Name: Yumuşak Agar koloni oluşturma deneyi kullanılması Meme Kanseri Hücrelerinde tümör oluşum nedenlerinin nin inhibitörlerini teşhis etmek üzere (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Öğrenin meme kanseri hücrelerinde tümör oluşumunu yumuşak agar koloni oluşturma deneyi ile değerlendirmeyi. BB-Cl-amidine ile PADI enzim inhibitörlerinin etkisini in vitro ortamda nicel olarak ölçün.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Teknik tavsiyeler verdikleri için Cornell Üniversitesi'nden Dr. Richard Cerione, Dr. Marc Antonyak ve Kelly Sullivan'a ve Olympus CKX41 ters mikroskoplarını paylaştıkları için Cornell Üniversitesi'nden Dr. Gerlinde Van de Walle'ye minnettarız.

% 3 2-Hidroksietil Agaroz hazırlanması 1. <ol><li> Temiz ve kuru bir 100 ml&#39;lik cam şişe içine, damıtılmış su, 30 ml, ardından 2-hidroksietil agaroz (Agaroz VII) 0.9 g. </li><li> 15 saniye hafifçe için karışım girdap mikrodalga. Agaroz tozu tamamen eriyene kadar bu adımı en az üç kez daha tekrarlayın. </li><li> 15 dakika için çözelti içeren bir şişe otoklava. </li><li> Agaroz çözüm daha kullanımdan önce oda sıcaklığına kadar soğumasını bekleyin. Oda sıcaklığında çözelti saklayın. </li></ol> Alt Katman 2. Hazırlık:% 0.6 Agaroz Jel <ol><li> Tutarken pipet katılaşmasını agaroz önlemek için 5 ml 37 ° C kuluçka makinesi içinde 10 mi pipetler önceden sıcak birçok. </li><li> Kısmen şişe kapağı ve mikrodalga 15 saniye önceden yapılmış% 3 2-hidroksietil agaroz çözümü gevşetin. Daha sonra, yumuşak bir 15 sn için çözelti ve mikrodalga girdap. DİKKAT: Agaro dönen dikkatli olunse çözümü çözüm havaya maruz ve yayılabilir zaman yükselir çünkü. </li><li> Şişede kalan katı jel, birkaç saniye mikrodalga varsa. </li><li> Erken katılaşmasını agaroz çözüm önlemek için bir sonraki adımları sırasında 45 ° C su banyosunda agaroz solüsyon içeren şişe tutun. </li><li> 37 ° C su banyosu içinde sıcak MCF10DCIS ortamı. Not: MCF10DCIS ortam DMEM / F12,% 5 at serumu,% 5 penisilin streptomisin oluşur. </li><li> Aktarım steril 50 ml konik bir tüp içine önceden ısıtılmış pipetler kullanılarak% 3 agaroz çözeltisi 3 mi. </li><li> Hemen sıcak MCF10DCIS medya 12 ml ekleyin ve hafifçe medya ile agaroz karıştırmak için konik tüp ters. Bu koloni sonradan sayım engel olacak herhangi bir kabarcıkları oluşturmak için çalışın. </li><li> Yavaşça hava kabarcıklarını oluşturucu olmayan bir 6-yuvalı kültür plakasının her bir oyuğuna, bu karışım 2 ml ekleyin. </li><li> 6-çukurlu kültür plakası Horizonta inkübelly, 1 saat boyunca 4 ° C &#39;de, düz bir yüzeye karışımın sertleşmesine izin vermek. </li><li> Karışım katılaşmasından sonra, 30 dakika boyunca 37 ° C inkübatör içine plaka yerleştirin. alt tabaka artık kullanıma hazırdır. </li></ol> Hücre içeren katmanın 3. hazırlanması:% 0.3 agaroz jel <ol><li> Trypsinize MCF10DCIS hücreler 4 x 10 4 / ml&#39;lik bir hücre konsantrasyonuna seyreltilmesi ve. </li><li> Bir steril 50 ml konik bir tüp içine önceden ısıtılmış pipetler ve transferi ile% 3 agaroz 2 ml alın. </li><li> Hemen konik tüp MCF10DCIS medya 8 ml ekleyin ve hafifçe medya ile agaroz karıştırmak için ters. Herhangi kabarcıkları oluşturan kaçının. </li><li> (0 uM (DMSO) ya da 1 uM) MCF10DCIS hücreleri (4 x 10 4 / ml) 2 ml alın ve BB-CLA ile tedavi edilir. </li><li> Bir 1: 1 seyreltme,% 0.6 agaroz ile hücrelerin karışımı. </li><li> Hücre-agaroz karışımının 1 ml alın ve yavaşça 6 oyuklu kültür p alt tabakanın üzerine eklemekGeç (2 x 10 4 hücre / ml). </li><li> Üst tabaka katılaşmaya izin vermek için en az 15 dakika boyunca 4 ° C &#39;de, düz bir yüzeye yatay 6 oyuklu kültür plakasına yerleştirin. </li><li> Karışım katılaşmasından sonra, besleme tabakanın ilave edilmeden önce bir hafta boyunca 37 ° C inkübatör içine plaka yerleştirin. </li></ol> Besleyici Katman 4. Hazırlanması:% 0.3 Agaroz Jel <ol><li> Mikrodalga 15 saniye önceden yapılmış% 3 2-Hidroksietil agaroz çözüm. yavaşça başka bir 15 saniye için çözüm ve mikrodalga girdap. </li><li> 45 ° C su banyosu içinde agaroz çözelti şişe dengelenmesi. </li><li> 37 ° C su banyosunda MCF10DCIS medyayı ısıtın. </li><li> 50 ml konik bir tüp içine, sıcak MCF10DCIS ortam 9 ml% 3 agaroz çözeltisi 1 ml karıştırın ve yavaşça ortam ile agaroz karıştırmak için ters. Hava kabarcıkları oluşturarak kaçının. </li><li> BB-CLA ile karışım (0 uM (DMSO) ya da 1 uM) tedavi edin. </li><li> Yavaşça için olmayan (bu karışıma 1 ml ekleMing alt ve yumuşak tabakalar ihtiva eden 6 oyuklu kültür plakasının her oyuğuna) kabarcıklar. </li><li> Karışım, katılaşmaya izin vermek için en az 15 dakika boyunca 4 ° C &#39;de, düz bir yüzeye yatay 6 oyuklu kültür plakasına yerleştirin. </li><li> Besleyici tabakası katılaşır sonra, 37 ° C inkübatör içine plaka yerleştirin. </li><li> Koloni oluşumu gözlenir kadar yeni medya ile hücreleri doldurmak için mevcut besleyici tabakası üzerine% 0.3 agaroz / orta / işleme çözeltisinin 1 ml kaplayan bu beslenme prosedürü haftalık tekrarlayın. Not: Agar yumuşak ve besleyici tabakalar bundan dolayı, besleyici tabaka ile ilgili ilave besinler kolaylıkla hücreler ulaşmak için hücre içeren bir tabaka halinde yayılır, çok yumuşak ve. </li></ol> 5. Veri Toplama <ol><li> Yumuşak agar içinde hücre büyümesinin 2.5 hafta sonra, her bir göze, bir ışık mikroskobu kullanarak koloni sayısı. Ölçümü kolaylaştırmak için, bir şeffaflık üzerine ızgara yazdırmak ve ızgara takmak6-plaka hücreleri sayma sırasında nerede bulmanıza yardımcı olmak için. (Her koloninin çapı ile miktarı gibi) koloni büyüklüğü değişebilir olduğundan, atılır olan koloniler belirlemek için bir referans koloni boyutunu önceden tanımlamak. Örneğin, 70 mikron ya da veri analizinde büyük bir koloni boyutları içerir. </li><li> Daha fazla koloni oluşumunu ve gelecekteki sayım önlemek için 4 ° C&#39;de örnekleri saklayın. Kurumasını önlemek için jeller Parafilm ile 6-kuyu kültür plaka Seal. </li></ol>

<ol><li>Hamburger, A. W., Salmon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bioassay+of+human+tumor+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Primary bioassay of human tumor stem cells.</a> Science. 197, 461-463 (1977).</li>
<li>Wang, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+signaling+regulating+anchorage-independent+growth+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mt+Sinai+J+Med%22%5BJournal%5D)">Molecular signaling regulating anchorage-independent growth of cancer cells.</a> Mt Sinai J Med. 71 (6), 361-367 (2004).</li>
<li>Vossenaar, E. R., Zendman, A. J., van Venrooij, W. J., Pruijn, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAD%2C+a+growing+family+of+citrullinating+enzymes%3A+genes%2C+features+and+involvement+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">PAD, a growing family of citrullinating enzymes: genes, features and involvement in disease.</a> Bioessays. 25 (11), 1106-1118 (2003).</li>
<li>Horibata, S., Coonrod, S. A., Cherrington, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+for+peptidylarginine+deiminase+enzymes+in+disease+and+female+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Role for peptidylarginine deiminase enzymes in disease and female reproduction.</a> J Reprod Dev. 58 (3), 274-282 (2012).</li>
<li>Mohanan, S., Cherrington, B. D., Horibata, S., McElwee, J. L., Thompson, P. R., Coonrod, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+role+of+peptidylarginine+deiminase+enzymes+and+protein+citrullination+in+cancer+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Potential role of peptidylarginine deiminase enzymes and protein citrullination in cancer pathogenesis.</a> Biochem Res Int. , 895343(2012).</li>
<li>McElwee, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+PADI2+as+a+potential+breast+cancer+biomarker+and+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Identification of PADI2 as a potential breast cancer biomarker and therapeutic target.</a> BMC Cancer. 12, 500(2012).</li>
<li>Knight, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptidylarginine+deiminase+inhibition+disrupts+NET+formation+and+protects+against+kidney%2C+skin+and+vascular+disease+in+lupus-prone+MRL%2Flpr+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Peptidylarginine deiminase inhibition disrupts NET formation and protects against kidney, skin and vascular disease in lupus-prone MRL/lpr mice.</a> Ann Rheum Dis. , 1-8 (2014).</li>
<li>Miller, F. R., Santner, S. J., Tait, L., Dawson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MCF10DCIS.com+xenograft+model+of+human+comedo+ductal+carcinoma+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">MCF10DCIS.com xenograft model of human comedo ductal carcinoma in situ.</a> J Natl cancer Inst. 92, 1185-1186 (2000).</li>
<li>Fan, D., Morgan, L. R., Schneider, C., Blank, H., Fan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+evaluation+of+human+tumor+chemosensitivity+in+the+soft-agar+assay+and+its+clinical+correlations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Res+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Cooperative evaluation of human tumor chemosensitivity in the soft-agar assay and its clinical correlations.</a> J Cancer Res Clin Oncol. 109, 23-28 (2000).</li>
<li>Hamburger, A. W., White, C. P., Dunn, F. E., Citron, M. L., Hummel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+human+tumor+colony+growth+in+soft+agar+by+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cell+Cloning%22%5BJournal%5D)">Modulation of human tumor colony growth in soft agar by serum.</a> Int J Cell Cloning. 1 (4), 216-229 (1983).</li>
<li>Anderson, S. N., Towne, D. L., Burns, D. J., Warrior, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+soft+agar+assay+for+identification+of+anticancer+compound%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A high-throughput soft agar assay for identification of anticancer compound.</a> J Biomol Screen. 12, 938-945 (2007).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

yumuşak agar içinde koloni oluşumu oranı hücre tipi 9 bağlı olarak değişir. Bu nedenle, hücre sayısı optimize edilmiş ve buna uygun olarak ayarlanmalıdır ile başlayın. Önerilen bir başlangıç ​​aralığı oyuk, 6 oyuklu plaka kullanılarak göz başına 4 ila 10 x 02-1 Ekim x 5 arasındaki hücreleridir. Buna ek olarak, koloni büyüklüğü her bir hücrenin büyüme hızına bağlı olarak değişir. Bu nedenle, koloni boyutu için önceden tanımlanmış bir cut-off aşağı kantitatif analizler için bireysel koloni...

Hem dönüşmemiş (normal) hem de dönüştürülmüş hücreler, 2B tek katmanlı bir kültürde kolayca çoğalabilir. Bu yapışık hücre büyümesi biçimi, mitojenik stimülasyonun yokluğunda hücrelerin genellikle mikro çevreleri içinde hızlı bir şekilde bölünmediği in vivo olarak meydana gelenden oldukça farklıdır. Öte yandan yumuşak agar testi, 2D kültür sistemlerinden farklıdır, çünkü bir hücrenin yarı katı bir agaroz jel1 içinde süspansiyon halinde çoğalma ve koloniler oluşturma yeteneğini ölçerek tümörjeniteyi ölçer. Bu ortamda, transforme olmamış hücreler, hücre dışı matrikse (ECM) ankraj yokluğunda hızla çoğalamaz ve anoikis olarak bilinen bir süreç olan apoptoza maruz kalırlar. Buna karşılık, malign transformasyon geçiren hücreler, fosfatidilinositol 3-kinaz (PI3K)/Akt ve Rac/Cdc42/PAK gibi sinyal yollarının aktivasyonu nedeniyle ankraj bağımlılıklarını kaybederler. Bu nedenle, bu hücreler yarı katı yumuşak agar matrisi2 içinde büyüyebilir ve koloniler oluşturabilir.
Yumuşak agar testinin yaygın bir kullanımı, PADI inhibitörleri gibi spesifik bileşiklerin in vitro tümör büyümesini baskılayıp baskılayamayacağını test etmektir. Genel olarak, koloni sayısı veya koloni boyutları, hücresel tümörjenisitedeki farklılıkları değerlendirmek için kontrol ve tedavi grupları arasında karşılaştırılabilen testten elde edilen kantitatif okumalardır. Bu nedenle, koloni oluşumunun artan ilaç konsantrasyonu ile ters orantılı olduğu bulunursa, ilacın in vitro olarak etkili bir tümörjenisite inhibitörü olduğu sonucuna varılabilir. Öte yandan, ilaç koloni oluşumunu etkilemiyorsa, ilaç ya uygun dozda değildir ya da etkili bir tümörjenik inhibitör değildir. Bir ilacın anti-tümör etkisini test etmek için yumuşak bir agar testi kullanmanın yanı sıra, bu test aynı zamanda belirli bir gen ile tümör oluşumu arasındaki ilişkiyi araştırmak için de kullanılabilir. Örneğin, PADI2 ekspresyonunun baskılanmasının tümörjenite üzerindeki etkisi, PADI2'ye özgü siRNA tedavisi ile ele alınabilir.
PADI'ler, sitrülinasyon veya deimination3-5 olarak bilinen bir işlemde pozitif yüklü arginin kalıntılarını nötr yüklü sitrüline dönüştürerek proteinleri translasyon sonrası olarak değiştiren kalsiyuma bağımlı enzimlerdir. Yakın zamanda peptidilarginin deiminaz 2'nin (PADI2) yeni bir meme kanseri biyobelirteç olarak işlev görebileceğini ve PADI inhibitörlerinin erken evre meme kanserleri için aday tedavileri temsil ettiğini bulduk6. Örneğin, daha önce bir "pan-PADI" inhibitörü olan Cl-amidin'in 2D tek tabakalar kullanarak meme kanseri hücrelerinin çoğalmasını baskıladığını ve inhibitörün 3D tümör sferoidlerinin büyümesini baskıladığınıgöstermiştik 6. Bu raporda, bu çalışmaları genişletiyoruz ve yeni bir PADI inhibitörü olan BB-CLA'nın MCF10DCIS meme kanseri kolonilerinin büyümesini baskılamadaki etkinliğini test ederek yumuşak agar testinin faydasını vurguluyoruz7. Bu deney için MCF10DCIS hücreleri kullandığımızı not ediyoruz, çünkü bunlar transforme edilmemiş insan MCF10A hücrelerinin onkojenik türevleridir ve yüksek kararlı durum PADI2 protein8 seviyeleri içerdikleri için. PADI2 enzimatik aktivitesinin bu hücre hattının tümörjenisitesinde anahtar bir rol oynadığını ve PADI2 aktivitesinin BB-CLA aracılı inhibisyonunun kanser ilerlemesini baskılayacağını varsayıyoruz.

<table><tbody><tr><td>Zeiss Axiopot Carl</td><td>Zeiss Mikroskopi</td><td>1021859251</td><td></td></tr><tr><td>Ters Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Lonza BioWhittaker</td><td>12-719F</td><td></td></tr><tr><td>HyClone Donör At Serumu</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH30074.03</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>2-Hidroksietilagaroz: Tip VII, düşük jelleşme sıcaklığı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>39346-81-1</td><td></td></tr></tbody></table>

yumuşak agar koloni oluşturma deneyi kullanılması meme kanseri hücrelerinde tümör oluşum nedenlerinin nin inhibitörlerini teşhis etmek üzere

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Tümör ilerlemesinin mekanizmalarını in vivo olarak araştırmadaki doğal zorluklar göz önüne alındığında, hücrelerin yarı katı matrislerde çoğalma yeteneğini ölçen yumuşak agar koloni oluşumu testi (bundan böyle yumuşak agar testi olarak anılacaktır) gibi hücre bazlı tahliller, kanser araştırmalarının ayırt edici özelliği olmaya devam etmektedir. Bu tekniğin konvansiyonel 2D tek tabakalı veya 3D küresel hücre kültürü tahlillerine göre önemli bir avantajı, 3D hücresel ortamın in vivo olarak görülene yakın taklididir. Daha da önemlisi, yumuşak agar testi, yeni bileşiklerin veya tedavi koşullarının hücre çoğalması ve göçü üzerindeki etkilerini titizlikle test etmek için ideal bir araç sağlar. Ek olarak, bu tahlil, genetik bozulmalar bağlamında hücre dönüşüm potansiyelinin kantitatif değerlendirmesini sağlar. Yakın zamanda peptidilarginin deiminaz 2'yi (PADI2) potansiyel bir meme kanseri biyobelirteç ve terapötik hedef olarak tanımladık. Burada, PADI inhibitörü BB-Cl-amidinin (BB-CLA) insan duktal karsinomu in situ (MCF10DCIS) hücrelerinin tümörjenitesi üzerindeki etkilerini test ederek klinik öncesi anti-kanser çalışmaları için yumuşak agar testinin faydasını vurguluyoruz.

yumuşak agar koloni oluşturma deneyi kanser hücrelerinin tümör oluşum nedenlerinin belgeleyen çok geniş bir uygulama aralığı için kullanılabilir. Bu tekniğin önemli bir avantajı, yan-katı bir matris seçici bir ankrajdan bağımsız bir şekilde prolifere olabilir hücrelerin büyümesini yana olmasıdır. Bu özellik esas olarak, kanser hücreleri tarafından değil, normal hücreler tarafından sergilenir. Öncelikle ilaçlar ile tümör büyüme inhibisyonu etkinliğini test etmek için, meme kanseri hücrelerinin bedenindeki, aşırı ekspresy...

Burada, bir peptidilarginin deiminaz (PADI) enzim inhibitörü olan BB-Cl-amidin'in in vitro meme kanseri tümörjenitesi üzerindeki etkilerini test etmek için yumuşak agar koloni oluşumu testinin kullanımını belgeliyoruz.

Yumuşak Agar koloni oluşturma deneyi kullanılması Meme Kanseri Hücrelerinde tümör oluşum nedenlerinin nin inhibitörlerini teşhis etmek üzere

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Bu prosedürün genel amacı, hücrelerin yarı katı matrislerde proliferasyon yeteneği üzerindeki tedavi etkisini nicel olarak belirlemektir; çünkü artırılmış proliferasyon yeteneği, hücrelerin tümörjenikliğinin belirgin bir özelliğidir. Yumuşak agar testi kullanılarak tümörjeniklik, hücrelerin yarı katı bir AROS jel içerisinde koloni oluşturma yeteneği aracılığıyla ölçülür. Transforme olmamış hücreler bu ortamda hızla çoğalamadığı için, yarı katı AROS jel önce %0,6 AROS alt tabakası oluşturularak hazırlanır. Ardından, alt tabakanın üzerine hücre içeren %0,3 AROS jel tabakası eklenir.Bu deneyde, deneysel hücreler Dr. Subramanian tarafından geliştirilen bir peptidil arginin deiminaz (pad) enzim inhibitörü ile işleme tabi tutulur. Her hafta, işlem uygulanmış veya uygulanmamış 0,3% agar jelinden oluşan ek bir besleme katmanı eklenir. Son adım, analiz için 70 micrometers'dan büyük koloni sayısının belirlenmesidir.Son olarak, kontrol ve tedavi grubu arasındaki koloni sayısı farkını göstermek için ters mikroskop kullanılır. Merhaba, ben Achi Huta. Baker Hayvan Sağlığı Enstitüsü'nde Dr. Scott Kros'un laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim.Cornell Üniversitesi'nde, yumuşak kaplan kolonisi olu

utilization-soft-agar-colony-formation-assay-to-identify-inhibitors

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, bir PADI enzim inhibitörü ve BB-Cl-amidin'in in vitro meme kanseri tümörjenitesi üzerindeki etkilerini test etmek için bir yumuşak agar koloni oluşumu testi açıklanmaktadır. Bu test aynı zamanda genetik bozulmalar bağlamında hücre dönüşüm potansiyelinin kantitatif değerlendirmesini de sağlar.

Yumuşak Agar Koloni Oluşumu Deneyi: Yeni Bileşiklerin Kanser Hücresi Proliferasyonu Üzerindeki Etkilerini Test Etmek İçin Bir Yöntem

Bu videoda, akciğer kanseri hücrelerinin süresiz olarak çoğalma ve bireysel koloniler oluşturma yeteneğini belirlemeye yardımcı olan koloni oluşumu testi açıklanmaktadır. Bir antikanser ajanının koloni oluşturan hücreler üzerindeki etkisini, ortaya çıkan kolonilerin sayısındaki ve/veya boyutundaki değişiklikleri analiz ederek analiz edebiliriz.

Koloni Oluşumu Deneyi: Antikanser Ajanların Koloni Oluşturan Akciğer Kanseri Hücreleri Üzerindeki Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Bu video, antikanser bileşiklerle tedaviye yanıt olarak lösemik hücreler tarafından oluşturulan kolonilerin sayısını tanımlamaya ve saymaya yardımcı olan metil selüloz bazlı koloni oluşum birimi veya CFU testi protokolünü açıklar.

Metil Selüloz Bazlı CFU Testi: Lösemik Hücrelerde Anti-kanser Bileşiklerinin Koloni Oluşumu Üzerindeki Etkisini Belirlemeye Yönelik Bir Yöntem

Yumuşak agar koloni oluşum testi, in vitro hücresel ankrajdan bağımsız büyümeyi doğrulamak için kullanılan bir yöntemdir. Bu protokolün amacı, transforme olmuş hücrelerin tümörjenik potansiyelinin ve proteinlerin transforme olmuş hücreler üzerindeki tümör baskılayıcı etkilerinin tespiti için sıkı bir yöntem göstermektir.

Yumuşak Agar koloni formasyon deneyi

Bu protokol, meme kanseri hücre dizilerinde hücre proliferasyonunu analiz etmek için üç farklı yöntemin kullanımını açıklar. Bu, geleneksel hücre sayımı, lüminesans tabanlı hücre canlılığı ve bir hücre görüntüleyici kullanımı yoluyla hücre sayımının kullanımını içerir. Her biri, hücre proliferasyonunun tekrarlanabilir ölçümü için avantajlar sunar.

Meme Kanseri Hücre Hatlarında Hücre Proliferasyonunu belirlenmesi için üç Farklı Yöntemlerle Karşılaştırılması

Klinik öncesi testlerden insan denemelerine geçiş yapan yeni ilaç hedeflerinin belirlenmesi bilimsel bir önceliktir. Bu amaçla, burada, gen tükenmesinin kanser hücre hattı sferoidleri üzerindeki etkisini incelemek için işlevsel bir genomik yaklaşımı tanımlıyoruz, bu da insan kanserlerini in vivo olarak daha uygun bir şekilde modelliyor.

İşlevsel Genomik Tarama kullanılması Kanser Hücre Sfero Kültürleri Potansiyel Yeni İlaç Hedefleri Belirlemek İçin

Hastalık göstergeler çok çeşitli, daha fizyolojik ilgili modelleri gelişmiş ve içine uygulanan ilaç bulma programları davranıyorsun. Burada açıklanan yeni modeli sistemi pulcuklarının kültürlü ve yeni Onkoloji uyuşturucu aramak için bir yüksek üretilen iş 1536-şey plaka tabanlı sistem festivalde nasıl üç boyutlu tümör göstermektedir.

Yüksek işlem hacmi üç boyutlu tümör pulcuklarının nesil uyuşturucu taraması

Genellikle kültürlü hücreler üzerinde bileşiklerin bir dizi potansiyel sitotoksisite değerlendirmek için gereklidir. Burada, 96-iyi formatında toksik bileşikler için güvenilir bir tarama stratejisi açıklar.

Düşük-Orta Throughput'ta Kültürlü Memeli Hücrelerinde Hücre Büyümesini ve SağkalımLarını Etkileyen Bileşikleri Belirleme Stratejisi

İn vitro hücre invazyonu assay, protein matrisini içeren hücre kültürü eklemlerini kullanarak invazyon ve göç için hücresel potansiyelin ölçülmesi ile kanser metastifinin potansiyelini ölçmek için kullanılır. Hücreler protein matrisinde ve gözenekli membrandan, bir kemoçekiciye doğru göç etmek ve sonra ışık mikroskobu ile ölçülebilir.

Onkojenik hücre davranışının bir ölçüsü olarak bir In vitro Invazif tahlil içinde Mouse mammary tümör hücrelerinin kullanımı

Bu protokol, insan meme hücrelerinin dönüşümünü değerlendirmek için deneysel in vitro araçlar sağlar. Hücre çoğalma hızının takibi, ankraj-bağımsız büyüme kapasitesi ve hücre soylarının 3Boyutlu kültürlerde bazal membran matrisi ile dağılımı nın detaylı adımları tanımlanmıştır.

İnsan Meme Epitel Hücrelerinde Onkojenik Dönüşümün İn Vitro Değerlendirilmesi

Bu deneysel protokol, lncRNA'nın koloni oluşturan testlerle birleştirerek lncRNA'nın osteosarkom hücre çoğalması üzerindeki etkisini niceleyen istikrarlı, maliyet etkin ve verimli bir yöntem sunar.

Koloni Oluşumu Testi LncRNA Knockdown Osteosarkom Hücrelerinin Proliferatif Kapasitesini Tespit Ediyor

Öğrenin meme kanseri hücrelerinde tümör oluşumunu yumuşak agar koloni oluşturma deneyi ile değerlendirmeyi. BB-Cl-amidine ile PADI enzim inhibitörlerinin etkisini in vitro ortamda nicel olarak ölçün.

Yumuşak Agar koloni oluşturma deneyi kullanılması Meme Kanseri Hücrelerinde tümör oluşum nedenlerinin nin inhibitörlerini teşhis etmek üzere (Video) | JoVE Journal

Yumuşak Agar koloni oluşturma deneyi kullanılması Meme Kanseri Hücrelerinde tümör oluşum nedenlerinin nin inhibitörlerini teşhis etmek üzere

Daha fazla video keşfet