Name: Fonksiyonel Araştırmaları 3D İnsan Akciğer Doku Modeli Mycobacterium tuberculosis Enfeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-05T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Öğrenin, 3D insan akciğer doku modeli kullanarak Mycobacterium tuberculosis enfeksiyonunun dinamiklerini ve erken granülom oluşumunu incelemeyi. Bu yöntem, tüberküloz patogenezinin anlaşılmasını geliştirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, gelişmiş görüntüleme sistemlerine erişim sağlamak için Linköping Üniversitesi Sağlık Bilimleri Fakültesi'ndeki Mikroskopi çekirdek tesisini kabul eder; Linköping Üniversitesi Klinik ve Deneysel Tıp Bölümü'nden Karl-Eric Magnusson (Emeritus Bilim İnsanı), Imaris 3D/4D görüntü işleme yazılımına (Bitplane, İsviçre) erişim sağladığı için; ve akciğer modeli çizgi filmindeki yardımı için S. Braian. Bu çalışma, İsveç Araştırma Konseyi (Hayvan Araştırmalarına Alternatifler, 2012-1951) ve İsveç Araştırma Konseyi (2012-3349) tarafından M.L.'ye ve İsveç Stratejik Araştırma Vakfı'ndan S.B.'ye sağlanan fonlarla desteklenmiştir. SB, Karolinska Enstitüsü, İsveç Araştırma Konseyi, İsveç Uluslararası Kalkınma İşbirliği Ajansı (Sida) ve İsveç Sivil Acil Durum Ajansı (MSB) ve İsveç Kalp ve Akciğer Vakfı'ndan (HLF) hibe almaktadır. M.S., Karolinska Enstitüsü ve Stockholm İl Meclisi'nden hibe aldı.

Not: Linköping Üniversitesi Hastanesi kan bankasından satın sağlıklı anonim kan vericilerden İnsan periferik kan, İsveç bu çalışma için bağışıklık hücrelerinin kaynağı olarak kullanıldı. Bu protokol, 24 mm 6-çukurlu plaka uçlar için tasarlanmıştır. Diğer iyi formatlarını doğrudan adaptasyon gelişimi sırasında hem dikey hem de yatay olarak doku modeli sözleşmeleri beri tavsiye edilmez. Bakteriler / Hücre Hatlarının Malzemeleri, Medya ve Kültür 1. Hazırlık <ol><li> Bakterilerin Kültürü: <ol><li> Mikobakteri suşu M. büyütün % 0.05 ihtiva eden Middlebrook 7H9 ortamında temel olarak yeşil fluoresan protein (GFP) ifade etmek için pFPV2 plazmiti taşıyan tuberculosis H37Rv, Tween-80,% 0.5 gliserol, kanamisin (20 ug / ml) ve (Middlebrook albümin, dekstroz ve katalaz zenginleştirme ile desteklenmiş Middlebrook ADC Zenginleştirme), 7-10 gün boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C &#39;de. Not: Tüm deneysel adımCanlı öldürücü M. içeren s tuberculosis suşlarında BSL-3 imkan yapılmalıdır. </li></ol></li><li> 1x Dulbecco Modifiye Eagle Ortamı (DMEM) tam orta hazırlanması (1 mM sodyum piruvat, 2 mM L-glutamin, 100 U / ml penisilin, 100 ug / ml streptomisin, 10 mM HEPES, 0.1 mM temel olmayan amino asitler ve 10 ile desteklenen % fetal sığır serumu (FBS)) ısı ile inaktive edilmiş. Ayrıca antibiyotik içermeyen DMEM tam orta hazırlayın. </li><li> 1x Minimum Essential Medium (MEM) tam orta hazırlanması (1 mM sodyum piruvat, 2 mM L-glutamin, 100 U / ml penisilin, 100 ug / ml streptomisin, 10 mM HEPES, 0.1 mM temel olmayan amino asitler ve% 10 ısı ile ile inaktive edilmiş fetal büyükbaş hayvan serumu (FBS)). </li><li> Fibronektin / kolajen kaplı şişeler (toplam 10 mi) hazırlanması: <ol><li> Temiz bir tüp içine pipetle 8,8 ml steril 1 x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS). 1 ml büyükbaş hayvan serum albümini (1 mg / ml), 100 ul tip I kollajen (3 mg / ml), sığır ve 100 ul rekombinant hu eklemeAdam fibronektin (ug / ml, 1 mg). </li><li> Baş aşağı 5 kez tüp çevirerek çözüm karıştırın. Bidonlar (a T-25 ve T-75 balonuna 2 ml 1 mi), bir fibronektin / kolajen çözeltisi ile kaplanır. 37 ° C&#39;de / Ç N bırakın. Kuluçkadan sonra, çözelti çıkarın ve oda sıcaklığında kaplanmış şişeler saklayın. Not: Toplanan çözelti, 4 ° C&#39;de saklanır ve üç kez tekrar edilebilir. 2 haftadan daha uzun saklama sıvı, atılmalıdır üzerine kahverengi (kristallerin oluşması) açılmasına neden olabilir. </li></ol></li><li> Fibroblast Kültürü: <ol><li> 37 ° C&#39;de% 5 CO2 içinde bitmiş DMEM içinde, büyümeye ve MRC-5 (14 haftalık erkek fetusun normal akciğer dokusundan elde edilen bir insan akciğer fibroblast hücre çizgisi) korumak. Geçitlerin 24-26 de fibroblastlar kullanın ve% 70-80 konfluent kadar büyür. Not: geçit&gt; 30 MRC-5 hücre hattı morfolojisi kaybetmek eğilimindedir ve doku modelinde kullanılması tavsiye edilmez. </li></ol></li><li> Epitel hücrelerinin kültürü:<ol><li> 16HBE14o- (16HBE), normal insan hava yolu epitel farklılaşmış morfolojisi ve fonksiyonunu koruyan bir ölümsüzleştirdi insan bronşiyal epitel hücre hattı, (bu Dieter Gruenert, Mt. Zion Kanser Merkezi, Kaliforniya Üniversitesi, San Fransisco bir hediye oldu edinin ABD 10.). Fibronektin / kolajen kaplı şişelerde kültür 16HBE hücreleri ve 37 ° C de% 5 CO2 tam MEM içinde hücreleri korumak. </li></ol></li><li> 5x DMEM hazırlanması <ol><li> DMEM tozu 13.4 g ve steril damıtılmış su içinde 150 ml sodyum bikarbonat 3.7 g çözülmesiyle 5x DMEM hazırlayın. , 7.3 ortamın pH ayarlama 200 ml hacim oluşturan ve 0,22 um membran filtre kullanılarak filtre. Steril bir kaba süzüldü orta toplamak ve oda sıcaklığında kullanıma kadar muhafaza edilmiştir. </li></ol></li></ol> Kollajen gömülü Fibroblast 2. Hazırlık <ol><li> 37 ° C su banyosu içinde FBS ve L-glutamin çözülme dondurulmuş tam bölünen miktarları.Çözündükten sonra buz üzerinde örnekleri tutmak. 4 ° C de sodyum bikarbonat (71.2 mg / ml) ve gentamisin (50 mg / ml) yerleştirin. 50 ml santrifüj tüplerine ve 4 ° C&#39;de 10 ml steril pipetler öncesi soğutulur. Not: (5x DMEM hariç) kullanılan bütün malzemelerin, kullanımdan önce buz üzerinde soğutulmuş ve tüm aşamaları, buz üzerinde gerçekleştirilir. Bu kollajen katılaşmasını engeller gibi sığır kollajeni (1,1 mg / ml), soğuk tutulmalıdır yazın. </li><li> Fibroblast hücreleri hazırlayın: <ol><li> Sıcak 37 ° C su banyosu içinde tripsin ve 37 ° C&#39;de% 5 CO2 seviyesinde 10 dakika boyunca akciğer fibroblast (MRC-5) hücreleri ile yeterli miktarda inkübe edin. 1x DMEM tam ekleyerek tripsin nötralize eder. 5 dakika boyunca 300 xg&#39;de hücre süspansiyonu ve santrifüj aspire. Süpernatant aspire ve bitmiş DMEM içinde bir 2.3 x 10 5 hücre / ml&#39;de tekrar süspansiyon hücreleri. Kullanım için hazır olana kadar buz üzerinde hücreleri yerleştirin. </li></ol></li><li> Ön karışım hazırlayın: <ol><li> &quot;Pre-mix&quot; etiketli bir tüpe aşağıdakileri ekleyin; 3955x DMEM ul, 40 ul L-Glutamin, 120 ul NaHCO3 (71,2 mg / ml), 440 ul FBS, 5 ul gentamisin (50 mg / ml), Toplam hacim 1000 ml, sonra iyice önceden karıştırılır ve koymak girdap Buz. Not: Verilen miktarlar, bir 24 mm 6 oyuklu kültür eklemek içindir. Ekler toplam sayısı için gerekli belirli miktarları hesaplayın ama emin yeterli ön karışım hazırlanır olmak için ekstra bir tane ekleyin. </li></ol></li><li> Acellular kollajen karışımı hazırlayın: <ol><li> Her kültüre asellüler kollajen karışımı 1 ml ekleyin. Verilen sıraya göre, buz üzerinde bir 50-ml&#39;lik konik tüpe aşağıdakileri ekleyin; 1,1 mg / ml kolajen 686 ul, 250 ul Ön karışımı ve 1000 ul toplam hacim 64 ul 1x tam bir DMEM. Iyi hava kabarcıkları sağlanması çözüm karıştırın. Hızlı çalışmak ve hava kabarcıklarını önlemek için tüpün duvarında kollajen ekleyin. </li><li> 6 yuvalı plaka yerleştirilir inserte hücresel olmayan tabaka karışımı 1 ml ilave edilir. Insert dışında kuyuya herhangi orta katmayın. Içinde37 ° C kuluçka makinesi içinde 30 dakika için cubate. Acellular karışım herhangi bir hava kabarcığı olmadan tüm insert kapsar emin olun. </li></ol></li><li> Hücresel kollajen karışımı hazırlayın: <ol><li> Aşağıdaki sırayla, buz üzerinde tutulan bir 50 ml konik bir tüp içinde hücresel tabakanın bileşenleri karıştırın; 2 ml Kolajen, 615 ul Öncesi karışımı, 1x tam DMEM 58 ul ve 327 ul hücre süspansiyonu Akciğer fibroblastlar (MRC-5) 3000 ul toplam hacmi telafi etmek. Her kültür, hücresel kolajen karışımı 3 ml gerektirir. KRİTİK ADIM: dikkatle hücre süspansiyonu eklenmesinden önce kolajen ve ön karışımı karıştırmak için emin olun. Bu fibroblastlar üzerindeki toksik etkileri önlemek için kolajen pH nötralize edecektir. </li><li> Hücresel olmayan kollajen tabakanın üzerine hücresel tabakanın (3 mi) ilave edin ve 37 ° C kuluçka makinesi içinde 2 saat süreyle inkübe edin. Hızlı çalışmak ve hava kabarcıklarını önlemek için tüpün duvarında kollajen ekleyin. </li><li> Polimerizasyon sonrasında, t tam DMEM 2 ml ilaveO (insert altında) 6 plaka alt ve 24 saat süre ile inkübe edilir. NOT: polimerizasyon meydana olmadıysa, fibroblast kollajen matriks içeren plaka ekler atmak ve start-tekrar. En olası neden eklenmesi veya yukarıda listelenen reaktiflerin bir yanlış hacminde bir hatadır. </li></ol></li></ol> Fibroblast-kollajen Matrix 3. Sürekli Kültürü <ol><li> Dikkatle temiz bir forseps kullanarak ekleme kaldırın ve kuyunun dibinden kültür ortamı aspire. Insert içinde 2 ml bitmiş DMEM ile iyice takip tabanına 2 mi tam bir DMEM ekleyin. Bu, dış ve iç bölme arasında besin difüzyonunu önlemek gibi, ekleme altında hava baloncuklarının oluşumunu ortadan. Bir mikropipet ucu ile hava kabarcıklarını çıkarın. </li><li> Yaklaşık 5-7 gün kültür ortamı (iç ve uç altında) her ikinci gün ve kültürü değiştirin. Insert medya giderilmesinde özen gösterin. Conta önlemek içinfibroblast kollajen matriks ile ct, hafif temiz bir forseps kullanarak ekleme eğin ve insert duvarlarından medya aspire. KRİTİK ADIM: kolajen matrisindeki fibroblastlar uzunlamasına bir fenotip elde, kolajen, daha sonra sözleşmeler değişiklik yapmak gerekir. Yaklaşık 5-7 gün içinde, matris insert merkezinde bir platform (çapı 10-14 mm) oluşturmak üzere sözleşmeli. Almasına matrisi, bir sonraki aşamada kullanıma hazırdır. Fibroblastlar önce (Adım 2.6.1) tohumlama için kolajen ile iyice karıştırılır o kritik matris muntazam bir daralma elde etmek. </li></ol> Bağışıklık Hücreleri (Enfekte / Bulaşmamış Monosit-makrofaj Karışımı) 4. Tohum Not: Aşağıdaki deney adım virülan mikobakteriler yayılır ve bu nedenle, bir BSL-3 imkan yapılmalıdır. <ol><li> Birincil monositler ve makrofajlar hazırlanması: <ol><li> Bir Establi kullanarak verici kandan periferal kan monositleri yalıtmakprotokolü döken. Doku modeli ve kültür kurma aynı gün monositler yalıtmak ve M. enfeksiyonu önce yaklaşık 7 gün süreyle makrofajlar içine ayırt tüberküloz. NOT: Bu sağlayacaktır hem makrofajlar ve sözleşmeli fibroblast kollajen matriks 7 gün sonra kullanılabilir. Ayrıca enfekte makrofajlar ile birlikte eklenecektir taze monositleri izole. </li></ol></li><li> M. hazırlanması Tüberküloz ile enfekte makrofajlar <ol><li> , 1 x PBS antibiyotik içermeyen bitmiş DMEM içinde% 0.05 Tween-80, tekrar süspansiyon içeren yıkama, kültürlenmiş bakteri hasat bakteriyel kümeleri dağıtmak ve optik yoğunluğunun ölçülmesi için, bir kesik, steril 27 G iğne geçer. Not: M. Öncesi belirlemek Laboratuvarda optik yoğunluk birim eşdeğer oluşturan tüberküloz koloni. Bu bakterilerin tahmini sayısının enfeksiyonu için kullanılacak verecektir. </li><li> 4 saat süre ile inkübe makrofajlar &lt;em&gt; M. enfeksiyon çokluğu (İçişleri Bakanlığı) 10) tüberküloz. Enfeksiyondan sonra, hücre dışı bakteriler kaldırmak için 1 x PBS ile 3 kez yıkayın. M. aynı şekilde ancak olmadan kültürlenen enfekte olmayan makrofagları kullanın tüberküloz, kontrol olarak. </li><li> 37 ° C&#39;de 10 dakika süreyle 2 mM EDTA ile muamele ile kültür plakasından çıkarın ve makrofajlar antibiyotik içermeyen bitmiş DMEM içinde yeniden süspansiyon haline getirildi hücreleri. </li></ol></li><li> Monositlerin Etiketleme Not: monositler İzolasyonu ve markalama BSL2 tezgah gerçekleştirilir ve daha sonra daha ileri işlemler için BSL-3 imkan alınabilir. <ol><li> Üreticinin talimatlarına uygun olarak, 5 dakika boyunca 2 uM PKH26 kırmızı boyanın bir son konsantrasyona sahip taze hazırlanmış monositler (2 x 10 7 hücreleri) Leke. Yıkama 3x 1 x 10 7 hücre / ml bir yoğunlukta antibiyotik içermeyen bitmiş DMEM ile hücreler tekrar süspansiyon ve. </li></ol></li><li> Bağışıklık hücrelerinin eklenmesi fibroblast-kollajen matrisin <ol><li> After fibroblast kollajen matrisin kültür 5-7 gün, dış ve iç bölmelerden kültür ortamı aspire dış odaya tam taze antibiyotik içermeyen DMEM 1,5 ml ilave ediniz. </li><li> MO bir oranı ile, etiketlenmiş bir monosit-makrofaj (enfekte edilmemiş / bulaşmış) karışım hazırlayın: MQ (5: 1), 50 | il DMEM içinde tamamlandı. 50.000 makrofajlar için 250,000 etiketli monositleri alır. </li><li> Fibroblast kollajen matris MQ karışımını 37 ° C&#39;de% 5 CO2 içinde, 1 saat boyunca inkübe edilir: 50 ul, MO ekleyin. İnkübasyondan sonra, yavaşça içine doğru kültür ortamı 2 ml ilave edilir ve 37 ° C&#39;de% 5 CO2 içinde, ilave 24 saat süreyle inkübe edin. Not: eklenen hücreler gevşek bağlanmış olduğundan, medyanın eklenmesi hafifçe ekin duvarlarına ekleyerek yavaş olmalıdır. </li></ol></li></ol> Akciğer Epitel Hücreleri 5. Tohum (16HBE) Not: Aşağıdaki adımlar BSL-3 imkan yapılmalıdır. <ol><li> Tohum akciğer eMQ-fibroblast kollajen tabaka: MO üstünde pithelial hücreleri (16HBE). Bunu gerçekleştirmek için, ilk olarak (. 2.2.1 gibi) tripsin ile muamele etmek suretiyle şişeden 16HBE hücreleri ayırmak ve antibiyotik içermeyen DMEM 4 x 10 6 hücre / ml&#39;de süspansiyon haline getirin. </li><li> Iç ve insert dışında kültür ortamı aspire. Daha sonra ekin dışında da alt tam 1.5 mi antibiyotik içermeyen DMEM ekleyin. </li><li> Immün hücre-fibroblast kollajen matrisinin üzerine 16HBE 50 ul ekle. Kaputu 2 dakika boyunca bırak ve% 5 CO2 ile 37 ° C kuluçka makinesi içinde 1 saat boyunca inkübe edilir. Kuluçkadan sonra, 3 gün boyunca 37 ° C&#39;de ekleme ve kültür içinde tam antibiyotik içermeyen DMEM yavaşça 2 ml ekleyin. Kültür aşama dokusu modelinde epitelyal hücrelerin çoğalmasını kolaylaştırır. Not: eklenen hücreler gevşek bağlanmış olduğundan, medya eklenmesi geçmenin duvarlar aracılığıyla kaydırarak yavaş ve nazik olmalıdır. </li></ol> 3D Akciğer 6. Hava pozlamaÖrnek Not: Enfekte makrofajların 5 gün sonra eklenmesinden sonra, doku modelleri hava maruz kalan ve aşağıdaki adımları BSL-3 tesiste yapılmalıdır. <ol><li> Iç ve insert dışında kültür ortamı aspire. Not: Bu adımda, süpernatanlar salgılanan faktörler saptanması için toplanabilir. -70 ° C &#39;de santrifüj steril filtre ve mağaza süpernatanları. </li><li> Dış odanın içinde 1,8 ml antibiyotik içermeyen DMEM ile tamamlanmış ekleyin ve 2 gün boyunca 37 ° C inkübatör% 5 CO2 içinde inkübe edilir. Insert içinde kültür ortamı eklemeyin. NOT: Doku modeli Hava kaldırma insan akciğer dokusuna doku ve fizyolojik benzerlik kuvvet sağlayan tabakalı epitel ve mukus salgısının, oluşumunu kolaylaştırır. </li></ol> 7. Hasat ve 3D Akciğer Doku Modeli Montaj Not: Aşağıdaki adımlar BSL-3 imkan yapılmalıdır.<ol><li> Enfekte makrofajların gün 7 yazılan implantasyon üzerinde doku modelleri hasat için hazır. Doku modeli tamamen kültür ortamı çıkarın. Oda sıcaklığında, karanlıkta 30 dakika süreyle% 4 paraformaldehid doku modeli sabitleyin. Bu adım, bakterileri öldürür ve daha fazla işlem için doku / hücre morfolojisi giderir. </li><li> Bir neşter kullanılarak, kuyu ovülden zarını ayırın. Iyi içeren 1x PBS doku içeren membran aktarın. </li><li> Kes ve temiz bir neşter kullanılarak doku modelinin yüzüne çıkarmak. Sonra 4 yaklaşık eşit kare parçaya doku modeli dilim. Bir SuperFrost cam slayt üzerine bir doku parçası aktarın. 4 ° C &#39;de 1 x PBS içinde doku parçaları saklayın. </li><li> 5 dakika boyunca doku kurutun ve DAPI ve lamel ile uzatmak Altın antifade kullanarak monte edin. Kuruyana kadar oda sıcaklığında karanlıkta bozmadan slaytlar bırakın. Not: doku kalınlığı hafif tilti neden merkez ve çevre arasında değişebilirlamel ng. Bunu önlemek için, (örneğin parafilm için) aralama kapak kayma köşesinde yerleştirilebilir. </li><li> Lamel kenarlarına oje sürün ve kurumasını bekleyin. BSL-3 tesisin ortaya çıkarmak için onları güvenli hale getirmek için% 70 etanol slaytlar bırakın. </li></ol> 8. Görselleştirme, Toplama ve Kantitatif Analiz 3D <ol><li> Lazerler sırasıyla GFP (yeşil kanal), PKH26 etiketli monositler için DAPI (mavi) için 420 nm ve 555 nm (kırmızı) uyarılması için 488 nm&#39;de yayan bir konfokal mikroskop sistemi kullanılarak doku slaytları gözünüzde canlandırın. </li><li> Yığınlarının arasında 1.5 mikron ayrılık - Z-yığınlarının 20 mikron kalınlığında en az kapsayan ve 1 sahip bir 512x512 çözünürlükte 3D görüntüler elde edin. Doku tüm parça kapsayan 5-10 farklı alanlarda edinin. Not: optik çözünürlük (dalga boyu, lazer güç / pozlama, piksel boyutu ve zoom) optimal ayarları için böyle Nyqvist olarak yapılandırmayı kullanın. Un kaçınınder ya piksel doygunluk bitti. </li><li> 3D görüntü işleme yazılımı ile konfokal görüntüleri analiz edin. Hücre kümelerinin 3D ölçümü için, aşağıdaki adımlar uygun analiz için tavsiye edilir. </li><li> 3D görüntü işleme yazılımını açın ve resim yüklemek. Örneğin, bir görüntü analiz edilecek nesnelerin boyutları ölçmek, bir çekirdek, tek tek monosit ve tek bakteri boyutu. Bu gözlemler, nesnelerin tanımlanması ya filtre edilmesi için kullanışlıdır. </li><li> Bir ekran ayarlama aracını kullanarak, görüntü kontrast, parlaklık ve matlık karışımı için her bir kanalı ayarlayarak ses render optimize. Bu adım, volume rendering gürültü girişimi en aza indirmektir. Not: Gamma düzeltmesi kaçınılmalıdır böylece görüntü manipülasyonu neden olabilir ve. </li><li> Eşiği (otomatik veya manuel seçim) kırmızı kanalı (monositler) seçerek yüzeyleri oluşturun ve ayarlayın. Gerekirse, kırmızı monosit seçimini kısıtlamak için filtreleri kullanın veya b dışlamak içinackground. Benzer şekilde, yeşil (M. tüberküloz) ve yukarıda tarif edildiği gibi mavi (çekirdekler) kanalları için yüzeyler oluşturur. </li><li> Ms-Excel dosyaları içine verileri verme. Belirli bir parametreyi veya tüm verileri vermek mümkündür. Hücre kümeleme analizi için ilgili parametreler hacmi, yoğunluk, nesne sayısı, voksellerin ve küresellik sayısıdır. </li><li> Kaydet ve uygun bir resim formatında tercihen TIFF görüntüleri ihracat. NOT: Animasyonlar da animasyon menüsünü kullanılarak yapılan ve bir medya dosyası olarak kaydedilebilir. </li><li> Ekleme parametreleri seçeneği kullanarak her kanalın analiz ayarları kaydedin ve işlevini yeniden kullanarak daha sonra alınabilir. Aynı anda Toplu işleme aracını kullanarak daha fazla dosyaları analiz. Not: alımr, muamele edilir ve aynı şekilde analiz edilmelidir karşılaştırılabilir tüm görüntüler. Mesela bir 8 bitlik görüntü (256 tamsayı) 12 bitlik görüntüde (4096 tamsayı) ile karşılaştırıldığında edilmemelidir. </li></ol>

<ol><li>Sakamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathology+of+Mycobacterium+tuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+pathology%22%5BJournal%5D)">The pathology of Mycobacterium tuberculosis infection.</a> Veterinary pathology. 49, 423-439 (2012).</li>
<li>Saunders, B. M., Britton, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+and+death+in+the+granuloma%3A+immunopathology+of+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Life and death in the granuloma: immunopathology of tuberculosis.</a> Immunol Cell Biol. 85, 103-111 (2007).</li>
<li>Kaufmann, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+issues+in+tuberculosis.+Ann+Rheum+Dis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">New issues in tuberculosis. Ann Rheum Dis.</a> Ann Rheum Dis. 63, Suppl 2. ii50-ii56 (2004).</li>
<li>Morrison, J., Pai, M., Hopewell, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberculosis+and+latent+tuberculosis+infection+in+close+contacts+of+people+with+pulmonary+tuberculosis+in+low-income+and+middle-income+countries%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Tuberculosis and latent tuberculosis infection in close contacts of people with pulmonary tuberculosis in low-income and middle-income countries: a systematic review and meta-analysis.</a> Lancet Infect Dis. 8, 359-368 (2008).</li>
<li>Barry 3rd, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+latent+tuberculosis%3A+rethinking+the+biology+and+intervention+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The spectrum of latent tuberculosis: rethinking the biology and intervention strategies.</a> Nat Rev Microbiol. 7, 845-855 (2009).</li>
<li>Puissegur, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+dual+model+of+mycobacterial+granulomas+to+investigate+the+molecular+interactions+between+mycobacteria+and+human+host+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An in vitro dual model of mycobacterial granulomas to investigate the molecular interactions between mycobacteria and human host cells.</a> Cell Microbiol. 6, 423-433 (2004).</li>
<li>Kapoor, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Granuloma+In+Vitro+Model%2C+for+TB+Dormancy+and+Resuscitation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human Granuloma In Vitro Model, for TB Dormancy and Resuscitation.</a> PLoS One. 8, e53657(2013).</li>
<li>Nguyen Hoang,, T, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+functional+properties+in+a+three-dimensional+tissue+model+of+human+lung+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell functional properties in a three-dimensional tissue model of human lung mucosa.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, L226-L237 (2012).</li>
<li>Parasa, V. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+Mycobacterium+tuberculosis+early+granuloma+formation+in+experimental+human+lung+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Modeling Mycobacterium tuberculosis early granuloma formation in experimental human lung tissue.</a> Dis Model Mech. 7, 281-288 (2014).</li>
<li>Cozens, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CFTR+expression+and+chloride+secretion+in+polarized+immortal+human+bronchial+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">CFTR expression and chloride secretion in polarized immortal human bronchial epithelial cells.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 10, 38-47 (1994).</li>
<li>Brighenti, S., Andersson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+immune+responses+in+human+tuberculosis%3A+learning+from+the+site+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Local immune responses in human tuberculosis: learning from the site of infection.</a> J Infect Dis. 205, Suppl 2. S316-S324 (2012).</li>
<li>Davis, J. M., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+granuloma+in+expansion+and+dissemination+of+early+tuberculous+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The role of the granuloma in expansion and dissemination of early tuberculous infection.</a> Cell. 136, 37-49 (2009).</li>
<li>Gupta, U. D., Katoch, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Animal models of tuberculosis.</a> Tuberculosis (Edinb). 85, 277-293 (2005).</li>
<li>Kashino, S. S., Napolitano, D. R., Skobe, Z., Campos-Neto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guinea+pig+model+of+Mycobacterium+tuberculosis+latent%2Fdormant+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Guinea pig model of Mycobacterium tuberculosis latent/dormant infection.</a> Microbes Infect. 10, 1469-1476 (2008).</li>
<li>Singhal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+tuberculosis+in+the+Wistar+rat%3A+a+model+for+protective+immunity+and+control+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Experimental tuberculosis in the Wistar rat: a model for protective immunity and control of infection.</a> PLoS One. 6, e18632(2011).</li>
<li>Subbian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphodiesterase-4+inhibition+alters+gene+expression+and+improves+isoniazid-mediated+clearance+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+rabbit+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Phosphodiesterase-4 inhibition alters gene expression and improves isoniazid-mediated clearance of Mycobacterium tuberculosis in rabbit lungs.</a> PLoS Pathog. 7, e1002262(2011).</li>
<li>Lin, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor+neutralization+results+in+disseminated+disease+in+acute+and+latent+Mycobacterium+tuberculosis+infection+with+normal+granuloma+structure+in+a+cynomolgus+macaque+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor neutralization results in disseminated disease in acute and latent Mycobacterium tuberculosis infection with normal granuloma structure in a cynomolgus macaque model.</a> Arthritis Rheum. 62, 340-350 (2010).</li>
<li>Rahman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartmentalization+of+immune+responses+in+human+tuberculosis%3A+few+CD8%2B+effector+T+cells+but+elevated+levels+of+FoxP3%2B+regulatory+t+cells+in+the+granulomatous+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Compartmentalization of immune responses in human tuberculosis: few CD8+ effector T cells but elevated levels of FoxP3+ regulatory t cells in the granulomatous lesions.</a> Am J Pathol. 174, 2211-2224 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir rakip mali çıkar beyan etmemektedir.

Enfeksiyon bölgesinde organize hücre kümeleri oluşturma ve oluşturma yeteneği, insan TB 11'in ayırt edici özelliğidir. Tüberkül granülomları olarak bilinen bu dinamik yapılar, esas olarak bağışıklık hücrelerinden (makrofajlar, monositler, T hücreleri ve B hücreleri) ve M. tuberculosis'i çevreleyen çok çekirdekli dev hücrelerden oluşur. Granülomun rolünün uzun zamandır enfeksiyonu duvarla ördüğü ve bakterilerin lokal yayılmasını önlediği düşünülmektedir. Bununla birlikte, daha yeni çalışmalar, granülom oluşumunun erken bakteri sağkalımı, büyümesi ve yayılması için kritik olduğunu göstermektedir 12. Yeni çalışmaların bir stratejisi, granülom oluşumunda ve/veya TB yayılımında hücresel göçü inhibe etmek için verimli bir şekilde hedeflenebilecek molekülleri veya yolları belirlemektir. 
Tüberküloz üzerine yeni çalışmalar için bir uyarı, insan tüberkülozunu özetleyen modellerin eksikliğidir. En yaygın kullanılan deney hayvanları, M. tuberculosis enfeksiyonu üzerine gerçek granülom oluşturmaz ve bu nedenle TB 13-16 çalışmaları için uygun seçimler değildir. İnsan olmayan primatlar, insan TB 17'ye en yakın benzerliğe sahiptir, ancak yüksek işletme maliyetleri ve etik sorunlar nedeniyle tercih edilen seçenek değildir. İnsan tüberkülozu karmaşık bir immünolojik süreçtir ve in vitro olarak modellenmesi zordur. Tek tabakalı veya ko-kültürlerin hücre kültürleri, 3B ortam ve doku tepkilerinden yoksundur. Bu nedenle, insan birincil bağışıklık hücrelerine ve insan akciğerine özgü hücre dizilerine 8,9 dayanan yenilikçi bir akciğer dokusu modeli geliştirdik. Model, eşit olarak entegre edilmiş makrofajlara sahip epitel, hücre dışı matris oluşumu, tabakalı epitel ve mukus salgısı 9 dahil olmak üzere insan akciğer dokusunun karakteristik özelliklerini gösterir. 
3D insan akciğer dokusu modelinin, doku kültürü plakaları veya transwell ekleri üzerine ekilen in vitro tek veya ko-kültürlere göre çeşitli avantajları vardır. İlk olarak, insan akciğerine özgü hücreler (fibroblastlar ve epitel hücreleri) genellikle in vitro tek veya ko-kültürlere dahil edilmez. İkincisi, bağışıklık hücreleri ve akciğere özgü hücreler, 3 boyutlu fizyolojik bir bağlama (kolajen açısından zengin hücre dışı matris ürünleri) gömülüdür. Hücrelerin bir uyarana/enfeksiyona tepkisi ve hücrelerin göç davranışı, örneğin bir granülom oluşumu, 2D ve 3D ortam arasında önemli ölçüde farklılık gösterir. Ayrıca, açıklanan yöntem, mekansal dağılım ve karmaşık hücresel etkileşimler hakkında önemli bilgiler sağlayan 3D görselleştirmeyi ve sağlam 3D kantitatif analizi mümkün kılar. 
Model dokuda M. tuberculosis ile deneysel enfeksiyon, erken TB granülomunu anımsatan enfeksiyon bölgesinde makrofajların kümelenmesiyle sonuçlandı (Şekil 2 ve 3). Yakın zamanda, virülans faktörü ESAT-6'yı veya ESAT-6'dan yoksun Mycobacterium bovis BCG'yi salgılama yeteneğinde kusurlu olan mutant suşların, virülan M. tuberculosis 9'un aksine, monositlerin kümelenmesini (erken granülom yok) indüklemediğini gösterdik. Bu veriler, şeffaflığı granülom oluşumunun 12 zarif bir şekilde canlı görüntülenmesine izin veren Mycobacterium marinum ile enfekte zebra balığı embriyolarından yapılan gözlemlerle tutarlıdır. TB için altın standart bir model olmadığından, yöntem 9'un doğrulanması için TB hastalarından cerrahi olarak rezeke edilen doku biyopsilerinden yararlandık. İn vitro doku modelimiz, granülomda makrofajların toplanması, hem hücre içi hem de hücre dışı bakterilerin varlığı 18 ve nekroz indüksiyonu 11 dahil olmak üzere TB hastalarından alınan akciğer ve lenf nodu biyopsileri ile çeşitli özellikleri paylaşır.
Tarif edilen modelin insan tüberkülozu ile fizyolojik ilişkisi olmasına ve diğer in vitro modellere göre çeşitli avantajları olmasına rağmen, bazı sınırlamaları vardır. Örneğin, insanlarda tanımlanan 20'den fazla kolajen proteininden, hücre dışı matrisi taklit etmek için modele yalnızca tip I dahil edilmiştir. Bununla birlikte, tip I kolajen, hücre dışı matris ürünlerinin karmaşık bir karışımıdır ve insan vücudunda en bol bulunan kolajendir. Ayrıca, doku modelinde epitel hücreleri ve fibroblastlar tarafından üretilen ve yeni kollajen 8 sentezini gösteren kollajen IV ve tropoelastin, vimentin ve laminin gibi birkaç hücre dışı matris proteininin varlığını gösterdik. Şu anda, akciğer dokusu modelinde akciğere özgü hücrelerin yanı sıra sadece monositler ve makrofajlar bulunmaktadır. Granülomda da bulunduğu bilinen nötrofiller ve lenfositlerden yoksundur. Dikkat çekici bir şekilde, model ek bağışıklık hücrelerinin eklenmesiyle sınırlı değildir ve bunların insan tüberkülozundaki karmaşık hücresel etkileşimlere nasıl katkıda bulunduğunu araştırmak ilgi çekicidir. Primer alveolar makrofajların, cilde özgü hücrelerin ve akciğer karsinom hücrelerinin implantasyonu modelde zaten test edilmiştir. Amacımız insan tüberkülozuna çok benzeyen bir model kullanmak olduğundan, fare hücrelerinin tanıtılması denenmemiştir.
Özetle, akciğer dokusu modelinin hem temel mekanik hem de uygulamalı çalışmalar için etkileri vardır. Akciğer modelinin potansiyel uygulamaları arasında doğuştan gelen bağışıklığın incelenmesi, fagozomal olgunlaşma, otofaji, sitokin, kemokin ve anti-mikrobiyal peptit üretimi gibi konakçı savunmalarının mekanik yönlerinin araştırılması ve bireysel hücre tiplerinin fonksiyonel karakterizasyonu yer alır. Çarpıcı bir şekilde, in vitro doku modeli, bir veya daha fazla hücre tipinin manipülasyonuna izin verir ve yalnızca TB çalışmaları için değil, aynı zamanda akciğerleri etkileyen çeşitli bulaşıcı ve bulaşıcı olmayan hastalıklar için de ilgili bir doku mikro ortamı sağlar.

İnsanlarda, enfeksiyon, doku iltihabı, hücresel işe alım, doku yeniden ve doku homeostazının düzenlemeye tepkiler farklı hücre tiplerini içeren karmaşık olaylardır. Dolayısıyla, bu süreçler en iyi lokal doku ortamında incelenir. Daha önce, bu çoğunlukla deneysel hayvan modelleri kullanılarak mümkün olmuştur. Genellikle insanlarda daha farklı bir şekilde patojenlere karşı cevap verir ve aynı zamanda hastalığın 1 farklı bir yol göstermek Ancak, yaygın olarak kullanılan deney hayvanları birçok sınırları tutun. In vitro akciğer dokusunda modelinde Bir insan, insan akciğerinde spesifik immün yanıtları incelemek için olasılıkları tutar. İnsan tüberküloz enfeksiyonu (TB). Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis), TB etkeni bakteriler akciğer dendri tarafından yuttu alveoler alana, taşınır aerosol damlacıkları yoluyla akciğere ulaşır akciğerleri etkileyen bir hastalıktırtik hücreleri ve enfeksiyon 2,3 doğuştan gelen bağışıklık yanıtının bir parçası olarak alveolar makrofajlar. Patojenin Fagositoz bir fagozomun içinde hata bölümlendirme yol açar ve ideal phagocyte ile nötralizasyon ve patojenin öldürülmesi ile sonuçlanır. M. maruz kalan bireylerin% 50 kadar tuberculosis tabii immun cevabın 4 ile enfeksiyonu temizleyebileceğine mümkün olduğuna inanılmaktadır. Diğer enfeksiyon sonuçların bir sonraki aşamada, latent enfeksiyon ya da en kötü durumda, kronik aktif hastalık 5 adaptif bağışıklık sistemi tarafından açıklık vardır. Daha önce, insan TBC çalışmalar için bir in vitro doku modelleri olmuştur. Insan makrofajları ve diğer periferal kan hücrelerinin tekli hücre kültürleri, genellikle 6,7 kullanılmıştır. Bu yaklaşımın dezavantajı, M. maruz kalan akciğer dokusu içinde birlikte çalışan farklı hücre tiplerinin dinamiklerini yansıtmıyor olmasıdır tüberküloz </em&gt;. Bu nedenle, TB ve işlevsel mekanistik çalışmalar yapabilmek için bir in vitro model için bir ihtiyaç vardır. Hücre tabanlı Burada anlatılan in vitro insan akciğer dokusu modelinde orijinal dendritik hücre fonksiyonları 8 çalışmalar için bizim grup tarafından kurulmuştur. Biz TB çalışması için bu yöntemi adapte var. Burada sunulan insan akciğer dokusu modeli dokuya özgü epitel hücreler ve fibroblastlar 8 oluşur. Bu hücreler, bir Transwell ek ve normal insan akciğer dokusu (Şekil 1) benzer bir şekilde yapılarında gözenekli bir zar üzerine kolajen matrisi içinde kültürlenir. Hava maruz kaldığında hücreler apikal tarafında 8&#39;de mukus salgılamaya başlar. Insan birincil makrofajlar implante tarafından M ile enfekte bağışıklık hücreleri dokuda göç ve TB granülom 9 erken aşamalarında formu nasıl modele tüberküloz, biz gözlemledik. Bu ilk insan dokusu modeli descri olduğunuTB IBED ve TB ve akciğer ve diğer hastalıklara karşı doğal immün yanıtları çalışmak için gelecek vaat eden bir araç teşkil etmektedir. Bugüne kadar, modelinde bağışıklık hücreleri sadece olarak monositleri ve makrofajlan kullanılan ama karmaşıklık düzeyi ilgili ek hücre tipleri dahil edilmesi ile artırılabilir. <img alt="figür 1" src="/files/ftp_upload/53084/53084fig1.jpg" /> Akciğer dokusu modelinin 1. şematik anahat rakam. (A) bir model M., insan akciğer epitel hücrelerine özgü oluşmaktadır tüberküloz primer makrofajlar ile enfekte ve kırmızı boya etiketli monositler bir transwell filtre üzerinde hazırlanan kollajen gömülü fibroblastlar üzerine numaralı seribaşı. Havaya doku modeli Pozlama epitel ile hücre dışı matriks proteinlerin üretimini, mukus salgılanmasını ve tabakalaşma başlatır. Böylece geliştirilen 3D doku modeli M. incelemek için yararlı bir araçtır clo bir ortamda tuberculosis enfeksiyonuyapt klar insan akciğeri. (B) bir doku modeli hazırlanmasında farklı adımların Örnek mikroskopik ve görüntüler. (C) akciğer modeli, doku bölümünün komple yapı benzemektedir. Ölçek -. 100 mikron <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53084/53084fig1large.jpg" target="_blank">bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

<table><tbody><tr><td>Hücre kültürü ekleri</td><td>BD Falcon</td><td>353092</td><td></td></tr><tr><td>6 oyuklu kültür plakaları</td><td>BD Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>MRC-5 hücreleri, akciğer fibroblastları</td><td></td><td></td><td>ATCC#CCL-171</td></tr><tr><td>16HBE hücreleri, akciğer epitel hücreleri</td><td></td><td></td><td>Dr. Dieter Gruenert'ten Hediye, Mt. Zion Kanser Merkezi, California Üniversitesi, San Fransisco, ABD&nbsp;</td></tr><tr><td>5 adet Dulbecco' s değiştirilmiş Kartal' s orta (5 x DMEM)</td><td>Gibco</td><td>12800-082</td><td>Tozdan yapılmıştır ancak 5 kat daha az su ekleyin. PH'ı 7.3'e ayarlayın ve 0.2 & mikro kullanarak filtreleyin; m filtresi.</td></tr><tr><td>Dulbecco' s değiştirilmiş Kartal' glikozlu s ortamı (DMEM) 1x</td><td>Gibco</td><td>41965-039</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Temel Orta (MEM) 1x Earle' ile s tuzları</td><td>Sigma</td><td>M4655</td><td></td></tr><tr><td>Esansiyel Olmayan Amino Asitler Çözeltisi, 100x</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin 200 mM (100x)</td><td>Gibco</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Piruvat</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11360-039</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3 (71.2 mg / ml)</td><td></td><td></td><td>Evde hazırlanır</td></tr><tr><td>Isı ile inaktive edilmiş Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Isı 30 dakika, 56 ° C boyunca etkisiz hale getirilir; C</td></tr><tr><td>Gentamisin (50 mg / ml)</td> <td>Gibco</td><td>15750-060</td><td></td></tr><tr><td>Hepes tampon çözeltisi 1M</td><td>Gibco</td><td>15630-056</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin (Kalem Strep)</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>Axis-Shield</td><td>7801</td><td></td></tr><tr><td>Ultra saf 0.5 M EDTA</td><td>Gibco</td><td>15575</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Kollajen PA ile tedavi edildi (500 ml)</td><td>Organogenez</td><td>200-055</td><td></td></tr><tr><td>Saf col saflaştırılmış Sığır Kollajen çözeltisi (100 ml)</td> <td>Gelişmiş biyomatris</td><td>5005-B</td><td></td></tr><tr><td>Hücre dışı matriks proteini, Fibronektin (1 mg)</td> <td>BD</td><td>354008</td><td></td></tr><tr><td>Birincil insan monositleri / makrofajları</td><td></td><td></td><td>İnsan tam kanından veya buffy paltolarından izole edilmiştir.</td></tr><tr><td>PKH26 Kırmızı floresan hücre bağlayıcı</td><td>Sigma</td><td>MINI26</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Rv, yeşil floresan protein</td><td></td><td></td><td>M. tuberculosis H37Rv vahşi tip, GFP'yi yapısal olarak eksprese eden pFPV2 plazmidi ile dönüştürüldü.</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H9 orta&nbsp;</td><td>Difco</td><td>271310</td><td></td></tr><tr><td>BBL Middlebrook ADC Zenginleştirme</td><td>BBL</td><td>211887</td> Tween-80 Gliserol Kanamisin B sülfat (20 & <td></td></tr> mikro<tr><td></td>;<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> g / ml)</td> <td>Sigma</td><td>B5264</td><td></td></tr><tr>DAPI <td>Invitrogen</td><td>P36935</td><td></td>Tripsin -EDTA<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSM700 Konfokal mikroskop</td><td>Zeiss</td> ile Prolong Gold anti=-solma reaktifi <td></td><td></td></tr><tr><td>iMaris Scientific 3D/4D görüntü işleme yazılımı, sürüm 7.6.8</td><td>Bitplane AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fonksiyonel araştırmaları 3d İnsan akciğer doku modeli<em&gt; mycobacterium tuberculosis</em&gt; enfeksiyon

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

Tüberküloz (TB) hala tüm dünyada insanların sağlığı için büyük bir tehdit tutar ve bize yeni tedavi seçeneklerinin keşifler hastalık mekanizmalarını anlamak ve ilerletmek yardımcı olmak için düşük maliyetli ama güvenilir modelleri için bir ihtiyaç vardır. Mono tabakaları In vitro hücre kültürleri ya da ko-kültürler üç boyutlu (3D) bir ortam ve doku tepkileri yoksundur. Bu yazıda, Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) ile enfeksiyon sırasında meydana gelen karmaşık olayları incelemek için etkili bir araç olarak umut vaat insan akciğer dokusu, in vitro model yenilikçi açıklar. 3D doku modeli gözenekli bir zar üzerine kolajen matrisi içinde kültürlenir dokuya özgü epitel hücreleri ve fibroblastlar, oluşur. Hava maruziyet üzerine, epitel hücreleri tabakalandırmak ve apikal tarafında mukus salgılar. Insan birincil makrofajlar tanıştırarak M. ile enfekte Doku moduna tüberkülozl, immün hücreleri enfekte doku içine göç ve TBC granülom erken aşamalarında meydana göstermiştir. Bu yapılar temelde farklı veya sık yaygın olarak kullanılan deneysel hayvan modellerinde gözlenen değil, insan TB, granülom, ayrı özelliği özetlemek. Bu Organotipik kültür yöntemi konak hücre-patojen etkileşimleri mekansal ve zamansal özellikleri önemli bilgi sağlar 3 boyutlu görselleştirme ve sağlam nicel analiz sağlar. Birlikte ele alındığında, akciğer doku modeli TB çalışmaları için fizyolojik ilgili doku mikro ortam sağlar. Böylece, akciğer doku modeli temel mekanik ve uygulamalı çalışmalar hem de potansiyel etkileri vardır. Önemli olarak, model, böylece akciğerleri etkileyen enfeksiyon hastalıklarının çeşitli modellemek için kullanımını genişler tek tek hücre tiplerinde, ilave ya da manipülasyon.

İnsan TB için bir 3D akciğer doku modeli etkin bir şekilde M. konak-patojen etkileşimleri çalışmak için kullanılabilir Tüberküloz enfeksiyonu. Bu yöntem temel aşamaları, farklı adımlar bir doku kesitinin bir genel mikroskobik yapısı temsili mikroskopik görüntüleri, Şekil 1 &#39;de özetlenmiştir. Modeli akciğer fibroblastlarında, bronşiyal epitel hücrelerinde ve primer monosit / makrofajlar dahil olmak üzere, insan akciğer dokusu çeşitli bileşenleri bulunmaktadır 3D doku ortamında gömülü. Insan akciğer dokusu bileşenlerini içeren yanı sıra, model, fizyolojik koşullar epitel mukus salgılanmasının, yani tabakalaşma benzemektedir. Bir TB enfeksiyonunu izleyerek akciğer dokusu modelinin kullanımı için bir örnek Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. M. görselleştirmek için Tüberküloz -immune hücre göçü ve etkileşim, biz M ile enfekte makrofajlar tanıttı GFP ifade tüberküloz(yeşil) birlikte, doku modeline taze izole PKH26 etiketli monositler (kırmızı) ile (mavi, DAPI çekirdekleri için boyandı). M. gün 7 sonrası ek Açık Doku modeline tüberküloz ile enfekte hücreler, konfokal mikroskopi insan TB 9 damgasını lezyonları taklit enfeksiyonu (yeşil) sitesinde (Şekil 2), kırmızı monosit kümeleme ortaya koymaktadır. M. 3D görselleştirme için temsili görüntüleri bir dizi Tüberküloz doku modeli ve hücre kümelerinin ölçümü Şekil 3&#39;te gösterilmiştir. 3D görselleştirme, etkileşim incelemek ve 3D görüntüde çeşitli özellikler ölçmek için kullanıcı esnekliği sağlar ile enfekte. M. yerinde monositlerin kümelenmesini ortaya Şekil 3B&#39;de, gösterildiği gibi, yeşil ve kırmızı bakteri kümeleri monosit spatyal, apikal rotasyonel ve yanal görünümünde görülebilir tüberküloz. kümeler ob değildibulaşmamış dokularda (Şekil 3A) görev yaptı. Biz monosit hücre kümelerinin sayısını ve boyutunu sayısal ve bireysel monosit sayısı M. (p &lt;0.01) azalmıştır hücre kümeleri boyutu (hacmi), (p &lt;0.001) artmış olduğu bulundu enfekte edilmemiş doku modelleri (Şekil 3C ve 3D) kıyasla tüberküloz dokuları bulaştırılır. Bu veriler M. erken granülom oluşumu önceki bulguyu doğrular Tüberküloz enfeksiyonu 2B doku kesitlerinde 9 analiz akciğer dokusunda modellerinde gözlenen. Bulgularımız doku modeli karmaşık ev sahibi M. hücre- araştırmak için doğal bir 3D yaşam sağladığını göstermektedir tüberküloz iletişim ağı. Biz de 3 boyutlu görselleştirme ve kantitatif analiz doku modelinde (Şekil 3) özelliklerini incelemek için daha iyi araçlar olduğunu gördük. Bir hücre kümesinin Kantitasyonu (örneğin granülom) sıklıkla Stretç<html> birkaç hücre tabakası hes alınmakta ve bir 3D niceliksel analizi ile yakalanabilir. Dahası, tek tek hücrelerin veya modele bakteri kesin mekansal ve zamansal özellikleri görselleştirme belirlenmiş bir laboratuarda canlı görüntüleme, göç ve izleme çalışmaları tanır. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53084/53084fig2.jpg" /> Öldürücü M. etrafında doku modeli kümede Şekil 2. Monosit tüberküloz. bulaşmamış ve M. Temsilcisi konfokal görüntüler tüberküloz ile enfekte doku modeli sunulmuştur. Bulaşmamış dokulara kıyasla Paneller yeşilden (M., tüberküloz GFP), kırmızı (PKH26 etiketli monositler), mavi (DAPI-lekeli çekirdekleri) ve birleştirilmiş kanallar enfekte dokuda monositlerin göstermektedir. Ölçek - 100 mikron.large.jpg &quot;style =&quot; font-size: 14px; line-height: 28px; &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53084/53084fig3.jpg" /> Şekil 3. 3 boyutlu görselleştirme ve doku modelinin kantitatif analiz yararlı bilgiler sağlamaktadır. M. ile enfekte tüm doku modeli (A) bulaşmamış doku, (B) 3 boyutlu görselleştirme Temsilcisi görüntüleri tüberküloz, Imaris görüntü işleme yazılımı (sürüm 7.6.8) tarafından Zeiss LSM700 konfokal mikroskop ve kantitatif analiz kullanılarak optik kesit boyunca. Bu görüntüler 20X büyütmede elde edildi, apikal, dönme yatay, düşey dönme ve lateral görünümde (A ve B) görselleştirme izin 1.5 mikron aralıklarla 19.5 um doku kalınlığı kapsayan 14 z-yığınları. (C) QuaM. sonrası erken granülom kümelerin monosit hücre kümelerinin ntitative analizi geliştirilmiş ortaya koymaktadır (p &lt;0.0001) boyutu enfekte olmuş dokudaki fazla kümeleri tekrarlayan, enfekte olmamış bir doku ile karşılaştırıldığında enfeksiyon olmamasına kıyasla tüberküloz enfeksiyonu. (D) monosit sayısının nicelleştirilmesi enfekte olmuş dokudaki bir düşüş (p &lt;0.01). Yeşil - M. tüberküloz GFP, Kırmızı - PKH26 etiketli monositler, Mavi - hücre çekirdekleri, Ölçek -. 100 mikron <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53084/53084fig3large.jpg" target="_blank">bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

İnsan tüberkülozu enfeksiyonu, in vitro olarak modellenmesi zor olan karmaşık bir süreçtir. Burada, bağışıklık hücrelerinin göçü ve fizyolojik bir ortamda erken granülom oluşumu da dahil olmak üzere enfeksiyon sırasında meydana gelen dinamikleri özetleyen yeni bir 3D insan akciğer dokusu modelini açıklıyoruz.

Fonksiyonel Araştırmaları 3D İnsan Akciğer Doku Modeli<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Enfeksiyon

Tuberculosis (TB) still holds a major threat to the health of people worldwide, and there is a need for cost-efficient but reliable models to help us ...

Bu prosedürün genel amacı, M tuberculosis enfeksiyonu çalışmalarına yönelik in vitro bir akciğer doku modeli oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle bir hücre kültür plakası inserti filtresi üzerine bir fibroblast kolajen matrisinin tabakalandırılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, enfekte bağışıklık ve akciğer epitelyal hücreleri fibroblast kolajen tabakasının üzerine yerleştirilir.Elde edilen 3D doku modeli, mukus sekresyonunu ve epitelyumun katmanlaşmasını kolaylaştırmak için ardından havayla temas ettirilir. Son adımda, doku hasat edilir ve lam üzerine yerleştirilir. Son olarak, M tuberculosis tarafından indüklenen erken granülom oluşumunu analiz etmek için immünofloresan mikroskopi kullanılır.Bu tekniğin veya in vitro hücre monokatmanı gibi mevcut yöntemlerin temel avantajı, bu sistemdeki hücrelerin 3D bir mikroortamda bulunmasıdır; bu durum, insan TB'sine benzeyen virülan mikrobakterilerle enfeksiyon sonrası granülom oluşumuna olanak tanır. Kollajen gömülü fibroblastlar hazırlamak için, akciğer fibroblast hücrelerini 37 °C'de 10 dakika boyunca tripsin ile muamele ederek başlayın; hücreler ayrıldığında, reaksiyonu 8 mL tam DMEM ile durdurun ve ardından hücreleri santrifüjleyin. Peletleri taze DMEM içinde mililitre başına 230.000 hücre olacak şekilde resüspande edin ve hücreleri buza yerleştirin. Ardından, altılı bir plakadaki her kuyucuğa bir adet insert ekleyin.Kuyu plakasına, her bir insertin içine taze hazırlanmış hücresiz tabaka karışımından bir mililitre dispense edin ve karışımın hava kabarcığı olmadan tüm inserti kapladığından emin olun. Ardından plakayı 37 °C'lik bir inkübatöre 30 dakika boyunca yerleştirin. İnkübasyonun sonunda, insert başına kolajenin pH değerini nötralize etmek için, buz üzerinde steril bir konik tüpte iki mililitre kolajeni 615 µL premiks ile karıştırın.Ardından, kolajen karışımına her insert için 58 µL tam DMEM ve 327 µL akciğer fibroblastı ekleyin. Hücreleri karışım boyunca eşit şekilde dağıtmak için pipetle aşağı yukarı hareketler yapın. Şimdi, her bir hücelerle yüklü olmayan kolajen tabakasının üzerine, her bir insertin kenarından üç mL hücresel tabakayı hızlıca ekleyin.Hava kabarcıkları oluşmamasına dikkat ederek plakayı hücre kültürü inkübatörüne iki saat daha yerleştirin. Kollajen polimerizasyonunun ardından, her kuyucuğun altına iki mililitre tam dmem ekleyin ve plakayı 24 saat daha inkübatöre geri koyun. Ertesi gün, temiz bir pens yardımıyla insertleri tek tek dikkatlice kaldırın ve her birinin altındaki kültür ortamını aspire edin.Ardından, her kuyunun dibine iki mililitre tam DMM ve her bir ekleme ünitesine (insert) iki mililitre tam DMM ekleyin. Beş ila yedi gün boyunca, her iki ortam hacmini iki günde bir değiştirin. Enfekte makrofajları hazırlamak için, bir makrofaj kültürünü 10 enfeksiyon çokluğuyla (MOI) virulent M tuberculosis ile dört saat boyunca inkübe ederek başlayın.İnkübasyonun sonunda, hücre dışı bakterileri uzaklaştırmak için hücreleri üç kez PBS ile yıkayın ve makrofajları 37 °C'de 10 dakika boyunca 2 mM DTA ile muamele edin. Hücreler ayrıldığında, onları antibiyotiksiz komplet DMM içinde süspande edin. Ardından, fibroblast kolajen matriks plağındaki tüm medyumu aspire edin ve dış odacıklara 1,5 mL taze antibiyotiksiz komplet DMM ekleyin.Ardından, floresanla işaretlenmiş monositleri, insert başına 50 µL antibiyotiksiz complete DM EM içerisinde, enfekte makrofajlarla beşe bir oranında karıştırın. Daha sonra, monosit-makrofaj karışımından 50 µL'yi her bir insertin içine ekleyin ve plakayı inkübatöre geri yerleştirin. Bir saat sonra, hücrelerin yerinden oynamasını önlemek için insertlerin duvarlarından aşağıya doğru yavaşça 2 mL kültür ortamı ekleyin ve kültürleri 24 saat daha inkübe edin.Kültürlere akciğer epitel hücreleri eklemek için, immün hücre fibroblast kolajen matrislerin üzerine 50 µL tam dmm içerisinde mililitre başına 4 milyon epitel hücre ekleyin. Hücreleri önce oda sıcaklığında iki dakika, ardından 37 °C'de bir saat boyunca inkübe edin. Daha sonra, az önce gösterildiği gibi insertlere iki mL antibiyotiksiz tam DMM'yi nazikçe ekleyin ve hücreleri üç gün daha kültüre edin.Enfekte makrofajların ekilmesinden beş gün sonra, plaktaki tüm kültür ortamını aspire edin ve dış odacıklara 1,8 mililitre antibiyotiksiz, tamamlanmış DMM ekleyin. Ardından, ekim sonrası yedinci günde, insert içine ortam eklemeden 3D doku modellerini inkübatörde iki gün boyunca havayla temas ettirin.Besiyerini plakadan tamamen uzaklaştırın ve doku modellerini, oda sıcaklığında ve karanlıkta 30 dakika boyunca %4 paraldehit ile karıştırın. Ardından bir bistüri kullanarak membranları kuyucuk insertlerinden ayırın. Sonrasında, temiz bir bistüri ile doku modellerinin kenarlarını dikkatlice kesin ve her bir dokuyu yaklaşık olarak eşit büyüklükte dört kare parça halinde dilimleyin.Parçaları süper donuk cam lamlara aktarın ve beş dakika boyunca kurumaya bırakın. Ardından, anti-fade ve dpi içeren floresan bağlama ortamı kullanarak dokuları bağlayın ve üzerlerini kapatma lamları ile örtün. Lamları kuruyana kadar oda sıcaklığında ve karanlıkta bekletin, ardından kapatma lamının kenarlarını oje ile mühürleyin.Lakur kuruduğunda, slaytları BSL 3 tesisinden dışarı çıkarmak için %70 etanol içine daldırın. Dokuları görselleştirmek için, hücre kümelerinin 3D kantifikasyonu amacıyla, floresan konfokal mikroskobunda, tüm doku parçasını kapsayan beş ila 10 farklı alanın 512 x 512 çözünürlükte, minimum 20 µm kalınlığında Z-stack'ler ve stack'ler arasında 1 ila 1,5 µm ayrım olacak şekilde 3D görüntülerini alın. 3D görüntü işleme yazılımını açın ve ilgili görüntüyü yükleyin.Ardından, görüntüleme ayar aracını kullanarak, hacimsel görüntülemeyi optimize etmek ve gürültü girişimini en aza indirmek için her bir kanalın görüntü, kontrast, parlaklık ve karışım opaklık ayarlarını yapın. Daha sonra doku yüzeyini görselleştirmek için kırmızı monosit kanalını seçin ve kırmızı monositlerin seçimini sınırlamak veya gerektiğinde arka planı dışlamak için filtreleri kullanarak uygun eşik değerlerini belirleyin. Son olarak, verileri daha sonraki analizler için uygun bir hesap tablosu programına aktarın.M tuberculosis ile enfekte hücre ekiminden sonraki yedinci günde, konfokal mikroskopi, insan tüberkülozundaki granülom adı verilen lezyonları taklit eden yeşil bakterilerin varlığıyla belirlenen enfeksiyon bölgesinde kırmızı monositlerin kümelendiğini ortaya koyar (3D). Görselleştirme; çeşitli özelliklerle etkileşim kurma, bunları inceleme ve nicelleştirme esnekliği sağlar. Örneğin, bu görüntülerdeki 3D bir görüntü, M tuberculosis enfeksiyon bölgesindeki monosit kümelenmesini betimlemektedir.Yeşil bakterilerin ve kırmızı monosit kümelerinin uzamsal düzenlemesi apikal, rotasyonel ve lateral görünümlerden gözlemlenebilir. Beklendiği üzere, bu kümeler enfekte edilmemiş dokularda gözlemlenmemiştir. Monositlerin, hücre kümelerinin ve M tuberculosis enfekte dokuların boyut ve sayısının nicelendirilmesi, enfekte edilmemiş doku modellerine kıyasla hücre kümelerinin boyutunun arttığını, bireysel monosit sayısının ise azaldığını ortaya koymuştur.Bu akciğer dokusu modelinin potansiyel kullanım alanları arasında, tüberkülozda farklı bağışıklık hücrelerinin ve doku bağışıklığının rolünün incelenmesi, mikobakteri fenotiplerinin çalışılması ve granülom içindeki mikobakterileri yok eden ilaç adaylarının test edilmesi yer almaktadır.

a-3d-human-lung-tissue-model-for-functional-studies-on-mycobacterium

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Mueller, A. ve diğerleri. Mycobacterium tuberculosis ve Plasmodium berghei'nin doğal bulaşımı üzerine tüberküloz-sıtma koenfeksiyonunu incelemek için deneysel bir model. J. Vis. Exp. (2014)Bu video, Mycobacterium tuberculosis (Mtb) aerosol olarak farelere aerosol olarak ulaşımı ve nebulizator tabanlı bir oda sistemi kullanılarak akciğer enfeksiyonu indükte göstererek, havadan tüberküloz iletimi ve konak-patojenler etkileşimlerini in vivo incelemek için kontrollü ve tekrarlanabilir bir...

Fare modelinde Mycobacterium tuberculosis'in akciğer enfeksiyonu için aerosol iletimi

Tüberküloz ve sıtma insan ve tropik yoksul toplumlarda morbidite ve mortalitenin önemli nedenlerinden en yaygın enfeksiyonlardan ikisidir. Bu enfeksiyon, doğal yoldan hem patojenler ile yüklemeden sonra farelerde sıtmaya tüberküloz koenfeksiyonu sonucunu çalışma deneysel bir model sistemi kurulmuştur.

Doğal İletim üzerine Tüberküloz-Sıtma Koenfeksiyonu Çalışması için Deneysel Bir Model Mycobacterium tuberculosis Ve Plasmodium berghei</i

Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC) hedefli tedavilere karşı duyarlılığı incelemek için biyolojik bir kollajen iskelesine dayalı üç boyutlu (3D) bir akciğer kanseri modeli sunuyoruz. Proliferasyon indeksi, apoptoz ve epitelyal-mezenkimal geçiş (EMT) durumunu belirlemek için farklı okuma teknikleri gösteriyoruz. Toplanan veriler, ilaç duyarlılığının tahmini için in silico bir modele entegre edilmiştir.

Kombine bir 3D doku mühendisliği<em&gt; İn Vitro</em&gt; /<em&gt; Siliko</emSpesifik mutasyonel Arka İlaç Etkinliği tahmin için&gt; Akciğer Tümör Modeli

Bu hücre içi, Mycobacterium tuberculosis karşısında roman bileşiklerin bulunması hedefleme için ve in suyu memeli konakçı hücreye karşı bakteri hem de sitotoksisite büyüyen modüler yüksek verimli bir tarama sistemini geliştirdik.

Hücre içi Hedefleme İnhibitörleri Etkinliği ve Sitotoksisite Taraması için sistem<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

Biz gazeteci enzim floresan (REF) kullanarak Mycobacterium tüberküloz ile (M. tuberculosis) enfekte farelerin optik görüntüleme açıklar. Bu iletişim kuralı M. tuberculosis hassas ve belirli algılama Patogenez, tedavi ve aşı araştırma için önceden klinik hayvan modellerinde kolaylaştırır.

Mycobacterium tüberküloz ile muhabir enzim Floresans farelerde görüntüleme

Burada, içinde bir yetişkin zebra balığı kendi doğal patojen Mycobacterium marinumkullanarak bir iletişim kuralı modeli insan tüberküloz için mevcut. Ayıklanan DNA ve RNA gelen virüslü zebra balığı iç organlarının balıklar ve ana bilgisayarın bağışıklık yanıtı qPCR ile toplam Mikobakteriyel yükler ortaya çıkarmak için kullanılabilir.

Tüberküloz Mycobacterium marinum enfekte yetişkin zebra balığı içinde modelleme

Burada, biyolojik ve biyomedikal çalışmalarda 3D akciğer doku kültürleri modeli insan akciğer hastalıkları için oluşturmak için uygun özel dolu insan hassas kesim akciğer dilimleri rezeke hasta dokusundan hazırlanması için bir iletişim kuralı mevcut.

Hastalık modelleme için insan 3D akciğer doku kültürleri (3D-LTCs) nesil

Galleria mellonella son zamanlarda Mycobacterium tüberküloz kompleksi için reproducible, ucuz ve etik olarak kabul edilebilir bir enfeksiyon modeli olarak kurulmuştur. Burada, Bioluminesans Mycobacterium bovis BCG Lux ile G. mellonella 'nın başarılı enfeksiyonunu kurmak için alınan adımları tarif ediyoruz ve gösteriyoruz .

Mycobacterium tüberküloz kompleksinin incelenmesi Için bir enfeksiyon modeli olarak ınvertebrate Galleria mellonella kullanımı

Biz cfbe41o kullanarak enfekte hava yollarının üç boyutlu ortak kültür modeli için bir protokol tarif- hücreler, THP-1 makrofajlar, ve Pseudomonas aeruginosa, hava-sıvı arayüzü nde kurulan. Bu model aynı anda antibiyotik etkinliğini test etmek için yeni bir platform sağlar, epitel bariyer fonksiyonu, ve inflamatuar belirteçleri.

P. aeruginosa Anti-Enfektiflerin Klinik Öncesi Değerlendirilmesi Için Hava-Sıvı Arabiriminde Bronşiyal Epitel Hücrelerin in enfekte 3D Eş Kültür

Çip üzerinde akciğer modelleri, hava-sıvı arayüzünü ve endotel hücre perfüzyonunu taklit ederek, akciğer fizyolojisi çalışmaları için çok önemli olan kan akışını ve besin değişimini simüle ederek geleneksel 2D kültürleri aşıyor. Bu, solunum yolu enfeksiyonlarının anlaşılmasını ve tedavisini ilerletmek için dinamik, fizyolojik olarak doğru bir ortam sunarak akciğer araştırmalarının alaka düzeyini artırır.

Alveolar mukozal immün yanıtları incelemek için immünokompetan alveol-çip üzerinde model

Burada, zayıflatılmış BSL-2 onaylı Mycobacterium tuberculosis'un intravital görüntüleme protokolünü sunuyoruz. sürün akciğerinde kalıcı akciğer penceresi kullanarak. Bu yaklaşım, aynı akciğer mikro ortamında bakteriler lokalizasyonu, damar dinamikleri ve makrofaj alımı dahil olmak üzere erken konakçı-patojen etkileşimlerinin uzunlamasına, tek hücre çözünürlüklü analizini mümkün kılar.

Erken Intravasküler Enfeksiyonda Sönmüş Oksotrofik Mycobacterium Tuberculosis'in Sönük Oksotrofik Mycobacterium Tuberculosis'in Erken Intravasküler Enfeksiyonda

Öğrenin, 3D insan akciğer doku modeli kullanarak Mycobacterium tuberculosis enfeksiyonunun dinamiklerini ve erken granülom oluşumunu incelemeyi. Bu yöntem, tüberküloz patogenezinin anlaşılmasını geliştirir.

Fonksiyonel Araştırmaları 3D İnsan Akciğer Doku Modeli

Daha fazla video keşfet