Name: Bir Hidrojel Construct ve Fare Miyokard Enfarktüsü Modeli Therapeutics sunun için Tutkal Yaklaşım Fibrin tabanlı. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 15 s
Description: Öğrenin miyokard enfarktüsü sonrası hasarı azaltmak için fibrin yapıştırıcı ile hidrojel yama uygulamasını. Bu yöntem fare kalbinde hücre yerleşimini artırarak rejeneratif tedavi potansiyelini güçlendirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma ABD Ordusu Grant (W81XWH-08-1-0701) ve Carle Vakfı Hastanesi&#39;ne Kardeşliği tarafından finanse edildi.

Prosedür IACUC protokolü numarası 13302 ile tam uyumluluk içindedir ve hayvan kaynaklarının bölünmesi tarafından onaylandı. 1. Enstrüman Hazırlık <ol><li> Sterilite sağlamak için cerrahi işlem öncesinde kullanılan tüm olmayan tek kullanımlık aletleri otoklavlayın. </li><li> Kullanımlar arasında bir cam boncuk sterilizatör bir oturumda birden çok kez kullanılan aletleri sterilize edin. </li></ol> 2. Hidrojel Hazırlık <ol><li> Çözülme ve hidrojel yapının oluşturulması için en az 24 saat önce plaka kök hücreler. </li><li> Önceki yayınlarda 8,18 detaylı bir şekilde tarif edilmiş bir stereolitografi aparatı kullanılarak cerrahi (ya da benzer bir alet), bir gün önce, yamalar hazırlayın. </li><li> Hidrojel oluşturmak için, ilk olarak istenen yama bir bilgisayar destekli tasarım (CAD) modeli oluşturmak ve stereolitografik biçimi (STL) tasarımını ihracat. </li><li> Dissolvin bir ön jel çözeltisi oluşturmakSteril 1x PBS g poli (etilen glikol) dimetakrilat (PEGDMA)% 20 ağırlık / hacim solüsyonu elde etmek için. Aynı zamanda, foto-başlatıcı 1- [4- (2-hidroksi-etoksi) -fenil] -2-hidroksi-2-metil-1-propan-1-on, DMSO içinde çözülür. / 0.5 hacimce% nihai olarak PEGDMA çözeltisine foto-başlatıcı ekleyin. Doğrudan çapraz bağlama öncesi hücrelerin istenen yoğunlukta 100 ml. Not: hücre / ml önerilir 6 10 x -2.0 5 10 x 2.0 arasında bir hücre yoğunluğuna. </li><li> SLA platformun ortasında bir çanak içine önceden jel çözümü Pipet ve önceden yüklenmiş STL formatlı tasarımı ile SLA yazılımını çalıştırın. </li><li> Aletinden yamalar çıkarın ve Dulbecco modifiye edilmiş Eagle ortamı,% 5 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenmiş (DMEM), 100 U / ml penisilin hidrojeller göre O / N inkübe ve hücreler, ayarlamak için 100 mg / ml streptomisin izin vermek için yama içinde çevreye. </li></ol> 3. Hayvan Hazırlama ve Sözlü intubatiüzerinde <ol><li> Onların kafes arkadaşları ile onların tımar alışkanlıkları ve etkileşimleri belirlenen hayvan, sağlık durumunun iyi olduğundan emin olmak için prosedür öncesinde her fare değerlendirin. Not: Bayan 8-10 haftalık C57BL / 6J fareler bu işlem için kullanılan, ancak, herhangi bir fare yaş ve tipi kullanılabilir. </li><li> Bir anestezik odasına hayvanları yerleştirin ve 1 L / dk O 2 desteği ile% 5 isofluorane maruz. Ayak tutam refleks ile anestezi düzeyini izleyin. </li><li> Hayvan düzgün uyuşturulduktan sonra, tartmak ve entübasyon standı üzerine koyun. </li><li> Hayvanın göğüs boşluğuna doğru bir ışık kaynağı yönlendirin ve ses tellerini laringeal yüzeyini geri çekin ve ortaya çıkarmak için forseps kullanabilir. Dikkatle ses tellerinin arasında 20 G angiocath rehberlik ve sorunsuz trakea içine yerleştirin. Kateter küçük hayvan ventilatöre bağlı bir kez göğüs boşluğunun mekanik hareketi ile uygun ekleme algılar. </li><li> Inci havalandırma ayarlarını yapınüreticinin yönergelerine göre hayvanın e ağırlığı. </li><li> Entübe sonra hipotermi önlemek için ısıtma pedi üzerinde yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. Isıtma yastığı 40 ° C&#39;yi aşmaması emin olun. Gerekirse, yanık şansını en aza indirmek için hayvan ve ısıtma yastığı arasında bir bariyer yerleştirin. </li><li> Bir epilasyon kremi kullanılarak cerrahi bölgeden saç çıkarın. Doğru sterilizasyon sağlamak için Betadin ve% 75 etanol 3 alternatif scrubs tarafından siteyi sterilize edin. Sadece cerrahi siteyi açığa ve işlem sırasında kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem yerleştirmek için bir örtü yerleştirin. </li></ol> 4. Cerrahi Prosedür <ol><li> torakotomi nedenle, sternum uzunluğu çalışan sternum sol, bir cilt kesisi yaklaşık 1 cm yapmak, hayvanın sol tarafında yapılır. </li><li> Iki adımda yatan göğüs kafesi arasında kas tabakası ayrı forseps kullanın. Bir Deline&#39;a gözlemleyinhayvan pektoralis majör kaslarını gösteren ating hattı. Altta yatan dış eğik kas ayırmak ve mediale geri, biraz bu kası kaldırın. Ardından, aynı şekilde yatan göğüs kafesi dış oblik kas özgür ve ikinci, üçüncü ve dördüncü kaburga bir unobscured görünüm sağlayan, yanal geri çekin. </li><li> Üçüncü ve dördüncü kaburga arasındaki torakotomi gerçekleştirin. Yavaşça dördüncü kaburga kaldırın ve üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki göğüs boşluğunu açmak için bir cauterizer kullanın. Ayrıca boşluğu açmak ve kalp maruz Ekartörleri yerleştirin. </li><li> Kalbin ince perikard rüptürü için forseps kullanabilir. </li><li> Bir 8-0 monofilament naylon sütür ile sol koroner arter Arter. Doğrudan sol atrium alt ucu altında, yaklaşık 4 mm kalbin apeks gelen dikiş yerleştirin. Ventriküler miyokard bir blanching ve Sutu sonra sol atrium boyutunda bir artış ile doğru dikiş yerleştirme belirleyinYeniden bağladı edilmiştir. </li></ol> 5. Patch Yerleştirme ve Tutkal <ol><li> Kullanılana kadar CO2 şartları, 37 ° C&#39;de tutun yamalar ve% 5. </li><li> Yavaşça düz uçlu spatula ile yama kaldırın ve yavaşça infarktüsü yerinde, kalbin bir yüzeye yerleştirin. Not: Sol ventrikül kaymasını önlemek için, yama hafifçe spatula ya da forseps bir çift ucu kullanarak kişiyi koruyarak yerinde tutulabilir. </li><li> Trombin, fibrinojenin: 1 oranını 4 karıştırılarak tutkal hazırlayın. Bu hazırlık başladıktan sonra genellikle 1 dakika içinde, kalınlaştırmak başlayana kadar tekrarlanan pipetleme çözüm karıştırın. </li><li> Çözelti viskozitesi istenen seviyeye ulaştığında, hızla yama yüzeyine yaklaşık 10 ml aktarın. Not: fibrin yapıştırıcı pıhtılaşma zamanı hızlıdır, tutkal verimli transferi için küçük bir fırsat penceresi sağlar. </li></ol> 6. Dikiş <ol><li&gt; 6-0 monofilament naylon dikiş kullanarak tüm kapanış sütür gerçekleştirin. </li><li> 3-4 ayrı kesintiye dikişlerle kaburga katmanı kapatın. </li><li> Interkostal katmanın tam kapanmasından önce, kapatma işlemi tamamlandıktan sonra göğüs boşluğuna tahliye ve uygun intraplevral basınç yeniden kurmak için kesi içine PE-10 kanül yerleştirin. </li><li> 3-4 ayrı kesintiye dikişlerle göğüs kasları kapatın. </li><li> Sürekli dikiş ile cilt katmanı mühür. </li><li> Tam kapatılması sonrasında, kanül sonuna 1.0 ml şırınga takmak ve göğüs boşluğunu tahliye için kullanabilirsiniz. </li><li> Dikiş sitesini güçlendirmek için kesi sitesine doku yapıştırıcısı sürün. </li></ol> 7. Post-cerrahi tedavi <ol><li> Fareler buprenorfin (0.05-1.0 mg / kg) ve deri altından hemen önce canlanma koroner ligasyon ve en az 20 dakika, aşağıdaki karprofen (2.2 mg / kg) enjeksiyonu ver. Her iki ilaç da ameliyattan sonra 6-8 saat yönetmeVe sonra ağrı ve sıkıntı kontrolü üç gün süreyle günde iki kez vermek. </li><li> Sürekli ilk 4 saat aşağıdaki ameliyat için bilinçli ve her saatte kadar hayvanları izlemek. Analjezik ikinci bir dozunu vermek için ikinci bir sağlık kontrolü ameliyat (2-4 saat sonra) gecesini gerçekleştirin. </li><li> Hayvanlar kararlı görünen kadar prosedürü izleyerek ikinci günden sonra her gün hayvanları izleyin. </li></ol> Kalp Fonksiyonu ve Histoloji 8. Analiz <ol><li> MI Aşağıdaki hasarın boyutunu belirlemek için prosedür izlenerek fareler 4 hafta echocardiographs gerçekleştirin. </li><li> Inhalasyon anestezi indüksiyonu için bir anestezi odasının içinde% 4-5 izofluran ile fareler anestezi ve bakım anestezi için yüz maskesi aracılığıyla daha sonra% 2 izofluran. </li><li> Bir tüy dökücü krem ​​ile görüntüleme alanını temizleyin ve kalpte bir 2B M-mod ekokardiyografi tarama elde etmek için küçük bir hayvan ultrason kullanımı ve fonksiyonel parametreler asso kayıtonunla anılmaktadır. </li><li> Daha sonra 24 saat boyunca bir% 10 formalin çözeltisi içinde hayvanlar ve yerden kalpleri toplamak, bir karbon diyoksit odasında fareler öldürülür. 24 saat sonra,% 70 etanol kalpleri aktarmak ve doku işlenene kadar 4 ° C&#39;de tutun. </li><li> Kalpleri işlemek ve parafin bloklar onları gömmek. </li><li> Apeks başlayan ve atrium biten, kalbin ventriküler bölgesi boyunca 5 mm bölümleri kesin. </li><li> Leke Masson trikrom ve hematoksilen ve standart protokoller kullanılarak eozin leke hem dilimleri kesitli. </li></ol>

<ol><li>Kolk, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LAD-ligation%3A+a+murine+model+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">LAD-ligation: a murine model of myocardial infarction.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2009).</li>
<li>Li, Y., Yao, Y., Sheng, Z., Yang, Y., Ma, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-modal+tracking+of+transplanted+mesenchymal+stem+cells+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Dual-modal tracking of transplanted mesenchymal stem cells after myocardial infarction.</a> International journal of nanomedicine. 6, 815-823 (2011).</li>
<li>Nagaya, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+mesenchymal+stem+cells+improves+cardiac+function+in+rats+with+acute+myocardial+infarction+through+angiogenesis+and+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Heart+and+circulatory+physiology%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of mesenchymal stem cells improves cardiac function in rats with acute myocardial infarction through angiogenesis and myogenesis.</a> American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 287, H2670-H2676 (2004).</li>
<li>Wang, J. S., Shum-Tim, D., Chedrawy, E., Chiu, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coronary+delivery+of+marrow+stromal+cells+for+myocardial+regeneration%3A+pathophysiologic+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+thoracic+and+cardiovascular+surgery%22%5BJournal%5D)">The coronary delivery of marrow stromal cells for myocardial regeneration: pathophysiologic and therapeutic implications.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 122, 699-705 (2001).</li>
<li>Cashman, T. J., Gouon-Evans, V., Costa, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+for+cardiac+therapy%3A+practical+challenges+and+potential+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reviews%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells for cardiac therapy: practical challenges and potential mechanisms.</a> Stem cell reviews. 9, 254-265 (2013).</li>
<li>Sutton, M. G., Sharpe, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+ventricular+remodeling+after+myocardial+infarction%3A+pathophysiology+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Left ventricular remodeling after myocardial infarction: pathophysiology and therapy.</a> Circulation. 101, 2981-2988 (2000).</li>
<li>Smolina, K., Wright, F. L., Rayner, M., Goldacre, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival+and+recurrence+after+acute+myocardial+infarction+in+England%2C+2004+to+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation.+Cardiovascular+quality+and+outcomes%22%5BJournal%5D)">Long-term survival and recurrence after acute myocardial infarction in England, 2004 to 2010.</a> Circulation. Cardiovascular quality and outcomes. 5, 532-540 (2012).</li>
<li>Chan, V., Zorlutuna, P., Jeong, J. H., Kong, H., Bashir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+photopatterning+of+hydrogels+using+stereolithography+for+long-term+cell+encapsulation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+chip%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional photopatterning of hydrogels using stereolithography for long-term cell encapsulation.</a> Lab on a chip. 10, 2062-2070 (2010).</li>
<li>Kai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-loaded+nanofibrous+patch+promotes+the+regeneration+of+infarcted+myocardium+with+functional+improvement+in+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Stem cell-loaded nanofibrous patch promotes the regeneration of infarcted myocardium with functional improvement in rat model.</a> Acta biomaterialia. 10, 2727-2738 (2014).</li>
<li>Serpooshan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+bioengineered+acellular+collagen+patch+on+cardiac+remodeling+and+ventricular+function+post+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of bioengineered acellular collagen patch on cardiac remodeling and ventricular function post myocardial infarction.</a> Biomaterials. 34, 9048-9055 (2013).</li>
<li>Cavallo, L. M., Solari, D., Somma, T., Savic, D., Cappabianca, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Awake+Endoscope-Guided+Sealant+Technique+with+Fibrin+Glue+in+the+Treatment+of+Postoperative+Cerebrospinal+Fluid+Leak+After+Extended+Transsphenoidal+Surgery%3A+Technical+Note%5BTitle%5D)+AND+%22World+neurosurgery%22%5BJournal%5D)">The Awake Endoscope-Guided Sealant Technique with Fibrin Glue in the Treatment of Postoperative Cerebrospinal Fluid Leak After Extended Transsphenoidal Surgery: Technical Note.</a> World neurosurgery. , (2013).</li>
<li>Chung, H. W., Mehta, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+glue+for+Gundersen+flap+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrin glue for Gundersen flap surgery.</a> Clinical Ophthalmology. 7, 479-484 (2013).</li>
<li>Dunn, C. J., Goa, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+sealant%3A+a+review+of+its+use+in+surgery+and+endoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Drugs%22%5BJournal%5D)">Fibrin sealant: a review of its use in surgery and endoscopy.</a> Drugs. 58, 863-886 (1999).</li>
<li>Chi, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+repair+achieved+by+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%2Fsilk+fibroin%2Fhyaluronic+acid+patches+in+a+rat+of+myocardial+infarction+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Cardiac repair achieved by bone marrow mesenchymal stem cells/silk fibroin/hyaluronic acid patches in a rat of myocardial infarction model.</a> Biomaterials. 33, 5541-5551 (2012).</li>
<li>Erb, M. A., Claus, T., Hartrumpf, M., Bachmann, S., Albes, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+Tachosil+surgical+patch+or+fibrin+glue+in+coronary+artery+surgery+does+not+affect+quality+of+anastomosis+or+provoke+postoperative+adhesions+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+cardio-thoracic+surgery+%3A+official+journal+of+the+European+Association+for+Cardio-thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">The use of Tachosil surgical patch or fibrin glue in coronary artery surgery does not affect quality of anastomosis or provoke postoperative adhesions in pigs.</a> European journal of cardio-thoracic surgery : official journal of the European Association for Cardio-thoracic Surgery. 36, 703-707 (2009).</li>
<li>Okada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+treatment+for+rupture+of+left+ventricular+free+wall+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Interactive+cardiovascular+and+thoracic+surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical treatment for rupture of left ventricular free wall after acute myocardial infarction.</a> Interactive cardiovascular and thoracic surgery. 4, 203-206 (2005).</li>
<li>Simpson, D., Liu, H., Fan, T. H., Nerem, R., Dudley, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tissue+engineering+approach+to+progenitor+cell+delivery+results+in+significant+cell+engraftment+and+improved+myocardial+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">A tissue engineering approach to progenitor cell delivery results in significant cell engraftment and improved myocardial remodeling.</a> Stem Cells. 25, 2350-2357 (2007).</li>
<li>Jeong, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Living%27+microvascular+stamp+for+patterning+of+functional+neovessels%3B+orchestrated+control+of+matrix+property+and+geometry%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Living' microvascular stamp for patterning of functional neovessels; orchestrated control of matrix property and geometry.</a> Advanced Materials. 24, 58-63 (2012).</li>
<li>Wu, X., Ren, J., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+glue+as+the+cell-delivery+vehicle+for+mesenchymal+stromal+cells+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Fibrin glue as the cell-delivery vehicle for mesenchymal stromal cells in regenerative medicine.</a> Cytotherapy. 14, 555-562 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Fare MI modeline Bu yaklaşımla, diğer kemirgen MI teknikleri ile ilişkili olmayan miyokard alanlara zarar en aza indiren bir sistem geliştirdik. Bu alanlar trakeostomi yol açtığı hasarı, kas tabakasının kesilmesi, ve göğüs boşluğunu maruz kaburga kırılması sayılabilir. Biz bu değişikliklerin cerrahi işlem sırasında olduğu gibi, kaburga ve kas tabakaları dahil, önemli yapıların çok sağlam tutmak için alınan bakım genel cerrahi sonuç sayesinde artırmak inanıyoruz. </...

Bir miyokard enfarktüsü (MI) büyük bir koroner arter tıkanmasına neden olduğu kalp bölgeye kan kesintisiz olarak tanımlanır. Bir MI kaynaklanan hasar nedeniyle ya da daha spesifik olarak, sol ventrikül düzgün yenmek için kalp yeteneğini azaltır fonksiyonel olmayan skar dokusu içine canlı kalp dokusunun yeniden, etmektir. Bu vuruş hacmi olarak bilinir, her kalp atışı, ve ejeksiyon fraksiyonu 6 olarak bilinen her kalp atışında kalp dışarı pompalanır, bir kan yüzdesi, gövdeye teslim edilebilir kan hacminde bir azalma ile sonuçlanır. Bunlar, diğer azalmış fonksiyonları ile birlikte, yeterli işlevini korumak için kalbin geri kalanı üzerinde gerginlik artar. Ikinci bir kalp krizi, bireylerin 7 yaklaşık% 10&#39;unda görülen bir fenomen neden sık sık bu artış suş çok şiddetli olabilir. Tıbbi uygulamalar tedavisinde geliştiğini ikenBir MI hemen sonrasında, hiçbir teknik, yavaş, durdurmak veya doku yeniden olumsuz yan etkilerini tersine çevirmek için geliştirilmiştir. Kök hücre terapileri da umut verici etkisine karşın, bununla birlikte, böyle bir tedavi için, olası bir yol olarak ortaya çıkmıştır kök hücreler klinik başarılı kanıtlanmamıştır. Onların eksikliklerini bir teori yararlı hücreler olumlu sonuçlar üretmek için 5 yeterince uzun enfarktüsü yerinde kalmasını sağlamak için yetersizliğidir. Bu sadece enfarktüs sitesi içine enjekte edilir hücrelerin en fazla% 24 hayatta kaldı ve zarar görmüş Alanı 1 gün sonrası teslimat 2 de kaldığı gösterilmiştir. Hücre tutma, bu konuyu ele için olası bir ihtimal hücreleri veya hasarlı siteye teslim edilebilir terapötikleri ya saklanması biyouyumlu hidrojel sistemleri geliştirmektir. Bu protokolde seçim hidrojel nedeniyle hücre encapsulation pr önceki kullanımına bir poli (etilen glikol) dimetakrilattırocedures Bununla birlikte, kapsülleme yeteneğine sahip herhangi bir hidrojel 8 kullanılabilir. yaralanmanın sitesine yama dağıtım hücreleri yatan miyokard yararlı faktörler sağlayabilir süreyi artırmak, uzun bir zaman süresi boyunca hücreden doku teması sağlar. Yama yaklaşımına bir darboğaz kalp yüzeyine yapışan yama zorluğudur. Birçok grup teknikleri, kalp yüzeyine 9,10 için yapı kravat basit bir dikiş olmanın en yaygın çeşitli aracılığıyla bunun üstesinden gelmiş. Bu yapı, daha sert bir malzemeden imal edildiği durumlarda, bir dizi başarılı olduğu kanıtlanmıştır, ancak, yüksek su konsantrasyonu ve yama yapısının hassas doğası, bir hidrojel sistemi üzerinde çalışırken başarısız olmuştur. Bunun üstesinden gelmek için, biz pıhtı oluşumu kimyası taklit eden bir fibrin yapıştırıcı dış yapıştırıcı sistemini kullanmışlardır. Fibrin yapıştırıcı inc, çok sayıda tıbbi ameliyatlarında kullanılmaktadırBir yara dolgu 11-13 olarak ürünün biyouyumluluk vurgulayarak, dura gözyaşları, bronşiyal fistül ve kornea nakli luding. Buna ek olarak fibrin Bununla birlikte, kalp yama için bir yapışma yapıştırıcı olarak kullanımı yaygın olarak 14-17 kullanılmaz sol ventrikül kopmalar ve koroner arter by-pass ameliyatları cerrahi tedavisi de dahil olmak üzere kalp amacıyla, çeşitli kullanılmıştır. Kalp etkileşim yama sağlamak için uygun bir yapıştırma sisteminin sağlanması, harici kalp yama dışında doğrudan yerleştirilebilir, bir biyo-uyumlu yapıştırıcı Trombin ve fibrinojen sonuçları basit bir formülasyon.

<table><tbody><tr><td>Harvard Model 687 Fare Vantilatörü</td><td>Harvard Aparatı</td><td>55-0001</td><td></td></tr><tr><td>Inintech Biosciences LLC Kuru Cam Boncuk Sterilizatörü</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9531961</td><td></td></tr><tr><td>Leica MZ6 cerrahi mikroskop</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Koter Kiti</td><td>İkizler</td><td>GEM 5917</td><td></td></tr><tr><td>Hassas Forseps - 0,4 mm Uçlar Açılı</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>11063-07</td><td></td></tr><tr><td>Agricola Ekartör - 3,5 cm Yayılmış</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>17005-04</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı Makas - 2,5 mm Bıçaklar Düz</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo İğne Tutucu - Kilitli Tungsten Karbür 14 cm</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>İris Makası - Narin Düz 10,5 cm</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>14060-10</td><td></td></tr><tr><td>8-0 monofilament sütür</td><td>Ethicon</td><td>8730P</td><td></td></tr><tr><td>6-0 İpek sütür</td><td>Ethicon</td><td>639G</td><td></td></tr><tr><td>Trombin</td><td>Sigma</td><td>T7009</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinojen</td><td>Sigma</td><td>F3879</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond Doku Yapıştırıcısı</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr></tbody></table>

bir hidrojel construct ve fare miyokard enfarktüsü modeli therapeutics sunun için tutkal yaklaşım fibrin tabanlı.

A Hydrogel Construct and Fibrin-based Glue Approach to Deliver Therapeutics in a Murine Myocardial Infarction Model.

Murin MI modeli, kardiyovasküler hastalık alanında yaygın olarak tanınmaktadır ve in vivo1 tedavilerin etkinliğini test etmek için sürekli olarak ilk adım olarak kullanılmıştır. Geleneksel, yerleşik protokol, hayvana verilen zararı en aza indirmek için daha da ince ayarlanmıştır. Özellikle, pektoral kas tabakaları basitçe kesilmek yerine alay edilir ve göğüs kafesinin bütünlüğü korunarak sternotomide kaburgaları kırmak yerine torakotome interkostal olarak yaklaşılır. Bu değişikliklerle, hayvan üzerindeki genel stres azalır. 
MI'ların neden olduğu hasarı hafifletmeyi amaçlayan kök hücre tedavileri, pro-anjiyojenik ve anti-apoptotik faydaları nedeniyle yıllar içinde umut vaat etmiştir. Hücrelerin kalp yüzeyine iletilmesine yönelik mevcut yaklaşımlar tipik olarak hücrelerin ya hasarlı bölgenin yakınına, bir koroner arter içine ya da periferik kan dolaşımına2-4 enjekte edilmesini içerir. Hücrelerin hasarlı miyokarda ev sahipliği yaptığı kanıtlanmış olsa da, işlevsellik, yaralanma bölgesindeki zayıf aşılanmaları nedeniyle sınırlıdır ve bu da kan dolaşımınadifüzyonla sonuçlanır 5. Bu el yazması, hücre kapsüllü bir hidrojel yaması kullanılarak bu engelin üstesinden gelen bir prosedürü vurgulamaktadır. Yama cerrahi işlemden önce üretilir ve sol koroner arterin tıkanmasını hemen takiben yaralı miyokard üzerine yerleştirilir. Yamayı yerine yapıştırmak için, biyouyumlu dış fibrin yapıştırıcısı doğrudan yamanın üzerine yerleştirilir ve hem yamanın hem de kalp yüzeyinin kurumasına izin verilir. Bu yaklaşım, hassas bir hücre kapsülleyici terapötik yapının uygulanması için yeni bir yapışma yöntemi sağlar.

Cerrahi işlem sırasında, sol koroner arter ligasyonu bir Tıkalı arterin alt beyazlatma işaretlenmiş tarafından tespit edilebilir. Düğüm atarak önce bir test olarak, dikiş uygun yerde olup olmadığını kontrol etmek için kısa bir süre sıkılır olabilir. Ayrıca, düzgün yenmek için sol atrium yeteneği neredeyse anlık azalma arter sonuçlarının tıkanması beri, sol atrium sisteminde kan geri akışının cevaben büyütmek olacaktır. M-mod ekokardiyografi ölçümleri sonrası enfarktüs kas yeniden göstergesid...

Bu protokol, miyokard enfarktüslerinin kök hücre tedavisi için bir hidrojel sistemi ve fibrin bazlı bir yapıştırıcı kullanılarak zayıf hücre aşılamasının sınırlamasını hafifletmeyi amaçlamaktadır. Bu yaklaşımla, enfarktüs sonrası hücreden dokuya temas korunabilir ve bu da yaralanma bölgesindeki faydalı ajanların terapötik potansiyelini artırır.

Bir Hidrojel Construct ve Fare Miyokard Enfarktüsü Modeli Therapeutics sunun için Tutkal Yaklaşım Fibrin tabanlı.

The murine MI model is widely recognized in the field of cardiovascular disease, and has consistently been used as a first step to test the efficacy of ...

Bu prosedürün genel amacı, miyokard enfarktüsü sonrası meydana gelen hasarı minimize etmek amacıyla terapötik bir hidrojel yamayı kalp yüzeyine transfer etmektir. Bu işlem, öncelikle torakotomi ile kalp yüzeyinin açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, miyokard enfarktüsü oluşturmak için sol koroner artere küçük bir sütür düğümü yerleştirilir.Ardından, terapötik hidrojel yama bir fibrin yapıştırıcı ile kalp yüzeyine sabitlenir ve ardından göğüs boşluğu kapatılır. Son olarak, bu girişimsel tekniklerin varlığında ve yokluğunda meydana gelen kalp yapısı ve fonksiyonundaki değişiklikleri değerlendirmek için histolojik analiz ve küçük hayvan ekokardiyografisi kullanılır. Bu yöntem, kalp fonksiyonlarını iyileştirmek için hangi hücre sayısının ve iletim yöntemlerinin gerekli olduğunun belirlenmesi gibi, kök hücre mühendisliği alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Miyokard enfarktüsü sonrası, bu yöntem miyokard enfarktüslerine yönelik tedaviler hakkında bilgi sağlamak için kullanılsa da, arka bacak iskemi modeli gibi diğer doku mühendisliği ve revaskülarizasyon sistemleri için de kullanılabilir. Anestezize edilmiş sağlıklı bir fareyi entübasyon standına yerleştirip göğüs boşluğuna bir ışık kaynağı yönlendirerek başlayın.Ardından, larenks yüzeyini geri çekmek ve vokal kordları açığa çıkarmak için pens kullanın. Daha sonra, 20 gauge bir anjiyo kateteri vokal kordların arasından dikkatlice yönlendirin ve trakeaya yumuşak bir şekilde yerleştirin.Kateteri küçük hayvan ventilatörüne bağlayın ve kateterin doğru yerleştiğini onaylamak için göğüs boşluğunu mekanik olarak bir kez hareket ettirin. Ardından, hipotermiyi önlemek için hayvanı bir ısıtıcı ped üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Cerrahi bölgedeki tüyleri temizlemek için depilatuar krem kullanın ve ardından Betadine ve %75 ethanol ile ardışık olarak üç kez sterilizasyon işlemi uygulayın. Yerleştirin.İşlem sırasında kurumayı önlemek için hayvanın gözlerine veteriner pomadı sürün ve ardından cerrahi alanı örtün. Şimdi, sternumun yaklaşık bir santimetre solundan başlayan ve tüm uzunluğu boyunca ilerleyen bir cilt insizyonu yaparak cerrahi prosedüre başlayın. Pectoralis major'u temsil eden belirleyici hattı bulun ve kası, altındaki external oblique kasından ayırmak için pens yardımıyla hafifçe kaldırın.Kası mediale doğru retraksiyonla çekin. Eksternal oblik kası, benzer şekilde ancak lateral retraksiyonla alttaki göğüs kafesinden serbestleştirin. Bu işlem, ikinci, üçüncü ve dördüncü kaburgaların önündeki engeller kalkmış bir şekilde görülmesini sağlar.Dördüncü kaburgayı nazikçe kaldırın ve üçüncü ile dördüncü kaburgalar arasında göğüs boşluğunu açmak için bir koter kullanın. Ardından, boşluğu daha fazla açmak için ekartörler yerleştirin; pens yardımıyla kalbi açığa çıkarın, perikardiyumu yırtın ve ardından sol koroner arteri, kalbin apeksinden yaklaşık dört milimetre uzaklıkta, sol atriumun alt ucunun hemen altından sekiz sıfır monofilaman naylon sütür ile bağlayın. Sütür doğru yerleştirildiyse, ventriküler miyokardda bir beyazlaşma ve sol atriumun boyutunda bir artış gözlemlenecektir.Yamayı yerleştirmek için, düz uçlu bir spatula kullanarak hidrojeli kalbin yüzeyinde enfarktüs bölgesine nazikçe konumlandırın. Bir asistan yapıştırıcıyı yaklaşık bir dakika boyunca hızla karıştırırken, spatulayı kullanarak yamayı hafifçe yerinde tutun. Yapıştırıcı istenen viskoziteye ulaştığında, yaklaşık 10 microliters miktarı hızla yama yüzeyine aktarın.Ardından, kaburga tabakasını kapatmak için üç ila dört adet ayrı kesintili 6-0 monofilaman naylon sütür kullanın. İnterkostal tabakayı kapatmadan önce, insizyon bölgesine bir PE 10 kanül yerleştirin. Sonrasında, pektoral kasları üç ila dört adet ayrı kesintili sütür ile kapatın.Deri tabakasını sürekli bir sütürle kapatın ve kanülün ucuna bir mililitrelik bir şırınga takın. Son olarak, göğüs boşluğunu tahliye edin, kapatma işleminden sonraki altı ila sekiz saat içinde cerrahi sonrası analjezi uygulayın ve hayvan tamamen iyileşene kadar takip edin; enfarktüs sonrası ikinci gün kadar erken yapılan mod ekokardiyografi ölçümleri, kas yeniden yapılanmasını gösteren sol duvar hareketinin durmasını sergiler. Verilerden elde edilen kalitatif hesaplamalar, enfarktüslü kalplerde ejeksiyon fraksiyonu ve atım hacminde bir azalma olduğunu göstermektedir.Sağlıklı ve enfarktüs geçirmiş kalplerin histolojik analizi, enfarktüs geçirmiş miyokardda gözlenen sol ventrikül dilatasyonunu ve sol ventrikül duvarının incelmesini ortaya koymaktadır. Her iki durum da doku yeniden şekillenmesinin ve skar dokusu birikiminin belirtileri olduğundan, fibrin yapıştırıcının miyokarda zarar vermemesi nedeniyle yamanın uygulanması, enfarktüs tedavisi için yararlı bir terapötik yaklaşımdır. Nitekim, hem kardiyak yamanın hem de beraberindeki yapıştırıcının eklenmesine rağmen, uygulama bölgesinde herhangi bir doku yeniden şekillenmesi veya ventriküler incelme gözlenmemiştir ve kardiyomiyositler bütünlüğünü korumuştur.Ek olarak, canlılık testi, hücre kapsülleyen hidrojel yamanın dış yüzeyine yapıştırıcı uygulanmasının yama içindeki hücre sağkalımını etkilemediğini doğrulamaktadır. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, işlem doğru şekilde gerçekleştirilirse 30 ila 40 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, yamanın sert yüzeye uygun şekilde yapışmasını sağlamak için fibrin yapıştırıcısının uygulama zamanlamasına dikkat etmek önemlidir.

a-hydrogel-construct-fibrin-based-glue-approach-to-deliver

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Enjektabl bir matris jel decellularized doku hazırlanması ve sıçan miyokardın içine enjekte...

Miyokard Doku Mühendisliği Biyolojik Türetilmiş Enjektabl Malzeme imalatı

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Biz yenidoğan kardiyomiyositlerde izolasyonu ve doku mühendisliği için fibrin hidrojel yapıları kapsülleme hücrelerin hazırlanması açıklar. Biz elektrik stimülasyonu ve hücre canlılığı ve immünohistolojik boyama üzerine oluşturulan etkin bir güç de dahil olmak üzere kültür süre sonra doku mühendislik miyokardın analiz yöntemleri açıklanmaktadır.

Kalp Doku Mühendisliği Fibrin Hidrojel kardiyomiyositlerinin Kapsülleme

Bu protokol çevreleyen hücre dışı matriks gelen ipucu almak ve birden fenotipleri farklılaşması için indüklenebilir kök hücrelerin doğal yeteneği kullanılmasına odaklanmıştır. Bu yöntemler yazının aynı anda yağ kaynaklı kök hücreleri birlikte ayırt etmek için, PEG-fibrin ve kollajen oluşan iki katmanlı hidrojel kullanan bir model, bizim ve nitelendirilmesi...

ASC farklılaşma kontrol için bir iki tabakalı Hidrojel mühendislik

Bu model sistem bir tahribatsız şekilde endojen kolajen (yeniden) organizasyonu gerçek zamanlı çalışma için kullanılabilecek bir miyofibroblast nüfuslu fibrin jel başlar. Bu model sistemi, farklı hücre kaynakları, orta katkı maddeleri ile birlikte kullanılabilir gibi çok ayarlanabilir, ve özel ihtiyaçlarına göre kolay bir şekilde adapte edilebilir.

Mühendislik Fibrin tabanlı Doku miyofibroblastlar ve Kısıtlar Uygulamasından Yapıları ve Hücre ve Kollajen (Re) Organizasyon tetikleyebilecek süzün

Bir kemirgen modelinde, LAD ligasyonu ile uyarılmış miyokardiyal enfarktüsü tedavi etmeye yönelik bir biograft implantasyonu, geleneksel olarak iki açık kalp ameliyatı gerektirmiştir. Ölümlerini azaltmak ve hücreleri ile ilişkili solid ve jelatinli biyolojik matrisler tespiti için en uygun koşulları sağlamak amacıyla, minimal invaziv prosedürler geliştirilmiştir.

Rat Kalp Yetmezliği Hücre Terapisi: Miyokard İnfarktüsü için çift Torakotomi ve Hücreleri ile BioMatrix arasında Epikardiyal implantasyonu

Minimal invaziv manipülasyonlara sahip farelerde miyokard enfarktüsü için yüksek oranda tekrarlanabilir bir model tanımlanmıştır. Model kolayca gerçekleştirilebilir, bu da yüksek tekrarlanabilirlik ve hayatta kalma oranı ile sonuçlanır. Bu nedenle, açıklanan model, 3R ilkesinin (Değiştirme, İyileştirme ve İndirgeme) talep ettiği gibi gerekli hayvan sayısını azaltacaktır.

Farelerde Miyokard İnfarktüsü Oluşturan Minimal İnvaziv Cerrahi Prosedür

Üredo-pyrimidinones dayalı Molekülüstü hydrogelators makroskopik jel özellikleri ve pH değeri kullanılarak sol-jel anahtarlama davranışı üzerinde tam kontrol sağlar. Burada, domuz kalbi ilgili alanlarda doğrudan lokal uygulama için bir kateterle dağıtım sistemi yoluyla bir supramoleküler hydrogelator oluşturulması ve enjekte edilmesi için bir protokol mevcut.

Domuz Kalbe Yerel Kateter Enjeksiyon için bir Enjekte ve İlaç yüklü Supramoleküler Hidrojel

Bu protokol, MRI ile bütün kalp miyokard dokusu 3D karşılaştırmak için yeni bir yöntem tarif eder. Bu miyokard enfarktüsü, kronik domuz modelinde enfarktüs sınır bölgesinde intramiyokardiyal enjeksiyonları tam olarak değerlendirilmesi için tasarlanmıştır.

3D Tüm kalp Miyokard Doku Analizi

Bu protokol, kalp yetmezliği ni modelleyen enfarktan farelerin epikardiyumuna 3Boyutlu biyobaskılı bir yama naklini amaçlamaktadır. Anestezi, cerrahi göğüs açıklığı, sol anterior inen kalıcı ligasyon (LAD) koroner arter ve kalbin enfarktüs bölgesine biyobbaskılı bir yama uygulaması ile ilgili ayrıntıları içerir.

Miyokard Enfarktüsü'nün Murine Modelinde 3Boyutlu Biyobaskılı Yama Transplantasyonu

Kök hücre bazlı tedavi, miyokard enfarktüsünden sonra yaralı kalp dokularını onarmak için etkili bir strateji olarak ortaya çıkmıştır. Enzmatik olarak çapraz bağlanabilen jelatin hidrojelleri kullanarak kök hücre nakli için en uygun in vivo uygulamayı sağlıyoruz.

Murine Modelinde Miyokard İnfarktüsünden Sonra MSC Yüklemeli Enjekte Edilebilir Hidrojellerin intramiyokardiyal Transplantasyonu

Öğrenin miyokard enfarktüsü sonrası hasarı azaltmak için fibrin yapıştırıcı ile hidrojel yama uygulamasını. Bu yöntem fare kalbinde hücre yerleşimini artırarak rejeneratif tedavi potansiyelini güçlendirir.

Bir Hidrojel Construct ve Fare Miyokard Enfarktüsü Modeli Therapeutics sunun için Tutkal Yaklaşım Fibrin tabanlı.

Daha fazla video keşfet