Name: Fare Modelinde Kuruluş ve İYE ve CAUTI Karakterizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Keşfedin fare modelinde idrar yolu enfeksiyonu ve kateter ilişkili İYE kurulum yöntemlerini. Bakteri yükü ölçümü ve intraselüler bakteri toplulukları analiziyle enfeksiyon şiddetini değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu iş için finansman, ORWH SCOR P50 DK064540 tarafından RO1 DK 051406, RO1 AI 108749-01, F32 DK 101171, ve F32 DK 104516-01 sağlandı.

Etik bildirimi: Washington Üniversitesi Hayvan Çalışmaları Komitesi 2013/01/11 onaylanmış ve 2016/01/11 sona eriyor oldu protokol numarası 20120216, bir parçası olarak, tüm fare enfeksiyonları ve prosedürleri onayladı. Hayvanların genel bakım Ulusal Araştırma Konseyi ve USDA Hayvan Bakım Kaynak Kılavuzu Laboratuvar Hayvanları Bakım için rehber ve Kullanım ile uyumlu idi. Ötenazi prosedürleri ile tutarlı &quot;Hayvanlar 2013 sürümü için Ötenazi için AVMA kurallarına&quot;. 1. UPEC İYE Protokolü, Aşılanması İğne Hazırlama (Şekil S1) <ol><li> 30 G iğne kapağını çıkarın. Iğne miline PI10 boru yaklaşık 1 inç geçirin. Gecede iğne meclisleri sterilize, UV. Kateterize iğneler steril petri tabaklarında süresiz olarak saklanabilir. </li></ol> 2. UPEC bakteriyel inokulum hazırlanması <ol><li> UTI89 inokulum hazırlayın (aşı öncesinde 72 saat başlatmakyon gün) <ol><li> Dondurulmuş stoktan LB (Luria-Bertani) agar plaka üzerine Streak UTI89. 37 ° C&#39;de gece boyunca inkübe edin. Bir koloni seçin ve 125 ml&#39;lik bir flask içinde, 10 ml LB içine inoküle. Statik, 24 saat boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> Statik, 37 ° C&#39;de ilave bir 24 saat boyunca yeni 125 ml&#39;lik bir flask içinde LB 10 ml, gece boyunca kültürün 10 ul inoküle. </li><li> Transferi 3 ml 3 dakika boyunca 7.000 xg&#39;de steril 1.5 ml tüplere ve santrifüj (zorlanma ve istenen inokulum boyutuna göre değişir) ve 1x PBS pelet ve santrifüj ikinci kez tekrar süspansiyon. PBS 1x 1 ml bakteri pelletini. </li></ol></li><li> Bakteriyel optik yoğunluk ölçün ve istenen inokulum yoğunluğu konsantrasyon ayarlayın. kullanılan inokulum standart konsantrasyonu 10 7 bakteri; Ancak, bu çalışmanın tasarımı sayesinde değişebilir. </li></ol> 3. Bakteriyel Aşılama <ol><li> % 70 etanol ve c iş istasyonu temizleyin(steril akış kaputu kullanın veya) emici kağıt ile alana. </li><li> 1 ml (TB) şırıngaya hazırlanan bakteri inokulum 0.9 ml kadar çizin (hava kabarcıkları). Sonra steril polietilen boru döşeme, inokulum içeren şırınga üzerine, PI10 boru ile bir hazırlanan steril aşılama iğne takın. NOT: mesane delinmesiyle önlemek için iğne ucu yukarıda boru 1 mm bırakın. </li><li> Parafilm 1 inç kare parça kesin ve üstüne cerrahi kayganlaştırıcı bir dab (bir kuruş yaklaşık boyutu) koyun. </li><li> Kadar (protokol üretmektedir takiben) izofluran veya buharlaştırıcı odasının 3 ml ile ıslatılmış pamuk topları ile bir çay demlik topu içeren 32 onsluk cam kavanoz koyarak dişi C3H / HeN fareler anestezi bilinçsiz ama hala normal nefes (1 nefes / sn) . NOT: Bazı IACUC komiteleri bir kavanoz ya da buharlaştırıcı kullanımını tasvip etmiyoruz. Kurumunuzun IACUC komitesinin göstergesini takip ediniz. NOT: Eğer cam kavanozizofluran-soakd pamuk topları kullanıldığı çay-top ve / veya burun konisi ile hayvan dikkatlice anestezik doz aşımı ve ölümleri önlemek için dikkat edilmelidir. Bir buharlaştırıcı ve anestezi odasına kullanmanın avantajı yanlışlıkla aşırı doz önler kontrollü izofluran yönetimini sağlamasıdır. DİKKAT: İsofluranın bir inhalasyon anestezik. İyi havalandırılan bir alanda kullanın ve inhalasyon en aza indirmek. </li><li> Kavanoz / buharlaştırıcı fareyi çıkarın ve bir kağıt havlu üzerine sırtında üzerine yerleştirin ve bacaklarını yayıldı. </li><li> Bir burun konisi olan fare burun küçük bir miktar ihtiva eden bir pamuk (yaklaşık 1-2 ml veya 50 ml konik tüp (kontrollü isoflurance bir buharlaştırma birimleri donatılmıştır doz sunar buharlaştıncıya bağlı bir tüp) Kapak ) izofluran. </li><li> Yavaşça idrar neden ve işeme mesane sağlamak için mesane palpitate. % 100 etanol silin ile periüretral alanı silin. Içine, ilk aşılama iğne / şırınga gelin dabCerrahi yağlayıcı. </li><li> , Transüretral aşılama iğne takmadan yaklaşık 12 mm, ve mesane yavaşça (10 ul / sn) içine inokulum dağıtmak için hafifçe şırınga pistonu bastırarak bakteri solüsyonu 50 ul her fare inoküle edin. Fare aşılama iğne çıkarın. NOT: aşılamak başlayan üretral açılışında inokulum derhal iade iğnenin yanlış veya eksik ekleme gösterir. </li><li> Burun konisi fareyi çıkarın ve kafesine geri. Yineleyin her fare için 3,3-3,8 adımları. Inokulum koşulları / suşları anahtarlama eğer / ne zaman, onaylanmış bir kesici kapta şırınga ve iğne aşılama imha ve yeniden 3.2 adım başlar. NOT: üropatojenik organizmalarla aşılama genellikle şiddetli ağrı belirtilerine neden olmaz. Ancak nadir durumlarda, patojenlerin yüksek dozlarda tatbik ateş, gıda ve su alımı ve anormal davranışları azalmaya neden olabilir. BirNimal sağlık deney boyunca izlenmelidir. Aşikar ağrı semptomları bildirimi, örneğin Buprenorfin (0.05-0.1 mg / kg verilen deri altına) olarak, bir ağrı kesici, varsa, uygulanabilir. Prosedürler her kurumun IACUC uygun olmalıdır. </li></ol> Bakteriyel Yüklerin 4. Belirlenmesi <ol><li> Her mesane ve böbrekler çifti hasat edilmesi için ayrı 5 ml tüpler hazırlayın. 1x PBS / tüp / fare mesane 1ml ekleyin hasat edilecek. 1x PBS / tüp 0.8 ml ilave edilir / fare böbrek çifti hasat edilmesi. Belirli bir fareye karşılık her tüp etiketleyin. 1:10 seri dilüsyonları için her bir oyuğa 1x PBS 180 ul ihtiva eden bir 96-çukurlu plaka hazırlanması. </li><li> % 70 etanol ile çalışma alanını temizleyin ve emici bir kapak veya kağıt havlu ile alanı kapsayacak. </li><li> Fare, yaklaşık 1 dakika boyunca nefes duruncaya kadar izofluran ile fare anestezisi sonra emici kapağı veya kağıt havlu üzerine koyun, (adım 3.4). Euthana diğer yöntemlersia aynı zamanda, karbon dioksit gibi IACUC komite tarafından kabul edilir, ve izofluran doz aşımı için ikame edilebilir. </li><li> Baş üssünde boyun kısıtlama ve yatay vücuttan çıkık oluşana kadar kuyruk çekme oluşur hızlı servikal dislokasyon ile fare Kurban. NOT: Çoğu IACUC komiteleri ötanazi ve servikal dislokasyon ikincil aracı gerektiren yaygın bir yöntemdir. IACUC komitesi tarafından onaylandı Ancak, diğer yöntemler de kullanılabilir. </li><li> Sırtında ölü fare yerleştirin ve karın% 70 etanol sprey. Fareyi teşrih, böbrek diseksiyonu aşağıdaki kandan potansiyel kontaminasyonu en aza indirmek için bu sırayla, mesane ve böbreklerde hasat. 1x PBS içeren hazırlanmış 5 ml tüpler içine bağımsız organlar yerleştirin (adım 4.1). NOT: Harici diseksiyon ve organ toplama kontaminasyonu minimize etmek için farklı makas kullanın. </li><li> Organlar t sağlamak için tüp dokununO PBS 1x. Her fare için yineleyin 4,3-4,5. Temiz makas ve her bir farenin sonra% 70 etanol içinde forseps. </li></ol> 5. Bakterilerin Kurtarma <ol><li> , Bir doku homojenleştirici ile böbrek başına 15 saniye ve mesane 30 saniye 5 ml tüpler hasat kesesi ve böbrek homojenize edilir. 1x PBS,% 70 etanol ve örnekler arasında 1x PBS homojenizer sekans durulayın. </li><li> 10 -8 dışarı seri 01:10 dilüsyonları yapın ve LB agar plakaları üzerinde CFU için her seyreltme (koloni oluşturan birim) plaka. 37 ° C&#39;de plakaları gece inkübe ve koloniler ertesi gün saymak. </li></ol> 6. IBC numaralandırma <ol><li> Aseptik mesane çıkarın ve bir silikon alt kısma sahip bir 6-yuvalı plaka içindeki 1 x PBS içinde yerleştirin. Plakalar, bir silikon elastomer kiti kullanılarak ve de her biri yaklaşık olarak silikon 1 cm dökme hazırlanabilir, bkz talimatları üretmektedir. Makas kullanılarak yarısında mesane kesin. </li><li> Küçük metal işaretçilerine kullanma hafifçe blad splayder, böylece mesane lümen yukarı bakacak. Ürotelyumun maksimum miktarda maruz sağlamak için mesane bölümlerinin dış kenarlarında işaretçilerine yerleştirmek için emin olun. </li><li> Yayvanlaşmasıyla sonra, yavaşça 1x kez PBS ile mesane yıkayın. Pipet ile 1x PBS çıkarın. Tüm yayvan mesane karşılamak için yeterli% 3 paraformaldehid ekleyerek mesane sabitleyin. DİKKAT: Paraformaldehyde kanserojen olduğunu. Eldiven içeren uygun koruyucu donanım, her zaman giyilmelidir. Bertaraf kurumsal kurallara uymalıdır. </li><li> 1 saat oda sıcaklığında inkübe edin. Paraformaldehit çözüm çıkarın. 1x bir kez PBS ile yıkayın. </li><li> (PBS 1X 2 mM MgCl2,% 0.01 sodyum deoksikolat ve% 0.02 Nonidet-p40in) LacZ yıkama çözeltisi, yıkama başına 5 dakika için üç kez yıkayın. </li><li> Yeterince LacZ leke yıkama solüsyonu çıkarın ve ekleme (9.5 mi LacZ yıkama çözeltisi, 0.4 mi 25 mg / ml X-gal ve 100 mM K-ferrosiyanür / K-ferrisiyanür 0.1 mi) mesane kapsayacak. 30 ° C overni inkübeışıktan koruyarak GHT. </li><li> Inkübatör yayvan mesane çıkarın ve diseksiyon kapsamı, 40-60X büyütme ile görüntülendi gibi mavi puncta görünür IBC, gözlemlemek. NOT: Bazen fare üretranın altında tüpün yerleştirilmesi öncesinde idrar olabilir. Bu durumda, yeniden idrar toplamak için denemeden önce 15-20 dakika bekleyin. </li></ol> 7. İdrar Bakteriüri CFU Sayımı İçin Toplama (CAUTI için Uygulanamaz) <ol><li> İdrar öncesi toplamak veya enfeksiyonu yayınlamak için yavaşça (fare kafesinin üst) kuyruğunu tutan ve düz bir yüzeye yükseltilmiş üzerine yerleştirerek fare dizginlemek. </li><li> Fare üretranın altında steril 1.5 ml tüp tutun. Yavaşça mesaneye baskı uygulamak için kuyruk yakın farenin arkasına bastırın. 1.5 ml tüp idrar yakalayın. </li><li> 10 -7 dışarı seri 1:10 dilüsyonları yapın ve uygun LB her seyreltme plaka 37 ° C&#39;de plakaları gece inkübe ve koloniler ertesi gün saymak. </li></ol> 8. CAUTI Modeli Protokol, CAUTI Modeli için Kateter İğne Hazırlık (Şekil S2) <ol><li> 30 G iğne kapağını çıkarın. PE10 boru ve RenaSIL gibi silikon boru 5 mm büyüklüğündeki bir 7 mm parça kesin. Boru iğne tabanını dokunana kadar PI10 boru ile iğne geçirin. </li><li> Daha sonra PE10 içeren iğne üzerine 5 mm parça besleme. Gecede iğneler derlemeleri sterilize, UV. NOT: silikon tüp yüklerken, iğne ucu geçmiş uzanan boru yaklaşık 1 mm bırakın. </li></ol> 9. E. faecalis OG1RF bakteriyel inokulum hazırlanması <ol><li> Aşılama gün önce 48 saat başlangıç ​​OG1RF inokulum hazırlayın. Donmuş stoktan bir BHI (Beyin Kalp infüzyonu) plakası üzerine Şerit OG1RF. </li><li> Bir koloni seçin ve BHI 10 ml içine aşılamak ve 37 ° C&#39;de 18 saat süreyle statik büyümek. Kültür santrifüj ve steril 1 x PBS içinde 1 ml hacim pelet (3 kez) yıkama. </li><li> 1x PBS içine bakteri pelletini. Bakteriyel optik yoğunluk ölçün ve istenen inokulum boyutuna konsantrasyonunu ayarlayın. kullanılan inokulum standart konsantrasyonu 10 7; Ancak, bu çalışmanın tasarımı nedeniyle değişebilir </li></ol> 10. Kateter Yerleştirilmesi <ol><li> % 70 etanol ile iş istasyonu temizleyin ve bir emici kapak alanı ile kapak (ya da steril akış kapağı kullanın). </li><li> Boş 1 ml (TB) şırınga kateter iğne takın. Parafilm 1 inç kare parça kesin ve üstüne cerrahi kayganlaştırıcı bir dab (bir kuruş yaklaşık boyutu) koyun. Not: iki farklı iğneler katetere bağlı implantasyonu için gerekli olan mekanik manipülasyon kateterin biriktirme ve minimize yanlışlıkla aşılama için aşı için kullanılmıştır. Bu aynı zamanda daha az aşılama iğneleri hazırlama kolaylık sağlar. </li><li> Bir çay içeren 32 onsluk cam kavanozda koyarak C57BL / 6 fareler anesteziizofluran veya buharlaştırıcı odasının 3 ml batırılmış pamuk topları ile -infuser top bilinçsiz ama hala normal nefes (1 nefes / sn) kadar (aşağıdaki protokol üretmektedir). </li><li> Sonra bir kağıt havlu üzerine sırtında fare koymak ve bacaklarını yayıldı. Küçük bir miktar izofluran (yaklaşık 1-2 ml) içeren pamuk topları ile bir burun konisi veya 50 ml konik tüp ile fare burun örtün. DİKKAT: İsofluranın bir inhalasyon anestezik. İyi havalandırılan bir alanda kullanın ve araştırmacı tarafından solunmasını en aza indirmek. </li><li> Yavaşça idrar neden ve işeme mesane sağlamak için mesane palpitate. % 100 etanol silin ile periüretral alanı silin. </li><li> Bir pamuk uçlu aplikatör kullanarak% 10 povidon-iyot çözeltisi ile periüretral alan dezenfekte edin. Cerrahi yağlayıcı içine ilk aşılama iğne / şırınga gelin hafifçe sürün. Not: Povidine-iyot alkol daha kuvvetli bir aseptik çözelti, kateter yerleştirilmesi için kullanılır. Kateter implantasyonu gerektirirdaha fazla mekanik manipülasyon kateter ve kirlenme dolayısıyla daha büyük bir potansiyele eklemek için. </li><li> Üretral kateter deliğe yerleştirin. Bir kez, cımbız kullanın dolayısıyla (5 mm silikon), küçük kateter itme ve mesane içine yatırılması, mesane doğru (7 mm PI10) uzun bir parça itmek için. Hemen hala bağlı 7 mm boru ile, iğne çıkarın. </li></ol> 11. Bakteriyel Aşılama <ol><li> Burun konisi fareyi çıkarın ve kafesine geri bölüm 9. itibaren hazırlanan inokulum kullanarak, bölüm 3 bakteriyel aşılama protokolü takip </li></ol> Kurban Her Zaman Noktasında 12. <ol><li> Mesane ve böbrek 5 ml tüpler (organlar adım 4.1 izleyin için) ve kateter 1.5 ml Eppendorf tüp hazırlayın. Kateter numune için 1.5 ml&#39;lik Eppendorf tüpü içine 1 x PBS içinde 1 ml ilave edilir </li><li> Adımları 4,3-4,5 izleyin. Mesane, böbrek ve kateter hasat, fare teşrih, pla1x PBS ve 1.5 ml Eppendorf içine kateter (adım 12.1 bakınız) ihtiva eden 5 ml tüpler içine, bağımsız bir doku dans ediyorum. NOT: Harici diseksiyon ve kirlenmeyi en aza indirmek için organ toplama ve kateter alımı için farklı bir makas kullanın </li><li> Sonra adım 4.6 izleyin. </li></ol> 13. Bakteriyel Kurtarma <ol><li> Organları için adımları 5.1 ve 5.2 izleyin. 30 saniye boyunca maksimum hızda bakteri kateterler kurtarma, vorteks için 5 dakika ilave bir 30 saniye boyunca maksimum hızda sonra vorteks banyo sonikatör kullanarak ve kateter örnekleri sonikasyon. </li><li> 10 -8 dışarı seri 01:10 dilüsyonları yapın ve BHI plakaları üzerinde CFU sayımı için her seyreltme plaka. Gece boyunca 37 ºC inkübe ve koloniler ertesi gün saymak. </li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

Komplike olmayan topluluk İYE birkaç milyon birinci basamak ziyaretleri her yıl 46 için muhasebe yaygın ve masraflı enfeksiyonudur satın aldı. Buna ek olarak, Cautis artık CAUTI 45 edinilen hastaneden kaynaklanan tedavi eklenen maliyet sağlayıcıları tazmin Medicare ve Medicaid Hizmetleri Merkezleri gibi sağlık sağlayıcıları için son derece pahalı hale gelmiştir ortak sağlık edinilen enfeksiyon vardır. Bu protokollerin açıklandığı İYE, hem komplike olmayan sistit ve CAUTI fare modelleri, başlatma ba...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/52892/establishment-and-characterization-of-uti-and-cauti-in-a-mouse-model">Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model</a>. The Protocol section has been updated.
The ethics statement has been updated from:
Ethics statement: The Washington University Animal Studies Committee approved all mouse infections and procedures as part of protocol number 20120216, which was approved 01/11/2013 and expires 01/11/2016. Overall care of the animals was consistent with The guide for the Care and Use of Laboratory Animals from the National Research Council and the USDA Animal Care Resource Guide. Euthanasia procedures are consistent with the &#8220;AVMA guidelines for the Euthanasia of Animals 2013 edition.&#8221;
to:
Ethics statement: The Washington University Animal Studies Committee approved all mouse infections and procedures as part of protocol number 20150226, which expires 12/10/2018. Overall care of the animals was consistent with The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals from the National Research Council and the USDA Animal Care Resource Guide. Euthanasia procedures are consistent with the &#8220;AVMA guidelines for the Euthanasia of Animals 2013 edition.&#8221;
Step 3 has been updated from:
3. Bacterial Inoculation
<ol>
	<li>Clean the workstation with 70% ethanol and cover area with absorbent paper (or use sterile flow hood).</li>
	<li>Draw up to 0.9 ml of the prepared bacterial inoculum into a 1 ml (TB) syringe (remove air bubbles). Attach a prepared sterile inoculation needle with PE10 tubing, onto the syringe containing the inoculum, then sterilely trim the polyethylene tubing. 
	NOTE: Leave 1 mm of tubing above the tip of the needle to avoid puncturing the bladder.</li>
	<li>Cut a 1 inch square piece of parafilm and put a dab of surgical lubricant (approximately the size of a dime) on top.</li>
	<li>Anesthetize female C3H/HeN mice by putting them in a 32 ounce glass jar containing a tea-infuser ball with cotton balls soaked with 3 ml of isoflurane or vaporizer chamber (following manufactures protocol) until unconscious but still breathing normally (1 breath/sec). 
	NOTE: Some IACUC committees do not approve the use of a jar or vaporizer. Please follow the indication of the IACUC committee of your institution. 
	NOTE: If glass jar with tea-ball and/or nose cone with isoflurane-soakd cotton balls are used, the animal must be carefully observed to avoid anesthetic overdose and death. The advantage of using a vaporizer and anesthesia chamber is that it provides controlled isoflurane administration that avoids accidental overdoses. CAUTION: Isoflurane is an inhalation anesthetic. Use in a well-ventilated area and minimize inhalation.</li>
	<li>Remove the mouse from the jar/vaporizer and place it on its back on a paper towel and spread the legs.</li>
	<li>Cover the nose of the mouse with a nose cone (a tube connected to the vaporizer that provides a controlled isoflurance dose that comes equipped on some vaporizer units) or 50 ml conical tube with a cotton ball containing a small amount (approximately 1-2 ml) of isoflurane.</li>
	<li>Gently palpitate the bladder to induce urination and ensure a voided bladder. Wipe the periurethral area with 100% ethanol wipe. Dab the inoculation needle/syringe, point first, into the surgical lubricant.</li>
	<li>Inoculate each mouse with 50 &#181;l of the bacteria solution by inserting the inoculation needle transurethrally, approximately 12 mm, and pressing down on the syringe plunger gently to dispense the inoculum into the bladder gently (10 &#181;l/sec). Remove the inoculation needle from the mouse. 
	NOTE: Immediate return of inoculum at the urethral opening when beginning to inoculate indicates improper or incomplete insertion of the needle.</li>
	<li>Remove the mouse from nose cone and return it to its cage. Repeat steps 3.3-3.8 for each mouse. When/if switching inoculum conditions/strains, dispose of the syringe and inoculation needle in an approved sharps container and start again step 3.2.&#160;&#160; 
	NOTE: Inoculation with uropathogenic organisms generally does not cause severe pain symptoms. However, in rare instances, administering large doses of pathogens may cause fever, reduction in food and water intake and abnormal behavior. Animal health should be monitored throughout the experiment. If overt pain symptoms are notice, an analgesic, such as Buprenorphine (0.05&#8722;0.1 mg/kg given subcutaneously), can be applied. Procedures should be in accordance with each institution&#8217;s IACUC.</li>
</ol>
to:
3. Bacterial Inoculation
<ol>
	<li>Clean the workstation with 70% ethanol and cover area with absorbent paper (or use sterile flow hood).</li>
	<li>Draw up to 0.9 ml of the prepared bacterial inoculum into a 1 ml (TB) syringe (remove air bubbles). Attach a prepared sterile inoculation needle with PE10 tubing, onto the syringe containing the inoculum, then sterilely trim the polyethylene tubing. 
	NOTE: Leave 1 mm of tubing above the tip of the needle to avoid puncturing the bladder.</li>
	<li>Cut a 1 inch square piece of parafilm and put a dab of surgical lubricant (approximately the size of a dime) on top.</li>
	<li>Anesthetize female C3H/HeN mice by putting them in a vaporizer chamber (following manufactures protocol) until unconscious but still breathing normally (1 breath/sec). 
	NOTE: Some IACUC committees do not approve the use of a vaporizer. Please follow the indication of the IACUC committee of your institution. 
	CAUTION: Isoflurane is an inhalation anesthetic. Use in a well-ventilated area and minimize inhalation.</li>
	<li>Remove the mouse from the vaporizer and place it on its back on a paper towel and spread the legs.</li>
	<li>Cover the nose of the mouse with a nose cone (a tube connected to the vaporizer that provides a controlled isoflurance dose that comes equipped on some vaporizer units) to maintain anesthetization.</li>
	<li>Gently palpitate the bladder to induce urination and ensure a voided bladder. Wipe the periurethral area with 100% ethanol wipe. Dab the inoculation needle/syringe, point first, into the surgical lubricant.</li>
	<li>Inoculate each mouse with 50 &#181;l of the bacteria solution by inserting the inoculation needle transurethrally, approximately 12 mm, and pressing down on the syringe plunger gently to dispense the inoculum into the bladder gently (10 &#181;l/sec). Remove the inoculation needle from the mouse. 
	NOTE: Immediate return of inoculum at the urethral opening when beginning to inoculate indicates improper or incomplete insertion of the needle.</li>
	<li>Remove the mouse from nose cone and return it to its cage. Repeat steps 3.3-3.8 for each mouse. When/if switching inoculum conditions/strains, dispose of the syringe and inoculation needle in an approved sharps container and start again step 3.2.&#160;&#160; 
	NOTE: Inoculation with uropathogenic organisms generally does not cause severe pain symptoms. However, in rare instances, administering large doses of pathogens may cause fever, reduction in food and water intake and abnormal behavior. Animal health should be monitored throughout the experiment. If overt pain symptoms are notice, an analgesic, such as Buprenorphine (0.05&#8722;0.1 mg/kg given subcutaneously), can be applied. Procedures should be in accordance with each institution&#8217;s IACUC.</li>
</ol>

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/52892/establishment-and-characterization-of-uti-and-cauti-in-a-mouse-model">Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model</a>. The Protocol section has been updated.

Erratum: Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

İdrar yolu enfeksiyonları (İYE) en sık görülen bakteriyel enfeksiyon hastalıklarından biridir ve İYE edinilen kazanım, toplum ve hastane kaynaklı mekanizmasına dayanan iki kategoriye ayrılabilir. Toplum kökenli İYE sık sık aksi takdirde sağlıklı kadın ve çalışmalarda meydana kadınların yaklaşık% 50&#39;si yaşamları 1 en az bir İYE olacaktır göstermiştir. Ayrıca, nüks önemli bir sorundur. Bir başlangıç ​​akut enfeksiyon olan bir kadın antibiyotik tedavisi ve birçok kadın sık nüks 2 yaşamaya devam uygun olmasına rağmen altı ay içinde ikinci bir enfeksiyonu olan bir% 25-40 şansı var. Bu enfeksiyona neden olan bakteriler de giderek daha fazla antibiyotiğe dirençli karıştırıcı tedavi protokolleri 3-6 hale gelmektedir. İYE hastalığın etkilerini ve yaygınlığını vurgulayan ABD&#39;de sağlık ile ilgili giderler yaklaşık 2,5 milyar dolara mal bireylerin milyonlara her yıl etkiler1,7 .Nosocomial esas olarak kalıcı kateter gibi yabancı cisimlerin varlığı ile ilişkilidir İYE satın almıştır. Kateter ilişkili İYE (CAUTI) bu tür enfeksiyonların 8% 70-80 ~ muhasebe, İYE edinilen en sık görülen hastane kalır. Ayrıca, CAUTI artmış morbidite ve mortalite ile ilişkili ve ikincil kan dolaşımı enfeksiyonlarının 9 en sık nedenidir olduğunu. İYE edinilen UPEC ilişkili topluluk cinsel ilişki, kötü hijyen veya farklı konak arasındaki diğer mikrobik nüfus dinamikleri sırasında mekanik manipülasyonu yoluyla gastrointestinal sistemde rezervlerden mesane içine bakterilerin giriş kaynaklandığı 10&#39;a nişler düşünülmektedir. Bir kez mesane içinde UPEC kapsül, demir toplama sistemleri, toksinler, bir virülans plazmid, tRNAs, patojenite adaları ve patogenezde rol oynadığı gösterilmiştir kolonizasyon faktörleri de dahil olmak üzere çok sayıda virülans faktörleri, istihdam &lt;sup&gt; 11-14. UPEC kolonizasyon kurulması için kritik, UPEC da stereokimyasal özgüllük 15 reseptörlerini tanıyan yapışkan hastabakıcı usher yolu (CUP) pili çok tip kodlar. FimH adezin uçlu tip 1 pili, UPEC ile ifade edilmektedir ve her ikisi de, insan ve fare keseli 18 lümen yüzeyi üzerinde ifade edilir uroplakins 16 ve α-1, β-3 integrinleri, 17 manosile bağlar. Bu FimH aracılı etkileşimler bakteri kolonizasyonu ve yüzeyel epitel hücrelerinin 19,20 işgali kolaylaştırmak. Tek bir bakteri hızla olgunlaşması üzerine, ~ 10 4 bakteri 21 içerebilir bir hücre içi bakteri topluluğu (IBC) oluşturmak için bölebilirsiniz nereye kez hücre içinde, UPEC sitoplazmaya kaçabilir. IBC formasyonu en az altı farklı fare soylarında gösterilmiştir, C3H / Hen, C3H / HeJ, C57BL / 6, FMA, FVB / NJ ve BALB / c ve farklı UPE bir çok çeşitliC suşları ve diğer Enterobacteriaceae 22-24. Ancak IBC formasyonunun zamansal ve uzamsal farklılıklar fare arka plan ve enfekte UPEC gerginlik bağlı olarak değişebilir. C3H Giriş / prototip UPEC ile enfekte HeN fareler UTI89 suşları veya CFT073, IBC formasyonu gibi erken 3 HPI (saat sonrası enfeksiyonu) gibi bakterilerin küçük biyokütlelerin olarak görüntülenebilir. Bu topluluk genişletmeye devam ediyor ve çubuk şekilli bakteriler terminal farklılaşmış yüzeysel şemsiye hücrelerinin sitoplazmik alan büyük bir yüzdesini işgal zaman kalkınma yaklaşık 6 HPI bir &quot;orta noktası&quot; ulaştığında benzer boyutları görüntüleyen çoğunluğu ile nispeten senkron bir şekilde bu erken IBC formu ve morfolojisi. ~ 8 hpi bir basilinin gelen IBC değişim bakteri morfolojisi koklar için. IBC doğada geçicidir. Böylece, bakteriyel nüfusunun sürekli genişleme 12-18 hpi sonuçlarından IBC olgunlaşma, hücre wi dışarı onların ipliklenmenin ve dağılma ardındankomşu hücreler 23 sonraki yayılmasını th. Bu nedenle, IBC hücresi konak bağışıklık tepkilerinin ve antibiyotikler 25 korunmuş bir ortamda hızlı bir bakteri büyümesi sağlar. farelerde görülür UPEC enfeksiyonun farklı aşama, aynı zamanda, insanlarda 22,26-28 İYE modellemek için kullanılabilecek yararlı bir araç olarak İYE fare modelini destekler, bu IBC ve ipliklenmenin olarak insanlarda görülür. Kadınların çoğunluğu yaşamları boyunca bir İYE yaşarken, bu enfeksiyonların sonucu sık tekrarlayan sistit, hiçbir nüks akut kendini sınırlayan enfeksiyon uzanabilir. Dahası, çalışmalar genetik bir bileşeni İYE yatkınlık 29 katkıda düşündüren, İYE güçlü ailesel geçtiği gösterilmiştir. Biz kliniklerde görülen farklı İYE sonuçları kendilenmiş fare suşlarının 30 arasında deneysel UPEC enfeksiyonu farklı sonuçların tarafından yansıtılmış olabilir bulduk. Örneğin, C3H / HeN, FMADBA ve C3H / HeOuJ fare bulaşıcı bir doza bağlı bir şekilde, kalıcı, yüksek titre bakteriler (&gt; 10 4 koloni oluşturan birim (CFU) / ml), yüksek titre bakteriyel özelliği uzun ömürlü, kronik sistit, duyarlı kurban mesane yükü&gt; 4 hafta sonrası enfeksiyon (TEFE), kronik inflamasyon ve ürotelyal nekroz. Bu fareler de kronik sistit gelişimi için biyobelirteçleri olarak hizmet ilk 24 HPI içinde IL-6, G-CSF, KC ve IL-5 serum seviyelerini gösterir. Plasebo çalışmaları İYE sistit ilk belirtiler sonra birkaç hafta boyunca kendi idrarda bakteri yüksek düzeyde tutacaktır karşılaşan kadınların büyük bir yüzdesi antibiyotik tedavisi 31 verilmediği takdirde göstermiştir ki gibi bu doğru, bazı kadınlarda İYE doğal seyrini temsil edebilir , 32. Dahası, C3H / HeN fareleri kullanılarak, kronik sistit öyküsü sonraki şiddetli tekrarlayan enfeksiyonlar için önemli bir risk faktörü olduğunu gördük. Tekrarlayan İYE çoğu si iseİYE ve C3H / HeN fare gnificant klinik bulgusu şu anda önceki maruz kaldıktan sonra artan yatkınlık özetlediği tek okudu modeldir. İkinci İYE sonuç Akut UPEC enfeksiyonu yaklaşık bir hafta içinde mesane iltihabı ve bakteriüri çözünürlüğe sahip, kendini sınırlayan nerede C57Bl / 6 fareler değinmeyecek. İlginç olarak, bu modelde, UPEC kolaylıkla UPEC potansiyel insanlarda 33 aynı suşu tekrarlayan İYE dair bir yöntemi, 34 açıklayan bir aktif İYE yeniden başlatmak için atıl bir durumda ortaya çıkan yeteneğine sahip olan mesane dokusu içinde hareketsiz hücre içi rezervuarlar oluştururlar. İYE duyarlılık genetik etkilere ek olarak, mesane içine bir kateter giriş büyük bir enfeksiyona sahip olarak bir enfeksiyon neden olabilecek bakteri dizi artan olasılığını artırır. Bu insan idrar kateterizasyon histolojik neden olduğu gösterilmiştir venedeniyle mekanik sağlam bir inflamatuvar yanıt ile sonuçlanan stres, pul pul dökülme, lamina propria ve submucusa, ürotelyal incelme ödem ve ürotelyum ve böbrek 35,36 mukozal lezyon mesanede immünolojik değişiklikler. Buna ek olarak, kateter ve böylece CAUTI neden çeşitli türleri tarafından kullanılan bir ortam yaratmak bakteriyel bağlanması için bir yüzey temin eder. UPEC hala büyük bir katkı olmakla birlikte, Enterococcus faecalis bu CAUTI 37% 15 oluşturmaktadır. E. faecalis ciddi bir sağlık sorunu 38 poz, direnç ortaya çıkması vankomisin ile antibiyotiklere dirençli giderek hale geliyor. E. faecalis toksinler ve kateter ve epiteline 38 hem tutturmak için gerekli adezinler dahil olmak üzere birçok virülans faktörleri sahiptirler. Üriner kateterizasyon sırasında, ev sahibi idrar yolu 39,40 mikrobiyal yapışma, çarpma ve yayılması savunmasızdır. E. faecabir mekanizmanın parçası mesane inat ve bir fare CAUTI modelinde 41 çoğaltılamaz böbrekler için yaymak olarak lis kateter üzerinde bir biyofilm oluşturmaktadır. Son zamanlarda, üriner kateter içinde gösterilmiştir, fibrinojen (FG) enflamatuar yanıtın bir parçası olarak mesane içine salınır. Fg mont kateter mesanede birikir ve E. için önemlidir faecalis biyofilm oluşumu, bir ek iskele olarak işleyen. CAUTI bir C57BL / 6 fare modelinde, o keşfettik E. faecalis biyofilm kateter üzerinde oluşumu ve mesane böylece sebat, özellikle ucu adhesin EbpA EBP pilus bağlıydı. Biz EbpA N-terminal alanı, özellikle kateter kaplama FG bağlanır olduğu bulunmuştur. Buna ek olarak, tespit E. faecalis enfeksiyon sırasında metaboliti kaynağı, böylece biyofilm oluşumunu 42 artırılması olarak FG kullanır. Fare model under kritik kanıtlanmıştırzanmıştır yanı sıra idrar yolu enfeksiyonu ve CAUTI 41 klinik belirtilerini tahmin. Bu yazıda sistit UPEC inokulum hazırlanması göstermek UTI89 ve C3H / HeN farelerin transüretral aşılama izole. Ayrıca, E. kateter C57BL / 6 farelerinde yerleştirilmesi ve aşılama için bir protokol göstermektedir faecalis&#39;in OG1RF süzün. Bu tekniklerin her ikisi de farelerde tutarlı ve güvenilir üriner veya CAUTI yol açar. Biz de kronik veya tekrarlayan sistit analizi için akut sistit ve idrar toplama sırasında IBC oluşumunu gözlemlemek için kullanılan teknikleri gösterilecek. C3H / HeN fareler ilk bakteri istilası, IBC formasyonu, ipliklenmenin ve kronik sistit 23,33,43 geliştirilmesi dahil olmak üzere UPEC patogenezinde yönlerini incelemek için kullanılmıştır. Bu hastalık oluşturma parametreleri de diğer fare arka 22,33 çeşitli çalışmalar yapılmıştır. CAUTI için C57BL / 6 modeli müteakip bakteriyel işbirliği ile mesane içine yabancı cisim implantasyonu için izin verir7 gün boyunca muhafaza edilebilir lonization, enfeksiyon sonrası 41. Bu modeller daha sonra değinmeyecek veya klinik insan popülasyonlarında gözlenmiştir çok olan konak yanıtları, yıkmak için bakteriyel hastalık mekanizmaları, İYE ev sahipliği yanıtları ve mekanizmaların değerlendirilmesi için yararlı olmuştur.

<table><tbody><tr><td>Kateter ve iğne hazırlama malzemesi:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>30 G iğneler</td><td>BD Precision Glide</td><td>305106</td><td>30 G x &frac12; (0,3 mm x 13 mm)</td></tr><tr><td>PE10 polietilen boru</td><td>BD</td><td>427400</td><td>İç çap -0,011 inç (0,28 mm); dış çap &ndash; 0,024 inç (0,61 mm)</td></tr><tr><td>RenaSIL 025 platinle kürlenmiş silikon boru</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>SIL 025</td><td>iç çap-0,012 x dış çap 0,025, 25 ft coil</td></tr><tr><td colspan="4">Enfeksiyonlar için malzeme:</td></tr><tr><td>İzoflonan &ndash; Isothesia</td><td>Butler Schein</td><td>29405 250</td><td>ml</td></tr><tr><td>Şeffaf Cam Düz Kenarlı Kavanoz</td><td>Kimble Chase</td><td>5413289V 21</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Çay Demlik</td><td>Schefs-Amazon</td><td></td><td>Premium Gevşek Yapraklı Çay Demlik By Schefs - Paslanmaz Çelik - Büyük Kapasite -</td></tr><tr><td>Steril olmayan pamuk topları</td><td>Fisherbrand</td><td>22-456-880</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Falcon tüpleri</td><td>VWR</td><td>89039-660</td><td></td></tr><tr><td>Isotec 3 -buharlaştırıcı</td><td>Ohmeda</td><td>1224478</td><td></td></tr><tr><td>Kulak yumruğu</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-201</td> <td>(gerektiğinde)</td></tr> <tr><td>Betadine çözeltisi</td><td>Betadine çözeltisi</td><td></td><td>% 10 Povidie-iyot topikal çözeltisi</td></tr><tr><td>Q-ipuçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-924</td><td>6 inç</td></tr><tr><td>Tezgah için çocuk bezi</td><td>Fisherbrand</td><td>14206 63</td><td>Emici Alt Pedler (20" X36 inç paspaslar)</td></tr><tr><td>Cerrahi yağlayıcı</td><td>Surgilube</td><td>0281-0205-36</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon makası</td><td>Güzel Bilim aletleri, INC</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Adson Forseps</td><td>Güzel Bilim aletleri, INC</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>1 ml şırınga</td><td>BD</td><td>309659</td><td>Tüberkülin kayma ucu</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td>4 inç x 125 FT</td></tr><tr><td>Eppendorf raf</td><td>Fisherbrand</td><td>05-541-1</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tüpleri</td><td>MIDSCI</td><td>AVX-T-17-C</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Toplama kateterleri, mesaneler ve böbrekler:</td></tr> <tr><td>Homojenizatör</td><td>PRO Scientific INC</td><td>Bio-Gen Pro 200</td><td></td></tr><tr><td>Organ homojenizasyonu için</td><td>5 ml polipropilen yuvarlak tabanlı tüp</td><td>BD</td><td>352063</td></tr><tr><td>Kağıt havlu</td><td>Georgia-Pacific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>11100020S</td><td>200 kanıt</td></tr><tr><td>Costar ve ticaret; Şeffaf Polistiren 96 Kuyulu Plakalar</td><td>Corning</td><td>3788</td><td></td></tr><tr><td>1x Fosfat sodyum salin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>BRANSONIC Ultrasonik temizleyici 1210</td><td>Branson Ultrasonik Şirketi</td><td>1210</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">IBC malzemeler:</td></tr> <tr><td>6 kuyulu doku kültürü test plakası</td><td>Tekno Plastik Ürünler</td><td>92006</td><td></td></tr><tr><td>Pim</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>Dow Corning</td><td>3097358-1004</td><td>Silikon Elastomer Kiti</td></tr><tr><td>X-gal (5-bromo-4-kloro-3-indolil-b-D-galaktozit)</td> <td>İnvitrojen</td><td>15520-034</td><td>Ultrasaf</td></tr><tr><td>N, N-Dimetilformamid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4551</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 (Magnezyum klorür)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum deoksikolat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Nonidet-P40</td><td>Roche</td><td>11754599001</td><td>Oktilfenolpoli (etilenglikoleter) n</td></tr><tr><td>Potasyum hekzasiyanoferrat (II) trihidrat (K-ferrOcyanide)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>P3289</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum hekzasiyanoferrat (III) (K-ferrIsiyanür)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>60299</td><td></td></tr></tbody></table>

fare modelinde kuruluş ve İye ve cauti karakterizasyonu

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

İdrar yolu enfeksiyonları (İYE) son derece yaygın bir morbidite nedenidir ve antibiyotik tedavisine giderek dirençlidir. Dişiler orantısız İYE tarafından tutulmuş olan: Bütün kadınların% 50&#39;si yaşamları boyunca bir İYE olacak. Ayrıca, ilk İYE yaşam, ağrı ve rahatsızlık, günlük faaliyetlerin bozulması kalitesinde ciddi bozulma bazı acı sık nüks ile nüks yaşayacaktır var bu kadınların% 20-40, sağlık maliyetleri artmıştır ve birkaç tedavi seçenekleri diğer uzun süreli antibiyotik profilaksisi daha. Üropatojenik Escherichia coli (UPEC) İYE edinilen toplumun temel etkenidir. Kateter ilişkili ÜSE (CAUTI) bir milyon yılda ABD&#39;de olaylar ve dramatik sağlık masrafları için muhasebe en yaygın hastane kökenli bir enfeksiyondur. UPEC ayrıca CAUTI birincil nedeni iken, diğer etkenler de dahil olmak üzere Enterococcus artan öneme sahiptirfaecalis&#39;in. İşte bu insan hastalıklarının klinik özellikleri birçok recapitulate iki köklü fare modellerini kullanmaktadır. İYE için, C3H / HeN modeli konak yanıtları, IBC oluşumu ve ipliklenmenin dahil insanlarda gözlenen UPEC virulans özellikleri birçok özetlediği. CAUTI, kateter, mesane implantlar korumak C57BL / 6 fareleri kullanan bir model için, E. duyarlı olduğu gösterilmiştir faecalis&#39;in mesane enfeksiyonu. Bu temsili modeller yeni terapötik ve yönetim veya önleme stratejilerinin geliştirilmesine öncülük etmektedir İYE hastalığın patogenezinde içine çarpıcı yeni anlayışlar kazanmak için kullanılmaktadır.

komplikasyonsuz ve kateter ilişkili İYE intravezikal modelleri bu ortak ve pahalı enfeksiyonları yönetmek bakteriyel patogenezi, konak dokusunda bu hastalıkların etkisi, ve geliştirme ve yeni yaklaşımların test moleküler mekanizmaların için esnek platformlar sunmak. Fare zorlanma ve patojene bağlı olarak, intravezikal aşılama akut başlatmak veya modüle edilmesi için gerekli faktörleri (Şekil 1 ve 3), kronik veya tekrarlayan (Şekil 2) sistiti aydınlatmak için konak-patoj...

Üriner sistem enfeksiyonlarını (İYE) modelleme yeteneği, bakteriyel patogenezi anlayabilmek ve yeni terapötiklerin geliştirilmesini sağlayabilmek için çok önemlidir. Bu çalışmanın amacı, insanlarda görülen bulguları özetleyen ve tahmin eden deneysel İYE ve kateterle ilişkili İYE'nin fare modellerini göstermektir.

Fare Modelinde Kuruluş ve İYE ve CAUTI Karakterizasyonu

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Bu prosedürün genel amacı, fare modelinde üriner sistem enfeksiyonlarının (ÜSE) veya kateterle ilişkili üriner sistem enfeksiyonlarının (KÜSE) oluşturulması ve bu enfeksiyonların değerlendirilmesi için güvenilir bir yöntem sunmaktır. Bu işlem, öncelikle bakteriyel inokülumların, kateterin ve iğnenin uygun şekilde hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, fare üriner sistemine intravezikal inokülasyon yapılır ve kateter yerleştirilir.Ardından, enfeksiyonu değerlendirmek için üriner sistem dokuları ve kateterler toplanır. Son olarak, doku, idrar ve kateterdeki bakteri yükü ve/veya hücre içi bakteri topluluğu veya IBC oluşumu belirlenerek enfeksiyon miktarı saptanır. Nihayetinde, bir fare modelinde üriner sistem kolonizasyonunun kurulması, kalıcılığı ve şiddetini göstermek için CFU sayımı ve laks boyama kullanılır.Bu tekniğin temel avantajı, TI patogenezindeki kritik basamakları ortaya çıkarmak amacıyla insan idrar yolu enfeksiyonlarını (İYE) taklit eden güvenilir bir model geliştirmektir. Bu model, İYE'ler için yeni tedavi yöntemlerinin ve terapötiklerin geliştirilmesine yardımcı olmuştur. Üretra ve mesane dokusunun manipülasyonu sezgisel olmadığından; inokülasyon, stabilizasyon ve hücre içi bakteriyel toplulukların değerlendirilmesinin öğrenilmesi zordur, bu nedenle bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir.Başlamak için, yaklaşık bir inç uzunluğundaki PE 10 tüpü 30 gauge bir iğnenin şaftına geçirin. Gece boyunca UV ile sterilize edin ve bakteriyel inokulumu hazırlayın. Steril bir çalışma istasyonunda, metin protokolüne uygun olarak, hazırlanan bakteriyel inokulumdan 0,9 ml'ye kadar bir mililitrelik şırıngaya çekin.Hazırlanan, PE tüplü steril inokulum iğnesini şırıngaya takın ve steril makasla tüpü bir milimetre uzunluğunda olacak şekilde kesin. Metin protokolüne uygun olarak dişi bir fareyi anestezi altına aldıktan sonra, fareyi bir kağıt havlu üzerine sırt üstü yerleştirin ve bacaklarını açın. Fareye bir burun konisi takın ve kontrollü izoflorin kaynağı sağlayın.İdrar yapımını uyarmak için mesaneyi nazikçe palpe edin ve %100 etanol mendiliyle periretral bölgeyi temizleyin. İnokülasyon iğnesi şırıngasının ucunu önce cerrahi lubrikanta batırın. Ardından, inokülasyon iğnesini üretranın yaklaşık 12 milimetresine kadar yerleştirin ve bakteriyel solüsyonun 50 µL'sini mesaneye aktarmak için şırınga pistonunu nazikçe itin.Enfeksiyon öncesi veya sonrası idrar toplamak için, fareyi kuyruğundan tutarak bir fare kafesinin üstü gibi düz ve yüksek bir yüzeye yerleştirerek nazikçe sabitleyin. Fare üretrasının altına steril 1,5 mililitrelik bir tüp tutun ve mesaneye basınç uygulamak için farenin kuyruk kısmına yakın sırt bölgesine nazikçe bastırın. İdrarı tüpün içine toplayın.İdrarın seri dilüsyonu hazırlanıp gece boyu kültüre edildikten sonra, C-A-U-T-I protokolünü gerçekleştirmek için kolonileri sayın. İlk olarak yedi milimetrelik bir PE 10 tüp parçası ve reil gibi beş milimetrelik bir silikon tüp parçası kesin. 30 gauge bir iğnenin kapağını çıkarın ve PE 10 tüpü kullanarak iğneyi tabanına kadar geçirin.Ardından silikon tüpü PE 10'un üzerine yerleştirin. Kateteri implante etmek için, kateter iğnesini boş bir bir mililitrelik şırıngaya takın. Bir inçlik kare şeklinde bir paraform parçası kesin ve üzerine bir miktar cerrahi lubrikant sürün.Fareyi anestezi ettikten sonra, bir kağıt havlu üzerine sırt üstü yerleştirin ve izofluran sağlamak için bir burun konisi takın. İdrara çıkmayı sağlamak ve mesanenin boş olduğundan emin olmak için mesaneye nazikçe palpasyon uygulayın. Ardından, periüretral bölgeyi temizlemek için %100 etanol içeren bir mendil kullanın.Ardından, periüretral bölgeyi dezenfekte etmek için %10 povidon iyot çözeltisi ve pamuk uçlu bir aplikatör kullanın ve inokülasyon iğnesinin ucunu cerrahi lubrikanta batırın. Daha sonra kateteri üretra açıklığına yerleştirin. Ardından, küçük silikon kateterin mesaneye yerleşmesini sağlamak için cımbız kullanarak PE tüpü mesaneye doğru itin.Ardından, yedi milimetrelik tüp hala takılıyken iğneyi hemen çıkarın. EFAs bakteriyel inokülumunu hazırladıktan sonra, bunu mesaneyi inoküle etmek için kullanın ve aşağıdaki gösterimde belirtildiği üzere bakteriyel yükü belirlemeden önce hayvanı kafesine geri koyun. Hayvan ötanize edildikten sonra, sırt üstü yatırın ve %70 ethanol ile karnına sprey sıkın, fareyi disseke ederek sırasıyla mesaneyi ve ardından böbrekleri toplayın ve organları birer XPBS içeren ayrı beş mililitrelik tüplere yerleştirin.Fare kateterize edilmişse, kateteri mesaneden çıkarın ve ayrı bir tüpe yerleştirin. Organlar homojenize edildikten, seri dilüsyonlar hazırlandıktan ve LB agar plaklarında gece boyunca aerobik olarak kültüre edildikten sonra, IBC sayımı için kolonileri sayın. Mesane toplandıktan sonra, PBS ile birlikte altı kuyucuklu bir plakanın silikon kaplı kuyucuğuna yerleştirin ve ikiye bölmek için makas kullanın.En dış kenarlar boyunca yerleştirilen küçük metal pinler kullanarak, lümen yukarı bakacak ve maksimum miktarda ürotelyum açığa çıkacak şekilde mesaneyi nazikçe gerin. Metin protokolünde belirtilen XI boyamasını gerçekleştirdikten sonra, diseksiyon mikroskobu altında mavi noktalar şeklinde görünen IBC'leri gözlemleyin. Burada gösterilen veriler, prototipik up e sistitis izolatı UTI 89 tarafından gerçekleştirilen akut aşama üriner sistem kolonizasyonunu temsil etmektedir.Bu şekilde, C3 HHEN farelerine iki x 10⁷ CFU U UTI I 89 inokülasyonundan dört hafta sonra ortaya çıkan CFU'lar gösterilmektedir. Bu deneysel koşullar altında, enfekte farelerin %20 ila %50'sinde kronik sistit gelişirken, farelerin geri kalan %50 ila %80'inde enfeksiyon çözülmektedir. IBC kantifikasyonu, akut sistit sırasında bakteriyel yükün bilgilendirici bir ölçüsüdür ve yüksek IBC seviyeleri, kronik sistit geliştirme riski ile korelasyon göstermektedir. Burada görüldüğü üzere, LAE becyase boyaması kullanıldığında IBC'ler, C3 HHEN arka planında sayılabilen, ürotelyum üzerindeki mavi mor noktacıklar şeklinde görünür. Mesane başına ortalama yaklaşık 50 IBC görülebilir.Burada gösterilen veriler, CA-A UTI'nin mesane implantı fare modelinden alınmıştır ve epha list suşu OG one rf ile yapılan 24 saatlik enfeksiyonları temsil etmektedir. 1x10⁷ CFU OG one RF implantsız bir mesaneye intravezikal olarak inoküle edildiğinde, enfeksiyon 24 HPI itibarıyla temizlenmeye başlar ve 3D PI'ye kadar çözülür. Buna karşın, implantlı bir mesaneye inoküle edilen OG one RF, hem kateterin hem de mesanenin kolonizasyonuyla sonuçlanır ve 24 HPI'de implantsız mesanelere göre on kat daha yüksek kolonizasyon seviyeleri görülür. Bu prosedürün ardından, IBC oluşumunu ve bakteriyel lokalizasyonu daha detaylı değerlendirmek için konfokal ve elektron mikroskobu gibi diğer teknikler kullanılabilir.Geliştirilmesinin ardından bu teknik, UTI alanındaki birçok araştırmacının, insan patogenezini yeniden canlandıran farelerde bakteriyel virülans faktörlerini ve konak yanıtlarını araştırmasına öncülük eden bir dalga başlattı.

establishment-and-characterization-of-uti-and-cauti-in-a-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video transüretral fare idrar yolu enfeksiyonlarına neden ve enfeksiyonların sonucunda dereceye ölçmek için yöntemler gösterecektir.

Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu

Kaynak: Luyts, N. ve diğerleri. Biyolüminesans görüntüleme ile farelerde idrar yolu enfeksiyonlarının uzunlamasına takibi ve tedavisi. J. Vis. Exp. (2021).Bu video, bakteriyel yapışma, invaziya ve hücre içi çoğaltmanın gerçekleştiği mesane içine enjekte edilen biyolüminesan E. coli kullanılarak fare modelinde idrar yolu enfeksiyonunun indüksiyonu ve izini göstermektedir. Biyolüminesans operondan yayılan ışık, enfeksiyon ilerlemesi sırasında bakteri yükünün gerçek zamanlı göstergesi olarak...

Biyolüminesans kullanarak fare modelinde idrar yolu enfeksiyonunun görselleştirilmesi

Kaynak: Conover, M. S. ve diğerleri, J. Fare Modelinde İYİS ve KAUTI'nin Kuruluşu ve Karakterizasyonu. J. Vis. Exp. (2015)Bu video, dişi bir farede transüretral kateter montajı ve implantasyonunu, ardından kateterle ilişkili idrar yolu enfeksiyonunu belirlemek ve biyofilm aracılı konak-patojen etkileşimlerini araştırmak için bakteriyel aşılama prosedürünü göstermektedir.

Fare modelinde kateterle ilişkili idrar yolu enfeksiyonu

Bu video, ürotelyal hücreli karsinom ilerlemesini incelemek için kullanılabilecek deneysel bir ksenogreft murin modeli oluşturma prosedürünü açıklar.

Hasta Kaynaklı Tümör Ksenogreftleme: Ürotelyal Hücreli Karsinomun Değerlendirilmesi için Deneysel Fare Modeli Oluşturma Tekniği

Bu videoda, farelerde idrar yolu enfeksiyonu modeli oluşturmak için üropatojenik bakterilerin intravezikal uygulama tekniğini açıklıyoruz. Bu model, üropatojenik bakteriyel enfeksiyonun üriner sistem içindeki yayılımını ve İYE duyarlılığını belirleyen mekanizmaları anlamak için kullanılabilir.

İdrar Yolu Enfeksiyonu Modelinin Oluşturulması: İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Geliştirmek İçin Farede Üropatojenik Bakterilerin Uygulanması İçin Bir Teknik

Bu video, transüretral kateter damlatma yoluyla bir dişi fare mesanesinde üropatojenik Escherichia coli enfeksiyonunun oluşumunu göstermektedir. Enjekte edilen bakteriler, mesane içinde başarılı bir idrar yolu enfeksiyonu oluşturur ve idrar yolu ile ilgili sağlıkla ilişkili hastalıkları incelemek için değerli bir platform sağlar.

Erkek Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Oluşturmak için Transüretral Kateterizasyon ve Bakteriyel Aşılama

Dişi Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modelinin Oluşturulması

Prostat enfeksiyonu kronik prostatit pelvik ağrı arabuluculuk katkıda bulunan bir faktör olabilir. Biz standardize edilmiş bakteriyel inokulum, zamanla farelerde dokunsal allodini ölçmek için erkek farelerde ve metodoloji üretra içine bakteri instilasyon hazırlama prosedürü açıklanmaktadır.

Bakteriyel Prostatit bir fare modelinde Dokunsal allodini Ölçümü

Farelerin transüretral Kateterizasyon kurulan modeli mesane patolojiler, idrar yolu enfeksiyonu, dahil olmak üzere çalışma sağlar ancak yalnızca dişi içinde gerçekleştirilebilir. Burada anlatılan erkek transüretral korumak yeni bir model araştırma cinsiyetler arasında güçlü klinik ve epidemiyolojik farklarına iaretlenmi bir alanı sağlayacaktır.

İdrar yolu enfeksiyonu küçük bir hayvan modeli: erkek ve dişi farelerin transüretral Kateterizasyon

Gizli hücre içi mesane rezervuarları oluşturmak için üropatojenik E. coli (UPEC) transüretral aşılamasının bir fare modeli ve tekrarlayan UPEC İYE'yi indüklemek için G. vajinalis'e mesane maruziyeti gösterilmiştir.  Ayrıca bakterilerin sayımı, idrar sitolojisi ve in situ mesane fiksasyonu ve taramalı elektron mikroskobu için işlenmesi de gösterilmiştir.

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

Bu makalede, farelerde idrar yolu enfeksiyonuna neden olacak lüks bir operon ile üropatojenik bakterilerin intravesik yönetimi ve daha sonra biyolüminesans görüntüleme kullanılarak bakteri yükünün uzunlamasına in vivo analizi açıklanmaktadır.

Biyolüminesans Görüntüleme Kullanan Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonlarının Boyuna Takibi ve Tedavileri

Keşfedin fare modelinde idrar yolu enfeksiyonu ve kateter ilişkili İYE kurulum yöntemlerini. Bakteri yükü ölçümü ve intraselüler bakteri toplulukları analiziyle enfeksiyon şiddetini değerlendirin.

Fare Modelinde Kuruluş ve İYE ve CAUTI Karakterizasyonu

Daha fazla video keşfet