Name: Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Öğrenin fare hipokampusu dentat girusa oligomerik amiloid-beta 1-42'nin stereotaksik infüzyon yöntemini. Bu teknik, nörodejeneratif süreçleri ve amiloid-beta toksisitesini canlı hayvan modellerinde incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Nörolojik Bozukluklar Enstitüsü tarafından desteklenen ve İnme Alzheimer Hastalığı Araştırma finanse Yaşlanma üzerine (CMT kadar) NS081333, Alzheimer Derneği hibe NIRG-10-171721 ve (UH kadar) Ruh Sağlığı Hibe MH096702 Ulusal Enstitüsü ve Ulusal Enstitüsü hibe edildi (YYJ ve JB) Columbia Üniversitesi, pilot hibe AG008702 de merkezi.

Not: Tüm hayvan deneyleri için, kurumsal ve bakım ve laboratuvar hayvanlarının kullanımı için ulusal kurallar takip edildi. 1. Cerrahi Cerrahi Aletler ve Çözümler hazırlayın <ol><li> Tüm paslanmaz çelik cerrahi aletleri otoklavlayın. </li><li> Steril moleküler sınıf iyonu giderilmiş damıtma suyu ile 200 derece mutlak etanol seyrelterek% 70 etanol hazırlayın. </li><li> Hamilton şırınga 29 G iğne takın. 1 dakika boyunca tekrar tekrar hazırlanması ve çıkarma nanopure su ile Hamilton şırınga ve iğne içini temizleyin. % 70 etanol ile bu işlemi tekrarlayın. <ol><li> Hamilton şırınga pistonu ve iğneyi çıkartın. Hava Laminer akış kaput O / N parçaları kurulayın. </li><li> Kullanımdan önce, 30 dakika boyunca ultraviyole ışığıyla iğne ve şırınga ışın tedavisi. </li></ol></li><li> % 0.9 hacim konsantrasyonuna nihai ağırlığa moleküler sınıf suda NaCl çözülmesiyle tuzlu su çözeltisi hazırlayın. Sterilizasyonu0.2 um gözenekli filtre içinden filtre edilerek çözelti ze. </li></ol> 2. oligomerik Aβ 1-42 hazırlayın <ol><li> Fa &#39;ve diğerleri 13 yayınında tarif edildiği gibi Monomerize tam olarak 5 mM DMSO içinde rekombinan insan Aβ 1-42 yeniden süspanse edin. </li><li> Ameliyat öncesi gününde 100 mcM steril (1x) PBS ile 5 mM Aβ 1-42 sulandırmak. </li><li> Ezilerek de çözüm karıştırın. </li><li> 4 ˚ C de 12 saat Aβ 1-42 çözelti inkübe edin. Not: Bu tür PBS DMSO seyreltilerek veya karıştırılmış olarak kontrol çözümleri / Aβ ​​1-42 peptid Aβ 1-42 ile aynı şekilde hazırlanmalıdır tersine çevirir. </li></ol> Enjeksiyon Koordinatları belirlemek 3. <ol><li> Tam anterior-posterior (AP), medial-lateral (ML) belirlemek için yetişkin fare beyin atlası kullanın ve dorsal-ventral (DV) ilgi 14 beyin bölgesi için koordine eder. Hayırte: Biz bregmadan aşağıdaki koordinatlarla hedef olarak hipokampusun dentat girus aldı tekniği göstermek için: AP, -2,00 mm; ML, 1.3 mm ±; DV, -2.2 mm. AP değeri önceki eksi işareti o bregma 2.00 mm arka olduğunu gösterir. ML değeri önceki ± işaret merkezinden sol ve sağ yönünü gösterir. Son olarak, DV önceki eksi işareti beynin ventral yüzeyinden hareket gösterir. </li></ol> 4. Stereotaksik Çerçevesi Ayarı <ol><li> Cerrahi yüz maskesi, temiz laboratuvar önlüğü ve steril cerrahi eldiven giyin. </li><li> Stereotaksik alet ve% 70 etanol ile fare adaptörü silin. </li><li> Tezgahın üzerine steril cerrahi örtü aşağı yatırın. </li><li> Steril cerrahi asmak üstünde fare adaptörü ile stereotaksik aleti koyun. </li><li> % 70 etanol ile fare ısıtma yastığı silin. Stereotaksik çerçeve yatağın üzerinde ısıtma yastığı yerleştirin. Genel amaçlı Labora kullanınFare adaptör yatağın üzerinde ısıtma pedi aşağı teybe edici etiketleme bant. <ol><li> Üreticinin talimatlarına göre ılık su sirkülasyon pompası ısıtma yastığı takın. </li><li> Sıcak su sirkülasyon pompası açın ve 37 ° C sıcaklığı ayarlamak ve sıcaklığına ulaşana kadar bekleyin. </li></ol></li><li> Üreticinin talimatlarına göre motorlu dikey enjeksiyon miline vidalanarak stereotaksik çerçeve üzerine 29 G iğne ile 50 ul Hamilton şırınga yapıştırın. </li><li> Boncuk sterilizatör açın ve üreticinin önceden ayarlanmış sıcaklığa ulaşana kadar bekleyin. Not: Bu hayvanlar arasında paslanmaz çelik aletleri sterilize etmek için kullanılır. Bu enstrümanlar sterilizasyon boncuklar ile temas 20 saniye sürer. </li><li> Sıcak plaka açın ve 42 ° C olarak ayarlayın ve üstüne temiz bir boş kafes yerleştirin. </li><li> Hamilton şırınga stereotaksik çerçeve üzerinde sabit iken motorlu stereotaksik i kullanınnjector Aβ 1-42 çözüm hazırlamak için. Not: şırıngaya çözümün fazla 4 ul hazırlayın ve daha sonra enjekte seviyesini ayarlamak için stereotaksik enjektör kullanın. Üreticinin talimatlarına uygun olarak bir enjektör. </li></ol> 5. Hayvan hazırlanması <ol><li> Ölçek tartmak kullanarak fare ağırlığını belirler. </li><li> Periton boşluğu içine (ip) enjekte edilerek 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg ksilazin ketamin / ksilazin kokteyli ile fare anestezisi. Ayak tutam refleks kaybı anestezi derinliği izleyin. </li><li> Fare sedasyon sonra saç kesme almak ve kafatası üzerindeki deriyi açığa başını tıraş. </li><li> Stereotaksik yatağın üstüne ısıtma yastığı üstüne fare yerleştirin. </li><li> Diş görevlisi içeride kesici diş ağzı açık ve yerleştirmek için spatula kullanın. Fare yüzünde burun sabitleyin. Nazikçe ve çok sıkı değil aşağı kelepçe. </li><li> Posikafa sabitlemek için kulak yolunun içine ikili kulak çubuklardan yon. Bu kafatası vurur kadar her enine hareket ettirin ve sonra kilitlemek için vidayı çevirin. <ol><li> Baş hafifçe kafasına aşağı itmek için parmağınızı kullanın güvenli olduğundan emin olmak için. Baş düzgün güvenli ise dışarı vermeyecektir veya basıldığında hareket ettirin. </li></ol></li><li> Nemli tutmak için gözlere göz kremi ya da göz damlası bir damla uygulayın. Gözleri cerrahi işlem boyunca nemli olduğundan emin olun. </li><li> Cerrahi alan% 70 etanol ve ardından kafatası üzerinde cilt için betadin çözüm uygulamak için steril pamuklu çubuklarla kullanmak dezenfekte etmek için. Alternatif betadin ve 2 kez daha temizliği% 70 etanol gerçekleştirin. </li></ol> 6. Cerrahi ve İnfüzyon <ol><li> Kafa derisinin orta hatta bir 2-3 mm&#39;lik kesi yapmak için bir neşter kullanın ve sonra kafatası, dönüm noktası sagital sütür, bregma ve lambda maruz 1.0-1.5 cm kesi hattı genişletmek için düz ince makas kullanınstereotaksik koordinatlar dayanmaktadır s. Ayrı cildi korumak için mikro kelepçeleri kullanın. Not: Bregma ve lambda pozisyonları fare beyin atlası &quot;Stereotaksik Koordinatlarda Fare Beyin&quot; 14 açıklanmıştır. </li><li> Bir pamuklu çubukla atın steril tuzlu su içinde ıslatın ve kafatasını temizlemek için kullanabilirsiniz. Sonra, kafatası kurulamak için temiz, kuru bir pamuklu bir bez kullanın. </li><li> Bregma üzerinde bir nokta işaretlemek için steril ince kalem kullanın. Iğne ucu sadece bregma üzerinde nokta değecek şekilde Hamilton şırınga konumlandırmak için stereotaksik mikromanipülatör kullanın. <ol><li> DV koordinat kaydedin. </li><li> Kafatasının AP ekseni seviyesi iğne ucu lambda noktasını değecek şekilde posterior Hamilton şırınga taşımak olup olmadığını kontrol etmek için. </li><li> DV konumunu kaydedin. 0.5 mm içindedir DV bregma ve lambda koordinatları emin olun. Not: amaç bregma ve lambda arasındaki DV farkı en aza indirmektir. </li></ol></li><li> M kullanicromanipulator Bregma noktaya geri Hamilton şırınga iğne ucu dönün. </li><li> Başlangıç ​​AP pozisyonu kaydedin. </li><li> Koordinat başlayan AP&#39;den 2.00 mm çıkarılarak biten AP konumunu hesaplayın. </li><li> Koordinat son AP&#39;ye Hamilton şırınga iğnesi yeniden konumlandırmak için mikromanipülatör kullanın. </li><li> Geçerli ML koordinat kaydedin. </li><li> Sol hesaplayın ve sağ ML biten ekleme veya koordinat ML başlatılmasını 1,3 mm çıkartarak koordine eder. </li><li> Biten ML koordinat ya Hamilton şırınga iğne taşımak için mikromanipülatör kullanın. <ol><li> Her iki biten ML koordinatlara kafatası yüzeyine iğne ucu dokunun ve DV koordinatlarını kaydetmek ve değerler 0,5 mm içinde olduğundan emin olun. Not: Gol ML koordinatları biten ikisi arasındaki farkı DV en aza indirmektir. </li><li> Bir bitiş kafatası üzerinde yukarı 0.5-1 cm iğne çekin koordinat iken. Th bir nokta işaretlemek için steril ince kalem alınKafatasının e yüzeyi. Kafatasının karşı tarafta için bu adımı yineleyin. </li></ol></li><li> Yolumdan net Hamilton şırınga Salıncak. </li><li> Matkap 0,8 mm matkap kafasını takın. , Iki eliyle matkap atın istikrar için masanın yüzeyinde dirsek ayarlamak ve sol veya sağ ML ya koordinat şarpi nokta üzerinde biraz matkap kafasını yerleştirin. Kafatasında bir delik tanıtmak için kafatası yüzeye matkap ucu düşürmek, matkap etkinleştirin. Karşı tarafta için bu adımı yineleyin. Not: Bazı kanama yeni tanıtılan deliklerden oluşabilir. Daha sonra kanama varsa kan kurulamak için temiz ve kuru pamuklu bir bez kullanın. </li><li> Yeni tanıtılan ML delik ya üzerinde geri pozisyona Hamilton şırınga taşıyın. Sadece kafatası geçmiş Hamilton iğne indirin. Bu noktada beyin delmek için dikkatli olun. Emin olmak için iğne sur kafatası işaret parmağınızı almak ve yavaşça yapmak için kafatası karşı iğne itin geçtie İğne deliği çıkmak değildir. </li><li> Başlangıç ​​DV koordinat kaydedin. </li><li> Biten DV başlangıç ​​DV koordinat 2.2 mm çıkartarak koordinat hesaplayın. </li><li> Koordinat aşağı biten DV iğneyi indirin. </li><li> 0.5 ul / dk&#39;lık bir oranda dentat girus içinde Aβ 1-42 4 ul pompalamak için stereotaksik enjektör pompası devreye sokun. </li><li> Infüzyon tamamlandıktan sonra, iğne enjeksiyon üzerinden çözeltinin geri akışını en aza indirmek için ilave 1 dakika boyunca yerinde kalması sağlar. </li><li> Beynin diğer tarafına iğne taşımak ve 6,13-6,18 adımları tekrarlayın. </li></ol> 7. Hayvan Kaldırma ve Ameliyat Sonrası Bakım <ol><li> Kulak çubukları ve yüz / burun nöbet sökün. Cihazdan fareyi çıkarın. </li><li> Kafa derisi kapatın çekin ve daha sonra sütür ile yara mühür bir öğrenci, standart model forseps kullanın. </li><li> Hidrasyon için IP üzerinden fare içine steril serum fizyolojik 1 ml enjekte edilir. </li><li> IçindeJECT buprenorfin (0.1 mg / kg) deri altından ağrıyı gidermek için. </li><li> O uyanana kadar 42 ° C sıcak plaka üstüne set temiz boş bir kafes içinde fare koruyun, sonra bol gıda ve su ile konut kafesine geri. </li><li> Deri altı enjeksiyon yoluyla ağrı kesici 3 gün boyunca her 12 saat buprenorfin yönetme. </li></ol> 8. Dikiş Kaldırma <ol><li> IP tarafından 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg xlyazine ketamin / xylazine kokteyl ile fare anestezisi. Not: Bu, 7-10 gün ameliyat sonra yapılır. </li><li> Dikiş kaldırmak için bir öğrenci, standart model forseps ve düz ince makas kullanın. </li><li> Hidrasyon için IP üzerinden fare içine steril serum fizyolojik 1 ml enjekte edilir. </li><li> O uyanana kadar 42 ° C sıcak plaka üstüne ayarlanmış bir temiz boş bir kafes içinde fare koruyun ve ardından bol gıda ve su ile konut kafesine geri. </li></ol> 9. Hayvan Kurban ve Doku İşleme <ol><li> Fare ve p uyutmak% 4 paraformaldehid 15 ile erfuse beyin kaldırmak ve 16 cryosectioning için işlemek. Not: hayvan kurban zamanlaması deneyci bağlıdır. Ancak, bizim çalışmalar için biz 7 ve 14 gün ameliyat sonrası seçti. </li></ol>

<ol><li>Baleriola, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonally+Synthesized+ATF4+Transmits+a+Neurodegenerative+Signal+across+Brain+Regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions.</a> Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+beta-peptide.+Nature+reviews%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews.</a> Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).</li>
<li>Knowles, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+p75+neurotrophin+receptor+promotes+amyloid-beta%281-42%29-induced+neuritic+dystrophy+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).</li>
<li>Troy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Amyloid-induced+neuronal+apoptosis+requires+c-Jun+N-terminal+kinase+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation.</a> Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).</li>
<li>Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APP+transgenic+modeling+of+Alzheimer%27s+disease%3A+mechanisms+of+neurodegeneration+and+aberrant+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+structure+%26+function%22%5BJournal%5D)">APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis.</a> Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).</li>
<li>Gotz, J., Ittner, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+Alzheimer%27s+disease+and+frontotemporal+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia.</a> Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).</li>
<li>Calhoun, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron+loss+in+APP+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuron loss in APP transgenic mice.</a> Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).</li>
<li>Oakley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraneuronal+beta-amyloid+aggregates%2C+neurodegeneration%2C+and+neuron+loss+in+transgenic+mice+with+five+familial+Alzheimer%27s+disease+mutations%3A+potential+factors+in+amyloid+plaque+formation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).</li>
<li>Jean, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase-2+is+essential+for+c-Jun+transcriptional+activation+and+Bim+induction+in+neuron+death%5BTitle%5D)+AND+%22The+Biochemical+journal%22%5BJournal%5D)">Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death.</a> The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).</li>
<li>Sotthibundhu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-amyloid%281-42%29+induces+neuronal+death+through+the+p75+neurotrophin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).</li>
<li>Kar, S., Quirion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+peptides+and+central+cholinergic+neurons%3A+functional+interrelationship+and+relevance+to+Alzheimer%27s+disease+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology.</a> Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).</li>
<li>Leranth, C., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+septal+region+in+the+rat+brain%3A+cholinergic-GABAergic+interconnections+and+the+termination+of+hippocampo-septal+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+comparative+neurology%22%5BJournal%5D)">Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers.</a> The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).</li>
<li>Fa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+oligomeric+beta-amyloid+1-42+and+induction+of+synaptic+plasticity+impairment+on+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Second edn, Academic Press. (2001).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).</li>
<li>Currle, D. S., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+freezing+and+cryosectioning+E12.5+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).</li>
<li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+amyloid+beta-protein+dimers+isolated+from+Alzheimer+cortex+directly+induce+Tau+hyperphosphorylation+and+neuritic+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).</li>
<li>Lambert, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusible%2C+nonfibrillar+ligands+derived+from+Abeta1-42+are+potent+central+nervous+system+neurotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).</li>
<li>Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMasters%2C+CL+%22Cold+Spring+Harbor+perspectives+in+medicine%22">Cold Spring Harbor perspectives in medicine</a>. 2 (6), a006262(2012).</li>
<li>Chakrabarti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+agonists+for+attenuation+of+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research+bulletin%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).</li>
<li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li>
<li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picomolar+amyloid-beta+positively+modulates+synaptic+plasticity+and+memory+in+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).</li>
<li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+amyloid-beta+is+necessary+for+hippocampal+synaptic+plasticity+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of%22%5BJournal%5D)">Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory.</a> Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).</li>
<li>Akpan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+caspase-9+inhibitor+reduces+caspase-6-dependent+axon%2Fneuron+loss+and+improves+neurological+function+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).</li>
<li>Fulmer, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte-derived+BDNF+supports+myelin+protein+synthesis+after+cuprizone-induced+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).</li>
<li>Thakker-Varia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropeptide+VGF+is+reduced+in+human+bipolar+postmortem+brain+and+contributes+to+some+of+the+behavioral+and+molecular+effects+of+lithium%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).</li>
<li>Greferath, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlarged+cholinergic+forebrain+neurons+and+improved+spatial+learning+in+p75+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice.</a> The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).</li>
<li>Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+GABAergic+and+cholinergic+neurons+in+the+rat+diagonal+band%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band.</a> Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).</li>
<li>Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+innervation+of+the+rat+dentate+gyrus%3A+an+immunocytochemical+and+electron+microscopical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study.</a> Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).</li>
<li>Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+mediates+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+memory%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta mediates memory formation.</a> Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

1) aseptik teknik kullanır;: deneyci veya cerrah olmalıdır başarılı Aβ 1-42 enjeksiyon elde etmek için 2) doğru doğru koordinatlar ile çıkar beyin bölgesini belirlemek; 3) düzgün AP ve ML ekseninde tesviye beyni stereotaksik çerçeve fare sabitlemek mümkün; 4) hassas mikromanipülatör çalıştırmak için yeteneği var; 5) Uygun post-operatif bakım sağlamak. Bu önemli adımlar takip edilirse, fare gözlemlenebilir enfeksiyonu ile ameliyat hayatta gerekir. In vitro uyum içinde çalı...

Amiloid-beta (Aβ 1-42) oluşan amiloid lekesi yatakları, Alzheimer hastalığı (AD) patolojisinde önemli bir özelliğidir. Birçok çalışma nöron ölümünü, sinaptik distrofi, kayıp ve disfonksiyonu ortaya rekombinant oligomerik Aβ 1-42 o yüksek veya toksik seviyelere göstermiştir; yanı sıra, öğrenme ve hafıza açıkları 1-4 olarak. Etkilenen beyin bölgeleri hipokampus, korteks ve bazal ön beyin ve amigdala 5,6 gibi subkortikal yapılar yer alıyor. Bugüne kadar, AD Aβ 1-42 patoloji simüle girişiminde birden transgenik fare modelleri vardır. Zorlanma bağlı bu hayvanlar AD seçkin patolojik özelliklerini inceleyerek yararlı olduğunu kanıtlayabilir. Ne yazık ki, 2 transgenik kuşaklar, APP23 ve 5XFAD hariç olmak üzere, bu fareler, tam nöronal kayıp, MS önemli bir yönünü çoğaltma olmadı. Hatta APP23 ve 5XFAD gözlenen nöronal kayıp, nöronal ölüm glikozu ileved birkaç seçme bölgelere 7,8 kadar, ince yaşa bağımlı ve izole oldu. vahşi tip fare beyin oligomerik Aβ 1-42 doğrudan infüzyon amyloidopathy 1,9,10 nöronal ölüm yönü çoğaltır in vivo modelinde mükemmel içerir. Yaygın olarak kullanılan transgenik fare modellerinin aksine oligomerik Aβ 1-42 infüzyon modeli akut bir mekansal ve zamansal bir şekilde Aβ 1-42 seviyesini yükseltmektir için idealdir. Bu model için, vahşi tip fareler kullanılarak avantajı transgenik fare hatları tanıtılan mutasyon potansiyel dengeleme ya da yan etkileri ortadan kaldırır. Son çalışmalar, hipokampusa Aβ 1-42 toksik düzeylerini beslerken 1 hafta 1 içinde enjeksiyon bölgesinde çok yakın nöron ölümünü ortaya çıkarır göstermiştir. Dahası, Aβ 1-42 kolinerjik nöronların 11 bazal ön beyin için toksik gözlem ile tutarlı olduğunuhipokampus için projeler kolinerjik nöron (BFCN) nüfus etkin bir beyinde izole nöronal devrenin sınavları için izin farelerde, beta-amiloid infüzyon 1,10 izleyen 7-14 gün içinde% 20-50 azalır. Çoğunlukla, kontrol / araç ve oligomerik Aβ 1-42 çözümler hipokampus 12 dentat girus için ipsilateral BFCN projesi yana karşılaştırmalar, sol ve sağ hemisfer 1 arasında yapılacak izin beynin her iki tarafında enjekte edilebilir. Bu yazıda erişkin vahşi tip C57BL / 6J fareler için detaylı bir ameliyat ve enjeksiyon metodoloji sağlayacaktır. Bu fare suşu nedeniyle araştırma geniş kullanım seçilir. Teknik olarak, herhangi bir beyin bölgesi, ancak burada tekniği açıklamak için bir hedef olarak hipokampusun dentat girus kullanır, infüzyon için hedeflenebilir.

<table><tbody><tr><td>Ketamin HCl (100 mg / ml)</td> <td>Henry Schein Medical</td><td>1049007</td><td>1 kg hayvan başına 100 mg ketamin</td></tr><tr><td>Ksilazin (20 mg / ml)</td> <td>Henry Schein Medical</td><td>mevcut değil</td><td>1 kg hayvan başına 10 mg ksilazin</td></tr><tr><td>Buprenex (0.3 mg / ml)</td><td>Henry Schein Medical</td><td>1217793</td><td>1 kg hayvan başına 0.1 mg buprenex</td></tr><tr><td>A ve beta; 1-42</td><td>David Teplow/UCLA</td><td>mevcut değil</td><td>100 &mu; M; Bu amiloid A & beta makalesinde kullanıldı</td></tr><tr><td>; 1-42</td><td>Bachem</td><td>H-1368</td><td>Teplow lab A & beta'dan amiloid yerine kullanılabilir</td></tr><tr><td>; 1-42</td><td>American Peptide</td><td>62-0-80B</td> Teplow lab Scrambled A <td>& beta'dan amiloid yerine kullanılabilir</td></tr><tr><td>; 1-42</td><td>Amerikan Peptit</td><td>62-0-46B</td><td>A ve beta'yı karşılaştırmak için kontrol peptidi olarak kullanılabilir; 1-42</td></tr><tr><td>NU4 Antikoru (Oligomerik Amiloid Antikoru)</td><td>William Klein/Northwestern U.'dan Hediye</td><td>mevcut değil</td><td>1: 2.000 seyreltme</td></tr><tr><td>Anti-Amiloid Oligomerik Antikor&nbsp; (Poliklonal Tavşan)</td><td>EMD Millipore</td><td>AB9234</td><td>Nu4 yerine kullanılabilir; son kullanıcı tarafından test edilmesi gerekiyor</td></tr><tr><td>6E10 Antikoru (Monoklonal Fare) (Amiloid Antikoru)</td><td>Biolegend</td><td>sig-39320</td><td>1:1.000 seyreltme</td></tr><tr><td>ChAT Antikoru (Poliklonal Keçi)</td><td>Millipore</td><td>AB144P</td><td>1:100 seyreltme</td></tr><tr><td>DeadEnd Florometrik TUNEL sistemi</td><td>Promega</td><td>G3250</td><td>için üreticinin talimatlarına uyun </td></tr><tr>DAPI <td>Invitrogen</td><td>P36935</td><td>ile Prolong Gold Antifade Reaktifi</td> kullanın <td>Slaytları kaydırırken kullanın</td></tr><tr><td>Fluorogold Fluorochrome</td><td>, LLC</td><td>mevcut değil</td><td>% 2 çözelti</td></tr><tr><td>Mutlak Etanol (200 kanıt)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>Novex'i sterilize etmek ve dezenfekte etmek için% 70 etanol yapmak için</td></tr><tr>%<td>10-20 Trisin jel</td><td>Life Technologies</td><td>EC6625BOX</td><td>A ve beta'yı ayırmak için; 1-42</td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS Koşu Tamponu (10X)</td><td>Life Technologies</td><td>LC1675</td><td>%10-20 Trisin jelleri çalıştırmak için</td></tr><tr><td>Novex Tris-Glisin Transfer Tamponu (25X)</td><td>Life Technologies</td><td>LC3675</td><td>%10-20 Trisin jelleri aktarmak için</td></tr><tr><td>SuperSignal Western Blot Enhancer</td><td>Thermo Scientific</td><td>46640</td><td>A ve beta'yı geliştirmek için; 1-42 sinyali; üreticinin protokolünü takip edin</td></tr><tr><td>Protran BA79 Nitroselüloz Lekeleme Membranı, 0.1 & mu; m</td><td>GE Sağlık Yaşam Bilimleri</td><td>10402088</td><td>%10-20 Trisin jelleri aktarmak için</td></tr><tr><td>Xcell SureLock Mini-Cell</td><td>Life Technologies</td><td>EI0001</td> %<td>10-20 Trisin jelleri çalıştırmak için elektroforez aparatı</td></tr><tr><td>GenTeal Kayganlaştırıcı Göz Jeli</td><td>Novartis</td><td>mevcut değil</td><td>Ameliyat sırasında fare gözlerini nemli tutmak için; yerel eczanelerde bulunabilir &#160; </td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>Refresh Optive Lubricant Eye Drops</td><td>Alergan</td><td>mevcut değil Ameliyat</td><td>sırasında fare gözlerini nemli tutmak için; yerel eczanelerde bulunabilir; GenTeal</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Stoelting</td><td>50998</td> yerine kullanılabilir Yuvarlak / Konik <td>Spatula'yı sterilize etmek ve dezenfekte etmek için</td></tr><tr><td>;</td><td>VWR</td><td>82027-490</td><td>Hayvan ağzını açmak için</td></tr><tr><td>Bulldog Serrefines Kelepçeleri (Çene Dims. 9X1.6 mm; Uzunluk 28 mm)</td> <td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18050-28</td><td>İsteğe bağlı; Enjeksiyon sırasında kafa derisini ayrı tutmak için</td></tr>: <tr><td>Düz İnce Makas (Kesme kenarı 25 mm; Uzunluk 11,5 cm)</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>14060-11</td><td>Kafa derisini kesmek için</td></tr><tr><td>#3 Neşter Sapı</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>#11 Cerrahi Bıçak</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>10011-00</td><td>Kafa derisi kesisi yapmak için</td></tr><tr><td>Öğrenci Standart Desen Forcep (Uç Dims. 2,5x1,5 mm; Uzunluk 11,5 cm)</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>91100-12</td><td>Dikiş sırasında kafa derisini kapalı tutmak için</td></tr><tr><td>Düzeltici Combo Kit</td><td>Kent Scientific</td><td>CL9990-1201</td><td>Saç tıraşı için</td></tr><tr><td>T / Pompa Ilık Su Sirkülatörü ve nbsp;</td><td>Kent Bilimsel&nbsp;</td><td>TP-700</td><td>Ameliyat sırasında hayvanı ısıtmak için</td></tr><tr><td>Yeniden Taşınabilir Savaş Madenciliği Pedi (5" x 10")</td><td>Kent Scientific&nbsp;</td><td>TPZ-0510FEA</td><td>Ameliyat sırasında hayvanı ısıtmak için T/Pump ılık su sirkülatörüne takmak için</td></tr><tr><td>Akülü Mikro Matkap</td><td>Çalma</td><td>58610</td><td>Kafatasında delik açmak için 0,8 mm çelik çapak kullanın</td></tr><tr><td>Fare ve Laboratuvar Standart Stereotaksik Alet Yenidoğan Sıçan Adaptörü</td><td>Çalma</td><td>51615</td><td></td></tr><tr><td>Sadece Fare için Stereotaksik Alet</td><td>Çalma</td><td>51730</td><td>Bunu Stoelting Cat yerine kullanabilirsiniz. # 51615</td></tr><tr><td>Özetin Özeti Stereotaksik Enjektör</td><td>Çalma</td><td>53311</td><td></td></tr><tr><td>Kuru Cam Boncuk Sterilizatörü</td><td>Çalma</td><td>50287</td><td>Paslanmaz çelik aletleri sterilize etmek için</td></tr><tr><td>Steril Cerrahi Örtü (18" x 26")</td><td>Çalma</td><td>50981</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Şırınga 50 ml, Model 705 RN SYR, NDL</td><td>Hamilton Company</td><td>7637-01</td><td>Beyin enjeksiyonu için; Farklı çözeltiler için farklı şırıngalar kullanın</td></tr><tr><td>29 G İğne, Küçük Hub RN NDL</td><td>Hamilton Şirketi</td><td>7803-06</td><td>Beyin enjeksiyonu için Hamilton şırıngasına takmak için</td></tr><tr><td>1 ml BD Tüberkülin Şırıngaları</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td>Anestezi ve salin uygulamak için</td></tr><tr><td>30 G İğne (0.5")</td><td>VWR</td><td>BD305106</td><td>Anestezi ve salin uygulamak için</td></tr><tr><td>Taşınabilir Elektronik CS Serisi Tartı (Ohaus)</td><td>VWR</td><td>65500-202</td><td>Anestezi dozunu belirlemek üzere hayvanları tartmak için</td></tr><tr><td>Sıcak plaka (Üst Plaka Dims. 7,25x7,25 inç)</td><td>VWR</td><td>47751-148</td><td>Ameliyat sonrası hayvanları ısıtmak için</td></tr><tr><td>Sofsilk İpek İpek Sütür C-1 Kesme 3/8, 12 mm</td><td>Covidien</td><td>S1173</td><td>Yarayı kapatmak için</td></tr><tr><td>Vetbond Doku Yapıştırıcısı (3M)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-361931</td><td>İsteğe bağlı: yaranın kapanmasına yardımcı olmak için; Sütür ile kullanın.</td></tr><tr><td>Pamuk Uçlu Ahşap Şaft Steril Aplikatörler</td><td>Fisher scientific</td><td>22-029-488</td><td>Cerrahi yaranın temizlenmesi ve kurutulması için</td></tr><tr><td>Fisherbrand Superfrost Plus Mikroskop Slaytları</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12-550-15</td><td>Beyin bölümlerini toplamak için</td></tr><tr><td>VWR Mikro Kapak Camı 24 X 50 mm</td><td>VWR</td><td>48393241</td><td>Mikroskop slaytlarını monte etmek için</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nalgene Şırınga Filtresi 0.2 & mu; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>194-2520</td><td>Tuzlu su solüsyonunu sterilize etmek için</td></tr><tr><td>Viscot Medical Medline'dan steril çift uçlu cilt markörleri</td><td></td><td>VIS1422SRL91</td><td>Kafatası üzerindeki koordinatları işaretlemek için</td></tr></tbody></table>

fare hippocampus içine oligomerik amiloid-beta stereotaksik İnfüzyon

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Alzheimer hastalığı, yaşlanma nüfusu etkileyen nörodejeneratif bir hastalıktır. Hastalığın önemli bir nöropatolojik özellik amiloid-beta aşırı üretim ve etkilenen bireylerin beyin bölgelerinde amiloid beta plakların birikmesidir. Yıllar boyunca bilim adamları, amiloid beta patolojiyi çoğaltmak girişiminde sayısız Alzheimer hastalığı fare modelleri yarattı. Ne yazık ki, fare modelleri, sadece seçici bir şekilde hastalık özelliklerini taklit eder. Nöronal ölüm, Alzheimer hastalığı olan hastaların beyinlerinde belirgin bir etki fark bu farelerde yoksundur. Nöronlar en zehirli olduğu kanıtlanmıştır amiloid-beta biçimleri - - Bu nedenle, biz ve diğerleri doğrudan amiloid-beta çözünür oligomerik türler beslerken bir yöntem istihdam var stereotaxically beyin içine. Bu yazıda seçkin bir beyin bölgesi amiloid beta seviyelerinin arttırılması, bu cerrahi teknik belgelemek için erkek C57BL / 6J fareler kullanmaktadır.Kolinerjik devre ile bağlıdır bazal ön ile birlikte bu beyin yapısı, hastalığın dejenerasyon alanlarından biri temsil ettiği infüzyon hedef hipokampusun dentat girus olduğunu. Broca diyagonal bant dikey bacak hücre ölümü ve kolinerjik nöron kaybı eşlik eden bir artış iken, stereotaksik infüzyon yoluyla dentat girus amiloid-beta yükseltilmesi sonucu, 1 hafta içinde, dentat girus nöron kaybına yükselerek Bazal önbeyin. Bu etkiler 2 haftaya kadar gözlenir. Elde ettiğimiz veriler mevcut amiloid beta infüzyon modeli, kısa vadede bölgeye özgü nöron ölümünü ele alternatif fare modeli sağladığını göstermektedir. Bu modelin avantajı amiloid-beta mekansal ve zamansal biçimde yüksek olmasıdır.

İnsan yeniden birleştirici oligomerik Aβ 1-42 hazırlanması için, bu yöntem, monomerlerin, dimerler, trimerler ve tetramerler (Şekil 1A) &#39;den oluşan çözünebilir oligomerik türler elde edilir. Bu düşük molekül ağırlıklı Aβ 1-42 türlerin değil, fibriller ve plaklar, nöronlar 1,4,9,17-19 en toksik olduğu çeşitli ortamlarda gösterilmiştir. Oligomerik Aβ 1-42 fare beyninde Aβ 1-42 nöron ölümünü indükleyen olup olmadığını belirlemek için (100 uM stok s...

Burada, amiloid-beta'nın doğrudan stereotaksik beyin infüzyonu için bir protokol sunuyoruz. Bu metodoloji, amiloid-beta'nın beyin nöronları üzerindeki kısa vadeli etkilerini ele almak için alternatif bir in vivo fare modeli sağlar.

Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Bu prosedürün genel amacı, hipokampusun dentat girusuna stereotaksik bir Liga meric a beta 1 42 enjekte etmektir. Bu, önce bir beta 1 42 çözümü olan bir liga meric hazırlanarak gerçekleştirilir. İkinci adım, enjeksiyon koordinatlarını belirlemektir.Daha sonra cerrahi olarak, hayvanın kafatasını açığa çıkarın ve iğne yerleştirmek için içine iki delik açın. Son adım, şırınga iğnesini son konumuna getirmek ve bir beta 1 42 infüze etmektir. Sonuç olarak, Stereotaksik Abeta 1 42 enjeksiyon yöntemi, Abeta 1 42'nin canlı bir hayvanda toksik etkilerini incelemek için kullanılır.Bu tekniğin mevcut transgenik, Abeta 42 fare modellerine göre en büyük avantajı, oligomerik ALA 42'nin özel ve zamansal bir şekilde yükseltilebilmesi ve transgenik fare modellerinde eksik olan hücre ölümü patolojisini güvenilir bir şekilde yeniden üretebilmesidir. Bu yöntem, Alzheimer hastalığında patolojik süreçlerin nasıl yayıldığı gibi Alzheimer alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu işleme başlamak için, cildi açığa çıkarmak için anestezi uygulanmış bir farenin kafasını tıraş edin.Ardından, fareyi stereotaksik bir çerçeve içinde bir ısıtma yastığına yerleştirin. Ardından kesici dişlerini diş koruyucusuna ve farenin yüzüne bir burun parçası yerleştirin. Bundan sonra, kontrol etmek için kafayı sabitlemek için kulak çubuklarını işitsel mauss'a yerleştirin.Kafa sabitlenmişse, hafifçe bastırın ve hareket etmediğinden emin olun. Sonra nemli tutmak için her iki göze de merhem sürün. Bundan sonra, kafatasının üzerindeki cilde Betadine uygulayarak cerrahi bölgeyi dezenfekte edin, ardından steril pamuklu çubuklarla% 70 etanol uygulayın.Alternatif Betadine ve etanol temizliğini iki kez daha gerçekleştirin. Şimdi bir neşter ile kafa derisinin orta hattında iki ila üç milimetrelik bir kesi yapın. Kafatasının sagital sütür bgma ve lambdasını ortaya çıkarmak için insizyon hattını yaklaşık 1.0 santimetreye uzatmak için düz ince makas kullanın.Bundan sonra, cildi ayırmak için forseps kullanın. Kafatasını steril tuzlu su ile ıslatılmış steril bir pamuklu çubukla temizleyin. Ardından kafatasını kurutmak için temiz, kuru bir pamuklu çubuk kullanın.Ardından, bir nokta işaretleyin. Bre ma üzerinde, mikro manipülatörü kullanarak Hamilton şırıngasını konumlandırın, böylece iğnenin ucu bgma üzerindeki noktaya değecektir. Ardından DV koordinatını kaydedin, Lambda noktasında bir nokta işaretleyin, şırıngayı Lambda noktasına arkaya doğru hareket ettirerek kafatasının AP ekseninin düz olduğundan emin olun.İğnenin ucu, bgma noktasında olduğu gibi Lambda noktasına da temas etmelidir. Bundan sonra, DV konumunu kaydedin. Bre, MA ve Lambda için DV koordinatları 0,5 milimetre içinde olmalıdır.Şimdi iğne ucunu BMA noktasına geri getirin. Başlangıç AP konumunu kaydedin. Ardından, başlangıç ap'sinden iki milimetre çıkararak bitiş AP konumunu hesaplayın.Şırınga iğnesini son AP koordinatına göre koordine edin ve yeniden konumlandırın. Ardından, geçerli ML koordinatını kaydedin. Başlangıç ml'den 1,3 milimetre ekleyerek veya çıkararak sol ve sağ bitiş ml koordinatlarını hesaplayın.Şırınga iğnesini koordine edin ve bitiş ML koordinatlarına taşıyın. İğne ucunu her iki uç ML koordinatında kafatasının yüzeyine dokundurun ve DV koordinatlarının 0,5 milimetre içinde olduğundan emin olun. Bitiş ml koordinatındayken, iğneyi kafatasının 0,5 ila bir santimetre üzerinde yukarı çekin.Koyu renkli ekstra ince nokta işaretleyici ile kafatası üzerinde bir nokta işaretleyin. Kafatasının karşı tarafı için bu adımı tekrarlayın. Ardından şırıngayı uzaklaştırın.Sol veya sağ ml'de bir delik açın. 0,8 milimetrelik bir matkap ucu kullanarak kafatası üzerinde koordinat oluşturun. Karşı taraf için bu adımı tekrarlayın.Daha sonra, şırıngayı yeni açılan deliklerden birine taşıyın. İğneyi kafatasının hemen yanından geçecek şekilde indirin ve iğnenin kafatasını geçtiğinden emin olmak için beyni delmemeye dikkat edin. İğnenin delikten çıkmadığından emin olmak için iğneyi yavaşça kafatasına doğru itin.Ardından, başlangıç DV koordinatını kaydedin. Bitiş dv'sini hesaplayın. Başlangıç DV'sinden 2,2 milimetre çıkararak koordine edin.Koordine edin, ardından stereotaksik enjektör pompasını, dakikada 0,5 mikrolitre hızında dentat girusa dört mikrolitre beta 1 42 infüze edecek şekilde ayarlayın. İnfüzyondan sonra, çözeltinin enjeksiyon bölgesinden geri akışını en aza indirmek için iğnenin bir dakika daha yerinde kalmasına izin verin. Bundan sonra, iğneyi beynin diğer tarafına hareket ettirin ve işlemi tekrarlayın.Şimdi kulak çubuklarını sökün. Kafa derisini kapatmak ve yarayı dikişle kapatmak için öğrenci standart desen forsepslerini kullanın. Burun koruyucusunu çıkarın ve fareyi çıkarın.Hidrasyon için fareye bir mililitre steril salin enjekte edin ve ağrıyı gidermek için deri altına kilogram başına 0.1 miligram buprenorfin enjekte edin. Daha sonra, fareyi uyanana kadar 42 santigrat derecelik bir sıcak plakanın üzerine yerleştirilmiş temiz ve boş bir kafese aktarın. Daha sonra fareyi bol miktarda yiyecek ve su ile yuvasına geri koyun.Bu şekil, dokuz aylık bir farenin ilgili sol ve sağ dentat girusunda bir beta 1 42 ve aracın infüzyonunu göstermektedir. Kesik çizgiler enjeksiyonun izini gösterir ve oklar çökmüş dentat girusu gösterir. Abeta 1 42 enjeksiyonundan sonraki bir hafta içinde, dentat girus, moleküler tabakada ve enjeksiyon bölgesine yakın polimorfik hücre tabakasında yedi ve 14 gün içinde yüksek Abeta 1 42 seviyeleri sergiledi.Abeta 1 42, tünel pozitif boyamada artışlar ve dentat girus kalınlığında azalmalar ortaya çıkardı ve Abeta 1 42'nin nörodejeneratif etkilerini doğruladı. Burada, retrograd izleyici floro altın, Abeta 1 42 ile dentat girus içine birlikte enjekte edildi. Enjeksiyondan yedi gün sonra, bazal ön beyinde florgold tespit edildi ve bu da etiketin kolinerjik nöronlar yoluyla retrograd taşınmasını düşündürdü.Bazal ön beyindeki florgold pozitif nöronlar miktar tayini için seçildi. Enjeksiyondan yedi gün sonra, Abeta 1 42 tünelde artışa ve sohbette azalmaya neden oldu. Bazal dört beyindeki pozitif nöronlar Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa yaklaşık 30 dakika içinde yapılabilir.Bu prosedürü takiben, amiloid infüzyonunun beyin üzerindeki mekanik etkisini ele almak için moleküler mekanizma çalışmaları gibi ek soruları yanıtlamak için başka yöntemler de kullanılabilir. Videomuzu izlediğiniz için teşekkür eder, yöntemin deneylerinizde faydalı olmasını dilerim.

stereotaxic-infusion-oligomeric-amyloid-beta-into-mouse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Alzheimer hastalığının bir özelliği Aβ yükseklik.

Β-amiloid Oligomerik hazırlanması 1-42</subHipokampal Dilimleri Sinaptik Plastisite değer düşüklüğü> İndüksiyon

Bu video, amiloid-beta (Aβ) peptide özgü antikorların bir sıçanın hipokampusuna sürekli infüzyonu için bir tekniği göstermektedir. Çalışma, oligomerler ve antikorlar arasındaki etkileşimleri incelemek için sıçan hipokampüsüne çözünür Aβ oligomerlerinin (Aβo) infüzyonu ile birlikte Aβ peptide özgü antikorların kontrollü bir infüzyonu için iki taraflı bir kanül sisteminin implante edilmesini kullanır.

Aβ Peptit Spesifik Antikorların ve Aβ Oligomerlerinin Sıçan Hipokampusuna Kontrollü İnfüzyonu

Bu video, Alzheimer hastalığının bir fare modelini oluşturmak için amiloid beta'nın dentat girusa kesin stereotaksik infüzyonunu göstermektedir. Amiloid beta proteinlerinin doğru koordinat tayini ve kontrollü iletimi, nöronal bozulmaya neden olur, hafıza işlemeyi bozar ve Alzheimer hastalığının gelişimine katkıda bulunur.

Bir Alzheimer Hastalığı Modeli için Amiloid-Beta Proteinlerinin Doğrudan Stereotaksik Beyin İnfüzyonu

Kaynak: Arango-Lievano, M. et. al., Serebrovasküler Sistemin Uzunlamasına İn Vivo Görüntülemesi: CNS Hastalıklarıyla İlgisi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, floresan etiketli amiloid plaklarını ve serebral vaskülatürü görselleştirmek için in vivo iki fotonlu görüntülemeyi göstermektedir. Mavi floresan plakları işaretlerken, yeşil floresan serebral kan damarlarını vurgular. İlgilenilen bölgenin 3 boyutlu haritası ve yüksek çözünürlüklü mozaik görüntüleme, amiloid plaklarının beyin damarları ile...

Alzheimer Hastalığı Fare Modelinde Serebral Damarların ve Amiloid Plaklarının İn Vivo Görüntülenmesi

Kaynak: Slezia, A. et al. γ-aminobütirik asidin (GABA) Epileptik Odağa Elektroforetik Olarak Verilmesi Farelerde Nöbetleri Önler. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, anestezi uygulanmış bir farede nöbet aktivitesini inhibe etmek için gama-aminobütirik asidin (GABA) elektroforetik dağıtımını göstermektedir. Terapötik etkinliğini değerlendirmek için prob implantasyonu, nöral aktivite kaydı, nöbet indüksiyonu ve bir mikroakışkan iyon pompası aracılığıyla kontrollü GABA iletiminde yer alan adımları ana...

GABA'nın Anestezi Uygulanmış Bir Farenin Epileptik Odağına Elektroforetik Verilmesi

MicroRNA beyin yapısı ve fonksiyonu önemli rolleri vardır. Burada aşırı ifadesi bir mühendislik miRNA-ifade lentivirüs stereotaktik enjeksiyonu kullanılarak hipokampal miRNA uygulamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, değerlendirmek için nispeten hızlı bir yöntem olarak hizmet...

Bir Stereotaktik Enjeksiyon MicroRNA-ifade Fare Hippocampus CA1 Bölgesi Lentiviruses ve Davranış Sonuç Değerlendirilmesi

Amiloid-β (Aβ) hayvan modeli tanımlanmış bir miktar ve Aβ parçalarının türlerinin yönetimini sağlayan ve her çalışma grubu içinde bireysel farklılıkları azaltır -injected. Bu protokol, normal farelerde Alzheimer-benzeri davranış bozukluğu üretimini sağlayan, stereotaktik araçlar olmaksızın Aβ intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyonu anlatılmaktadır.

Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek

Bu makale, nörotransmitter reseptörlerinin ekspresyonunun nasıl ölçülebileceğini ve optogenetik araçların viral transdüksiyonu ve donma-kırık replika immünoetiketleme tekniğinin bir kombinasyonu kullanılarak tanımlanmış presinaptik ve postsinaptik elementlerle sinapslarda analiz edilen modeli göstermektedir.

Optogenetic ve donma-fraktür çoğaltma ile immün Fare amigdalada glutamat reseptörlerinin giriş-özel bir düzenleme incelemek için bir araya

Aβo'nun etkilerini in vivo olarak incelemek için, Aβo'nun nörotoksik etkisine karşı koymak için ozmotik pompalar kullanarak hipokampusta sürekli Aβo antikoru (6E10) infüzyonu ile birlikte çözünür Aβo'nun tekrarlanan hipokampal infüzyonlarına dayanan bir model geliştirdik.

Kronik Amiloid beta Oligomer İnfüzyon bir hayvan Modelinde Nörodejenerasyon Osmotik Pompalar ile Antikor Tedavisi infüzyon ile giderilir

Utero sağkalım cerrahisinde farelerde gen ekspresyonu gelişimi sırasında moleküler manipülasyon izin verir. Burada, yüksek frekanslı ultrason görüntüleme embriyonik gün fare beyin (E) 9.5 retroviral vektörlerin enjeksiyon kılavuzunu kullanımı açıklanmaktadır.

Fare önbeyin içine Ultrason Rehberliğinde Mikroenjeksiyon In Utero E9.5 az

Öğrenin fare hipokampusu dentat girusa oligomerik amiloid-beta 1-42'nin stereotaksik infüzyon yöntemini. Bu teknik, nörodejeneratif süreçleri ve amiloid-beta toksisitesini canlı hayvan modellerinde incelemek için kullanılır.

Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon

Daha fazla video keşfet