Geri dönüşümsüz ve Tersinir Tek taraflı Üreterik Obstrüksiyon bir fare modeli

Bu video, tek taraflı üreter tıkanıklığı ile indüklenen, geri dönüşümsüz veya geri dönüşümlü olabilen bir obstrüktif nöropati fare modelini sunmaktadır; ortaya çıkan yapısal hasarı ve geri döndürme işlemi sonrası iyileşmeyi vurgulayan histolojik veriler sunulmaktadır. Bu şematik çizim, bu modelin ana basamaklarını göstermektedir. Burada sol böbrek, üreter ve mesaneyi görmekteyiz.

Standart bir tek taraflı üreter obstrüksiyonu, üreterin bağlanmasıyla indüklenir. Zamanla üreter genişler ve böbrekte hidronefroz gelişir. Geri döndürülebilir bir tek taraflı üreter obstrüksiyonu gerçekleştirmek için, üreter mesaneye yakın bir noktadan bağlanır ve obstrüksiyon noktasında üreterin çevresine gri renkte gösterilen yumuşak duvarlı plastik bir tüp yerleştirilir.

Aşırı üreter dilatasyonunu sınırlamak için, böbrek zamanla hidronefrotik hale gelir ve ardından çalışma için uygun olan bir zaman noktasında tıkanıklık giderilir. Bu deneydeki yedinci günde, yumuşak duvarlı tüp çıkarılır ve üreter, ligasyon seviyesinin hemen üzerinden kesilir. İdrar akışına izin vermek için tıkanıklığı giderilmiş üreter mesaneye anastomoz edilir ve böbrek genellikle birkaç gün içindele dekomprese olur.

UUO olarak adlandırılan tek taraflı üreter obstrüksiyon modeli, obstrüktif nefropati sonrası doku hasarı ve fibrozis gelişimini incelemek için kullanılabilir. RUUO şeklinde kısaltılan geri dönüşlü üreter obstrüksiyon modeli ise hasarı takip edebilecek doku yeniden şekillenmesi hakkında bilgi edinmek için kullanılabilir. Burada, hem UUL ve hem de UUL prosedürlerimizi içeren tipik bir deneyin sunumu yer almaktadır.

Farelere sıfırıncı günde UUL uygulanır ve yedi gün sonra ya hasar düzeyini değerlendirmek için fareler sakrifiye edilir ya da bir RUUR gerçekleştirmek için üreterler yeniden açılır. Dokular toplanmadan önce böbreklerin yedi gün boyuncaledekomprese olmasına izin verilir.

Dokular; yapısal hasar, makrofaj infiltrasyonu, miyofibroblast birikimi ve fibrozis açısından değerlendirilebilir. İşte tipik bir cerrahi kurulum. İşlem, steril bir cerrahi alan içinde konumlandırılmış, otoklavlanmış steril aletler ve sarf malzemeleri kullanılarak gerçekleştirilir.

Birden fazla hayvan ameliyat edilecekse, prosedürler arasında aletler bir boncuk sterilizatör ile steril edilmeli veya her prosedür için yeni bir alet seti kullanılmalıdır. Operatörler steril önlük, maske, bone ve eldiven giyer. Sekiz haftalık erkek C 57 black six fare, ketamin hidroklorür ve ksilazinın intraperitoneal enjeksiyonu ile anestezi altına alınmıştır.

Anestezi derinliği, ayak parmağı sıkıştırmasına karşı verilen tepkinin kaybolmasıyla doğrulanmıştır. Cerrahi alan tıraşlanmış ve seyreltilmiş klorheksidin solüsyonu kullanılarak sterilize edilmiştir. Kornea kurumasını önlemek için göz yağlaması uygulanmıştır.

Analjezik buprenorfin hidroklorür deri altı enjeksiyon yoluyla uygulanmıştır. Ağız kısmı steril örtülü ısıtmalı cerrahi bir ped üzerine yerleştirilmiş, ekstremiteler doku ayırıcı makaslar kullanılarak sabitlenmiş, orta hat laparotomisi gerçekleştirilmiş ve avasküler lineer dirsek boyunca bir insizyon yapılmıştır. Bir sonraki bölüm, geri dönüşümsüz bir UUOA işleminin nasıl gerçekleştirileceğini detaylandıracaktır; insizyona bir calibra retraktör yerleştirilir ve fare steril örtülerle kapatılır.

Sol üreteri açığa çıkarmak için bağırsaklar kenara çekilir ve nemli steril gazlı bezle örtülür. Obstrüksiyon oluşturmak amacıyla, eğimli pensler kullanılarak üreter açığa çıkarılır ve izole edilir. Üreter, 6-0 siyah örgü ipek sütür kullanılarak iki kez bağlanır.

Üreter, mesane ile renal pelvis arasındaki herhangi bir noktadan obstrükte edilebilir. Ardından üreter, sütürler arasındanlele bölünür. Bir sonraki bölüm, geri döndürülebilir bir üreter obstrüksiyonunun nasıl gerçekleştirileceğini detaylandıracaktır.

Bu, bir RUUL'nin ilk aşamasıdır. Obstrüksiyonu indüklemek için açılı pensler kullanılarak üreter açığa çıkarılır ve izole edilir. Üreter, 6.0 siyah örgü ipek sütür kullanılarak iki kez ligatize edilir.

Mesane ile anastomoz için uygun bir üreter uzunluğu korumak amacıyla, üreter mesaneye yakın bir yerden obstrükte edilmelidir. Geri çevirme prosedürü sırasında sütürler kırpılır ancak biri daha sonra kullanılmak üzere uzun bırakılır ve yaklaşık beş milimetre uzunluğunda yumuşak duvarlı plastik tüp kesilir. Daha sonra, tüpün üreterin etrafına uygulanabilmesi için açılıp yayılmasına olanak sağlayacak şekilde boyuna bir yarık açılır.

Yumuşak duvarlı plastik tüpün iç çapı bir milimetre ve dış çapı iki milimetre olmalıdır. Yumuşak duvarlı plastik tüp, kapatıldığında uzun sütürün yarık merkezinden çıktığından emin olunarak üreterin etrafına dikkatlice yerleştirilir. Ardından, altı sıfır siyah örgü ipek sütürden bir parça tüpün etrafından geçirilerek bağlanır.

Ardından, tüpün merkezinden çıkan uzun sütür bir sonraki bağa dahil edilir. Bu işlem, üreteri ve tüpü yerine güvenli bir şekilde sabitlemek için gerçekleştirilir. Üreterin etrafındaki tüp, hem UUO hem de RUUO prosedürlerinin sonunda aşırı üreterik dilatasyonu önleyecektir.

Bağırsaklar yerine yerleştirilir, periton dikilir ve cilt metal klipslerle kapatılır. Cerrahi bölgeye iyot da uygulanır. Anestezi, deri altına aamaz enjeksiyonu yapılarak kısmen geri döndürülür.

Hidroklorür ve sıvılar, 1 mL ısıtılmış salin ile subkütan enjeksiyon yoluyla uygulanır. Fareler, bilinçleri yerine gelene kadar izlenir ve ardından 29 °C'de tutulan bir ısı kutusunda 24 saat boyunca iyileşmelerine izin verilir. Üreter obstrüksiyonunu takip eden günlerde böbrekler hidronefrotik hale gelir.

Fareler, yaralanma evresinin çeşitli zaman noktalarında veya tıkanıklığın geri çevrilmesinin ardından sakrifiye edilebilir. Bu bir sonraki bölüm, RUUO prosedürünün ikinci aşaması olan geri çevirme işleminin nasıl gerçekleştirileceğini detaylandırmaktadır. Fare, daha önce açıklanan şekilde anestezi altına alınır ve hazırlanır.

Metalik deri klipsleri çıkarılır ve laparotomi gerçekleştirilir. Periton dikişleri alınır ve periton, fare diş pensi ile nazikçe açılabilir. Ardından fare hazırlanır ve daha önce açıklandığı gibi açılı pens kullanılarak sol üreter ortaya çıkarılır.

Üreter ve yumuşak duvarlı plastik tüp çevre dokulardan izole edilir. Yumuşak duvarlı tüpü yerinde tutan sütürler skalpel ile kesilir ve ardından çıkarılır. Daha sonra yumuşak duvarlı plastik tüp dikkatle çıkarılır ve genişlemiş bir üreter görülür.

Üreter, tıkanma noktasında hassastır ve bu klipte olduğu gibi tıkanıklığın üst kısmından kolayca kopabilir. Bununla birlikte, UUO'nun ilk aşamasında mesane yakınına önceden yerleştirilen sütürler sağlam kalacak ve bu da mesaneden periton boşluğuna idrar sızmasını önleyecektir. Daha önce tıkalı olan üretere boşalacak herhangi bir idrar sedimentini toplamak için üreterin altına steril bir gazlı bez parçası yerleştirilir.

Üreter lümeninin her türlü kalıntıdan temizlendiğinden emin olmak için, tıkanıklığı giderilmiş üreterin geri kalan uzunluğunun berrak idrar üretilene kadar drene olmasına izin verilmelidir. Üreter ve renal pelvis drene edildikten sonra, üreterin ucuna uzun, 6-0 siyah örgü ipek sütür uygulanır. Bu sütür, sonraki üreter-mesane anastomozuna yardımcı olmak için kullanılır.

Ardından üreter, orijinal konumunun önünde kalacak ve böbreğin üzerine gelecek şekilde çevrilir. Üreterin ucuna tek bir nano poliamid monofilaman TAing süturu yerleştirilir. Süturun kas tabakasında kaldığından ve üreter lümenine girmediğinden emin olmak için dikkatli olunur.

Sütür, daha sonra mesaneyi anastomoz için hazırlamak amacıyla üreteri mesaneye sabitlemek için kullanılır; 21 gauge bir iğnenin mesaneden çapraz olarak geçirilmesiyle mesane boyunca bir kanal oluşturulur. Ardından, 21 gauge iğne, gözlü bir iğneyi mesaneden geçirmek için kılavuz olarak kullanılır. Üretere daha önce yerleştirilen Nino sütürü, üreteri mesaneden geçirmek için mesanedeki ilk insizyondan içeri sokulur ve giriş noktasına komşu olan mesane duvarından dışarı çıkarılır.

Üreterin ucuna yerleştirilen uzun 6-0 sütür, iğnenin deliğinden geçirilir. Ardından, üreterin de mesane içerisine çekildiğinden emin olunarak, iğne yavaşça mesane üzerinden geri çekilir. Üreter mesane içerisine yerleştirildiğinde, üreteri güvenli bir şekilde sabitlemek amacıyla üreter ve mesane duvarına yerleştirilen nano sütürler bağlanır.

İkinci bir otax sütürü yerleştirilir. Bu sütür, kas tabakası içinde kaldığından emin olunarak tekrar üreterden, ardından mesane insizyonundan ve mesane duvarından dışarıya doğru geçirilir. Daha sonra benzer bir şekilde bağlanır.

Mesanenin arka kısmına üçüncü bir nano tax sütürü daha yerleştirilir. Ardından, üreteri açığa çıkarmak için açık makasların sırtı kullanılarak mesane duvarı hafifçe geri itilir. Daha sonra üreter, akciğer sütürünün üzerinden kesilir.

Ardından, boyalı üreter açılı bir şekilde mesaneye doğru geri çekilecektir. Üreterin mesane içine tamamen çekildiğinden emin olmak için dört uç kullanılır. Son olarak, mesanedeki çıkış yarası 9-0 poliamid monofilaman sütür ile kapatılır; kapatma işleminden önce üreterin mesane içinde sıkıca sabitlendiğinden emin olun.

Periton ve cilt daha önce açıklandığı şekilde kapatılır ve daha önce açıklandığı şekilde ameliyat sonrası bakım sağlanır. Tıkanmış böbreğinleksiyonu sağlamak amacıyla, bu çalışmadaki tüm UUO farelerinin yedi gün boyunca iyileşmesine izin verilmiştir; ancak daha erken veya daha geç zaman noktaları da incelenebilir. Sırada, tıkanmış ve tıkanıklığı giderilmiş böbreklerin görünümünü ve ortaya çıkan hasarı gösteren veriler yer almaktadır.

Bu şekil, doğal U-U-L-U-U-O böbreklerin, renal pelvisin ve üreterlerin doğal böbrekle karşılaştırmalı görünümünü göstermektedir. Yedi gündür obstrükte olan UUO böbreği, hidronefrotik ve soluk renkli görünmektedir. Yedi günlükdeobstrüksiyonun ardından, RUO böbreği dekomprese olmuş; renal pelvis ve üreter, doğal böbreğin boyut ve rengine benzer hale gelmiştir.

Destruktürleme tekniği ve mesaneye yapılan anastomoz nedeniyle, IUO üreterinin UUO ve doğal böbreklerin üreterlerinden daha kısa olduğunu unutmayın. Bu şekil, doğal UUO ve RUUO böbreklerinden alınan H ve E boyalı böbrek kesitlerinin temsili görüntülerini göstermektedir. Normal böbreğin sağlıklı interstisyumu, kompakt sağlıklı tübüllerin kesitlerinden oluşur.

Siyah oklarla belirtilen bir dizi tübül, yedinci günde belirgin dilatasyon göstermektedir. Kontrast tüpteki QUL'den sonra, UUL'nin geri döndürülmesini takip eden yedinci günde dilatasyon belirgin şekilde azalmıştır. Burada sunulan obstrüktif nefropati fare modeli, geri dönüşü olmayan veya geri döndürülebilir olabilen tek taraflı üreter obstrüksiyonu ile indüklenmiştir.

Burada ayrıntılı olarak açıklanan geri dönüşümlü model, üreter tıkanıklığının giderilmesine ve idrar akışının tamamen geri kazandırılması için üreterin mesaneye anastomoz edilmesine olanak tanır. Bunun sonucunda meydana gelen böbrek dekompresyonu, yaralanma sonrası deneylerde doku yeniden şekillenmesinin çalışılmasını sağlar. Hem geri dönüşümsüz hem de geri dönüşümlü obstrüktif nefropati modellerinin birlikte kullanılması, araştırmacılara hastalık süreçleri ve terapötik müdahalelerin hem yaralanmanın gelişimini hem de takip eden doku yeniden şekillenmesini nasıl modüle ettiği konusunda güçlü bir içgörü sağlar.