Bir Colliculo-talamokortikal Fare Beyin Dilim modifikasyonu, 3-D Odası Bileşenleri baskı ve Multi-ölçekli Optik Görüntüleme birleştirilerek

Bu prosedürün genel amacı, Calot Thal kortikal dilimini dört ana işitsel yapı, inferior kolus, işitsel talamus, talamik retiküler çekirdeğin işitsel kısmı ve işitsel korteks ile hazırlamaktır. Bu, önce beynin fareden çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, dilimleme hazırlığında beyni bloke etmektir.

Daha sonra, Calot thal kortikal bağlantısını içeren dilimler elde etmek için beyni kesin. Son adım, bağlantıyı değerlendirmek için flavoprotein görüntülemeyi kullanmaktır. Sonuç olarak, karotal kortikal bağlantıyı içeren beyin dilimi, orta ve dört beynin işitsel bölgelerinde bilgi işlemeyi daha iyi anlamak için çeşitli deneyler için kullanılabilir Bu yöntemin görsel gösterimi, dilimlemeden önce beyni bloke etme adımlarının öğrenilmesi zor olduğu için kritik öneme sahiptir, çünkü karmaşık bir çift açılı kesim gerektirir, Bu, sağlam projeksiyonlar elde etmenin anahtarıdır.

Tekniği göstermek, laboratuvarımda bir yüksek lisans öğrencisi olan BJ Slater olacak, Kesme aşamasını dilimleme için hazırlamak için, beyin için bir dayanak noktası olarak kullanılmak üzere yaklaşık bir santimetreküp büyüklüğünde% 3'lük küçük bir parça kesin ve alt kollikulusu desteklemek için bir yumru olarak kullanılmak üzere 1,5 santimetre x 1,5 milimetre x üç milimetrelik başka bir parça kesin. Daha sonra, backstop'u siyanoakrilat yapıştırıcı ile sahneye yapıştırın ve ardından backstop'un sağ tarafındaki çıkıntıyı, 90 derecede iki çizgi ve 17 derecede çapraz bir çizgi ile işaretlenmiş bir slayt üzerinde 80 derecelik bir açı oluşturacak şekilde yapıştırın. sol üstten sağ alta beyin sırt tarafı yukarı gelecek şekilde iki çizginin kesişme noktasına yerleştirin. Bir tıraş bıçağı kullanarak, düz bir yüzey oluşturmak için beynin rostral ucunun iki ila dört milimetresini çıkarın.

Ardından, beyin tokacını yeni oluşturulan düz yüzeye yukarı bakacak şekilde yerleştirin. Beynin sırt yüzeyini yatay bir çizgi ile ve beynin orta hattını slayt üzerinde işaretlenmiş dikey bir çizgi ile hizalayın. Ardından tıraş bıçağını 17 derecelik bir çizgiyle hizalayın.

Tıraş makinesini 30 derecelik bir açıyla eğin ve beyni vibrato sahnesine monte etmek için çift çapraz bir kesimle sağ korteksin yaklaşık üç milimetresini çıkarın. Beynin ventral tarafına küçük bir parça filtre kağıdı yerleştirin, böylece uzun boyut orta hatta dik olur. Arka durdurucunun önündeki ve çıkıntının solundaki alana az miktarda siyanoakrilat yapıştırıcı dikkatlice uygulayın.

Daha sonra, çift çapraz olarak kesilmiş beyin tarafını yapıştırıcının üzerine yerleştirin, böylece beynin alt kısmı ve arka beyin tümseğe dayanır ve beynin sağ tarafı geri tepmeye karşı olur. Bu prosedürde, kesme aşamasını hızlı bir şekilde vibratoya yerleştirin, kesme çözeltisi ile bir aşama oluşturun. Ardından, bıçağı beynin üst kısmı ile hizalayın.

Beynin üst kısmından bir ila 1,5 milimetre çıkarın. Daha sonra daha derine inerken 300 ila 500 mikrometre arasında daha fazla dilim dilimleyin ve çıkarın. İnferior kollikulus, medial atlı cisim ve lateral ICT çekirdeğinin tümü görünür olduğunda, dentat girus C şeklinde görünmeli ve yapı aynı hizada olmalıdır.

Yaklaşık iki dilim 600 mikrometre elde edin. Bunlar karotal kortikal dilimlerdir. Bundan sonra, onları 32 santigrat derece tutma odasına aktarın.

Flavoprotein Otofloresan görüntüsünü elde etmek için, görüntüleri 105 saniye boyunca dört hertz'de toplayın. Dokuyu 470 ila 490 nanometre mavi ışıkla aydınlatın ve 515 nanometrenin üzerinde çekim yapın, görüntünün ne çok karanlık ne de dışarı fırlamış olmasını sağlayın. Daha sonra bir kalsiyum görüntüsü elde etmek için dokuyu aktive etmek için elektrik stimülasyonu kullanın.

Görüntüleri 25 saniye boyunca 10 hertz'de toplayın. Dokuyu 365 nanometre ışıkla aydınlatın ve 510 nanometrenin üzerindeki floresan yakalayın. Yine, görüntünün ne çok karanlık ne de patlamış olduğundan emin olun.

Daha sonra hücreleri aktive etmek için elektrik stimülasyonu kullanın. Bu görüntü, Flavoprotein Otofloresan ile beyin dilimindeki karotal kortikal bağlantının doğrulanmasını göstermektedir. İnferior kolusa 0.05 hertz'de verilen elektriksel stimülasyon, bu stimülasyondaki gücü göstermek için dört hertz ve dört a'da işlendi.

Frekans, işitsel talamus, talamik, retiküler, çekirdek ve işitsel korteks sinaptik olarak aktive edilir. İşte bağlantısız bir dilim. İnferior kolusun aktivasyon ile elektriksel stimülasyonu sadece işitsel talamusta görüldü.

Muhtemelen kesiklerden birinin düzlemden biraz çıkması nedeniyle yolun tamamı yakalanmadı. Alam kortikal projeksiyonları ile. Bu görüntü, işitsel korteksin atipik aktivasyonunu göstermektedir.

İnferior kolusun elektriksel stimülasyonu, görünür bir sinyal olmadan işitsel korteksi aktive etti. İşitsel talamusta, talamusun hala aktive edilmiş olması muhtemeldir, ancak görüntü yüzeyinde değildi. Bu videoyu izledikten sonra, AAL talamik kortikal dilimin nasıl elde edileceğini ve bağlantısını nasıl değerlendireceğinizi iyi anlamalısınız.