Name: Ferric Klorür kaynaklı Karotis Arter ve Mezenter Gemi Tromboz Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Keşfedin, ferric klorür ile indüklenen karotis arter ve mezenter damar trombozu fare modelini. İntravital mikroskopi ve Doppler akım ölçümü kullanılarak trombüs oluşumu gerçek zamanlı izlenir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar NHMRC ve NHF teknik Joy Yao Dr. Karen Alt destek yanı sıra, fon kabul etmek istiyorum.

Hayvanlarla ilgili tüm deneyler Alfred Tıbbi Araştırma ve Eğitim Semt Hayvan Etik Komitesi (E / 1534/2015 / B) tarafından onaylanmıştır. Tüm cerrahi manipülasyonlar tam anestezi altında gerçekleştirildi ve hayvanlar herhangi bir aşamada ağrı deneyimi yoktu. Tarif edilen tüm deneyler olmayan kazanımı vardır. 1. Hazırlık <ol><li> Filtre kağıdı (1 mm x 2 mm), ince şeritler kesilir. </li><li> Taze% 4 demir klorür 2 çözüm hazırlanması (a / h) ve% 6 (w / v) deiyonize su içinde seyreltilmiştir. 0.22 um ile filtrelenmiştir, PBS içinde rodamin 6G solüsyon 0.3% hazırlayın. </li><li> Şırınga sargının beyaz plastikten küçük bir parça (5 mm x 1 cm) kesin. </li></ol> Intravital Mikroskopi tarafından Gözlenen 2. Mezenter Arteriole trombüs oluşumu <ol><li> 10-12 haftalık erkek C57BL / 6 vahşi tip fare tartılır ve intraperitoneal enjeksiyon olsa ketamin karışımı (100 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) ile buna göre anestezi. Ayak, kuyruk ve / veya cilt tutam, kornea ve palpebral tutam gelen reaktivite ve bıyıkları hareketin olmaması tepki ile anestezi derinliği izleyin. Gerekirse, hayvanın anesteziyi muhafaza etmek üzere ketamin ikinci bir doz (50 mg / kg) enjekte edilir. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem sürün. 37 ° C&#39;ye ayarlanmış bir ısıtma pedi üzerine yerleştirilmiş küçük bir petri fare yerleştirin. NOT: IP enjeksiyon hayvanlar için ağrıya neden olabilir, ancak bu rahatsızlık süresi asgari (en az 3 sn) olacaktır. Enjeksiyonlar ile ilişkili ağrı ve rahatsızlık deneyimli ve yetkin personeli ve uygun iğne boyutu (25 G) kullanımı ile minimize edilecektir. Tüm prosedürler izlenerek, sonra servikal dislokasyon yapılmıştır ketamin ve ksilazin bir doz aşımı ile tüm hayvanlar ötenazi. </li><li> Deride yaklaşık 3 cm&#39;lik bir abdominal orta hat kesi gerçekleştirin ve dikkatli Periton kesti. </li><li> Pet tarafında fare yerleştirinri çanak, yavaşça bağırsak exteriorize ve dikkatle Petri kabı yüzeyine uygun bir kap getirmek için 2 pamuk tomurcukları ile mezenter yayıldı. Hassas bir silecek ile düzgün kurulayın. Not: mezenterik damar hareketini sınırlamak için, papaverin bağırsak peristalsis inhibe etmek için de kullanılabilir. </li><li> Damarlarını dilate ve lökosit ve trombosit sayısında etiketlemek için bir 29 G şırınga ile fare kuyruğu damar içine Rodamin 6G (% 0.3) 30 ul enjekte ılık suda fare kuyruğu ıslatın. </li><li> Ters bir mikroskop altında Petri kabı yerleştirin ve parlak saha kanalı kullanılarak seçilen arteriole odaklanın. </li><li> % 6 (ağırlık / hacim), demir (III) klorid ile filtre kağıdı bir bant emmek ve iki forseps ile arteriol filtre kağıdı uygulanır; İlki filtre kağıdı yavaşça ilgi alanı üzerine basın ikinci bir tutun. Filtre kağıdı çökelmesi sonraki ilk 10 saniye içinde trombus oluşumu dikkate alınmalıdır. NOT: Bu oldukça comm olduğunuçevrili mikrovaskuleterini ve filtre kağıdı birikimi ve yavaşça basınç hassasiyeti yaralama bu sorunu sınırlamak için önemlidir. </li><li> Filtre kağıdı ile: floresan mikroskop ile trombüs oluşumunu (tepe uyarma 557 nm, pik emisyon 576 nm TRITC kanalı) dikkate alınmalıdır. Trombüs içine Rodamin 6G ve agregasyonu kadar almış dolaşan lökosit ve trombosit sayısında uyun dolayısıyla tespit etmek kolaydır. </li><li> Demir (III) klorür maruz kalma 1 dakika sonra filtre kağıdı çıkarın ve trombüs oluşumunu izlemeye devam edin. PBS ile kap yıkayın. </li><li> Gözlemleyin ve Rodamin 6G ile trombositlerin ve lökositlerin etiketleme ile vurgulanan trombüs dinamik oluşumunu kaydedin. Görüntü yakalamak ve trombüs boyutunu ölçmek. Bu tarifnamede sunulan resimler TRITC floresan kanal, objektif 4X da, ters intravital mikroskobu ile elde edildi. </li><li> Ftüm işlemleri ollowing, servikal dislokasyon tarafından takip ketamin ve ksilizin aşırı dozda kullanarak hayvan euthanize. </li></ol> 3. Karotis Arter trombüs oluşumu Kan Akış Hızı Ölçümü tarafından Değerlendirilen <ol><li> 10-12 haftalık erkek C57BL / 6 fare tartılır ve intraperitoneal enjeksiyon da ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile anestezi buna göre. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem sürün. </li><li> 37 ° C ayarlanmış bir ısıtma yastığı, bacaklarda yapışkan bant kullanarak bir işletim mikroskop altında fare sabitleyin. </li><li> Tek silecek dışında küçük bir yastık yapmak ve hafifçe başını yükseltmek için fare başının altında bantlayın. (Üst dişleri kullanın) burun aşağı çekmek için maşa ile bir iplik döngü kullanın. Bu kolay erişim için karotis arter bölgesini gösterecektir. </li><li> Aşağı sternum, doğrudan çene altında küçük bir deri 5 mm derinliğinde kesi gerçekleştirin. </li><li> Fa teşrihscia çatallanma üzerinde sağ veya sol ortak karotid arter ya da bir fragmanını izole eder. </li><li> Dikkatle-in arasındaki arter ve onları ayırmak için sinir cımbız tanıtmak. Yakın artere çalışan sinir rahatsız ve o olabilir gemiye zarar olarak karotis arter çok dokunmamak etmeyin. Arterin en az 5 mm&#39;lik bir bölümü izole edin. </li><li> Herhangi bir sıvı FeCl3 müdahale önlemek için düzgün silecekler arterin alanını kurutun. </li><li> Çevre dokularda emmek değil FeCl 3 çok yaygın karotid izole bir parçası altında küçük beyaz plastik parçası koyun. Bu amaç için, arter altında plastik kağıt sonra yavaş yavaş ilk bir parçası getirmek kaymasına ikinci forseps kullanır. </li><li> % 4 (a / h) ya da% 6 (ağırlık / hacim), ferrik klorid ile filtre kağıdı parçası daldırın ve arter çevresindeki tüm yerleştirin. </li><li> 3 dk maruz kaldıktan sonra, filtre kağıdı çıkarmak PBS ile durulayın ve kurulayın w alanıi silecekler. </li><li> Yaralı alanda geminin etrafında Doppler probu yerleştirin ve akış değişiklikleri kaydetmeye başlayın. Yetişkin farelerin sağlıklı genel karotis, akış genellikle yaklaşık 1 ml / dk&#39;dır. Dikkat! Herhangi bir temas kaçınılmalıdır böylece demir klorür ile prob temas probu zarar verecektir. Burada sunulan veriler, bir nano Doppler akış sondası 0.5 PBS ile donatılmış bir Transonic System Inc. Akış ölçer, TS420 perivasküler modülü ile elde edilmiştir. NOT: demir klorid konsantrasyonu, farklı bir oklüzyon zamanlarda elde edilen trombus oluşumunun kinetiği değiştirebilir. Böylece,% 6&#39;lık bir maruziyet (a / h), ferrik klorür, ferrik klorür (w / v)% 4 maruz daha hızlı bir oklüzyon verir. </li><li> Tüm prosedürler izlenerek, servikal dislokasyon tarafından takip ketamin ve ksilizin aşırı dozda kullanan tüm hayvanlar euthanize ve dikkatle Doppler probu temizleyin. </li></ol>

<ol><li>Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+in+vivo+models+of+thrombosis+to+the+discovery+and+development+of+novel+antithrombotic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).</li>
<li>Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+animal+models+in+the+preclinical+study+of+interventions+to+prevent+human+coronary+artery+restenosis%3A+analysis+and+recommendations.+On+behalf+of+the+Subcommittee+on+Animal%2C+Cellular+and+Molecular+Models+of+Thrombosis+and+Haemostasis+of+the+Scientific+and+Standardization+Committee+of+the+International+Society+on+Thrombosis+and+Haemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis.</a> Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).</li>
<li>Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+thrombosis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Murine thrombosis models.</a> Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).</li>
<li>Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+thrombus+formation+in+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo thrombus formation in murine models.</a> Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).</li>
<li>Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of thrombus formation.</a> N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+thrombosis+in+a+mouse+model+by+IgG%2C+IgM+and+IgA+immunoglobulins+from+patients+with+the+antiphospholipid+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome.</a> Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).</li>
<li>Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+endothelial+injury+in+the+mouse+as+a+screening+model+for+inhibitors+of+vascular+intimal+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).</li>
<li>Rosen, E. D., Raymond, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+noninvasive+vascular+injury+models+in+mice+generate+platelet-+and+coagulation-dependent+thrombi%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi.</a> Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).</li>
<li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+arterial+thrombosis+induced+by+ferric+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride.</a> Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).</li>
<li>Eckly, A., Hechler, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).</li>
<li>Darbousset, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+neutrophils+in+thrombus+formation+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol+Biol+%28Paris%29%22%5BJournal%5D)">Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice.</a> Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).</li>
<li>Denis, C., Methia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+severe+von+Willebrand+disease%3A+defects+in+hemostasis+and+thrombosis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis).</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).</li>
<li>Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+single-chain+antibody-targeted+microbubbles+for+molecular+ultrasound+imaging+of+thrombosis%3A+validation+of+a+unique+noninvasive+method+for+rapid+and+sensitive+detection+of+thrombi+and+monitoring+of+success+or+failure+of+thrombolysis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice.</a> Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).</li>
<li>Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+ferric+chloride-induced+vena+cava+thrombosis%3A+evidence+for+effect+of+potato+carboxypeptidase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor.</a> J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).</li>
<li>Karatas, H., Erdener, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombotic+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+produced+by+topical+FeCl%283%29+application%3A+a+novel+model+suitable+for+intravital+microscopy+and+thrombolysis+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).</li>
<li>Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+blockade+or+mutation+of+the+fibrinogen+gamma-chain+C-terminus+is+more+effective+in+inhibiting+murine+arterial+thrombus+formation+than+complete+absence+of+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen.</a> Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).</li>
<li>Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoprotein+VI-dependent+and+-independent+pathways+of+thrombus+formation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo.</a> Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).</li>
<li>Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+to+characterize+the+antithrombotic+effect+of+molecules+targeting+human+von+Willebrand+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor.</a> Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).</li>
<li>Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+and+ADAMTS13-dependent+modulation+of+disease+severity+in+a+mouse+model+for+von+Willebrand+disease+type+2B%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B.</a> Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).</li>
<li>Lamrani, L., Lacout, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemostatic+disorders+in+a+JAK2V617F-driven+mouse+model+of+myeloproliferative+neoplasm%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm.</a> Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., Ye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+platelet+activation+and+thrombosis+in+transgenic+mice+expressing+constitutively+active+P2Y12%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12.</a> J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).</li>
<li>Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+mechanisms+of+increased+luminal+stenosis+after+arterial+injury+in+mice+deficient+for+urokinase-+or+tissue-type+plasminogen+activator%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator.</a> Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).</li>
<li>Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+effective+and+safe+thrombolysis+and+thromboprophylaxis%3A+preclinical+testing+of+a+novel+antibody-targeted+recombinant+plasminogen+activator+directed+against+activated+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets.</a> Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).</li>
<li>Decrem, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ir-CPI%2C+a+coagulation+contact+phase+inhibitor+from+the+tick+Ixodes+ricinus%2C+inhibits+thrombus+formation+without+impairing+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis.</a> J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).</li>
<li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmolaris%2C+a+novel+factor+XIa+anticoagulant+from+the+salivary+gland+of+the+vampire+bat+%28Desmodus+rotundus%29+inhibits+inflammation+and+thrombosis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo.</a> Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).</li>
<li>Lei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anfibatide%2C+a+novel+GPIb+complex+antagonist%2C+inhibits+platelet+adhesion+and+thrombus+formation+in+vitro+and+in+vivo+in+murine+models+of+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis.</a> Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).</li>
<li>Waisberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+infection+induces+expression+of+a+mosquito+salivary+protein+%28Agaphelin%29+that+targets+neutrophil+function+and+inhibits+thrombosis+without+impairing+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis.</a> PLoS Pathog. 10 (9), e1004338(2014).</li>
<li>Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+standardization+of+the+murine+ferric+chloride-induced+carotid+arterial+thrombosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model.</a> J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).</li>
<li>Wang, X., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+murine+model+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+for+thrombosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research.</a> Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).</li>
<li>Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transendothelial+migration+of+ferric+ion+in+FeCl3+injured+murine+common+carotid+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery.</a> Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).</li>
<li>Bonnard, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+mimetic+polysaccharide+microparticles+tracked+in+vivo+on+activated+endothelium+and+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm.</a> Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).</li>
<li>Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+dorsal+skinfold+chamber+as+a+model+for+the+study+of+thrombolysis+by+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy.</a> Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).</li>
<li>Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+its+cofactor+vitronectin+stabilize+arterial+thrombi+after+vascular+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice.</a> Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).</li>
<li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury%3A+A+model+of+redox+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

ferrik klorür trombozu modeli mükemmel bir araştırma aracıdır. Bu çalışmada gösterildiği gibi, uygulanması son derece kolay ve intravital mikroskobiyle veya doppler akış ölçer ile kombinasyon halinde kullanıldığında, bu trombus oluşumu için iyi bir gerçek zamanlı izlenmesini sağlar. Zaman pozlama ve FeCl3 konsantrasyonu ayarlanması, aynı zamanda tıkayıcı-olmayan ya da tıkayıcı ya trombüs üretmek için imkan sunuyor. Bununla birlikte, bu yöntem, aynı zamanda bazı sınırlamalar vardır...

tromboza ve anti-trombotik ilaçların etkinliğinin değerlendirilmesinde ilgili mekanizmaların çalışma ile deneysel hayvan modelleri kurulmuştur gerektirir. Onlar kemirgenler 1 den insanlara büyük gemiler daha benzer sağlamak gibi büyük hayvan modellerinde kullanılmak üzere ilk edildi. Ancak, yüksek maliyet, gerekli büyük tesisler ve onları manipüle zorluk genetik kullanımlarına önemli dezavantajları vardır ve kemirgenler üzerinde ön testler kesin sonuç 2 verdik kez büyük hayvanlar artık geç preklinik çalışmalarda sınırlıdır. In vivo test edilmesi için gerekli olan anti-trombotik ilaçlarının miktarı en aza indirir transgenik ve boşaltma suşlar ve bunların küçük boyutu geniş durumu ile, fareler esas olarak tromboz araştırma için kullanılmıştır. Bu nedenle, trombotik bozuklukların ve çeşitli modelleri, farelerde 3 geliştirilmiştir. Birçok kurulan tromboz modellerinde intim bozabilirkan pıhtılaşması 4 oluşumunu uyaran kan akışına alt endotel hücre dışı matrisin maruz bırakılarak, ardından damar duvarının bir tabaka. trombüsler ve / pıhtılaşma kaskadını 5 aktive doku faktörünün maruz veya trombosit aktivasyonunu tetikleyen kollajen maruz neden olabilir. Çeşitli teknikler sonra başlangıç ​​damar yaralanması elde etmek için kullanılır. Pierangeli ve ark. Femoral ven 6 bir mikrocerrahi aracıyla mekanik bozulma modeli geliştirmiştir. Kikushi ve ark., Yeşil ışık (540 nm), 7 ile çıkar damar duvarı belirli bir uyarım ardından endoteliyal hücrelerin lipid çift tabakası içinde biriken bir verilmedi reaktif bileşik (Rose Bengal) uygulanmasından oluşur, bir modeli tarif. yaralanması aynı zamanda, kısa bir yüksek yoğunluklu darbe lazer aydınlatma 8 tarafından indüklenebilir. Başka bir teknik öncelikle sıçanların karotis arter üzerine kurulmuşdemir klorür, topikal uygulama (FeCl3), 9 oluşur. Bu durumda, FeCl3 ile yaratılan serbest köklerin alınan damar denüdasyon sonuçları olan endotel hücreleri 10 lipid peroksidasyonu ve tahribata yol açar. yaralanma lökositlerin işe gibi trombosit yapışması ve yığılmasını tetikleme birçok yapışma moleküllerinin ifadesini indükler. Bu lökosit, özellikle nötrofiller, tromboz 11 giden kan pıhtılaşma kaskadının aktivasyonuna çok önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir. Bu yöntem de koagulasyon akışını üretmek için uygundur; Araştırmacılar, insanlarda tromboz çoğunlukla hastalıklı örneğin meydana oysa bu fare modelinde, tromboz genellikle sağlıklı damarlar indüklenir, akılda tutmak gerekir. aterosklerotik gemiler. Bu modeli uygulamak için çok basit ve aynı zamanda farelerde etkili olduğu gibi, bu en çok kullanılan tromboz moduin vivo çalışmalar küçük hayvan için l. Buna ek olarak, bu teknik, gemilerin çeşitli trombüs oluşumunu uyarmak için imkanı sunar. Hedef gemiler arterler veya büyük çaplı (karotis, femoral, vena kava) ya da küçük çaplı (mezenter, cremaster) 12-14 damarları olabilir. Daha yakın bir zamanda, aynı zamanda, inme 15 bir model geliştirmek için proksimal orta serebral arter kullanıldı. tromboz oluşumu ile doğrudan trombosit ve lökosit flüoresan etiketleme sonra intravital mikroskopi ile gözlemlenmiştir veya sıcaklık sensörü veya Doppler prob 12,16,17 kan akışı azalma ölçülerek izlenebilir. Örneğin kapama süresi, trombus oluşumu zaman veya trombüs büyüklüğü gibi çeşitli parametreler araştırılabilir. gemiler arasındaki fizyolojik farklılıklar elde trombüsün önemli farklılıklar sonucu araştırıldı. Bu nedenle, araştırmacılar genellikle measu isteyen parametrelere göre hedef geminin seçinyeniden ve / veya araştırmak istediğiniz ayarı hastalığı. Tipik olarak, karotis arter model vena kava üzerinde çalışmalar derin ven trombozu araştırma için daha uygun iken, miyokard infarktüsü veya inme ile ilişkili aterotromboz araştırma için daha uygun olduğunu. Farklı damarların erişilebilirlik de trombüs gelişimini ölçmek için kullanılan bir yöntem belirler. Örneğin, mezenterik damarlar intravital mikroskopik gözlem ve trombüs oluşumu dinamikleri çalışması için bu model de uygun hale erişmek kolaydır. Karotis arter daha az erişilebilir ama sağlayan kan akımı ölçümleri daha büyük ve tıkayıcı trombozu incelemek için mükemmel bir model oluşturabilir. ferrik klorür trombozu modeli bu patolojinin anlayışında muazzam bir ilerleme sağlamıştır. Bu tromboz oluşumunun 18,19 von Willebrand faktör rolü üzerinde duruluyor birçok çalışmada kullanılmıştır. Genetik modi ile birliktenağı teknikleri, bu trombotik bozukluklar dahil birçok spesifik genin belirlenmesini sağladı. Lamrani ve diğ. Örneğin JAK2 V617F geninin bir knock-istikrarsız pıhtı 20 hızlanan oluşumu ile ilişkili olduğunu göstermiştir. Zhang ve ark. P2Y12 trombosit reseptörü fizyolojik ima incelendi ve trombositler özel olarak bu reseptörü aşırı ifade eden transgenik fareler, sadece, FeCl3 21 yaralı mezenterik arter içinde daha hızlı ve kararlı bir trombüs oluşumunu gösterildi olduğunu göstermiştir. doku-tipi plazminojen aktivatörü (tPA) ve fibrin bozunma süreci ürokinaz tipi plazminojen aktivatörü (uPA) önemli bir rol de bu yöntemle 22 olarak araştırılmıştır. Bundan başka, bu model, aynı zamanda, in vivo olarak pek çok yeni ilaçların fibrinolitik kapasiteleri test basit ve doğru bir şekilde sağlar. Örneğin, Wang ve diğ. Th Bu model kullanmışaktive trombositler 23 karşı hedeflenen yeni rekombinant plazminojen aktivatörü e preklinik doğrulama. Bu yöntem aynı zamanda kene, vampir yarasalar ve sivrisinek tükürük ya da hedefin 24-27 spesifik tanımlama ile yılan zehirinden izole terapötik proteinlerin doğrulama sağladı. Bu örnekler, ferrik klorür modelinin çok yönlülüğünü göstermektedir. Bu yazıda iki yöntem üzerinde durulacak ve iki farklı damar tipine demir klorür kaynaklı tromboz çalışma; mezenterik damar ve karotid arter.

<table><tbody><tr><td>Whatman kromatografi kağıdı</td><td>GE Healthcare</td><td>3030917</td><td></td></tr><tr><td>Demir (III) klorür %40 (a/h)</td><td>VWR</td><td>24212.298</td><td></td></tr><tr><td>Rhodamine 6G</td><td>Sigma</td><td>R4127</td><td></td></tr><tr><td>Ters mikroskop ve nbsp;</td><td>Olympus</td><td>IX81</td><td></td></tr><tr><td>Dijital siyah-beyaz fotoğraf makinesi&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>XM10</td><td></td></tr><tr><td>Doppler akış ölçer</td><td>Transonik</td><td>TS420</td><td></td></tr><tr><td>Nano-doppler akış probu</td><td>Transonik</td><td>0.5 PBS</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Hospira&nbsp;</td><td>0409-2051-05</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin (Rampun)</td> <td>Bayer</td><td>75313 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırıngası (29 G)</td><td>BD Ultra İnce</td><td>326103</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatörler</td><td>BSN medikal</td><td>211827A</td><td></td></tr><tr><td>Dynek disipek sütürler</td><td>Dynek Pty Ltd</td><td>CS30100</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun fosfat tampon salin (PBS)</td><td>Gibco yaşam teknolojileri</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Kirchner</td><td>T60</td><td></td></tr></tbody></table>

ferric klorür kaynaklı karotis arter ve mezenter gemi tromboz fare modeli

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

Ağır tromboz ve miyokard enfarktüsü, pulmoner emboli ve inme gibi iskemik sonuçları dünya çapında önemli sağlık sorunlarıdır. Ferrik klorür hasarı, açıkta kalan damarlarda veya küçük ve büyük çaplı arterlerde trombüs oluşumunu hızlı ve doğru bir şekilde indüklemek için artık iyi bilinen bir tekniktir. Bu model, trombozun patofizyolojisinin incelenmesinde, yeni antitrombotik ilaçların keşfinde ve doğrulanmasında ve bu yeni ajanların etki mekanizmasının anlaşılmasında anahtar bir rol oynamıştır. Burada, bu tekniğin farelerde mezenterik bir damar ve karotis arter üzerine uygulanması sunulmaktadır. Yöntem, dolaşımdaki lökositlerin ve trombositlerin floresan bir boya ile nasıl etiketleneceğini ve maruz kalan mezenter üzerinde intravital mikroskopi ile bunların bir trombüs oluşumuna yol açan yaralı damar duvarında birikimlerinin nasıl gözlemleneceğini açıklar. Karotis arterde pıhtı oluşumundan kaynaklanan tıkanıklık, Doppler probu ile kan akımının izlenmesi ile ölçülür.

Rodamin 6G birikimini ortaya koyacaktır mezenter floresan intravital mikroskopi gözlem FeCl3 yaralandı damar duvarı boyunca trombosit ve lökositlerin etiketli. kısmi trombüs aşamalı oluşumu 200 um mezenter kabına (Şekil 1) takip edilir. Bir trombüs yavaş görünür ve açıkça FeCl 3 maruz kalma ilk dakikadan sonra tanımlanabilir (Şekil 1, t = 60 sn). 40 saniye FeCl3 ile ıslatılmış filtre kağıdı çıkarılmasından sonra, tromboz hızla ilerler ve son olarak gözle...

Farelerde FeCl3 ile indüklenen tromboz modeli burada açıklanmıştır. Mezenterik bir damarda intravital mikroskopi gözlemi ve karotis arterde kan akışı ölçümü ile trombüs büyümesini izlemek için bir yöntem sunulmaktadır.

Ferric Klorür kaynaklı Karotis Arter ve Mezenter Gemi Tromboz Fare Modeli

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Bu prosedürün genel amacı, açığa çıkarılmış bir fare damarında indüklenen bir trombozun oluşumunu izlemektir. Bu işlem, öncelikle ilgili damarın açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, mezenterik damarda trombus oluşumunu indüklemek için, ferrik klorür ile ıslatılmış küçük bir filtre kağıdı parçası damarın üzerine yerleştirilir.Trombüs oluşturan hücrelerin agregasyonu, karotis arter üzerinde vial içi mikroskopi ile izlenir. Trombüsün neden olduğu kan akışındaki değişiklikler bir doppler akış ölçer ile ölçülür. Kırmızıların CED arterinde tromboz indüklemek için klorür kullanımı ilk kez 1990 yılında Profesör Coz ve meslektaşları tarafından saptanmıştır.O zamandan beri, yöntem farelere adapte edilmiş ve birçok farklı damarı incelemek için kullanılmıştır. Bu yöntem şu an araştırma alanımızda en yaygın kullanılan tromboz modelidir ve savunmasız faktör duvarı ile tromboz oluşumunda P2Y12 trombosit reseptörünün uygulanması gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olmuştur. İşleme başlamadan önce, filtre kağıdından 1x2 mm'lik şeritler ve bir şırınga ambalajından 3x5 mm'lik küçük bir beyaz plastik parça kesin.Ardından, ayak parmağı sıkıştırma testine yanıt alınmadığını doğrulad

ferric-chloride-induced-thrombosis-mouse-model-on-carotid-artery

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz trombüsler oluşumunu tıkayıcı zaman izlemek için intravital mikroskopi kullanılarak etkin bir şekilde karakterize bir rafine demir klorür (FeCl3) karotis ve mezenterik arter üzerinde indüklenen trombozu modelleri prosedürü yanı sıra damar, rapor.

Ferrik klorit indüklenen fare tromboz modellerinde

Burada, bir büyük hayvan vasküler yaralanma modelinde kullanım için de karakterize ve yaygın olarak kullanılan küçük bir hayvan ferrik klorid kaynaklı (FeCl3) karotis arter yaralanması model için gerekli değişiklikler mevcut. Elde edilen modeli profilaktik ve trombolitik farmakolojik ve mekanik müdahaleler önceden klinik deneme değerlendirilmesi için yararlı olabilir.

Ferrik klorid kaynaklı köpek karotid arter trombozu: Bir büyük hayvan modeli vasküler yaralanma

Bu protokol, arteriyel trombozu indüklemek için FeCl3 aracılı bir yaralanmanın nasıl kullanılacağını ve elektron mikroskobu analizi için trombozun çeşitli aşamalarında arteriyel yaralanma örneklerinin nasıl toplanacağını ve hazırlanacağını açıklamaktadır.

Ferrik Klorür Kaynaklı Arteriyel Tromboz ve 3D Elektron Mikroskobu Analizi için Numune Toplama

Bu fare karotis arter intraplak neo-vaskülarizasyon (dört hafta) ile rahatsız akış koşulları ve sonraki ateroskleroz gelişimi (iki hafta) neden olan bir kısmi karotis ligasyonu cerrahi, açıklamaktadır. Ayrıca, yüksek saflıkta endotel RNA, RNA izolasyonu, karotis intima yeni bir yöntem açıklanmaktadır.

Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model

Inferior vena kava trombozu fare tam durağanlık modeli ven duvar dokusu ve trombüs ölçülebilir miktarda verir. Bu damar duvar ve oklüzif trombüs arasındaki etkileşimleri ve akut ve kronik inflamasyon ilerlemesini değerlendirmek değerlendirmek için yararlı olduğu kanıtlanmıştır.

İnferior Vena Kava Trombozu Fare Komple Durağanlık Model

Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Fare karotis arter stent implantasyonu bir modeli açıklanmıştır. Diğer benzer yöntemlerle karşılaştırıldığında, bu işlem için uygun bir yol farklı ilaç salınımlı stent ve restenoz moleküler mekanizmaları için damar duvarı tepki olarak çalışma imkanı sunan, çok hızlı, basit ve erişilebilir.

Restenoz Çalışmaları Karotis Arter Stent İmplantasyonu bir murin Modeli

Biz yetişkin fare serebral venöz hipertansiyon güvenilir bir model oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu model yaygın fare tarif edilir ve test edilmiştir. Farelerde bu yeni mevkidaşı genetik modifiye hayvanları kullanma imkanı açar ve böylece modelin uygulamalarını genişletmektedir.

Yetişkin Fare Venöz Hipertansiyon Modeli: Dış Boyun Ven Anastomoza Ortak Karotis Arter.

Bu yöntem, fare modellerinde yeni ilaçların farmakokinetiğini değerlendirmek için, karotid arter yoluyla sabit bir ilaç çözeltisi sunmak amacı ile geliştirilmiştir.

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

Bu protokol, sıçan karotis arter üzerinde bir lümen içi yaralanmalara neden ve bundan sonra neointimal hiperplazi ortaya çıkarmak için bir balon kateter kullanır. Bu yaralanmaya yanıt olarak vasküler yeniden mekanizmalarını incelemek için iyi bilinen bir modeldir. Ayrıca yaygın potansiyel terapötik yaklaşımların geçerliliğini belirlemek için kullanılır.

Sıçan Karotis Arter Vasküler Balon Yaralanma ve intraluminal İdaresi

Keşfedin, ferric klorür ile indüklenen karotis arter ve mezenter damar trombozu fare modelini. İntravital mikroskopi ve Doppler akım ölçümü kullanılarak trombüs oluşumu gerçek zamanlı izlenir.

Ferric Klorür kaynaklı Karotis Arter ve Mezenter Gemi Tromboz Fare Modeli

Daha fazla video keşfet