Name: Primer Multipl Miyelom Hücrelerinin İlaç Duyarlılık Karakterizasyonu için bir Organotipik Yüksek Verimli Sistemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Öğrenin, primer multipl miyelom hücrelerinin ilaç duyarlılığını kemik iliği mikroçevresini koruyarak yüksek verimli bir sistemle nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu yöntem, uzunlamasına canlılık ölçümü sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma Florida&#39;nın Bankhead-Coley Takımı Bilim Grant (2BT03), Sağlık / Ulusal Kanser Enstitüsü (1R21CA164322-01) ve Moffitt Kanser Merkezi&#39;nin Takım Bilim Grant National Institutes Devlet tarafından finanse edildi. Bu eser, H. Lee Moffitt Kanser Merkezi ve Araştırma Enstitüsü, bir NCI belirlenen Kapsamlı Kanser Merkezi&#39;nde (P30-CA076292) de çeviriyle ilgili araştırma Çekirdek Tesisi tarafından kısmen desteklenmiştir. Birincil hücrelere Erişim Moffitt Kanser Merkezi&#39;nde Toplam Cancer Care Protokolü&#39;nün sayesinde mümkün olmuştur.

<ol><li>Salmon, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+differential+sensitivity+of+human-tumor+stem+cells+to+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Quantitation of differential sensitivity of human-tumor stem cells to anticancer drugs.</a> N Engl J Med. 298, 1321-1327 (1978).</li>
<li>Suggitt, M., Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((50+years+of+preclinical+anticancer+drug+screening%3A+empirical+to+target-driven+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">50 years of preclinical anticancer drug screening: empirical to target-driven approaches.</a> Clin Cancer Res. 11, 971-981 (2005).</li>
<li>Kirshner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+three-dimensional+model+for+evaluating+the+impact+of+therapy+on+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma.</a> Blood. 112, 2935-2945 (2008).</li>
<li>Durie, B. G., Jacobson, J., Barlogie, B., Crowley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnitude+of+response+with+myeloma+frontline+therapy+does+not+predict+outcome%3A+importance+of+time+to+progression+in+southwest+oncology+group+chemotherapy+trials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Magnitude of response with myeloma frontline therapy does not predict outcome: importance of time to progression in southwest oncology group chemotherapy trials.</a> J Clin Oncol. 22, 1857-1863 (2004).</li>
<li>Harousseau, J. L., Attal, M., Avet-Loiseau, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+complete+response+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The role of complete response in multiple myeloma.</a> Blood. 114, 3139-3146 (2009).</li>
<li>Khin, Z. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+assay+for+chemosensitivity+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A preclinical assay for chemosensitivity in multiple myeloma.</a> Cancer Res. 74, 56-67 (2014).</li>
<li>Misund, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+measurement+of+drug+sensitivity+of+myeloma+cells+co-cultured+with+bone+marrow+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A method for measurement of drug sensitivity of myeloma cells co-cultured with bone marrow stromal cells.</a> J Biomol Screen. 18, 637-646 (2013).</li>
<li>Ramasamy, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence-based+experimental+model+to+evaluate+the+concomitant+effect+of+drugs+on+the+tumour+microenvironment+and+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Fluorescence-based experimental model to evaluate the concomitant effect of drugs on the tumour microenvironment and cancer cells.</a> Br J Haematol. 157, 564-579 (2012).</li>
<li>McMillin, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+cell-specific+bioluminescence+platform+to+identify+stroma-induced+changes+to+anticancer+drug+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor cell-specific bioluminescence platform to identify stroma-induced changes to anticancer drug activity.</a> Nat Med. 16, 483-489 (2010).</li>
<li>Koh, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+cells+for+microscopy+using+cytospin%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Preparation of cells for microscopy using cytospin.</a> Methods Enzymol. 533, 235-240 (2013).</li>
<li>Al-Quran, S. Z., Yang, L., Magill, J. M., Braylan, R. C., Douglas-Nikitin, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+bone+marrow+plasma+cell+infiltrates+in+multiple+myeloma%3A+the+added+value+of+CD138+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Pathol%22%5BJournal%5D)">Assessment of bone marrow plasma cell infiltrates in multiple myeloma: the added value of CD138 immunohistochemistry.</a> Hum Pathol. 38, 1779-1787 (2007).</li>
<li>Najar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+promote+or+suppress+the+proliferation+of+T+lymphocytes+from+cord+blood+and+peripheral+blood%3A+the+importance+of+low+cell+ratio+and+role+of+interleukin-6%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells promote or suppress the proliferation of T lymphocytes from cord blood and peripheral blood: the importance of low cell ratio and role of interleukin-6.</a> Cytotherapy. 11, 570-583 (2009).</li>
<li>Scott, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+i+trialist%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncol%22%5BJournal%5D)">Phase i trialist.</a> Lancet Oncol. 13, 236(2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Özet olarak, bu kemik iliği, bir yeniden birincil MM hücre ve ilaç ex vivo farmakodinamik kemosensitiviteyi ölçmek için güçlü ve yüksek kapasiteli bir yöntemdir. Bu protokol kapsamında kritik adımlar kuyuların uygun tohumlama ve yeterli (beklenen sonuçlar için bakınız Şekil 2) odaklama: MM ve stromal hücreler düzgün yayılı sağlamak, bu stromal hücreler, kuyunun dibine yapışık olan MM tüm Hücreler, MM hücreleri koyu halka çevrili aydınlık diskin yönü olan aynı odak düzleminde ve vardır. <p c...

Bu yöntemin amacı, bu sonuçlar Kemoterapiye alt tespit etmek için kullanılabilir yeterli hassasiyetle, fizyolojik koşullara mümkün olduğunca yakın, ex vivo olarak ajanların bir panele birincil hücreler multipl miyeloma (MM), ilaç duyarlılığını karakterize etmektir tümör yükü ve içinde nüfusları sonuçta, klinik yanıtı tahmin etmek için tasarlanan hesaplama modelleri parameterize için. Hesaplamalı modelleri, kanser konak-terapi etkileşimleri gibi kompleks sistemler, analiz etmek güçlü araçlardır. Ancak, modeller sadece veri onları parameterize eskisi kadar iyi. Ne yazık ki, literatürde mevcut olan en veriler genellikle birbirini dışlayan deney koşullarında elde edilenler gibi, bu tür modeller parametrelerini elde etmek için, mevcut biçimde kullanılamaz. Böylece, yeni deneyler genellikle gerekli deneysel parametrelerin set elde etmek amacı ile ihtiyaç vardır. Çoğu canlılık deneyleri, ancak, yıkıcı ve inci vardırBize zaman noktalarında az sayıda, genellikle sadece birine sınırlı. Bu büyük ölçüde bu tür deneyler sistemin zamansal dinamikleri hakkında bilgi vermek için başarısız beri kemosensitivite tahlillerin kullanımı, hesaplama modelleri parameterize için yaşlılık ve sakatlık. Bu genellikle, böylece mevcut deneysel koşullar sayısının sınırlandırılması, numune başına birkaç milyona sınırlı ve biyopsi sonra kısa bir ömre sahip olan primer kanser hücrelerinin, özellikle de geçerlidir. Buna ek olarak, çoğu canlılık deneyleri ayrıca hücreleri bozan ve yapılabilir deneyler sayısını sınırlar, protokole ekstra çalışma ekler ölçümü, zamanında olmayan kanser (stroma) hücrelerinden kanser ayrılmasını gerektiren . 40 yıl kadar önce, somon ve ortak 1 tümör hücrelerinin duyarlılığında değerlendirilmesi için in vitro koloni oluşturma deneyi kendi ünlü önerdi. Ne yazık ki bu deney sayesinde çoklu mye az sayıda karışık başarı bulunduKontrol koşulları altında koloniler oluşturabilen edildi Loma (MM) hasta numuneleri: Bu, AA hücrelerin 0.1 ila% 0.001,% sadece küçük bir alt-grup replikasyon kabiliyetine sahip olduğu tahmin edilmiştir multipl miyelom kök hücreler 2 olarak adlandırılan edilir. Bu anlamlı daha yeni modeller 3, testin başarı oranını ve bir anda test edilebilir ilaçların sınırlı sayıda. (Standart ya da deneysel) MM ajanlar, dört yıl önce daha çoktur Bu sorun artık çok daha önemlidir. Ya bir hasta belirli bir ilaca &quot;hassas&quot; veya &quot;dirençli&quot; dir: Bu erken tahlillerin önemli bir sınırlama onların ikiye bölünmüş çıkışıdır. Hiçbir bilgi tümör nüfusun duyarlılık ve heterojen derecesine ilişkin sağlanmaktadır. Böylece, hızlı büyüyen dirençli hücrelerin küçük alt popülasyonlar olan hastalar tedaviye &quot;hassas&quot; olarak sınıflandırılır, ancak kısa bir süre nüks olur ve böylece değil bentedaviden Efit. Kanser hastalarının 4,5 genel sağkalım (OS) yanıt süresi önemi göz önüne alındığında, bu deneyler doğru sürekli OS tahmin etmek mümkün değildi nasıl açıktır. Amacıyla bu sınırlamaları aşmak için, ve uyuşturucu bir panele kişiselleştirilmiş klinik yanıtı tahmin ediyorum hastaya özgü hesaplama modelleri üretmek edebilmek için, biz multipl miyelom (MM) hücre hatlarının olmayan yıkıcı test ilaç duyarlılığı için bir yöntem geliştirdik ve hücre dışı matriks ve stroma 6 olmak üzere kemik iliği mikroçevresindeki bir ex vivo yeniden, birincil MM hücreleri. Bu deney, ancak, kimin boyutları ve maliyetli ekipman belirli bir parça bir defada yapılabilecek deneyler veya ilaç sayısını sınırlı belirli bir ticari mikroakışkan slayt, güvenerek sınırlama vardı. Burada anlatılan sistem, yüksek içine bu orijinal tahlil uzanırolmayan yıkıcı hücre canlılığını ölçmek için bir dijital görüntü analizi algoritmasına dayalı ilaçlar, in vitro tarama için Organotipik doz-yanıt platformu, -throughput. De 384 ya da 1536 oyuklu plakalarda her primer MM hücreleri, hücre-dışı matris ve hasta türevi stroma ve büyüme faktörleri de dahil olmak üzere kemik iliği mikro-3D rekonstrüksiyonu vardır. Canlı mikroskopi ve dijital görüntü analizi doz-yanıt yüzeyler üretmek için kullanılan farklı ilaç konsantrasyonları, hücre ölümü olayları tespit etmek için kullanılır. In vitro verilerden, bir matematiksel model hastanın tümör yükü içinde boyutu ve alt-popülasyonlarının kemosensitiviteyi tanımlar ve tümörü (klinik rejime 6 fizyolojik koşullarda ilaç (lar) nasıl tepki vereceğini simüle etmek için kullanılabilir Şekil 1). Bu platformun temel yenilikler şunlardır: İlaç konsantrasyonlarda başına gereken kanser hücrelerinin, (a), az sayıda (1,000-10,000rasyon); (B) anılan ilacı, fizyolojik koşullar etkinlik (hücre dışı matrisin, stroma hasta türevli büyüme faktörleri) değerlendirilmesi; (C) Sadece parlak bir alan görüntüleme beri canlılık belirteçleri 7 No toksisite, floresan 8 veya 9 biyoparlaklık ile hücreleri transfect böylece hiç gerek kullanılır; (D) Sürekli görüntüleme konsantrasyonu ve uygulama zamanı (farmakodinamik) &#39;in bir fonksiyonu olarak, ilaç etki sağlar; ve (e) in vitro ve hesaplamalı evrimsel modeller arasındaki entegrasyon, klinik sonucu 6 (Silva ve ark., hazırlık) tahmin etmek. Dijital görüntü analizi algoritması stromal hücrelerin kanser ayırt sağlar önemli bir faktördür altına onların farklı afinite de: dd hücreleri uygun ve stromal hücreler alt uygun ise, matris içinde süspansiyon halinde kalır yok iyi ve daha sonra streç. Bu ayrılık bile MM ve stroma a da oluşurAynı zamanda tohumlanmıştır ve inkübasyon O / N işlemi sırasında oluşur yeniden. plaka santrifüj aşağı iplik aşağıdaki tohumlama daha bu süreci hızlandırır. Stroma düşük bir profil ve koyu gölge (Şekil 2) korurken Sonuç olarak, MM hücreleri, karanlık bir halka ile çevrili yuvarlak parlak diskler gibi görüntüde görünür. Algoritması ayarlamaları gibi boyut ve şekil olarak diğer morfolojik özellikleri, dayalı ayrı kanser ve stroma ile yapılabilir rağmen Böylece, mevcut haliyle tahlil, yapışmayan kanser hücreleri için uygundur. Bu protokolde, (kemik iliğinden elde edilen mezenkimal stem hücreleri) BHYK ve HUVECler, kemik iliği interstisyel ve perivasküler niş temsil eden, hücre-dışı matrisi (kollajen ve temel zar matris) iki tip olarak ko-kültürler iki tip tarif sırasıyla. 384-plaka kullanarak, ilaç başına 5 konsantrasyonları ve iki çoğaltır, biz tes başardıkTek bir hastanın numune ile 31 farklı ilaçlara t kadar. Ek Şekil 1 bir robot pipet kullanarak optimum dağılımını temsil ederken 1,536 kuyucuğu bu sayı, 3 şu anda manuel hücre tohumlama için kullanılan düzen göstermektedir 127. Şekil olduğunu. Şekil 3&#39;ten tasarımda, her bir 384-oyuklu plaka 21 ilaç test 7 farklı ilaçlar, ya da bir hasta örneği 3 hasta numuneleri taşıyabilir. Her ilaç 5 konsantrasyonları ile temsil edilir, ve her bir durum çiftleri olarak tohumlanır. 4 kontrol kuyuları (ilaç yok) eklendi 7 ilaçlar (örneğin, kuyular 36-39, 126-129 ve 200-203) her biri için tohumlanır. Kullanılan ilaçların etkisini temin etmek için, insan miyeloma hücre kuşağı (örneğin, H929 ya da MM1.S), aynı zamanda tohumlandı ve (kuyular 76-89) kullanılan ilaçların her birinin en yüksek konsantrasyonda iki kopya halinde uyuşturulmuş. pozitif hücre hattı kontrolü onların doz yanıt eğrileri karşılaştırılabilir ac beri kullanılan ilaçlar, yeterli güce sahip olmalarını sağlarross deneyleri. Iki kuyu (kuyular 75 ve 90), görüntüleme sırasında tezgah üstü inkübatör olası sorunları tespit etmek için, başka bir deyişle, çevre koşulları için bir kontrol olarak, bir miyeloma hücre kuşağı ile tohumlanır. Kuyuların numaralandırma etme süresini azaltır ve ekipmanın aşınmasını azaltan mikroskop motorlu aşamasında tarafından katedilen mesafeyi azaltmak için zikzak bir yol izler.

<table><tbody><tr><td>EVOS FL AUTO</td><td>AMG</td><td>AMAFD1000 + AMC1000</td><td>Motorlu tabla ve tezgah üstü inkübatör ile donatılmış dijital mikroskop.</td></tr><tr><td>384 kuyulu plaka CellBind</td><td>CORNING</td><td>CLS3683 SIGMA</td><td>Corning CellBIND 384 kuyulu plaka 384 kuyulu plaka, polistiren, CellBIND yüzey, steril, şeffaf düz tabanlı, siyah, kapaklı</td></tr><tr><td>1.536 kuyulu plaka CellBind</td><td>CORNING</td><td>CLS3832 ALDRICH</td><td>Corning 1.536 kuyulu plaka, düşük tabanlı, yüzey işleme CellBIND, steril</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque Plus&nbsp;</td><td>GE Sağlık</td><td>GE17-1440-02 SIGMA</td><td>İnsan periferik kanından lenfositlerin in vitro izolasyonu için.</td></tr><tr><td>CD138 manyetik boncuklar</td><td>Miltenyi&nbsp;</td><td>130-051-301</td><td>CD138+ hücrelerinin seçimi için antikor konjuge manyetik boncuklar.</td></tr><tr><td>LS sütunları</td><td>Miltenyi&nbsp;</td><td>&nbsp; 130-042-401</td><td>Hücrelerin ayrılması için sütun.</td></tr><tr><td>MidiMACS Ayırıcı</td><td>Miltenyi&nbsp;</td><td>130-042-302</td><td>Ayırma sütunu için mıknatıs.</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E6909</td><td>Engelbreth-Holm-Swarm murin sarkomundan SIGMA ECM Jeli</td></tr><tr><td>Getrex</td><td>Life Technologies</td><td>A1413201</td><td>LDEV-İçermeyen Azaltılmış Büyüme Faktörü Bazal Membran Matrisi</td></tr><tr><td>HUVEC</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>C-003-25P-B</td><td>İnsan Göbek Veni Endotel Hücreleri (HUVEC)</td></tr><tr><td>RPMI-1640 medya</td><td>GIBCO</td><td>11875-093</td><td>RPMI 1640 Orta + L-Glutamin + Fenol Kırmızı</td></tr><tr><td>FBS Isı ile inaktive</td><td>edilmiş GIBCO</td><td>10082-147</td><td>Fetal Sığır Serumu, sertifikalı, ısı ile inaktive edilmiş, ABD menşeili</td></tr><tr><td>3.1 mg/ml Sığır kollajen tip I</td><td>Gelişmiş Biomatrix</td><td>5005-B</td><td>Sığır Kollajen Solüsyonu, Tip I, 3 mg/ml, 100 ml</td></tr><tr><td>Hassas XS</td><td>BIOTEK</td><td>PRC3841</td><td>Robotik pipetleyici sistemi</td></tr></tbody></table>

primer multipl miyelom hücrelerinin İlaç duyarlılık karakterizasyonu için bir organotipik yüksek verimli sistemi

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

Bu çalışmada biz, hasta kaynaklı multipl miyelom (MM) hücreler kemosensitiviteyi ve heterojenitesini tahmin etmek ex vivo ilaç duyarlılık testleri ve dijital görüntü analizi birleştiren yeni bir yaklaşım açıklar. Bu yaklaşım, hasta-Taze hücre dışı matrisin (kolajen ya da temel membran matrisi) ve stroma (dahil olmak üzere her kemik iliği mikro bir yeniden oluşan, çok oyuklu plakalara uygulanan mikroakışkan odaları içine, kemik iliği elde primer MM tohum hücreleri oluşur türetilmiş mezenkimal kök hücreleri) veya insandan türetilmiş endotel hücreleri (HUVECler). odaları, farklı ajanlar ve konsantrasyonları ile uyuşturulmuş olan ve bir dijital kamera ile donatılmış bir motorlu mikroskopta, parlak bir alan mikroskobu ile 96 saat süreyle sırayla görüntülenmiş. Dijital görüntü analiz yazılımı varlığı veya zar hareket yokluğu canlı ve ölü hücreleri algılar ve bir fonksiyon o kadar canlılığı değişim eğrileri üretirf ilaç konsantrasyonu ve maruz kalma süresi. Her ilaç, tümör nüfusun duyarlılığında parametrelerini yanı sıra, tümör heterojenite bir ölçüsü olarak, bu alt-popülasyonlarının sayısını belirlemek için bir hesaplama modeli kullanırlar. Bu hasta özel modeller daha sonra tedavi rejimleri taklit ve klinik yanıtı tahmin etmek için kullanılabilir.

Deney akışı kısaca Şekil 1&#39;de açıklanan tüm adımları başarıyla tamamlandığı takdirde, mikroskop ile elde edilen görüntüler Şekil 2&#39;ye eşdeğer olmalıdır. MM hücreleri açıkça parlak diskler ve BMSCs veya HUVECler zor görünür olmalıdır görülmelidir canlı ve de arka planda dağıtılır. Şekil 2A&#39;da görüldüğü gibi, DD hücreleri bir hastadan diğerine boyutu değişir, ancak genel olarak hücre çizgileri daha küçüktür. Pratik olarak deney aralığında ex vivo repl...

Primer multipl miyelom hücreleri için yüksek verimli bir ilaç duyarlılık testi tanımlıyoruz. Çok kuyulu plakalarda kemik iliği mikro çevresinin (hücre dışı matriks ve stroma dahil) yeniden yapılandırılmasından ve hücre canlılığının uzunlamasına ölçülmesi için invaziv olmayan bir yöntemden oluşur.

Primer Multipl Miyelom Hücrelerinin İlaç Duyarlılık Karakterizasyonu için bir Organotipik Yüksek Verimli Sistemi

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...

Bu prosedürün genel amacı, çoklu miyelom primer hücrelerinin bir dizi kemoterapötik ajana karşı kemo-duyarlılığını nicelleştirmektir. Bu işlem, öncelikle taze kemik iliği aspiratından izole edilen çoklu miyelom hücrelerinin; ön kültür yapılmış, hastadan türetilmiş stroma ve kolajen ile karıştırılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, CEL karışımı çok kuyucuklu bir plakaya ekilir.Hücreler daha sonra ilgili kemoterapötik ajanlarla muamele edilir ve plaka, hücrelerin 96 saatlik inkübasyon süresi boyunca ardışık olarak görüntülenmesi için motorlu tabla mikroskobunun inkübatörüne aktarılır. Nihayetinde, her bir ilaç ve konsantrasyon için canlılık eğrileri oluşturmak amacıyla dijital bir görüntü analiz algoritması kullanılabilir. Bu tekniğin mevcut son nokta canlılık analizlerine göre temel avantajları, tek bir hasta örneğine karşı birden fazla kemoterapötik ajanın test edilebilmesi ve hasta hücrelerinin canlılığının, hücreleri stromadan veya matriksten ayırmaya gerek kalmadan birkaç gün boyunca boylamsal olarak ölçilebilmesidir.Bu tekniğin etkileri, teorik olarak belirli kemoterapi rejimlerine verilen klinik yanıtı öngörmek için kullanılabileceği için hematopoetik tümörlerin tedavisin

an-organotypic-high-throughput-system-for-characterization-drug

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, lenfoma hücrelerini kemoterapötik ajanların sitotoksisitesine karşı korumada nötrofil benzeri hücrelerin rolünü araştıran bir testi göstermektedir. Lenfoma ve nötrofil benzeri hücrelerden oluşan bir 3D ko-kültür kurulur ve bir kemoterapi ilacı olan vinkristin'e maruz bırakılır. Nötrofil benzeri hücrelerle doğrudan temas, lenfoma hücrelerinde anti-apoptotik proteinlerin yukarı regülasyonuna neden olur, böylece vinkristin varlığında hayatta kalmalarını teşvik eder.

Lenfoma hücresinin bir test ilacına duyarlılığında nötrofil benzeri hücrelerin rolünün belirlenmesi

İnsan multipl miyeloma (MM) hücreler, mezenkimal hücreler ve hayatta kalma ve proliferasyon için hücre dışı matris bileşenlerinin destek mikro-gerektirir. Biz tümör büyümesi, işgali ve anjiyogenez üzerine kanser ilaçlarının etkilerini incelemek için engrafted insan miyelom ve mezenkimal hücreler ile in vivo tavuk embriyo modelini kurdu.

Chicken İnsan Multipl Miyelom Xenograftlarında Modeli Kurulması Tümör Büyüme, Invasion ve Anjiogenez Eğitim için

Mevcut rapor, kemik iliği mikroçevre nişinin lösemik hücreler üzerindeki etkisini, en kemodirençli alt popülasyonun zenginleştirilmesine vurgu yaparak modellemek için kullanılabilecek bir protokolü özetlemektedir.

Modelleme Kemoterapi Dayanıklı Lösemi<em&gt; İn Vitro</em

Toplu gen ifade ölçümleri bulut tek hücre farkları türdeş olmayan hücre popülasyonlarının. Burada, bir protokol açıklamak nasıl tek hücreli gen ifade analizi ve dizin için Variety aktif hücre sıralama (FACS tarafından) sıralama heterojenite betimlemek için birleştirilebilir ve immunophenotypically karakterize tatlı ayrı hücre popülasyonlarının.

Bir moleküler karakterize etmek için Kombinatorik tek hücreli yaklaşım ve insan kök ve yaratıcı nüfus Immunophenotypic heterojen

Burada kollarındaki kullandığımız, x-ışını nasıl inhibe mTOR etkinlik çalışmaya ve pozitron emisyon tomografi/bilgisayarlı tomografi Imaging etkileri myeloma kemik iliği engrafted tümörler bir xenograft modeli. Bu myeloma kemik iliği engrafted tümör vivo içindehedefleme terapiler Anti-miyelom etkisini fizyolojik ilgili, non-invaziv ve multimodal analizleri için sağlar.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Organotipik tümör doku dilimlerinde gerçek zamanlı ilaç yanıtını ölçmek için bir protokol uyguluyoruz. Burada özetlenen deneysel strateji, ekstrem koşullarda klinik veya fare tümörlerinden elde edilen doku dilimlerinde orta-yüksek iş yapma ilaç ekranları yürütmek için bir platform sağlar.

Organotipik Tümör Doku Dilimlerinde Gerçek Zamanlı İlaç Yanıtının Ölçülmesi

Kanser dokularına benzer ancak 96 kuyulu ve 384 kuyu plakalı in vitro yüksek verimli tahlil sistemleri için uygun olmayan, hasta kaynaklı tümör organoidleri (PDO) kullanan antikanser ilaçları değerlendirmek için son derece hassas bir in vitro yüksek verimli tahlil sistemi geliştirilmiştir.

Hasta Kaynaklı Tümör Organoidleri Kullanılarak Yüksek Verimli In Vitro Tahlil

Bu protokol, NSCLC hasta kaynaklı organoid modellerde hedeflenen sinyal inhibitörlerine karşı ilaç duyarlılıklarının standartlaştırılmış bir değerlendirmesini açıklamaktadır.

EGFR-Mutant NSCLC Hasta Kaynaklı Organoidlerde Hedefe Yönelik Tedavilere Duyarlılığın Profillenmesi

Bu protokol, orta ila yüksek verimli organoid ilaç taramaları için yarı otomatik bir yöntemi ve intratümör heterojenitesini yakalamak için multiparametrik, tek organoid ilaç yanıtlarını ölçmek ve görselleştirmek için mikroskoptan bağımsız, otomatik görüntü analiz yazılımını açıklamaktadır.

Toplu ve Tek-Organoid Analizi için Geniş Alan Canlı Hücre Görüntüleme Kullanılarak Multiparametrik Tümör Organoid İlaç Taraması

Genetiği değiştirilmiş fare modellerinde ortaya çıkan tümörlerde terapötik hedefleri ve karşılık gelen insan tümör tipini belirlemek ve karşılaştırmak için genomik analizler ve fonksiyonel genomik ekranlar kullanan türler arası karşılaştırmalı bir onkogenomik yaklaşım geliştirdik.

Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörünün Fare Modellerinde Terapötik Hedefleri Belirlemek için Genetik Profilleme ve Genom Ölçeğinde Bırakma Taraması

Burada, farelere ksenogreftlenmiş ve kemik iliği aspiratlarından elde edilen akut insan miyeloid lösemi hücrelerinde mTORC1, JAK/STAT5 ve MAPK yollarının aşağı akışındaki sinyalleri analiz etmek için fosfoflow sitometri tabanlı bir yöntem açıklanmaktadır. p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 ve p-ERK1/2 seviyeleri, yüksek duyarlılığa sahip yeni nesil spektral akış sitometresi kullanılarak eş zamanlı olarak ölçülür.

Akut Miyeloid Lösemi Hasta Kaynaklı Ksenotransplantların Hücre İçi Fosfoflow Sitometrisi

Öğrenin, primer multipl miyelom hücrelerinin ilaç duyarlılığını kemik iliği mikroçevresini koruyarak yüksek verimli bir sistemle nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu yöntem, uzunlamasına canlılık ölçümü sağlar.

Primer Multipl Miyelom Hücrelerinin İlaç Duyarlılık Karakterizasyonu için bir Organotipik Yüksek Verimli Sistemi

Daha fazla video keşfet