CNS in models of neurodegeneration: Naturally Occurring Migration of BMDC into the CNS.</a> Journal of Comparative Neurology. , 3863-3876 (2013).</li>
<li>Kierdorf, K., Katzmarski, N., Haas, C. A., Prinz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+Marrow+Cell+Recruitment+to+the+Brain+in+the+Absence+of+Irradiation+or+Parabiosis+Bias%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Bone Marrow Cell Recruitment to the Brain in the Absence of Irradiation or Parabiosis Bias.</a> PLoS ONE. 8 (3), e58544(2013).</li>
<li>Ajami, B., Bennett, J. L., Krieger, C., McNagny, K. M., Rossi, F. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infiltrating+monocytes+trigger+EAE+progression%2C+but+do+not+contribute+to+the+resident+microglia+pool%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Infiltrating monocytes trigger EAE progression, but do not contribute to the resident microglia pool.</a> Nature Neuroscience. 14 (9), 1142-1149 (2011).</li>
<li>Down, J. D., Tarbell, N. J., Thames, H. D., Mauch, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syngeneic+and+allogeneic+bone+marrow+engraftment+after+total+body+irradiation%3A+dependence+on+dose%2C+dose+rate%2C+and+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Syngeneic and allogeneic bone marrow engraftment after total body irradiation: dependence on dose, dose rate, and fractionation.</a> Blood. 77 (3), 661-669 (1991).</li>
<li>Van Pel, M., van Breugel, D. W. J. G., Vos, W., Ploemacher, R. E., Boog, C. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+myeloablative+regimen+with+clinical+potential%3A+I.+Treosulfan+conditioning+and+bone+marrow+transplantation+allow+induction+of+donor-specific+tolerance+for+skin+grafts+across+full+MHC+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Towards a myeloablative regimen with clinical potential: I. Treosulfan conditioning and bone marrow transplantation allow induction of donor-specific tolerance for skin grafts across full MHC barriers.</a> Bone Marrow Transplantation. 32 (1), 15-22 (2003).</li>
<li>Ajami, B., Bennett, J. L., Krieger, C., Tetzlaff, W., Rossi, F. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nature Neuroscience. 10 (12), 1538-1543 (2007).</li>
<li>Andersson, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioning+therapy+with+intravenous+busulfan+and+cyclophosphamide+%28IV+BuCy2%29+for+hematologic+malignancies+prior+to+allogeneic+stem+cell+transplantation%3A+a+phase+II+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Blood+and+Marrow+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Conditioning therapy with intravenous busulfan and cyclophosphamide (IV BuCy2) for hematologic malignancies prior to allogeneic stem cell transplantation: a phase II study.</a> Biology of Blood and Marrow Transplantation. 8 (3), 145-154 (2002).</li>
<li>Hassan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+and+plasma+concentrations+of+busulfan+during+high-dose+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid and plasma concentrations of busulfan during high-dose therapy.</a> Bone Marrow Transplantation. 4 (1), 113-114 (1989).</li>
<li>Hassan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+distribution+of+%5B11C%5D-busulfan+in+cynomolgus+monkey+and+in+the+brain+of+a+human+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemotherapy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">In vivo distribution of [11C]-busulfan in cynomolgus monkey and in the brain of a human patient.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 30 (2), 81-85 (1992).</li>
<li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Fractalkine+Receptor+CX3CR1+Function+by+Targeted+Deletion+and+Green+Fluorescent+Protein+Reporter+Gene+Insertion%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of Fractalkine Receptor CX3CR1 Function by Targeted Deletion and Green Fluorescent Protein Reporter Gene Insertion.</a> Molecular and Cellular Biology. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li>
<li>Harrison, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competitive+repopulation%3A+a+new+assay+for+long-term+stem+cell+functional+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Competitive repopulation: a new assay for long-term stem cell functional capacity.</a> Blood. 55 (1), 77-81 (1980).</li>
<li>Evans, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+intravital+imaging+reveals+that+blood-derived+macrophages+but+not+resident+microglia+facilitate+secondary+axonal+dieback+in+traumatic+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">High-resolution intravital imaging reveals that blood-derived macrophages but not resident microglia facilitate secondary axonal dieback in traumatic spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 254, 109-120 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Busülfan condition kolaylıkla saptanabilen hematopoietik hücrelerin farelerde yüksek düzeyde BM kimerizmin üretimi sağlar. Bu koşullandırma ışınlama tesisleri için gerek kalmadan gerçekleştirilebilir. Üstelik, bu protokolde belirtilen busulfan dozlarda myelosupresyon iyi ışınlama miyeloablatif dozlarda neden toksik yan etkileri en aza indirerek, tolere edilir, ve böylece daha vardır, genç yaşlı, ya da hastalıklı farelerde BM şimerizmi üretmek için daha uygun bir teknik olabilir ışınlama miyeloablatif duyarlı. Busulfan i...

Son zamanlarda, merkezi sinir sistemindeki (MSS) mikroglia ve kemik iliği (BM) kaynaklı hücrelerin (BMDC'ler) rollerine hem hastalık sırasında hem de normal yaşlanma ile ilgili önemli bir ilgi olmuştur. CNS'nin yerleşik bağışıklık hücreleri olan mikroglia'nın, embriyogenez1 sırasında ilkel miyeloid progenitörlerin girişini takiben CNS'de geliştiği bilinmektedir. Mikroglia, miyelomonositik soylarının yönlerini yetişkin yaşamına kadar korur. Kanıtlar, BMDC'lerin mikroglial havuza katkısının sağlıklı yetişkin hayvanlarda minimum olduğunu gösterse de1, BMDC'lerin çeşitli nörodejeneratif hastalıkların ilerlemesinde oynadığı rol belirsizliğini korumaktadır. Bu belirsizlik, evrensel olarak kabul edilmiş ayırıcı immünohistokimyasal belirteç tanımlanmadığından, CNS içinde biriken BMDC'leri endojen yerleşik mikrogliadan ayırt etmenin zor olması gerçeğiyle birleşmektedir. BMDC'leri in vivo olarak izlemek için, bir alıcı farenin endojen BM hücrelerinin, β-aktin promotörün kontrolü altında her yerde yeşil floresan proteini (GFP) eksprese eden bir donör fareninkilerle değiştirildiği bir BM transplantasyonu (BMT) protokolü kullanıyoruz. Bu protokol, immünohistokimya kullanılarak alıcı fare içindeki GFP + BMDC'lerin hem lokalizasyonunun hem de morfolojisinin belirlenmesine izin verir ve floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması (FACS) ve ardından gelen biyokimyasal testler kullanılarak bu hücrelerin daha fazla karakterizasyonunu kolaylaştırır. 
Başarılı bir BMT için, alıcı BM hücrelerinin, donör hücre aşılamasına izin vermek için alıcı BM içinde niş alanı oluşturmak için ablasyon (miyeloablasyon olarak adlandırılır) gerekir. Sıklıkla, miyeloablasyon, özellikle hematopoietik progenitör hücreler2,3 gibi aktif olarak bölünen hücrelerde, hücre ölümüne yol açan DNA'da çift iplikli kırılmalara neden olan toplam vücut gama ışınlaması kullanılarak elde edilir. Işınlama protokolleri, yeterli BM hücre ölümünü indüklemek için yapılır, böylece alıcı hayvan BMT'den yeterli donör hücre aşılaması elde edemezse ('ölümcül ışınlama' olarak adlandırılır) hayvan ölümcüllüğü ile sonuçlanır. Bununla birlikte, ışınlama, tüm kurumlardaki araştırmacılar için mevcut olmayan veterinerlik ve hayvancılık kaynaklarının yanı sıra özel bir tesis ve ekipman gerektirir. Ayrıca, miyeloablatif ışınlama diğer dokularda potansiyel olarak ölümcül hasara neden olabilir ve immünosupresyon nedeniyle, ışınlanmış hayvanlar ikincil enfeksiyonlara karşı daha hassastır3. Bu nedenle, özellikle çocuklar ve yaşlılar gibi risk altındaki popülasyonlarda kullanım için, hastalarda koşullandırma protokolünün potansiyel olarak toksik yan etkilerini en aza indirmeyi amaçlayan azaltılmış yoğunluklu koşullandırma ('RIC' protokolleri olarak adlandırılır) rejimleri geliştirilmiştir4. 
Bazı RIC protokolleri, BM kompartmanını koşullandırmak için busulfan gibi kemoterapötiklere dayanır. Busulfan, ışınlamaya alternatif olarak sıklıkla klinik olarak kullanılan iki işlevli bir DNA alkilleyici ajandır5,6. Özellikle, busulfan, intraperitoneal (IP) enjeksiyonu ile farelere güvenli bir şekilde uygulanabilir ve fareleri ışınlamak için gerekli özel tesis ve ekipmanı gerektirmez. Busulfan koşullandırma, laboratuvarımızda7 ve diğer bazı yeni yayınlarda 8-11 yaygın olarak kullanılmaktadır. 60-100 mg / kg'lık dozlar kullanıldığında, periferik kanda ve BM7'de yüksek derecede stabil kimerizm (% >80 GFP + hücreleri) oluşturulabilir. Daha da önemlisi, bu dozlarda miyeloablasyon tam değildir ve bu nedenle fareler destek BM hücreleri almadan hayatta kalabilirler. Ayrıca, miyelosüpresif busulfan koşullandırma ile periferik kan miyelomonositik hücrelerinin donör hücreler tarafından hızlı bir şekilde yeniden yapılandırılması söz konusudur. Bununla birlikte, periferik kan lenfositlerinin donör hücreler tarafından değiştirilmesi daha yavaştır ve toplam vücut ışınlamasına kıyasla 60-100 mg / kg busulfan dozları ile ortaya çıkan immünosupresyon eksikliğini vurgular7. 
Vahşi tip farelerde ve ayrıca nörodejeneratif bozukluklar amyotrofik lateral skleroz (ALS)7 ve Alzheimer hastalığının fare modellerinde BMDC'leri araştırmak için busulfan kaynaklı kimerizmi başarıyla kullandık. Belirli koşullar altında önemli sayıda GFP + BMDC'nin CNS7,12 içinde biriktiği gözlemlenmiştir. Daha da önemlisi, ışınlama ile miyeloablatif koşullandırma gibi, busulfan koşullandırması ve ardından BMT, hem vahşi tip farelerde hem de nörolojik bozuklukları olan farelerdeCNS içinde GFP + BMDC birikimine izin vermek için yeterlidir 7-11. Nörodejeneratif bozuklukların tedavisinde önemli bir engel olarak, terapötik molekülleri dolaşımdan CNS'ye alma kabiliyeti olup, faydalı etkiler gösterebilmektedir, bu, BMDC'lerin terapötik molekülleri eksprese etmek için tasarlanabileceği ve daha sonra busulfan şartlandırılmış alıcıların CNS'sine terapötikler sunmak için bir araç olarak kullanılabileceği olasılığını artırmaktadır. aktif olarak araştırdığımız bir mekanizma. Işınlama ile miyeloablatif koşullandırmanın, busulfan koşullandırma7'ye kıyasla CNS'de daha fazla GFP + BMDC birikimine yol açtığını bulmuş olsak da, ışınlama, nörodejeneratif bozuklukları olan hastalarda ve CNS hastalığının murin modellerinde önemli toksisiteye sahip olabilir.
Biz ve diğerleri, nörodejeneratif bozukluklarda BMDC'leri incelemek için BMT modellerini kullanmış olsak da, bir alıcı farenin BM bölmesini büyük ölçüde belirgin bir şekilde tanımlanabilir bir BM hücresi popülasyonu ile değiştirme yeteneği, hematopoetik sistemin çeşitli yönlerini incelemek için paha biçilmez bir araçtır. Bu, hematopoietik soy gelişimi, lösemi, organ nakli, graft-versus-host hastalığı ve immünobiyoloji gibi çok çeşitli araştırma konularını içerir.

<table><tbody><tr><td>Busulfex</td><td>Otsuka Kanada İlaç A.Ş.</td><td>DIN 02240602</td><td>Kullanmadan hemen önce busulfanı steril PBS ile 3 mg / mL'ye seyreltin. Busulfan sitotoksiktir. MSDS'ye ve kurumsal yönergelere göre ele alın ve atın.</td></tr><tr><td>ACK Lizing Tampon Ömrü</td><td>Teknolojileri</td><td>A10492-01</td><td>Diğer lizis tamponu ikame edilebilir, ancak inkübasyon sürelerinin buna göre ayarlanması gerekebilir</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu Yaşam Teknolojileri</td><td></td><td>12483-020</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde kararlı yüksek seviyeli kemik İliği kimerizm yaratma için miyelosupresif ajan olarak busulfan

Busulfan as a Myelosuppressive Agent for Generating Stable High-level Bone Marrow Chimerism in Mice

Kemik iliği nakli (KİT) genellikle alıcı farelerin kemik iliği (BM) bölmesini, donör farelerden izole edilen farklı bir biyobelirteç eksprese eden BM hücreleri ile değiştirmek için kullanılır. Bu teknik, alıcı fareler içindeki donör kaynaklı hematopoietik hücrelerin tanımlanmasına izin verir ve çeşitli biyokimyasal teknikler kullanarak donör hücrelerini izole etmek ve karakterize etmek için kullanılabilir. BMT tipik olarak, donör hücre aşılaması için alıcı farelerin BM bölmesinde niş alan oluşturmak için toplam vücut ışınlaması ile miyeloablatif koşullandırmaya dayanır. Burada tarif ettiğimiz protokol, kemoterapötik ajan busulfan ile miyelosupresif koşullandırma kullanır. Özel tesislerin kullanılmasını gerektiren ışınlamadan farklı olarak, busulfan koşullandırması, toplam 60-100 mg / kg'lık bir doz uygulanana kadar 20 mg / kg busulfan intraperitoneal enjeksiyonları kullanılarak gerçekleştirilir. Ayrıca, miyeloablatif ışınlama toksik yan etkilere sahip olabilir ve alıcı farelerin hayatta kalması için donör hücrelerin başarılı bir şekilde aşılanmasını gerektirir. Buna karşılık, bu dozları kullanan busulfan koşullandırması genellikle iyi tolere edilir ve fareler donör hücre desteği olmadan hayatta kalır. Donör BM hücreleri, her yerde yeşil floresan proteini (GFP) eksprese eden farelerin femurlarından ve tibialarından izole edilir ve şartlandırılmış alıcı farelerin lateral kuyruk venine enjekte edilir. BM kimerizmi, BMT'yi takiben periferik kandaki GFP + hücrelerinin sayısının ölçülmesiyle tahmin edilir. Kimerizm seviyeleri >% 80 tipik olarak nakilden 3-4 hafta sonra periferik kanda gözlenir ve en az 1 yıl boyunca yerleşik kalır. Işınlamada olduğu gibi, busulfan ve BMT ile koşullandırma, özellikle nörodejenerasyonun fare modellerinde, merkezi sinir sistemi (CNS) içinde donör BM'den türetilmiş hücrelerin birikmesine izin verir. Bu busulfan aracılı CNS birikimi, toplam vücut ışınlamasından daha fizyolojik olabilir, çünkü busulfan tedavisi daha az toksiktir ve CNS iltihabı daha az kapsamlı görünmektedir. Bu hücrelerin, CNS'ye terapötikler sağlamak için genetik olarak tasarlanabileceğini varsayıyoruz.

60-100 mg verilmesi / busulfan kg genellikle iyi tolere edilir fareler tarafından. Ancak, hayvanlar tipik olarak yeme teşvik etmek ışınlanmış ayçiçeği tohumu gibi davranır ile takviye gerekebilir Klima fazı (~% 5-10) ve dolayısıyla diyet sırasında kilo. Periferik kanda&gt;% 80 GFP + hücrelerinin kimerizmin ve BM Düzeyleri 60-100 mg / kg busulfan 7 kullanarak sürekli ulaşılabilir olmalıdır. Laboratuvarımız başarıyla periferik kan ve kemik iliğinde&gt;% 80 GFP + hücreler ile 100&#39;den fazla kimerik fareler ol...

Busulfan koşullandırmasının, bir alıcı farenin kemik iliğinin, ışınlamanın yokluğunda her yerde yeşil floresan proteini eksprese eden donör farelerden alınan kemik iliği hücreleri ile değiştirilmesine izin veren bir protokolü açıklıyoruz. Bu teknik, merkezi sinir sistemindeki kemik iliği hücresi birikimini incelemek için yararlıdır.

Farelerde Kararlı Yüksek seviyeli Kemik İliği Kimerizm Yaratma için miyelosupresif Ajan olarak Busulfan

Bone marrow transplantation (BMT) is often used to replace the bone marrow (BM) compartment of recipient mice with BM cells expressing a distinct ...

Bu prosedürün genel amacı, alıcı farelerin kemik iliği kompartmanını, yaygın olarak yeşil floresan protein eksprese eden donör farelerin kemik iliği hücreleriyle değiştirmektir. Işınlama olmaksızın; bu işlem, öncelikle alıcı fareye miyelosüpresif bir bileşik olan busalan'ın ardışık intraperitonal enjeksiyonları ile kondisyonlama yapılarak gerçekleştirilir.Ardından, yaygın olarak yeşil floresan protein ifade eden donör bir farenin femur ve tibialarından kemik iliği hücreleri izole edilir. Son olarak, donör kemik iliği hücreleri, kuyruk veni enjeksiyonu yoluyla kondisyonlanmış alıcı fareye nakledilir. Nihayetinde, nakil yapılan fareden kan toplanır ve kemik iliği şimerizminin düzeyini tahmin etmek için akış sitometrisi ile analiz edilir.Bu tekniğin total vücut ışınlaması gibi mevcut yöntemlere karşı temel avantajı, total vücut ışınlamasının sitotoksik etkileri olmadan ve özel tesis ve ekipmanlara ihtiyaç duymadan yüksek derecede kemik iliği şimerizminin sağlanabilmesidir. Bu yöntem sadece kemik iliği kaynaklı hücrelerin merkezi sinir sisteminde birikiminin incelenmesine olanak tanımakla kalmaz, aynı zamanda hematopoetik soy gelişimi, immünobiyoloji ve lösemi gibi araştırma konularının çalışılmasında da kullanılabilir. Alıcı fareleri hazırlamak için, metin protokolüne göre seyreltilmiş busulfan hazırlayın ve alıcı farelere günlük kilogram başına 20 mg dozda IP enjeksiyon uygulayın.Fareler, kurumsal kılavuzlara uygun olarak ötanize edildikten sonra, laminar akışlı kabin altında, fareye %70 ethanol püskürtün. Karın bölgesindeki deriyi kaldırın ve cerrahi makasla, ayağı tutarak ayak bileğine doğru bacak boyunca, karın boşluğundaki deriden başlayarak bir insizyon yapın. Deriyi ayak bileğinden kalçaya doğru sıkıca çekerek bacak dokusunu açığa çıkarın.Ayağı nazikçe çekerken, kalça eklemini açığa çıkarmak için femur üzerindeki kas ve yağ dokularını temizleyin. Bacağı uzatmak için makasla pelvik kemiklere baskı uygulayın ve femura zarar vermemeye dikkat ederek femur başının hemen üzerinden kesin. Sterilitenin korunmasına yardımcı olmak için bacağı ayağından tutun ve femurda kalan dokuları makasla temizleyip kemik yüzeyini ovalamak için otoklavlanmış dokular kullanın.Diz ekleminden keserek femur ve tibianın ayrımını yapın ve femuru PBS içeren bir kültür kabına yerleştirip buz üzerinde inkübe edin. Ardından, fibulanın tibiaya bağlandığı noktalardan keserek fibulayı çıkarın ve atın. Sonrasında tibianın temizliğini yapın.Kırmızı iliğin bittiği yerden tibia kesilerek ayağı çıkarın ve tibiayı femur ile birlikte kültür kabına yerleştirip buz üzerinde inkübe edin. Femuru tutmak için pens kullanın ve cerrahi makasla kemiğin distal uçlarını dikkatlice tıraşlayın. Medüller boşluğu açığa çıkarmak için kemikten mümkün olduğunca az kısmını alın ve üç mililitre steril PBS kullanın.Bir şırıngayı doldurun ve 23 gauge bir iğne takın. İğneyi medüller boşluğa dikkatlice batırın ve kemik iliğini steril bir kültür kabına boşaltın. Ekstraksiyon sonrası istenen tüm hücrelerin alındığından emin olmak için iğne ucunu kullanarak medüller boşluğu sıyırın.Kırmızı kemik iliğinin artık görünmediğinden ve kemiğin beyaz göründüğünden emin olun. Tibiayı tutmak için pens kullanın ve cerrahi makasla, tibianın dize bağlı olduğu uç kısmı dikkatlice tıraşlayın. Medüller kaviteyi açığa çıkarmak için, bir şırıngayı üç mililitre steril PBS ile doldurun ve 25 gauge bir iğne takın.İğneyi dikkatlice medüller kaviteye sokun ve kemik iliğini, femurlerden toplanan kemik iliği kabına boşaltın. Hücreleri ayrıştırmak için bir mililitrelik pipet ucuyla kemik iliğini nazikçe triture edin. Hücre süspansiyonunu 40 mikronluk bir sepet filtreden geçirerek steril 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın.Kalan hücreleri toplamak için kabı PBS ile durulayın ve tamponu filtre üzerinden santrifüj tüpüne aktarın. Tüpe, toplam hacim 30 ila 40 mililitre olacak şekilde PBS ekleyin ve 450 ×g kuvvetinde, dört °C'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Ardından süpernatantı uzaklaştırıp atın.Pelleti üç mililitre eritrosit lizleme tamponu ile yeniden süspande edin ve buz üzerinde 8,5 dakika inkübe edin. Ardından, lizleme tamponunu etkisiz hale getirmek için yaklaşık 30 mililitre steril PBS ekleyin, santrifüjleyin ve süpernatantı atın. Pelleti yeniden süspande etmek için bir mililitre steril PBS kullanın ve buz üzerinde muhafaza edin.Küçük bir miktar hücre homojenatını PBS ile seyreltin ve hücreleri saymak için bir hemositometre kullanın. Hücre süspansiyonunu mililitre başına 8 × 10⁶ hücre olacak şekilde seyreltin ve enjeksiyona kadar buz üzerinde inkübe edin. Kemik iliği transplantasyonunu gerçekleştirmek için, seyreltilmiş hücre süspansiyonundan 300 µL'yi 0,5 mL'lik bir şırıngaya ekleyin.Enjeksiyon yapılacak her bir fare için hava kabarcıklarının giderildiğinden emin olun. Koşullandırılmış alıcı farelerin bulunduğu fare kafesini bir ısıtma pedinin üzerine yerleştirin ve lateral kuyruk venlerinin genişlemesini bekleyin. Alıcı bir fareyi uygun boyutlarda bir sabitleyiciye yerleştirin ve kuyruğu %70 ethanol emdirilmiş cerrahi gazlı bezle silin; kuyruğu sıkıca tutun ve iğnenin eğimli ucunu yukarıya gelecek şekilde lateral kuyruk venlerinden birine nazikçe yerleştirerek hücre süspansiyonunu enjekte edin.Kanamayı durdurana kadar enjeksiyon bölgesine cerrahi gazlı bez tutun. Kemik iliği transplantasyonundan yaklaşık iki ila üç hafta sonra, fareyi yeni ve temiz bir kafese yerleştirmeden önce, fareyi bir tutma tüpüne yerleştirin ve lateral safen veni açığa çıkarmak için arka bacağındaki tüyleri tıraş edin. Ardından, bacağa ince bir tabaka vazelin uygulayın ve heparin kaplı bir kapiler tüp ile safen venini delmek için 25 gauge bir iğne kullanın.Yaklaşık 50 µL kan toplayın, ardından kanamayı durdurmak için cerrahi gazlı bez kullanın. Kanama durduğunda fareyi kafesine geri koyun. Kanı, bir mL fax tamponu içeren bir mikro santrifüj tüpüne ekleyin.Tüpü ters çevirerek karıştırın ve buz üzerinde saklayın; kan örneklerini 900 ×g'de beş dakika santrifüjleyin. Süpernatantı uzaklaştırıp attıktan sonra, peleti yeniden süspande etmek için 500 µL eritrosit liz temizeleme tamponu kullanın ve buz üzerinde 8,5 dakika inkübe edin. Ardından, liz tamponunu nötralize etmek için bir mililitre fax tamponu ekleyin ve 900 ×g'de beş dakika santrifüjleyin.Metin protokolüne göre, ikinci kez liz ettiğiniz ve santrifüj ettiğiniz ardından peletin artık beyaz olduğunu kontrol edin. Eğer kırmızıysa, liz adımını üçüncü kez tekrarlayın. Peleti fax tamponunda süspande edin ve GFP pozitif hücrelerin oranını belirlemek için akış sitometrisi kullanın.Bu grafik, kilogram başına 100 miligram busalan ile hazırlanan ve başarılı bir sinjenik kemik iliği nakli alan farelerin yanı sıra, kilogram başına 80 miligram busalan ile hazırlanan ve başarısız bir allojenik kemik iliği nakli alan farelerin periferik kanında haftalık olarak nicelendirilen kimerizm seviyelerini göstermektedir. Kemik iliği naklinden sonra genellikle üç ila dört hafta içinde %80'den yüksek kimerizm seviyeleri oluşur; burada gösterilenler, kemik iliği naklinden üç hafta sonra başarılı ve başarısız kemik iliği naklini gösteren temsili periferik kan verileridir. Bu akış sitometrisi verileri, kemik iliğinde yüksek derecede kimerizmin en az bir yıl boyunca korunduğunu ve araçla (vehicle) hazırlamanın kemik iliği kimerizmini indüklemek için yeterli olmadığını göstermektedir.Kilogram başına 60 ila 100 miligram busulfan dozları kullanılarak elde edilen kemik iliği kimerizm seviyelerinde anlamlı bir fark olmasa da, GFP pozitif hücreler merkezi sinir sistemi içinde doza bağlı bir şekilde birikir. Bu şekil, vahşi tip bir farede ve nörodejeneratif bir hastalık olan amiyotrofist lateral skleroz fare modelinde daha fazla olmak üzere, omuriliğin lomber bölgesindeki GFP pozitif kemik iliği kaynaklı hücre birikimini göstermektedir. Bu prosedür uygulanırken, transplantasyon sonrası reddedilme olasılığını minimize etmek için aynı cinsiyetten sinjenik alıcı ve donör farelerin kullanılması önemlidir.Kemik iliği kaynaklı hücrelerin merkezi sinir sistemine giriş mekanizmalarını incelemek için akış sitometrisi ve immünohistokimya gibi diğer yöntemler kullanılabilir.

busulfan-as-myelosuppressive-agent-for-generating-stable-high-level

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kompleks doku kitleleri, organlardan tümörler, çeşitli hücresel elemanların oluşmaktadır. Bu hücre köken hem de protein ekspresyonu göre hücre özelliklerini deşifre spektral unmixing ardından çok parametreli immünofloresan boyama ile bir arada çok etiketli floresan transgenik fareler kullanılarak bir doku içinde hücre fenotipleri katkısını açıklanacaktır.

Hücre Origins, Türleri ve Etkileşimler Görselleştirme için Floresan Doku Nakli ardından Kantitatif Çokspektrumlu Analizi

Bu protokol, farelerin kurban edilmesini gerektirmeden femur kemik iliğinin (BM) seri örneklemesi için bir prosedürü tanımlar. Bu prosedür, farelerin BM bileşiminin zaman içinde uzunlamasına çalışmalarını kolaylaştırır ve ex vivo ve transplantasyon çalışmaları için BM içindeki hücrelere seri erişim sağlar.

Canlı Farelerde Femoral Kemik İliği Aspirasyon

Aşıların nasıl çalıştığı hakkında genel bir bilgi eksikliği var. Burada, dendritik hücrelere ve T hücresi bağışıklığına özel olarak odaklanarak, aşılara karşı erken konak bağışıklık tepkileri hakkında fikir edinmek için ters genetik ve kemik iliği kimerik farelerin birlikte kullanılmasını öneriyoruz.

Kimerik fare modellerinde Rekombinant Grip aşıların burun içinde yoluyla mukozal bağışıklık Okumak

Bu el yazması, transdüksiyon-transplantasyon fare modelleri oluşturmak için kullanılan metodolojinin bir tanımını sağlar. Kemik iliği nakli yapılırken kaçınılması gereken teknik hataların ayrıntılı bir açıklaması yapılır. Yüksek viral titre, transfeksiyon / transdüksiyon ve ışınlamanın önemi hakkında net bir anlayış kazanılmalıdır.

Myeloproliferatif tümörün İletimi-Transplantasyon Fare Modeli

Hematopoetik kök hücre transplantasyonu (HKHT) genetiği hematopoetik hücrelerin kötü huylu potansiyelini değerlendirmek için nasıl kullanılacağını açıklar. HKHT çeşitli malign hematopoetik hücrelerin vivo içinde değerlendirmek için hem de Roman terapiler değerlendirmek için büyük bir kohort myelodisplastik sendrom (MDS) veya lösemi ile farelerin üreten yararlıdır.

Hematopoetik kök hücre transplantasyonu myelodisplastik sendromu kökeni değerlendirmek için kullanımı

Bu iletişim kuralı hangi autoreactive photoactivatable yeşil flüoresan protein (PA-GFP) muhabir lenfositleri taşımak spontan otoimmün germinal merkezleri ile karışık fare kemik iliği chimeras nesil açıklar. Bu hücresel aşağı akım moleküler ve fonksiyonel analizleri kurcalayarak konumda bağlantı olanağı sağlar.

Bireysel Autoreactive Germinal merkezleri Photoactivation otoimmünite, karışık Chimeric modeli tarafından sorguya

Greft-versus-host hastalığı allojenik kemik iliği transplantasyonu sonrası önemli bir komplikasyondur. Dendritik hücreler greft-versus-host hastalığının patogenezinde kritik bir rol oynarlar. Bu makalede, dendritik hücrelerin greft-versus-host hastalığı nın gelişimindeki rolünü ve greft-versus-lösemi etkisinin araştırılması için yeni bir kemik iliği transplantasyon platformu açıklanmaktadır.

Kemik İliği Transplantasyon Platformu Greft-versus-Host Hastalığında Dendritik Hücrelerin Rolünü Araştırmak Için

Kemik iliği naklinin (BMT) üç yöntemini tarif ediyoruz: toplam vücut ışınlamalı BMT, korumalı ışınlamalı BMT ve fare modellerinde klonal hematopoez çalışması için ön koşullandırması olmayan BMT yöntemi (benimseyen BMT).

Klonal Hematopoez Çalışması İçin Farelerde Kemik İliği Nakli İşlemleri

Burada, akut lenfoblastik lösemi hastası kaynaklı ksenogreft modelinin, CD19 hedefli kimerik antijen reseptörü T hücresi ile ilişkili toksisiteleri değerlendirmek ve izlemek için bir strateji olarak kullanıldığı bir protokol tanımlanmıştır.

Akut Lenfoblastik Lösemi Hasta Kaynaklı Ksenogreft Fare Modeli Kullanılarak Kimerik Antijen Reseptörü T Hücresi İlişkili Toksisitelerin Değerlendirilmesi

Bu protokol, gen düzenlenmiş hücreler de dahil olmak üzere birkaç hematopoietik veya lösemik kök hücrenin murin ksenogreft modellerinde intrafemoral enjeksiyonunu tanımlar, bu da sadece hücrelerin hızlı ve güvenli bir şekilde nakledilmesini sağlamakla kalmaz, aynı zamanda kemik iliğinin seri analizlerini de sağlar.

Canlı fareler kullanılarak yapılan basitleştirilmiş intrafemoral enjeksiyonlar, sürekli kemik iliği analizine izin verir

Burada, hasarlı bir hematopoietik ve bağışıklık sisteminin yeniden inşası için terapötik hematopoietik kök/progenitör hücreleri hasat etmek için kemik morfogenetik protein-2 yüklü jelatin iskeleler tarafından tetiklenen in vivo osteo-organoidler kurduk. Genel olarak, bu yaklaşım hücre tedavileri için umut verici bir hücre kaynağı sağlayabilir.

Terapötik Hematopoietik Kök/Progenitör Hücrelerin Toplanması için İn Vivo Osteo-organoid Yaklaşım

Öğrenin farelerde busulfan ile kemik iliği transplantasyonu yöntemini; GFP işaretli hücreleri kullanarak santral sinir sisteminde hücre birikimini inceleyin. Bu teknik radyasyonsuz yüksek kimerizm sağlar.

Farelerde Kararlı Yüksek seviyeli Kemik İliği Kimerizm Yaratma için miyelosupresif Ajan olarak Busulfan

Daha fazla video keşfet