Name: Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Öğrenin farelerde servikal kalp nakli modelini, iskemi-reperfüzyon hasarı ve greft reddini incelemek için. Manşet tekniği karmaşık dikişleri atarak prosedürü basitleştirir ve tutarlı sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

M.-A. Deutsch, Dr. Rusche Forschungsprojekt (2014), Deutsche Stiftung für Herzforschung ve Deutsche Gesellschaft für Thorax- Herz- und Gefäßchirurgie tarafından desteklenmektedir. M. Krane, Deutsche Stiftung für Herzforschung (F/37/11), Deutsches Zentrum für Herz Kreislauf Forschung (DZHK B 13-050A; DZHK B 14-013SE) ve Deutsche Forschungsgemeinschaft (KR3770/7-1; KR3770/9-1)

Bütün deneyler Alman Kalp Merkezi Münih ve Bavyera, Almanya (Gz. 55.2-1-54-2532.3-17-13) Hükümeti tarafından kabul edildi. Hayvanlar belli bir patojen serbest tesis içinde yer ve Tıbbi Araştırmalar Ulusal Derneği ve Ulusal Bilimler Akademisi tarafından verilen &quot;Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu&quot; ile formüle &quot;Laboratuar Hayvan Bakımı İlkeleri&quot; ile uyumlu insan bakım alınmıştır Fen ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH Yayın no. 86-23, 1985 revize) tarafından yayınlandı. NOT: İki kavisli bir forseps ve damar dilatatörler dahil steril mikrocerrahi aletlerin tam bir set, prosedür (Şekil 2a) için gereklidir. Perioperatif antibiyotik profilaksisi rutin gerekli değildir, ancak, bağışıklığı bozulmuş hayvanlarda endike olabilir. Hayvanlar, terminal izofluran inhalasyonu ile sakrifiye edildi. Donör Hazırlama ve Aşı Hasat &lt;ol&gt; <li> Intraperitonal (ip) ile hayvan midazolam enjeksiyonu (5.0 mg / kg), medetomidin (0.5 mg / kg) ve fentanil (0.05 mg / kg vücut ağırlığı) anestezisi. Operatif sahada yatar pozisyonda fare yerleştirin ve pedal çekme refleksi cerrahi toleransı onaylayın. </li><li> Klorheksidin ile cilde üç kez dezenfekte ve orta hat karın kesisi gerçekleştirin. Inferior vena kava maruz sola ıslak bir gazlı bez ile bağırsakları geri çekin. </li><li> Antikoagülasyon inferior vena kava ile 0.4 ml serum fizyolojik içinde sulandırılmış heparin 50 IU enjekte edilir. Heparin sonrası damar 1 dakika İnsizyon. </li><li> Diyaframı açın ve kalp maruz ikili torakotomi gerçekleştirin. Ön göğüs duvarı superiora yansıyan ve bir kelepçe ile yerinde tutulur. </li><li> Timus çıkarın ve açıkça aort ve pulmoner gövdede arasındaki bağ dokusunu incelemek. Sağ superior vena kava İnsizyon. </li><li> Düzeyinde harekete çıkan aort delinme30 G iğne ile brakiyosefalik gövde 5 ml şırınga üzerine monte ve yavaş yavaş 4 ° C soğuk kardiyoplejik çözeltisi 3 ml aşırı baskı olmadan retrogradually kalbi serpmek. Koroner dolaşım içine hava girmesini önleyin. Ayrıca kardiyak arrest geliştirmek için greft üzerine buz tuz çözeltisi bırakın. </li><li> Brakiosefalik gövde kökeni proksimale aort transect. </li><li> 8-0 ipek ile kalbe yakın alt ve üst venae hem kava inferior bağlanır ve bitişik harfler distal onları transect. </li><li> Kadar distale mümkün olduğunca pulmoner gövde ücretsiz teşrih. 8-0 ipek ile çatallanma yakın pulmoner arterleri bağlanır ve distalde onları transect. </li><li> Tek bir 8-0 ipek ligatür ile hep birlikte pulmoner venlerin bağlanır ve onları transect. </li><li> Donörden kalbini çıkarıp implantasyon kadar buz gibi soğuk kardiyoplejik solüsyon içinde saklayın. </li></ol> 2. Alıcı Hazırlık <ol><li> HazırlamakBir No. 11 neşter veya mikroskop altında bir makas ile polimid boru keserek anastomozlar için manşet. Manşet, bir silindirik gövde ve damar kelepçesi yerleştirilmesi için bir uzantı (çevresinin 1/3), 1 mm (Şekil 2b) bir uzunluğu, her oluşur. </li><li> Hayvan anestezisi ve yukarıda tarif edildiği gibi, cerrahi tolerans teyit etmektedir. Sıvı replasmanı için 0.25 ml ılık tuzlu su solüsyonu subkutan (sc) enjekte edilir. </li><li> Elektrikli tıraş makinesi kullanarak sağ servikal bölgenin saç çıkarın ve sıcak bir pad üzerinde bir yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. Solunum tehlikeye sokabilir, bu kadar ön uzuvları gerilmeden kaçınarak bant ipliklerini bacakları sabitleyin. Kuruluğunu önlemek için oftalmik merhem kullanarak gözleri örtün. Cerrahi siteyi klorheksidin ile üç kez dezenfekte edin. </li><li> Juguler çentik sağ mandibular açıdan enine deri kesi olun. </li><li> Açık açık ext seferberernal juguler ven. Iki kutuplu bir forseps ile yan dalları cauterize ve bunları transect. </li><li> Submandibuler bezden ven ile izdiham düzeyinde ligatures arasındaki dış juguler ven bölün. </li><li> Manşet harici juguler ven çekin ve manşet uzantısı üzerinde bir damar kelepçe koyarak proksimale gemi tıkamak. Bitişik harfleri çıkarın ve 01:10 heparinli serum fizyolojik ile damar lümeni sulamak. </li><li> Manşet üzerinde damar duvarını Evert ve önceden belirlenmiş bir çevresel 8-0 ipek ligatür ile sabitleyin. </li><li> Sternocleidomastoid kasının yüzeysel kısmını çıkarın. </li><li> Sağ karotis arter harekete geçirmek ve karotis bifurkasyonu altındaki ligatures arasındaki gemi transect. </li><li> Manşet ile karotis arter çekin ve manşet uzantısı üzerinde bir Yaşargil kelepçe koyarak proksimale gemi tıkamak. Bitişik harfleri çıkarın ve 01:10 heparinli serum fizyolojik ile damar lümeni sulamak. </li><li> Yavaşça dilate bir gemi dilatatörle arter lümen, manşet üzerinde damar duvarını tersine çevrilmesi ve önceden belirlenmiş bir çevresel 8-0 ipek ligatür ile sabitleyin. </li><li> Greft implantasyonu için yeterli yer kazanmak için, submandibular bezin sağ lobunu çıkarın. </li><li> Implantasyon kadar nemli ameliyat alanını tutun. </li></ol> 3. Greft İmplantasyonu <ol><li> Başaşağı medial odaklı aorta ve pulmoner arter yanal ile alıcı servikal bölgede greft yerleştirin. </li><li> Karotis arter ile manşet üzerine greft aorta çekin ve çevresel 8-0 ipek ligatür ile anastomoz sabitleyin. </li><li> Onun ön yönü üzerinde akciğer gövde insizyon ve dış juguler ven ile manşet üzerine çekin. Yine çevresel 8-0 ipek ligatür ile anastomoz sabitleyin. </li><li> Karotid arter çözülmesini aşağıdaki dış juguler ven kelepçeyi çıkarın. Kalpler kanla hemen doldurur. R artırmak içineperfusion greft üzerine 37 ° C sıcak tuzlu su çözeltisi bırakın. Normalde kalp bir dakika içinde sinüs ritmi geliştirir. Venöz yerinde manşet uzantısını kaldırın. </li><li> Doğru greft pozisyonunu sağlamak, anastomozlar torsiyon olmadan gerilimsiz ve damarları olmalıdır. Bu beri cilt koterize gemiler yara iyileşmesini bozabilir etmeyin. Kanama genellikle kendiliğinden durur. Tek bir 8-0 sürekli dikiş ile cilt kapatın. </li></ol> 4. Ameliyat Sonrası Bakım <ol><li> Sıvı replasmanı için 0.25 ml ılık tuzlu su solüsyonu sc enjekte edilir. </li><li> Narkotik nalokson (1,2 mg / kg), flumazenil (0.5 mg / kg) ve sternal yatma muhafaza edilmesi için yeterli bilinci yerine kadar sıcak bir pedi üzerinde hayvan sol sc atipamezol (2,5 mg / kg vücut ağırlığı) enjekte antagonize etmek. Herhangi bir anormal davranış kaydetmek için en az bir saat daha hayvan gözlemleyin. Tamamen geri kazanılması kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyinKırmızı. </li><li> Buprenorfin ile önleyici analjezi sağlamak (0.05 mg / kg sc günde üç kez) ya da işlemden sonra 72 saat içinde minimum bir süre için yerel kurumsal protokole göre alternatif bir analjezi. </li><li> Cerrah ve bir veteriner hayvanları düzenli olarak görmelisiniz. Kilo kaybı&gt;% 15, halsizlik, şişme veya cerrahi yan enfeksiyon hayvanlar durumunda terminal izofluran inhalasyonu ile ötenazi. </li></ol>

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5, 733-735 (1973).</li>
<li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52, 1099-1101 (1991).</li>
<li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28, 565-570 (2008).</li>
<li>Schramm, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+subepicardial+microcirculation+in+heterotopically+transplanted+mouse+hearts%3A+an+intravital+multifluorescence+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">The subepicardial microcirculation in heterotopically transplanted mouse hearts: an intravital multifluorescence microscopy study.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 134, 210-217 (2007).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp : JoVE. 238, (2007).</li>
<li>Gong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+modified+cervical+cardiac+transplant+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">Introduction of modified cervical cardiac transplant model in mice.</a> Exp Clin Transplant. 10, 158-162 (2012).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51, 896-898 (1991).</li>
<li>Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+kidney+transplantation+in+mice%3A+technique+using+cuff+for+renal+vein+anastomosis%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis.</a> PloS one. 8, e77278(2013).</li>
<li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141, 682-689 (2007).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+hind-limb+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Orthotopic hind-limb transplantation in rats.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2010).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28, 47-50 (1979).</li>
<li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2012).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 7, 1672-1679 (2007).</li>
<li>Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+obliterative+bronchiolitis+in+a+murine+model+of+orthotopic+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2012).</li>
<li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+venous+bypass+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis.</a> Am J Pathol. 153, 1301-1310 (1998).</li>
<li>Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+on+suture+versus+cuff+anastomosis+in+mouse+cervical+cardiac+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant.</a> Exp Clin Transplant. 8, 245-249 (2010).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20, 1123-1128 (2001).</li>
<li>Arras, M., Autenried, P., Rettich, A., Spaeni, D., Rulicke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+intraperitoneal+injection+anesthesia+in+mice%3A+drugs%2C+dosages%2C+adverse+effects%2C+and+anesthesia+depth%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Optimization of intraperitoneal injection anesthesia in mice: drugs, dosages, adverse effects, and anesthesia depth.</a> Comp Med. 51, 443-456 (2001).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Biz çeşitli deneysel ortamlarda% 90 üzerinde bir başarı oranı ile 200 kalp nakli tamamladık. Burada anlatılan teknik ile, tam bir prosedür, deneyimli bir cerrahın 60 dakika içinde yapılabilir. Organ ihale öncesi servikal damarları hazırlayarak toplam greft iskemi süresi 20 dakika ile sınırlı olabilir. Implantasyon (sıcak iskemi süresi) için zaman sütür tekniği 16 oranla manşet tekniği kullanılarak önemli ölçüde daha kısadır. Bunun yerine sadece daha önce 5,17 açıklandığ...

Kalp nakli modeli sıkça I / R-yaralanma, allogreft reddini, nakil sonrası vaskülopatisinin ve imünmodüller ajanların etkinliğini araştırmak için kullanılır. Fare modelleri bilinen immünolojik ve genetik geçmişleri, birçok kendilenmiş ve transgenik suşları ve nispeten düşük maliyetlerle deneysel durumu gibi birçok avantaj birleştirir. 1973 yılında, farelerde abdominal Kalp nakli bir teknik ilk Corry ark 1 tarafından tarif edilmiştir. Bu modelde greftler alıcının abdominal aorta ve vena kava inferior ana pulmoner arter çıkan aort uç-yan anastomoz ile revaskülarize edilmektedir. 1991 yılında, farelerde rahim kalp transplantasyonu için olan bir dikiş tekniği Chen ve ark 2 tarafından tarif edilmiştir. Bu modelde bir retrograd koroner arter perfüzyon gr çıkan aorta alıcının karotis arter anastomoz tarafından kurulanKıç. Venöz kan sağ atriuma, sağ ventrikül içine koroner sinüs yoluyla drene ve alıcı dış şahdamarından (Şekil 1) içine pulmoner arter yoluyla atılır. Karın greft implantasyonu ile karşılaştırıldığında servikal modeli daha az invaziv ve greft yüzeysel konumu ek izlem muayeneleri (örn palpasyon, ekokardiyografi, intravital floresan mikroskopi) 3,4 için çok kolay erişilebilirlik sağlar. Teknik gelişmelere 5,6 olmasına rağmen, bu modelin daha yaygın kullanımı anastomoz kaçağı ve tromboz insidansının yüksek olan küçük damarların dikilir anastomoz gerçekleştirmek için teknik zorluklar nedeniyle sınırlı kalmıştır. 1991 yılında, Matsuura ve ark. damar duvarı büyük ölçüde servikal Kalp nakli 7 modelini kolaylaştıran bir sentetik silindir, üzerinde dışa dönük olduğu kaf tekniğini tanıttı. Tekniği fu oldurther renal 8, pankreas 9, bacak 10, hepatik 11,12, 13,14 akciğer ve damar nakli 15 de dahil olmak üzere çeşitli deneysel modeller için transplant kabul etmiştir. Dikiş tekniği ile karşılaştırıldığında gereken anastomozlar için zaman ve böylece sıcak iskemi süresi kısadır ve içinde manşet tekniği kullanılarak 16 daha az vasküler komplikasyonları vardır. Ayrıca, yüksek başarı oranı ile işlemi gerçekleştirmek için mikrocerrahi az eğitim ile cerrahlar sağlar. Manşet tekniğinin bir dezavantajı serebral perfüzyon değiştirebilir karotis arter, bir önkoşul ligasyonu olduğunu. Bu videoyu yazıda farelerde servikal Kalp nakli için geliştirilmiş ve basitleştirilmiş manşet tekniği sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>Forseps JFC-7.2</td><td>S & T</td><td>P-00036</td><td>Kavisli uç 0,20 mm</td></tr><tr><td>Damar dilatatörü D-5a</td><td>S & T</td><td>S-00124</td><td></td></tr><tr><td>Adventita makas</td><td>S & T</td><td>S-00102</td><td></td></tr><tr><td>Vasküler kelepçe B-1V</td><td>S & T</td><td>S-00396</td><td></td></tr><tr><td>Yaşargil Klips</td><td>Peter Lazic</td><td>65,097</td><td>3,5 mm uzunluk</td></tr><tr><td>Bipolar forseps</td><td>Micromed</td><td>148-100-011</td><td>uç 0,25 mm</td></tr><tr><td>Poliimid tüpler</td><td>River Tech Medical</td><td></td><td>19-24 gauge</td></tr><tr><td>8.0 ipek ligatürler</td><td>Catgut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK çözeltisi</td><td>Temel İlaçlar</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde heterotopik servikal kalp nakli

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Farelerde heterotopik servikal kalp nakli, nakil ve kardiyovasküler araştırmalarda değerli bir araçtır. Manşet tekniği, küçük damarların zorlu sütür anastomozlarını önleyerek bu modeli büyük ölçüde basitleştirir ve böylece sıcak iskemi süresini azaltır. Abdominal greft implantasyonu ile karşılaştırıldığında, servikal model daha az invazivdir ve implante edilen grefte daha ileri takip muayeneleri için kolayca erişilebilir. Anastomozlar, greftin çıkan aortunun alıcının ortak karotid arteri ile manşet üzerinden çekilmesi ve ana pulmoner arterin dış juguler ven ile manşet üzerinden çekilmesi ile gerçekleştirilir. Uygun manşet boyutunun seçilmesi ve damarların tam mobilizasyonu başarılı bir revaskülarizasyon için önemlidir. İskemi-reperfüzyon (I/R) hasarı, greftin kardiyoplejik bir solüsyon ile perfüze edilmesi ve hipotermi ile en aza indirilebilir. Bu yazımızda, temel mikrocerrahi becerilere sahip cerrahların işlemi yüksek başarı oranıyla gerçekleştirmesine olanak tanıması gereken basitleştirilmiş ve geliştirilmiş bir manşet tekniği için teknik detaylar sunuyoruz.

Ekibimiz başarıyla yaklaşık 20 eğitim ameliyatlarından sonra açıklanan teknik gerçekleştirebilir. En zorlu kısmı kolayca geri çevirir ve çoklu girişimler duvarın yırtılmaya yol açabilir, çünkü manşet üzerinde karotis arter damar duvarını tersine çevrilmesi için olduğunu. Eğitim döneminden sonra, ortalama toplam ameliyat süresi 60 ± 8 dk idi. Yaklaşık 20 dakika donör hasat, servikal damarlar ve anastomoz ve cilt kapatılması için 15 dakika hazırlanması için 25 dakika gereklidir. Miyokard I / R...

Manşet tekniği, küçük damarların teknik olarak zorlayıcı sütür anastomozlarından kaçınarak farelerde heterotopik servikal kalp nakli modelini kısaltır ve kolaylaştırır. Bu video makalesinde gösterilen teknik ayrıntılar, araştırmacıların bu modeli laboratuvarlarında kurmalarına izin vermelidir.

Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Bu video, sinjenik farelerle iskemi reperfüzyon hasarını veya allojenik hayvanlarla greft reddini incelemek amacıyla uygulanan servikal kalp transplantasyonunun deneysel bir modelini sunmaktadır. Prosedürün ilk adımı, donör fareden kalbin çıkarılmasıdır. Greft, deneysel düzeneğe bağlı olarak buz üzerinde, kardiyoplejik çözelti içerisinde dört saate kadar saklanır.Bir sonraki adım, alıcı farenin sağ servikal damarlarının hazırlanmasıdır; ayrılmış eksternal juguler ven ve karotis arterin damar duvarı bir manşetin üzerine kıvrılır ve bir ligatürle sabitlenir. Prosedürün son adımı, greftin alıcı fareye implantasyonudur. Greftin asendan aortu, karotis arterle birlikte manşetin üzerine çekilir ve pulmoner trunkus eksternal juguler vene anastomoz edilir.Son olarak, klempler çıkarılır ve reperfüzyon başlatılır. Normal şartlarda kalp, bir dakika içinde sinüs ritmi geliştirir. Karın içi greft implantasyonuyla karşılaştırıldığında, servikal kalp transplantasyonu yöntemi daha az invazivdir ve hayvanlar daha hızlı iyileşir.Ayrıca anastomoz için kals kullanılarak küçük damarların dikilmesine tamamen gerek kalmaz, bu da yöntemi teknik olarak daha uygulanabilir bir model haline getirir. Fareyi izofluran ile ön sedasyon uyguladıktan sonra, intraperitonal anestetik enjeksiyonu ile anestezi yapın ve pedal çekilme refleksini kontrol ederek cerrahi toleransı doğrulayın. Ardından fareyi operasyon alanına sırtüstü pozisyonda sabitleyin.Ardından cildi klorheksidin ile üç kez dezenfekte edin. Şimdi orta hat abdominal insizyon yapın ve inferior vena cava'yı açığa çıkarmak için ıslak bir gazlı bez kullanarak bağırsakları sola çekin. Daha sonra koagülasyonu önlemek için IVC'ye 0,4 mililitre salin ile seyreltilmiş 50 ünite heparin enjekte edin.Bir dakika sonra, damarı kestikten sonra diyaframı açın ve kalbi açığa çıkarmak için bilateral torakotomi gerçekleştirin, ön göğüs duvarını üst yöne doğru yansıtın ve bir klemple sabit tutun. Ardından, timusu çıkarın ve aorta ile pulmoner trunkus arasındaki bağ dokusunu küt diseksiyonla ayırarak sağ üst VA cva'yı kesin. Daha sonra, brachiocephalic trunkus seviyesinde mobilize edilmiş desendan aorta'yı delmek için 30 gauge bir iğne kullanın ve kalbi retrograd olarak üç mililitre buz gibi soğuk kardiyoplejik solüsyon kullanarak yavaşça perfüze edin.Aşırı basınç uygulamayın. Hava enjekte etmeyin. Kardiyak arresti daha da güçlendirmek için greft üzerine buz gibi soğuk salin damlatın.Ardından aortayı, brakiyosefalik gövdenin başlangıcının proksimalinden kesin ve inferior ile her iki superior vena cava'yı kalbe yakın bölgeden bağlayın. Ligasyonlar yerleştirildikten sonra, her bir damarı ligasyonların distalinden kesin. Sonrasında, pulmoner gövdeyi mümkün olduğunca distalden serbest bırakın ve pulmoner arterleri bifurkasyona yakın bölgeden bağlayın.Ose ipek kullanarak, bu damarları ligatürlerin distalinden kesin. Bağlanacak son damarlar olan pulmoner venler, tek bir ose ipek ligatürle birlikte bağlanabilir. Ardından bu venleri kesin ve kalbi donörden çıkarın.Kalbi, mikroskop altında işleme başlanana kadar buz soğukluğundaki kardiyoplejik solüsyon içinde saklayın. Poliamid tüpleri makasla veya 11 numara bisturi ucuyla keserek anastomoz için manşetleri hazırlayın. Alıcıyı, donörde olduğu gibi cerrahiye hazırladıktan sonra, sıvı değişimi için 0,25 mililitre ılık salin solüsyonu şeklinde subkütan enjeksiyon uygulayın.Ardından, sağ servikal bölgedeki tüyleri tıraşlayın ve fareyi sıcak bir ped üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin; bacaklarını bantla sabitleyin ancak solunumu olumsuz etkileyebileceği için ön üyeleri aşırı germeyin. Daha sonra oftalmik pomad uygulayın ve cerrahi bölgeyi birkaç klorheksidin temizleme işlemiyle üç kez dezenfekte edin. Şimdi, sağ mandibular açıdan juguler çentiğe doğru transvers bir cilt insizyonu yaparak cerrahi işleme başlayın.Ardından eksternal juguler veni künt şekilde mobilize edin, yan dalları bipolar pensle koterize ederek kesin. Eksternal juguler veni, submandibular bezden gelen ven ile birleştiği noktadaki ligatürler arasından kesin. İzole edilen eksternal juguler veni manşetin içinden çekerek çıkarın.Ardından, manşetin uzantısına bir vasküler klemple yerleştirerek damarı proksimalden tıkayın. Şimdi ligatürü kaldırın ve damar lümenini 1 ila 10 heparinli salin ile irige edin. Damar duvarını manşetin üzerine kıvırıp damarı önceden ayarlanmış çevresel bir ose ipek ligatürle sabitleyerek manşete tutturma işlemini tamamlayın.Şimdi sternokleidomastoid kasının yüzeysel kısmını çıkarın. Ardından, sağ ortak karotis arteri mobilize edin. Daha sonra karotis bifurkasyonunun altına iki ligatür yerleştirin ve damarı bu iki ligatür arasından kesin.Şimdi karotis arterini manşetten geçirin ve manşetin proksimalindeki uzantıya bir klempleme yapın. Damarı kapatmak için ligatürü çıkarın ve damar lümenini 1-10 mL heparinli salin ile irige edin. Ardından lümeni bir damar dilatörü ile nazikçe genişletin.Ve daha önce olduğu gibi, damarın manşete tutturulmasını tamamlayın. Prosedürün en zor kısmı, kolayca geri döndüğü için taşıyıcı arterin damar hacmini manşet üzerinden ters çevirmektir. Bu nedenle, uygun bir manşet boyutu seçmek için arteri tamamen mobilize etmek ve ters çevirme işleminden önce damar lümenini nazikçe genişletmek önemlidir.Greft hazırlığı için submandibular bezin sağ lobunu çıkarın ve operasyon alanını nemli tutun, aort mediale ve pulmoner arter laterale bakacak şekilde grefti alıcı servikal bölgeye ters çevirerek yerleştirin. Ardından, greftin aortunu karotis arterle birlikte manşetin üzerine çekin ve anastomozu çevreleyen sekiz O ipek ligatürle sabitleyin.Ardından, pulmoner trunkusun ön yüzünden insizyon yapın ve onu eksternal juguler ven ile birlikte manşetin üzerine çekin. Bu anastomozu sabitlemek için başka bir ligatür kullanın. Şimdi, önce eksternal juguler ven üzerindeki klempi, ardından karotis arter üzerindeki klempi kaldırın; reperfüzyonu artırmak için kalbin hızla kanla dolması gerekir; graftın üzerine ılık salin damlatın.Normal şartlarda kalp, bir dakika içinde sinüs ritmine başlayacaktır. Şimdi, venöz bölgedeki manşet uzantısını çıkarın ve grefti kontrol edin. Anastomoz gerilimsiz olmalı ve damarlarda herhangi bir torsiyon görülmemelidir.Deri damarlarını koterize etmeyin. Bu durum yara iyileşmesini bozabileceği için, kanama kendiliğinden durduğunda deriyi tek bir sürekli dikişle kapatın. Ameliyat sonrası, hayvana deri altına çeyrek mililitre sıcak serum fizyolojik enjekte edin.Ardından, narkotikleri antagonize etmek için deri altına bir ilaç kokteyli enjekte edin. Hayvan, stern recumbent (karın üstü dik) pozisyonunu koruyana kadar sıcak bir ped üzerinde iyileşmeye bırakın. Hayvanın tamamen iyileştiğine karar vermeden önce en az bir saat boyunca gözlemleyin.Fare kendine geldikten sonra, en az üç gün boyunca tek başına barındırılmalıdır. Minimum 72 saat boyunca analjezik uygulanmalıdır. Ayrıca, ciddi kilo kaybı olup olmadığını kontrol etmek için hayvan günlük olarak tartılmalı ve genel sağlık durumu izlenmelidir.Tanımlanan protokol kullanılarak, histopatolojik inceleme için sinjenik Black six farelere transplantasyon yapıldı. Greftler hematoksilin, eozin ve sirius red ile boyandı. Transplantasyon yapılmayan hayvan kesitleri, kontrol grubu olarak kullanıldı.Uzamış iskemi. Reperfüzyon, doku ödemi ile birlikte güçlü bir enflamatuar reaksiyonla sonuçlanmıştır. Yıldızlarla belirtilen infiltre lökositler, hiperemi ve mikrovasküler tıkanıklık.Oklarla gösterilen belirgin interstisyel kollajen birikimi, şiddetli kırmızı boyanma ile ortaya çıkmıştır. Kontrol grubunda bu tür kollajen birikimleri görülmemiştir. Bu transplantasyon modeli, kardiyovasküler ve transplant araştırmalarında ilgi çekici bir araçtır.Deneylere başlamadan önce miyokardiyal iskemi reperfüzyon hasarını incelemek özellikle faydalıdır. Aksi takdirde anastomoz işleminin büyük bir yanlılığa (bias) yol açabileceği göz önünde bulundurularak, bu tekniği tekrarlanabilir operatif sonuçlarla gerçekleştirebildiğinizden emin olun; bu nedenle sıcak iskemi süresi 20 dakikanın altında tutulmalıdır.

heterotopic-cervical-heart-transplantation-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fare heterotopik kalp transplantasyonu modeli ret ve immün yanıt mekanizmaları eğitim için önemli bir yöntem olduğu birçok araştırmacı tarafından kanıtlanmıştır. Ancak, söz konusu teknikleri hala zorlu. Standart teknikler değiştirerek 1000 nakli ile daha fazla başarı elde ettiler.

Farelerde Heterotopik Kalp Nakli

Sıçangil modeli servikal kalp nakli immünolojik hem de iskemi reperfüzyon yaralanması çalışmasından için uygundur. Biz olmayan bir dikiş manşet tekniği kullanılarak prosedür değiştirilmiş ve bu yaklaşım ile 1.000 'den fazla başarılı nakli gerçekleştirildi.  Burada, videoyu tamamlamak için bu tekniğin ek ayrıntıları.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

Farelerde kalplerin heterotopik nakli için mikrocerrahi prosedür için, donör toplama ve alıcı damar anastomozu için basitleştirilmiş yöntemler de dahil olmak üzere bir teknik gösterilmiştir.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

El yazması fare heterotopik kalp nakli gerçekleştirmek için gereken adımları açıklar.

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

Burada, yeni kardiyokoruyucu stratejileri araştırmak için sıkı bir şekilde kurulan ve kullanılan ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi büyük hayvan (porcine) modelini tarif ediyoruz.

Ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi porcine modeli

Heterotopik abdominal fare kalp nakli modelinde kan devresi rekonstrüksiyonu için yeni bir teknik gösterilmiştir.

Abdominal Fare Kalp Nakli Modelinde Kan Devresi Rekonstrüksiyonu

Bu protokolde, kardiyak allogreft rejeksiyon mekanizmasını araştırmak için bir fare kalp nakli modeli kullanılmıştır. Bu heterotopik kalp nakli modelinde, modifiye Manşet tekniği kullanılarak kalp implantasyonunun servikal uçtan uca anastomozu ile operasyon etkinliği artırılır ve kalp greftlerinin sağkalımı sağlanır.

Fare Servikal Heterotopik Kalp Transplantasyon Modeli için Modifiye Manşet Tekniği

Fare kardiyak transplantasyon modelleri, transplantasyon immünolojisini incelemek için değerli araştırma araçlarını temsil etmektedir. Mevcut protokol, laminer kan akışına izin vermek için alıcının ortak karotis arterine ve donörün pulmoner arter gövdesine manşetlerin yerleştirilmesini içeren fare heterotopik servikal kardiyak transplantasyonunu detaylandırmaktadır.

Vasküler Manşetler Kullanılarak Fare Heterotopik Servikal Kardiyak Transplantasyonu

Bu protokol, farelerde manşetsiz, dikiş bazlı servikal heterotopik kalp nakli tekniği sunar; bu teknik, donör-spesifik bağışıklık toleransını fizyolojik koşullarda minimum yabancı madde müdahalesiyle değerlendirmek için ikinci heterotopik kalp greftinin güvenilir şekilde yerleştirilmesini sağlamaktadır.

Farelerde Donör-Spesifik Bağışıklık Toleransını Değerlendirmek İçin İkincil Heterotopik Kalp Nakli için Manşetsiz Dikiş Tabanlı Servikal Model

Bu protokol, sare servikal kalp nakli için basitleştirilmiş ve uçtan yana dikiş anastomozu tekniği sunarak nakil immünolojisini incelemek için sağlam ve tekrarlanabilir bir model sunar.

Nakil İmmünolojisini Çalışmak İçin Uçtan Yana Anastomoz Tekniği Kullanılarak Servikal Heterotopik Fare Kalp Nakli

Öğrenin farelerde servikal kalp nakli modelini, iskemi-reperfüzyon hasarı ve greft reddini incelemek için. Manşet tekniği karmaşık dikişleri atarak prosedürü basitleştirir ve tutarlı sonuçlar sağlar.

Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli

Daha fazla video keşfet