Bütünleşmeyen episomal plasmidler kullanılarak dondurulmuş Buffy tüylerdeki uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi

Bu prosedürün genel amacı, uygun maliyetli ve virüssüz bir protokol kullanarak donmuş buffy tüylerden elde edilen insan periferik kan mononükleer hücrelerinden indüklenmiş pluripotent kök hücreler üretmektir. Bu, ilk olarak, yoğunluk gradyanı olmadan tam kan santrifüjlemesinden sonra PB ÇUŞ'ların Buffy kaplamalarından izole edilmesi ve ardından belirli bir kan kültürü ortamında genişleme ile gerçekleştirilir. İkinci adım, Buffy coat PB MNC'leri epizomal plazmitlerle elektroporasyon yoluyla transfekte etmektir.

Transfekte edilmiş PB ÇUŞ'lar daha sonra taze fare embriyonik fibroblast besleyici hücreleri üzerine kaplanır. Son adım, indüklenmiş pluripotent kök hücreleri kültürden manuel olarak almak ve bunları genişleme için yeni besleyici hücre plakalarına aktarmaktır. Sonuç olarak, PB ÇUŞ'ların tipik bir insan morfolojisine sahip indüklenmiş pluripotent kök hücrelere verimli bir şekilde yeniden programlanması, immünofloresan ve gen ekspresyonunun ölçülmesi ile gösterilebilir.